分子生物學(xué)復(fù)習(xí)資料總結(jié)

分子生物學(xué)復(fù)習(xí)資料第一章DNA與染色體的構(gòu)造1、DNA構(gòu)造的多態(tài)性與動(dòng)態(tài)性【重】1，二級(jí)構(gòu)造的多肽性：除了B-DNA外，人們還發(fā)現(xiàn)了其它的構(gòu)造參數(shù)有一定差別的雙螺旋DNA，如：A-DNA,Z-DNA等，這一現(xiàn)象稱為DNA構(gòu)造的多態(tài)性（ploy-morphism）。2，動(dòng)態(tài)性定義：不同DNA構(gòu)造形式互相轉(zhuǎn)變的現(xiàn)象稱為DNA的動(dòng)態(tài)性。B-DNA的重要特點(diǎn)：①兩條反向平衡的多核苷酸鏈圍繞同一中心軸盤(pán)繞成右手雙螺旋。②糖與磷酸在外側(cè)形成螺旋的軌跡，核苷酸間彼此通過(guò)3’,5③堿基伸向內(nèi)部，其平面與螺旋軸垂直④兩條核苷酸鏈依靠彼此堿基之間形成的氫鍵相聯(lián)系而結(jié)合在一起，且總是a與t，g與c配對(duì)⑤雙螺旋平均直徑為2nm，每個(gè)螺旋圈上升10個(gè)核苷酸，螺距為3。4nm⑥沿螺旋中心軸方向看去，雙螺旋構(gòu)造上有兩個(gè)凹槽,一種較為寬深，稱大溝，一種較淺小，稱小溝。2、DNA變性、復(fù)性和分子雜交【重】變性：在某些物理、化學(xué)因子的作用下，DNA雙鏈間的氫鍵斷裂，雙鏈解離形成單鏈。復(fù)性：去除變性條件后，單鏈DNA在適宜條件下重新形成雙鏈，回復(fù)到原有的物理和生物學(xué)特性。分子雜交：基于DNA的變性與復(fù)性的特性，雙鏈DNA加熱后來(lái)變成單鏈，在去除變性條件后，在一定的條件下，含有互補(bǔ)次序的DNA能再形成雙鏈。3、DNA雙螺旋構(gòu)造的重要特點(diǎn)P351）兩條鏈反平行互相纏繞的右手螺旋，螺旋有大溝和小溝2）堿基在內(nèi)側(cè)，磷酸和核酸在外側(cè)3）螺旋直徑2nm，堿基距0.34nm每圈10（10.5）個(gè)核苷酸殘基，螺距3.4（3.6）nm4）A與T形成2個(gè)氫鍵，G與C形成3個(gè)氫鍵基因與基因組構(gòu)造1.基因(gene)：是一段含有特定功效和構(gòu)造的持續(xù)的脫氧核苷酸（DNA）序列。（或者說(shuō)是合成一種功效蛋白或RNA分子所必須的全部DNA序列）．基因是生物體傳遞和體現(xiàn)遺傳信息的基本單位。一種典型的真核基因涉及①編碼序列-----外顯子(exon)②插入外顯子之間的非編碼序列-----內(nèi)合子(intron)③5’-端和3’-端非翻譯區(qū)(UTR)④調(diào)控序列(可位于上述三種序列中)絕大多數(shù)真核基因是斷裂基因(split-gene)，外顯子不持續(xù)順?lè)醋永碚摚簩?duì)典型的基因概念的第一次重要修正與發(fā)展a一種順?lè)醋泳幋a一條多肽鏈b順?lè)醋樱菏且环N為多肽鏈編碼的DNA片斷，順?lè)醋拥膬?nèi)部能夠發(fā)生突變或重組，即包含c許多突變子（muton)和重組子（recon)d順?lè)醋訉W(xué)說(shuō)否認(rèn)Morgan認(rèn)為基因是功效單位（順?lè)醋樱⒂质墙粨Q單位（重組子）、突變單位（突變子）的概念.2.基因家族：真核細(xì)胞中許多有關(guān)的基因經(jīng)常按功效成套組合，一套基因就是所謂的一種基因家族（genefamily）基因簇：一種家族的基因組員能夠在染色體上緊密地排列在一起，成為一族，稱為基因簇（genecluster）.在人類基因組中有12個(gè)大的基因簇。外顯子（exon）：斷裂基因中的體現(xiàn)序列，即轉(zhuǎn)錄后在成熟的RNA中存在內(nèi)含子（intron）：斷裂基因中的非體現(xiàn)序列，即在mRNA成熟加工過(guò)程中被除去1、一種典型的真核基因涉及P237①編碼序列-----外顯子(exon)絕大多數(shù)真核基因是斷裂基因(split-gene)，外顯子不持續(xù)②插入外顯子之間的非編碼序列-----內(nèi)合子(intron)③5’-端和3’-端非翻譯區(qū)(UTR)④調(diào)控序列(可位于上述三種序列中)基因組的概念P237生物體的整套（單倍體）遺傳物質(zhì)的總和。