1、細(xì)菌的形態(tài)結(jié)構(gòu)觀察和染色

實(shí)驗(yàn)一細(xì)菌的形態(tài)結(jié)構(gòu)觀察和染色整理ppt目的要求觀察細(xì)菌菌落的特征。掌握簡(jiǎn)單染色法和革蘭氏染色法的原理及操作步驟。在油鏡下觀察細(xì)菌個(gè)體的形態(tài)。了解幾種細(xì)菌的特殊染色方法，包括芽孢、莢膜及鞭毛染色。

整理ppt奧林帕斯(OLYMPUS)雙筒生物顯微鏡鏡筒物鏡轉(zhuǎn)換器載物臺(tái)載物臺(tái)調(diào)節(jié)紐粗調(diào)節(jié)器細(xì)調(diào)節(jié)器電源光強(qiáng)調(diào)節(jié)鈕孔徑光闌視場(chǎng)光闌雙筒目鏡攝像頭物鏡鏡座鏡臂熒光發(fā)射裝置整理ppt奧林帕斯生物顯微鏡的使用方法接通電源。翻開主開關(guān)。轉(zhuǎn)動(dòng)光強(qiáng)調(diào)節(jié)鈕，使亮度適中。把標(biāo)本固定在載物臺(tái)上。用低倍物鏡，旋轉(zhuǎn)粗調(diào)和微調(diào)來進(jìn)行對(duì)焦。調(diào)節(jié)雙目鏡筒間距和視度差。再適當(dāng)調(diào)節(jié)照明度。使焦點(diǎn)正確地對(duì)準(zhǔn)標(biāo)本。調(diào)節(jié)孔徑光闌。依次用低、中、高倍鏡觀察。油鏡觀察：高倍鏡下找到清晰的物象后，下降載物臺(tái)，在標(biāo)本中央滴一滴香柏油，使油鏡鏡頭浸入香柏油中，再細(xì)調(diào)至看清物象為止。換片：另換新片，必須從第9條開始操作。觀察完畢，下降載物臺(tái)，取下載物臺(tái)上的載玻片，將4×的目鏡對(duì)準(zhǔn)載物臺(tái)，再用擦鏡紙擦去鏡頭上的油，然后用擦鏡紙沾取少量乙醇/水擦去殘留的油，最后用擦鏡紙擦去殘留的乙醇/水。用畢復(fù)原：先將電壓調(diào)節(jié)旋鈕復(fù)原，關(guān)閉主開關(guān)，切斷電源。整理ppt顯微鏡保養(yǎng)和使用中的本卷須知不準(zhǔn)擅自拆卸顯微鏡的任何部件,以免損壞。鏡面只能用擦鏡紙擦，不能用手指或粗布，以保證光潔度。觀察標(biāo)本時(shí)，必須依次用低、中、高倍鏡，最后用油鏡。當(dāng)目視目鏡時(shí)，特別在使用油鏡時(shí)，切不可使用粗調(diào)節(jié)器，以免壓碎玻片或損傷鏡面。光強(qiáng)要適中，太亮不僅損傷燈泡壽命，也對(duì)眼睛有一定的傷害，并且無法進(jìn)行圖像采集。觀察時(shí)，兩眼睜開，養(yǎng)成能夠用兩眼觀察的習(xí)慣，使兩眼同時(shí)聚焦。觀察臨時(shí)制片時(shí)，不要讓玻片中的水分流到載物臺(tái)上，更不能使酸、堿及其它化學(xué)藥品與顯微鏡接觸。整理ppt油鏡使用的原理油鏡，即油浸接物鏡。當(dāng)光線由反光鏡通過玻片與鏡頭之間的空氣時(shí)，由于空氣與玻片的密度不同，使光線受到曲折，發(fā)生散射，降低了視野的照明度。假設(shè)中間的介質(zhì)是一層油〔其折射率與玻片的相近〕，那么幾乎不發(fā)生折射，增加了視野的進(jìn)光量，從而使物象更加清晰。整理ppt基本原理(一)簡(jiǎn)單染色法原理(二)革蘭氏染色法原理(三)抗酸染色原理(四)芽孢染色原理(五)莢膜染色原理(六)鞭毛染色原理整理ppt染色劑和染色原理微生物染色常用染料如下表：整理ppt實(shí)驗(yàn)內(nèi)容

〔簡(jiǎn)單染色的方法和步驟〕涂片自然枯燥微火固定染色lmin沖洗吸干鏡檢整理ppt實(shí)驗(yàn)內(nèi)容

〔革蘭氏染色的方法和步驟〕涂片，干燥、固定草酸銨結(jié)晶紫染液染色lmin，用水沖洗用革氏碘液媒染lmin，用水沖去碘液用95％乙醇脫色10-30s，至乙醇液不呈現(xiàn)紫色蕃紅染液復(fù)染lmin，用水沖洗吸干并鏡檢整理ppt實(shí)驗(yàn)內(nèi)容

〔了解抗酸染色的方法和步驟〕1．制片將少量草分枝桿菌制成菌懸液，80℃恒溫水浴3h殺死菌體。取菌懸液涂片，自然枯燥。2．染色滴加石炭酸復(fù)紅染液2滴，覆蓋涂片，在微火上加熱至有蒸氣出現(xiàn)，不斷補(bǔ)充染液，加熱8～10min，棄染液。3．脫色用3％鹽酸乙醇液脫色，至乙醇液呈淡紅色或無色。4．水洗滴加蒸餾水洗去鹽酸乙醇。5．復(fù)染加美藍(lán)染液染lmin。6．水洗后自然枯燥、鏡檢草分枝桿菌呈現(xiàn)紅色。假設(shè)用非抗酸性菌作為對(duì)照，那么菌體被染成藍(lán)色。整理ppt實(shí)驗(yàn)內(nèi)容