3、原核生物基因組的特點(diǎn)P238①原核生物物的基因組都較小：如大腸桿菌，整個(gè)基因組由4.6×106bp構(gòu)成，大概包含3000-4000個(gè)基因；②基因組的序列大部分是用來(lái)編碼蛋白質(zhì)的，只有及少數(shù)部分不轉(zhuǎn)錄，而不轉(zhuǎn)錄部分普通是控制基因體現(xiàn)的序列；③存在著基因重疊的現(xiàn)象，即同一段DNA序列能攜帶2種不同的蛋白質(zhì)信息；④原核生物的基因是持續(xù)的，基本不存在內(nèi)含子成分，因此在轉(zhuǎn)錄后不需要剪接加工，并且，決大多數(shù)區(qū)域都無(wú)重復(fù)序列；⑤在轉(zhuǎn)錄調(diào)控中存在操縱子構(gòu)造（Operon)：即DNA序列中功效有關(guān)的RNA或蛋白質(zhì)基因往往前后排列在一起形成一種轉(zhuǎn)錄單位，從同一啟動(dòng)子開(kāi)始轉(zhuǎn)錄形成一種多順?lè)醋觤RNA，然后分別體現(xiàn)成不同的RNA或蛋白質(zhì)；4、真核生物基因組的特點(diǎn)P238①真核基因組DNA在細(xì)胞核內(nèi)處在以核小體為基本單位的染色體構(gòu)造中．即真核生物基因分布在多個(gè)染色體上；②真核基因組中，編碼序列只占整個(gè)基因組的很小部分(2—3％)；③真核生物在基因組轉(zhuǎn)錄后的絕大部分前體RNA(pre-mRNA)必須通過(guò)剪接過(guò)程才干形成成熟的mRNA(matureRNA)；④真核生物的轉(zhuǎn)錄和翻譯在時(shí)空上都是分離的；⑤真核生物的基因是不持續(xù)的，中間存在不被翻譯的內(nèi)含子（intron)序列；⑥真核生物基因組復(fù)制起點(diǎn)多，缺少明顯的操縱子構(gòu)造5、物種的C值P238一種物種單倍體基因組的DNA含量稱為該物種的C值每個(gè)物種的C值是相對(duì)恒定的，不同物種的C值差別極大第三章DNA的復(fù)制、突變、損傷修復(fù)1、DNA復(fù)制共同特性【重】P39①半保存性(Semi-Conservative)；②普通雙向復(fù)制：復(fù)制起始點(diǎn)(origin)+兩側(cè)復(fù)制叉=復(fù)制單位(復(fù)制子,Replicon)③半不持續(xù)性(Semi-discontinuous)：前導(dǎo)鏈(leadingstrand)-持續(xù)合成；隨從鏈(LaggingStrand)-不持續(xù),由崗崎片段(okazaki-Fragment)連接而成；④復(fù)制的起點(diǎn)含有特殊序列；⑤需要RNA引物；⑥復(fù)制含有高度的忠實(shí)性在合成時(shí)，1條鏈的合成方向和復(fù)制叉的邁進(jìn)方向相似，能夠持續(xù)復(fù)制，這條鏈稱前導(dǎo)鏈鏈。另一條鏈的合成方向和復(fù)制叉的邁進(jìn)方向相反，不能持續(xù)復(fù)制，只能分成幾個(gè)片斷合成，稱為滯后鏈、后隨鏈。DNA的這種方式稱不持續(xù)復(fù)制,連接滯后鏈的片斷稱岡崎片斷基因突變與DNA的損傷修復(fù)【重】基因突變：突變是DNA分子堿基序列水平上所發(fā)生的一種永久性、可遺傳性的變化，它是與遺傳保守性相對(duì)立而又互相統(tǒng)一的自然現(xiàn)象。DNA損傷：指正常DNA分子的化學(xué)構(gòu)造或物理構(gòu)造在某些物理、化學(xué)因素以及細(xì)胞自發(fā)產(chǎn)生的基因毒素等干擾作用下發(fā)生變化的現(xiàn)象。DNA修復(fù)：是指DNA受到損傷后，細(xì)胞內(nèi)發(fā)生的使DNA的化學(xué)構(gòu)成和核苷酸序列重新恢復(fù)或使細(xì)胞對(duì)DNA損傷產(chǎn)生耐受的一系列反映。DNA復(fù)制起點(diǎn)特性的共同點(diǎn)P41共同特點(diǎn)：由多個(gè)獨(dú)特的短重復(fù)序列構(gòu)成；短重復(fù)序列被多亞基的復(fù)制起點(diǎn)結(jié)合蛋白所識(shí)別；復(fù)制起點(diǎn)附近普通有一種富含A-T的序列，以利于雙螺旋DNA解鏈或解旋。4、DNA復(fù)制的必需要素P45A、染色體DNA復(fù)制必需三種核苷酸序列①?gòu)?fù)制起點(diǎn)②著絲粒③端粒.B、RNA引物(RNAPrimer)：普通8-14nt.帶游離3-OH末端.C、參加DNA復(fù)制的重要酶和蛋白質(zhì)：①DNA聚合酶(DNAPolymerase)真核DNA復(fù)制的重要酶DNAPola/δ.功效:從5-3方向延伸與模板互補(bǔ)的子代鏈.②引發(fā)酶(Primase)：與其它多個(gè)蛋白構(gòu)成多蛋白復(fù)合體-引發(fā)體(Primosome).催化RNA引物合成和復(fù)制起始.③DNA連接酶(DNALigase)：催化一種雙鏈DNA的5磷酸與另一雙鏈DNA的3-OH形成磷酸二酯鍵.④DNA解鏈酶(DNAHelicase)：打開(kāi)DNA雙鏈.⑤增殖細(xì)胞核抗原(Proliferatingcellnuclearantigen.PCNA)：輔助催化前導(dǎo)鏈合成.⑥端粒酶(Telomerase)：端粒酶負(fù)責(zé)染色體末端(端粒)復(fù)制5、突變基因、突變體、移碼突變的概念P47突變基因：堿基序列發(fā)生變化的基因稱為突變基因（mutantgene）突變體：攜帶突變基因的生物個(gè)體或群體或株系普通稱為突變體（mutant）移碼突變：如果插入或缺失的核苷酸數(shù)碼不等于3的倍數(shù)，將會(huì)造成突變點(diǎn)后的全部密碼子閱讀框架移位，進(jìn)而翻譯產(chǎn)生的氨基酸序列與正常蛋白質(zhì)完全不同，或使肽鏈提前終止或延長(zhǎng)，產(chǎn)生無(wú)正常功效的異常蛋白質(zhì)，這種突變稱之。6、突變的類型突變的類型按照突變生成的過(guò)程可將突變分為自發(fā)突變和誘發(fā)突變（誘變）自發(fā)突變：由于自然界突變劑的作用或由于偶然的復(fù)制錯(cuò)誤而產(chǎn)生的突變都屬于自然突變誘變：運(yùn)用突變劑解決生物體而產(chǎn)生的突變：A、堿基置換突變；B、缺失或插入突變7、DNA修復(fù)的重要方式：直接修復(fù)：A光復(fù)合，B斷裂鏈的重接，C直接插入嘌呤，D烷基轉(zhuǎn)移修復(fù)；切除修復(fù)：A堿基切除修復(fù)(Baseexcisionrepair、BER)；B核苷酸切除修復(fù)(Nucleotideexcisionrepair，NER)；C錯(cuò)配修復(fù)(Mismatchrepair)負(fù)責(zé)修復(fù)DNA復(fù)制過(guò)程中由于錯(cuò)誤摻入而產(chǎn)生的錯(cuò)配8、點(diǎn)突變類型與概念P47最簡(jiǎn)樸的堿基置換突變是點(diǎn)突變，即DNA序列上單個(gè)堿基的變化。類型：（1）同義突變（沉默或沉寂突變）：ACU-ACC-ACA(蘇）；（2）錯(cuò)義突變；（3）無(wú)義突變；（4）終止密碼子突變；（5）起始密碼子突變：第四章轉(zhuǎn)錄與轉(zhuǎn)錄后加工1、轉(zhuǎn)錄的基本特性P64①轉(zhuǎn)錄是DNA的信息流向RNA的過(guò)程，是基因體現(xiàn)第一步；②除了某些病毒RNA基因組外，全部RNA分子都是以DNA為模板合成的③轉(zhuǎn)錄過(guò)程中，酶系統(tǒng)將DNA片斷的遺傳信息轉(zhuǎn)移到與其中一條DNA鏈有互補(bǔ)堿基次序的RNA鏈，轉(zhuǎn)錄大多數(shù)為對(duì)稱轉(zhuǎn)錄；④轉(zhuǎn)錄與復(fù)制的不同：復(fù)制過(guò)程是整條染色體復(fù)制，而轉(zhuǎn)錄是有選擇的；⑤細(xì)胞的轉(zhuǎn)錄機(jī)制都類似：需要RNA聚合酶為工具，DNA為模板，4種三磷酸核苷酸（ATP/CTP/GTP/UTP）為原料，鎂離子為輔助成分；⑥轉(zhuǎn)錄的過(guò)程能夠分為模板識(shí)別、起始、延伸和終止4個(gè)過(guò)程（后加工可算第5階段）⑦轉(zhuǎn)錄的初級(jí)產(chǎn)物普通不穩(wěn)定：把作為轉(zhuǎn)錄模板的DNA單鏈稱模板鏈或反義鏈，非模板鏈稱為編碼鏈或有義鏈。mRNA的合成延著5‘－3‘方向進(jìn)行。原核生物與真核生物轉(zhuǎn)錄加工過(guò)程內(nèi)容與異同？啟動(dòng)子、終止子的概念P71啟動(dòng)子：?jiǎn)?dòng)子是基因轉(zhuǎn)錄起始所必須的一段DNA序列，普通位于構(gòu)造基因的上游，是DNA分子上與RNA聚合酶特異結(jié)合而使轉(zhuǎn)錄起始的部位，啟動(dòng)子本身不被轉(zhuǎn)錄終止子：是指一種在基因編碼區(qū)下游的可被RNA聚合酶識(shí)別和停止合成RNA的一段DNA序列—35區(qū)、—10區(qū)P71原核生物啟動(dòng)子模式：涉及兩個(gè)區(qū)域：轉(zhuǎn)錄起點(diǎn)的堿基上游約40bp范疇內(nèi)，包含有同源性較強(qiáng)的兩個(gè)保守區(qū)，一種是－10bp區(qū)和－35bp區(qū)－10區(qū)：由6－8個(gè)核苷酸構(gòu)成，大多包含TATAAT序列又稱Pribnowbox區(qū)－35區(qū)：由10個(gè)核苷酸構(gòu)成，有TTGACA序列，是RNA聚合酶結(jié)合位點(diǎn)，決定啟動(dòng)子的強(qiáng)弱原核生物RNA的轉(zhuǎn)錄后加工P78A原核生物mRNA前體的加工；B原核生物tRNA前體的加工：（1）由核酸內(nèi)切酶在tRNA兩端切斷；（2）由核酸內(nèi)切酶從3’-端逐個(gè)切去附加的次序，進(jìn)行修剪；（3）在tRNA36、真核生物RNA的轉(zhuǎn)錄后加工P82A真核生物mRNA前體的加工：5’加帽（多個(gè)帽子，但都含7－甲基鳥(niǎo)苷酸）和3’端加多聚(A)尾（增加mRNA的穩(wěn)定性）；BtRNA的轉(zhuǎn)錄后加工：（1）切除tRNA前體兩端多出序列；（2）（3）加甲基等進(jìn)行修飾；CrRNA的轉(zhuǎn)錄后加工；DRNA的拼接、編輯和再編碼；第五章遺傳密碼子特性及概念P104遺傳密碼子：mRNA上決定一種特定氨基酸的三個(gè)持續(xù)核苷酸，稱為密碼，或三聯(lián)子密碼a密碼子的通用性；b簡(jiǎn)并性；c擺動(dòng)性；d密碼子的不重疊性：密碼子間無(wú)標(biāo)點(diǎn)符號(hào)；e密碼子的閱讀方向與閱讀框：5′→3′方向持續(xù)閱讀tRNA的種類P111（1）校正tRNA:校正基因突變（2）起始tRNA與延伸tRNA（3）同工tRNA（4）轉(zhuǎn)移－信使RNA（tmRNA）：兼具tRNA分子和mRNA分子的雙重功效tRNA的特點(diǎn)：A、tRNA的形態(tài)特性（1）不同來(lái)源的tRNA含有共同的特性，構(gòu)成tRNA的核苷酸普通為74－93個(gè)，大部分為76個(gè)；幾乎全部的tRNA都含有三葉草式的二級(jí)構(gòu)造（2）tRNA一級(jí)構(gòu)造特點(diǎn)：含有一定的恒定性，含有大量的修飾性堿基。B、tRNA的高級(jí)構(gòu)造tRNA的單鏈通過(guò)堿基配對(duì)折疊成三葉草形二級(jí)構(gòu)造，三葉草構(gòu)型進(jìn)一步通過(guò)氫鍵等作用，折疊成倒L型的三級(jí)構(gòu)造，其長(zhǎng)度靠近7nm，呈扁平狀。