〔了解芽孢染色的方法和步驟〕孔雀綠染色法：取一干凈載片，在載片中央加一小滴水，按無菌操作取巨大芽孢桿菌菌體少許混合均勻，制成涂片，風(fēng)干固定后，在涂菌處滴加7.6％的孔雀綠飽和水溶液，間斷加熱染色10min后(注意添加染液勿使涂片枯燥)，用水沖洗。再用0.5％蕃紅液染色lmin，水洗，自然枯燥后鏡檢。芽孢被染上綠色，營養(yǎng)體呈現(xiàn)紅色。整理ppt實(shí)驗(yàn)內(nèi)容

〔了解莢膜染色的方法和步驟〕1．制片加一滴6％葡萄糖水溶液于載片一端，挑取少量膠質(zhì)芽孢桿菌與其混合，再加一滴黑色素充分混勻。用推片法制片，將菌液鋪成薄層，自然枯燥。2．固定滴加l～2滴無水乙醇覆蓋涂片，固定lmin，自然枯燥。3．染色，沖洗滴加結(jié)晶紫，染色2min，用水輕輕沖洗，枯燥后鏡檢。有莢膜的菌、菌體呈紫色，背景灰黑色，莢膜不著色呈無色透明圈。無莢膜的菌，由于枯燥菌體收縮，菌體四周也可能出現(xiàn)一圈狹窄的不著色環(huán)，但這不是莢膜，莢膜不著色的局部寬。整理ppt實(shí)驗(yàn)內(nèi)容

〔了解鞭毛染色的方法和步驟〕1．載片的清洗：將載片洗凈浸泡在95％乙醇中備用。2．實(shí)驗(yàn)菌種的準(zhǔn)備：將枯草芽孢桿菌在新制備的肉膏蛋白胨斜面培養(yǎng)基上(斜面下部要有少量冷凝水)，連續(xù)移種3～4次，每次培養(yǎng)12～18h，最后一次培養(yǎng)12～16h。3．制片：擦干載片，在載片一端加一滴蒸餾水，用接種環(huán)挑取少許菌苔底部有水局部的菌體(注意不要挑出培養(yǎng)基)，將接種環(huán)懸放在水滴中片刻，將載片稍傾斜，使菌液隨水滴緩緩流到另一端，可再返轉(zhuǎn)一次使菌液流經(jīng)面積擴(kuò)大，然后放平，自然枯燥。4．染色〔利夫森氏染色法〕：用蠟筆將涂菌區(qū)圈起，滴加染液，過數(shù)分鐘后，當(dāng)染液的1/2以上區(qū)域外表出現(xiàn)金屬光澤膜時(shí)，用水輕輕將金屬膜及染液沖洗干凈，自然枯燥。鏡檢鏡檢時(shí)應(yīng)在涂片上按順序進(jìn)行觀察，經(jīng)常是在局部涂片區(qū)的菌體染出鞭毛，菌體及鞭毛均為紅色。整理ppt實(shí)驗(yàn)材料Ⅰ(一)菌種大腸桿菌、枯草芽孢桿菌、金黃色葡萄球菌。(二)染液簡(jiǎn)單染色：草酸銨結(jié)晶紫染液。革蘭氏染色：草酸銨結(jié)晶紫染液、革氏碘液、95％乙醇、蕃紅染液。整理ppt實(shí)驗(yàn)材料Ⅱ(三)標(biāo)本細(xì)菌三型、四聯(lián)球菌、莢膜、芽孢。(四)其他物品無菌水、顯微鏡、載片、蓋玻片、酒精燈、吸水紙、香柏油、擦鏡紙、接種環(huán)。整理ppt實(shí)驗(yàn)內(nèi)容

(一)成片觀察(1)觀察細(xì)菌三型涂片，比較球菌、桿菌和螺旋菌的形態(tài)。(2)觀察四聯(lián)球菌的形態(tài)及排列方式。(3)觀察蘇云金芽孢桿菌的芽孢，褐球固氮菌的莢膜的形態(tài)。整理ppt實(shí)驗(yàn)內(nèi)容

(二)觀察平板上的細(xì)菌菌落，識(shí)別大腸桿菌、枯草芽孢桿菌和金黃色葡萄球菌的菌落特征。注意菌落的形狀、高度、大小、顏色，是否濕潤(rùn)、光澤、透明度、邊緣狀況等等。整理ppt實(shí)驗(yàn)內(nèi)容

(三)簡(jiǎn)單染色(只做金黃色葡萄球菌)。(四)革蘭氏染色法：大腸桿菌、枯草芽孢桿菌和金黃色葡萄球菌。整理ppt實(shí)驗(yàn)報(bào)告內(nèi)容(一)畫表描述大腸桿菌、枯草芽孢桿菌、金黃色葡萄球菌菌落特征。(二)繪圖：畫出大腸桿菌、枯草芽孢桿菌、金黃色葡萄球菌的細(xì)胞形態(tài)圖。(三)記錄3種菌的