不同種類的tRNA含有類似的三維構(gòu)造，所不同的僅是在倒L形的角有輕度變化，這表明在拐角區(qū)可伸屈，以允許tRNA在執(zhí)行不同功效時(shí)能變化其生物學(xué)功效C、tRNA的專一性tRNA種類繁多，但一種tRNA只攜帶一種氨基酸，這就是tRNA的專一性蛋白質(zhì)生物合成的重要環(huán)節(jié)P122（1）翻譯的起始：核糖體與mRNA結(jié)合并與氨基?！猼RNA生成起始復(fù)合物（核糖體是蛋白質(zhì)合成的場(chǎng)合，mRNA是蛋白質(zhì)合成的模板，tRNA是模板與氨基酸之間的接合體。另外，有20種以上的AA-tRNA及合成酶、10多個(gè)起始因子、延伸因子及終止因子，30多個(gè)tRNA及多個(gè)rRNA、mRNA和100種以上翻譯后加工酶參加蛋白質(zhì)合成和加工過(guò)程。）；（2）肽鏈的延伸：核糖體沿mRNA5’端向3’端移動(dòng)，造成從N端向C端的多肽合成；（3）肽鏈的終止以及肽鏈的釋放：核糖體從mRNA上解離，準(zhǔn)備新一輪合成反映4、信號(hào)肽理論重要涉及P135A胞內(nèi)蛋白質(zhì)的去向由其本身所含的信號(hào)肽指導(dǎo)，信號(hào)肽普通位于新生肽的N端，但也有某些位于肽鏈的內(nèi)部，長(zhǎng)度普通為10－30個(gè)氨基酸殘基，平均15個(gè)殘基B胞內(nèi)存在兩套獨(dú)立的、互不有關(guān)的機(jī)制，一套機(jī)制負(fù)責(zé)把新生肽轉(zhuǎn)運(yùn)到多個(gè)細(xì)胞器內(nèi)，或分泌到細(xì)胞外，蛋白質(zhì)的流向是單向的；另一套機(jī)制則負(fù)責(zé)把某些細(xì)胞質(zhì)內(nèi)的蛋白質(zhì)轉(zhuǎn)運(yùn)到核內(nèi)，或把某些核內(nèi)的蛋白質(zhì)轉(zhuǎn)運(yùn)到核外，這一過(guò)程是雙向的。5、簡(jiǎn)并性的概念P105由一種以上密碼子編碼同一種氨基酸的現(xiàn)象稱為簡(jiǎn)并，對(duì)應(yīng)于同一氨基酸的密碼子稱為同義密碼子第六章原核生物基因體現(xiàn)調(diào)控的特點(diǎn)P196（1）原核生物基因體現(xiàn)調(diào)控的體現(xiàn)控制存在于轉(zhuǎn)錄和翻譯的起始、延伸和終止的每一環(huán)節(jié)中（2）調(diào)控多以操縱子為單位進(jìn)行，將功效有關(guān)的基因組織在一起，同時(shí)啟動(dòng)或關(guān)閉基因體現(xiàn)，既經(jīng)濟(jì)有效，又確保其生命活動(dòng)的需要（3）調(diào)控重要發(fā)生在轉(zhuǎn)錄水平，有正調(diào)控（啟動(dòng)或增強(qiáng)基因體現(xiàn)活性）和負(fù)調(diào)控（關(guān)閉或減少基因體現(xiàn)活性）兩種機(jī)制（4）轉(zhuǎn)錄水平上的調(diào)控決定于DNA的構(gòu)造、RNA聚合酶的功效、蛋白因子及其小分子配基的互相作用（5）細(xì)菌的轉(zhuǎn)錄與翻譯過(guò)程幾乎在同一時(shí)間內(nèi)相偶聯(lián)原核生物基因體現(xiàn)調(diào)控的操縱子學(xué)說(shuō)P197內(nèi)涵：即操縱子是原核生物在分子水平上基因體現(xiàn)調(diào)控的單位，由調(diào)節(jié)基因、啟動(dòng)子、操縱基因和構(gòu)造基因等構(gòu)成。通過(guò)調(diào)節(jié)基因編碼的調(diào)節(jié)蛋白或與誘導(dǎo)物、輔阻遏物協(xié)同作用，啟動(dòng)或關(guān)閉操縱基因，對(duì)操縱子構(gòu)造基因的體現(xiàn)進(jìn)行正調(diào)控或負(fù)調(diào)控第七章基因工程的概念P147基因工程：將不同的基因在體外人工切割并與載體連接，導(dǎo)入到另一種微生物和細(xì)胞內(nèi)，進(jìn)行無(wú)性繁殖（克?。┖蛿U(kuò)增，從而行使正常功效（體現(xiàn)蛋白質(zhì)），甚至發(fā)明生物新品種或新物種的遺傳學(xué)技術(shù)。（GeneEngineering，GeneManipulation）限制性核酸內(nèi)切酶的概念、命名法則P148限制性核酸內(nèi)切酶（限制酶）--一類能識(shí)別并切割雙鏈DNA分子中特定核苷酸序列（如回文序列）的核酸水解酶。限制酶命名：限制性內(nèi)切酶的命名遵照一定的原則，重要根據(jù)來(lái)源來(lái)定，涉及宿主的種名、菌株號(hào)或生物型。（1）宿主屬名第一種字母（大寫(xiě)）（2）+種名前兩個(gè)字母（小寫(xiě)）（3）[+菌株名或型第一種字母（大小寫(xiě)）]（4）+空格+序號(hào)（羅馬數(shù)字）影響酶活性的因素外因是可預(yù)見(jiàn)和控制的，如反映條件、底物的純度（與否有雜質(zhì)、與否有鹽酚的污染）、何時(shí)加酶、操作與否恰當(dāng)、反映體積的選擇以及反映時(shí)間的長(zhǎng)短等等。內(nèi)因涉及位點(diǎn)偏愛(ài)性、甲基化底物、底物的構(gòu)象。構(gòu)象的影響重要指切割線性DNA和超螺旋DNA時(shí)的活性II型限制性核酸內(nèi)切酶基本特點(diǎn)P148限制酶識(shí)別序列的長(zhǎng)度：限制酶識(shí)別序列的長(zhǎng)度普通為4-8個(gè)堿基，最常見(jiàn)的為6個(gè)堿基。當(dāng)識(shí)別序列為4個(gè)和6個(gè)堿基時(shí)，它們可識(shí)別的序列在完全隨機(jī)的狀況下，平均每256個(gè)和4096個(gè)堿基中會(huì)出現(xiàn)一種識(shí)別位點(diǎn)（44=256，46=4096）。限制酶識(shí)別序列的構(gòu)造：限制酶識(shí)別的序列大多數(shù)為回文對(duì)稱構(gòu)造，切割位點(diǎn)在DNA兩條鏈相對(duì)稱的位置。限制酶切割的位置：限制酶對(duì)DNA的切割位置大多數(shù)在內(nèi)部，但也有在外部的。在外部的，又有兩端、兩側(cè)和單側(cè)之別。限制酶產(chǎn)生的末端基因工程技術(shù)的基本環(huán)節(jié)或內(nèi)容P149基因工程技術(shù)的基本環(huán)節(jié)或內(nèi)容：1）目的基因制備和分離（獲得）；2）DNA重組體的構(gòu)建（酶切、連接）；3）DNA重組體的擴(kuò)增（導(dǎo)入）；4）重組體篩選和鑒定（篩選）；5）基因體現(xiàn)及產(chǎn)物的分離純化和鑒定（體現(xiàn)）。同裂酶、同尾酶、位點(diǎn)偏愛(ài)、切口酶的概念P150同裂酶（isoschizomer）：識(shí)別相似序列的限制酶稱同裂酶，但它們的切割位點(diǎn)可能不同。同尾酶：許多不同的限制酶切割DNA產(chǎn)生的末端是相似的，且是對(duì)稱的，即它們可產(chǎn)生相似的粘性突出末端。這些酶統(tǒng)稱為同尾酶。這些酶切割DNA得到的產(chǎn)物可進(jìn)行粘端連接。位點(diǎn)偏愛(ài)：某些限制酶對(duì)同一介質(zhì)中的有些位點(diǎn)體現(xiàn)出偏愛(ài)性切割，即對(duì)不同位置的同一種識(shí)別序列體現(xiàn)出不同的切割效率的現(xiàn)象稱作位點(diǎn)偏愛(ài)。切口酶：有些限制酶只切割雙鏈DNA中的一條鏈，產(chǎn)生單鏈缺口，即切口酶。酶切反映條件P1501個(gè)限制酶活力單位—在規(guī)定的緩沖液及溫度條件下，在20ul反映液反映1小時(shí)，使1ugDNA完全消化所需的酶量。緩沖液：常規(guī)緩沖液普通涉及提供穩(wěn)定pH值的緩沖劑、Mg++、DTT（二硫蘇糖醇）以及BSA（小牛血請(qǐng)白蛋白）。反映溫度：反映溫度大多數(shù)為37℃，一部分為50-65℃，少數(shù)25-30℃。銷售商在產(chǎn)品闡明中都會(huì)標(biāo)明最佳反映溫度。反映時(shí)間：反映時(shí)間普通為1小時(shí)或更多，許多酶延長(zhǎng)反映時(shí)間可減少酶的用量。（4）終止酶切的辦法：EDTA、加熱等辦法。耐熱DNA聚合酶、反轉(zhuǎn)錄酶、連接酶、標(biāo)記基因、α—互補(bǔ)的概念及連接酶的重要來(lái)源和功效耐熱DNA聚合酶在高溫下有DNA聚合活性，來(lái)自噬高溫的細(xì)菌，重要用于PCR反映，如TaqDNA聚合酶、VentDNA聚合酶、PfuDNA聚合酶、PwoDNA聚合酶和TthDNA聚合酶等。反轉(zhuǎn)錄酶即依賴于RNA的DNA聚合酶，它有5'--3'合成DNA活性，但是無(wú)3'--5'外切活性。連接酶就是將兩段核酸連接起來(lái)的酶，相稱于基因工程中的“糨糊”。現(xiàn)已發(fā)現(xiàn)幾個(gè)不同來(lái)源或作用于不同底物的連接酶。按其用途可將標(biāo)記基因分為選擇標(biāo)記基因和篩選標(biāo)記基因。選擇標(biāo)記用于鑒別目的DNA（載體）的存在，將成功轉(zhuǎn)化了載體的宿主挑選出來(lái)。篩選標(biāo)記可用于將特殊表型的重組子挑選出來(lái)。α-互補(bǔ)是指lacZ基因上缺失近操縱基因區(qū)段的突變體與帶有完整的近操縱基因區(qū)段的β-半乳糖苷酶（β-galactosidase）陰性的突變體之間實(shí)現(xiàn)互補(bǔ)。α-互補(bǔ)是基于在兩個(gè)不同的缺點(diǎn)β-半乳糖苷酶之間可實(shí)現(xiàn)功效互補(bǔ)而建立的。大腸桿菌的乳糖lac操縱子中的lacZ基因編碼β-半乳糖苷酶，如果lacZ基因發(fā)生突變，則不能合成有活性的β-半乳糖苷酶?；颍ǚ肿樱┛寺?、遺傳工程、蛋白質(zhì)工程的概念P157基因（分子）克?。簩⒆鳛楣w的重組DNA分子置于與他毫無(wú)親緣關(guān)系的受體（宿主）細(xì)胞內(nèi)復(fù)制（擴(kuò)增）的過(guò)程；或重組DNA分子操作、復(fù)制過(guò)程。（GeneCloning,MolecularCloning）遺傳工程：涉及基因工程在內(nèi)的人工改造生物遺傳性的全部技術(shù)，即以變化生物有機(jī)體性狀的特性為目的的遺傳信息量操作。（GeneticEngineering）蛋白質(zhì)工程：在基因工程技術(shù)的基礎(chǔ)上通過(guò)對(duì)基因的定向突變改造，從而達(dá)成了對(duì)固有蛋白質(zhì)的構(gòu)造與功效修飾，并能夠離體體現(xiàn)，這就是第二代基因工程，所謂的蛋白質(zhì)工程。ProteinEngineering星星活性的概念P152在極端非原則條件下，限制酶能切割與識(shí)別序列相似的序列，這個(gè)變化的特殊性稱星星活性。5’—3只有含有了下述三種條件的狀況下，DNA聚合酶I才干夠催化合成DNA的互補(bǔ)鏈，這些條件涉及：A、全部四種脫氧核苷5’無(wú)論是5’-磷酸和5’-二磷酸還是3’-磷酸、3’-二磷酸和3’-三磷酸都不能作為DNA聚合酶I催化的聚合作用的底物，只有5’-三磷酸dNTPs才是這種聚合作用的真正的底物。B、帶有3’如此DNA聚合酶I才干將脫氧核苷酸加到這段預(yù)先存在的DNA引物鏈的3’-OH末端。C、DNA模板，它能夠是單鏈的，也能夠是雙鏈的。雙鏈的DNA只有在其糖-磷酸主鏈上有一至數(shù)個(gè)斷裂的狀況下，才干是有效的模板。DNA聚合酶I催化的聚合作用，是在生長(zhǎng)鏈的3‘-OH基末端基團(tuán)同參入進(jìn)來(lái)的核苷酸分子之間發(fā)生的。當(dāng)這個(gè)核苷酸加入之后，它又提供了另一種游離的3'-OH末端基團(tuán)，由于每一條DNA鏈都含有一種5'-P末端基團(tuán)和一種3'-OH末端基團(tuán)。因此說(shuō)，DNA聚合酶I催化的DNA鏈的合成是按照5’-3’方向生長(zhǎng)的。質(zhì)粒、載體概念P155質(zhì)粒：細(xì)菌質(zhì)粒是存在于細(xì)胞質(zhì)中的一類獨(dú)立于染色體的自主復(fù)制的遺傳成分，絕大多少由環(huán)形雙鏈的DNA構(gòu)成的復(fù)制子。除了酵母的殺傷質(zhì)粒（killerplasmid）是一種RNA質(zhì)粒之外。載體：將外源DNA或基因攜帶入宿主細(xì)胞（hostcell）的工具（DNA片段）稱為載體。載體是基因操作的核心工具。來(lái)源于質(zhì)?；蚴删w等DNA分子，能夠供插入或克隆目的基因DNA，并含有傳遞運(yùn)載外源DNA導(dǎo)入宿主細(xì)胞能力。質(zhì)粒的基本特性P156（1）質(zhì)粒的復(fù)制；（2）．質(zhì)粒的拷貝數(shù)：質(zhì)?？截悢?shù)分為嚴(yán)謹(jǐn)型（stringentplasmid）與松馳型（relaxedplasmid）。嚴(yán)謹(jǐn)型質(zhì)粒每個(gè)細(xì)胞中拷貝數(shù)有限，大概1～幾個(gè)；松馳型質(zhì)粒拷貝數(shù)較多，可達(dá)幾百。；（3）．質(zhì)粒的不相容性：兩個(gè)親緣關(guān)系親密的質(zhì)粒在同一宿主中不能共存的現(xiàn)象稱質(zhì)粒的不相容性。而不相容群（incompatibilitygroup）指那些含有不相容性的質(zhì)粒構(gòu)成的一種群體，普通含有相似的復(fù)制子；（4）．遷移性；抱負(fù)載體必須含有的條件P1551）含有復(fù)制起點(diǎn)；2）含有抗菌素抗性基因；3）含有若干限制酶單一識(shí)別位點(diǎn)；4）含有較小的分子量和較高的拷貝數(shù)目的基因的分離手段及鑒定手段鳥(niǎo)槍法；機(jī)械切割法，或限制酶局部消化法處；基因文庫(kù)、基因組文庫(kù)概念基因文庫(kù)：指某個(gè)生物的基因組DNA或cDNA片段與適宜的載體在體外通過(guò)重組后，轉(zhuǎn)化宿主細(xì)胞，并通過(guò)一定的選擇機(jī)制篩選后得到大量的陽(yáng)性菌落（或噬菌體），全部菌落或噬菌體的集合?；蚪M文庫(kù)：指將某生物體的全部基因組DNA用限制性內(nèi)切酶或機(jī)械力量切割成一定長(zhǎng)度范疇的DNA片段，與適宜的載體體外重組并轉(zhuǎn)化對(duì)應(yīng)的宿主細(xì)胞獲得的全部陽(yáng)性菌落?；蛭膸?kù)的構(gòu)建、過(guò)程基因組DNA文庫(kù)的構(gòu)建程序包含5個(gè)部分：①載體的制備；②高純度大分子量基因組DNA（HighmolecularweightDNA,HMWDNA）的提取；③HMWDNA的部分酶切與脈沖電泳分級(jí)分離（PFGEsizeselection）；④載體與外源片段的連接與轉(zhuǎn)化或侵染宿主細(xì)胞；⑤重組克隆的挑取和保存。DNA與cDNA文庫(kù)的區(qū)別PCR三個(gè)環(huán)節(jié)（原理）【重】p164變性（denaturation）：將模板DNA置于＞9１℃的高溫下，加熱１分鐘，使dsDNA在高溫下解鏈成為ssDNA，且熱變性不變化其化學(xué)性質(zhì)；退火（annealing）：將溫度減少約50℃，致冷１分鐘，使專門(mén)設(shè)計(jì)的一對(duì)寡核苷酸引物與兩條單鏈模板DNA結(jié)合在靶DNA區(qū)段兩端的互補(bǔ)序列位置上；延伸（extension）：將反映混合物的溫度上升到72℃條件下，保溫1.5分鐘，此時(shí)DNA聚合酶將dNTP持續(xù)加到引物的3‘-OH端，合成新生的DNA互補(bǔ)鏈。PCR反映體系P163參加PCR反映的物質(zhì)重要有五種，即引物、酶、dNTP、模板和Mg2