淋球菌培養(yǎng)及鑒定

淋球菌培養(yǎng)及鑒定

1整理課件什么是淋球菌？共同點(diǎn)：革蘭陰性球菌、單個(gè)或成雙排列、無(wú)芽孢、無(wú)鞭毛、有菌毛觸酶試驗(yàn)〔+〕氧化酶試驗(yàn)〔+〕不同點(diǎn)：對(duì)糖分解能力、硝酸鹽復(fù)原能力和DNA合成酶

淋球菌即淋病奈瑟菌，屬于奈瑟菌屬。2整理課件淋球菌形態(tài)淋球菌，是一種革蘭陰性雙球菌，呈卵圓形或腎形，成對(duì)排列，直徑約0．6—0．8~m，常位于多形核白細(xì)胞的胞漿內(nèi)，慢性期那么在細(xì)胞外。生長(zhǎng)適宜溫度為37℃—38℃，淋菌不耐熱，枯燥環(huán)境存活1—2小時(shí)，55℃5分鐘立即死亡，附著在衣褲和臥具上的淋菌最多只能生存24小時(shí)，一般消毒劑易將其殺死。3整理課件淋球菌形態(tài)4整理課件致病性傳染方式：成人性接觸初生嬰兒患病母親產(chǎn)道感染致病物質(zhì)：菌毛外膜蛋白PI：中性粒細(xì)胞受損外膜蛋白PII：黏附外膜蛋白PIII：阻抑抗體活性IgA1酶:破壞粘膜局部抗體5整理課件所致疾病男性——急性淋菌性前尿道炎女性——淋菌性宮頸炎、尿道炎初生嬰兒——膿漏眼開(kāi)展：男性——后尿道炎、前列腺炎、精囊炎、附睪炎等女性——子宮內(nèi)膜炎、輸卵管炎等后遺癥：不育、不孕、異位妊娠6整理課件淋球菌感染淋病是由奈瑟淋球菌所致的泌尿生殖系統(tǒng)感染。不僅可引起男性尿道炎、女性宮頸或尿道炎，還可經(jīng)血行播散引起菌血癥。臨床表現(xiàn)因感染的人群不同，部位不同而有差異7整理課件實(shí)驗(yàn)室鑒別淋球菌直接涂片：取尿道或?qū)m頸膿性分泌物涂片，作革蘭染色，鏡下可見(jiàn)大量多形核白細(xì)胞，細(xì)胞內(nèi)可見(jiàn)數(shù)量不等的革蘭陰性雙球菌。涂片對(duì)女性檢出率低，有假陰性，必要時(shí)應(yīng)作培養(yǎng)。細(xì)菌培養(yǎng)：標(biāo)本在選擇性培養(yǎng)基上培養(yǎng)，可出現(xiàn)典型菌落，氧化酶試驗(yàn)陽(yáng)性，鏡檢可見(jiàn)到革蘭陰性雙球菌，還可用檢測(cè)淋球菌DNA，直接免疫熒光試驗(yàn)協(xié)助確診。8整理課件淋球菌培養(yǎng)淋球菌是淋病的病原菌，為實(shí)驗(yàn)室確診淋病提供依據(jù)。〔培養(yǎng)法為確診淋病的金標(biāo)準(zhǔn)〕淋球菌藥敏試驗(yàn)，測(cè)定藥物抑菌或殺菌能力，以便準(zhǔn)確有效利用藥敏進(jìn)行治療。9整理課件淋球菌培養(yǎng)條件淋球菌的營(yíng)養(yǎng)要求較復(fù)雜，所用的培養(yǎng)基中應(yīng)含有動(dòng)物蛋白及細(xì)菌生長(zhǎng)所需的各種因子。目前國(guó)內(nèi)常用的是血液瓊脂或巧克力瓊脂。國(guó)外常用的培養(yǎng)基有Thayer-Martin(T-M)培養(yǎng)基、NewYorkCity(NYC)培養(yǎng)基和Martin-Lewis(ML)培養(yǎng)基等。10整理課件T-M培養(yǎng)基T-M培養(yǎng)基是在GC根底培養(yǎng)基中，參加血紅蛋白(1%)、抗生素(萬(wàn)古霉素3g/ml、粘菌素7.5g/ml和制霉菌素12.5g/ml)和淋球菌增菌劑，使絕大多數(shù)雜菌被抑制而淋球菌菌落長(zhǎng)得較大，在乎皿中幾乎呈純培養(yǎng)，從而大大提高了由子宮頸、尿道，尤其是咽和直腸部位別離出淋菌的陽(yáng)性率。11整理課件淋球菌培養(yǎng)條件淋球菌對(duì)外環(huán)境變化頗為敏感，對(duì)寒冷和枯燥抵抗力很弱。因此，為了保證培養(yǎng)有足夠的成功率，取材后應(yīng)立即接種，標(biāo)本離體時(shí)間越短越好。培養(yǎng)的最適溫度為35℃~37℃，超過(guò)38.5℃或低于30℃便生長(zhǎng)不良。因此，孵育的溫度要恒定。淋球菌為需氧菌，但最初從人體別離時(shí)，為促進(jìn)生長(zhǎng)，需用5%二氧化碳環(huán)境培養(yǎng)。12整理課件淋球菌培養(yǎng)關(guān)鍵取材部位準(zhǔn)確女性病人標(biāo)本：取宮頸內(nèi)膜分泌物男性病人標(biāo)本：取尿道口膿性分泌物培養(yǎng)基預(yù)溫立即接種最好床邊接種適宜的培養(yǎng)基CO2培養(yǎng)13整理課件淋球菌鑒定分泌物直接涂片染色別離培養(yǎng)可疑菌落涂片染色生化反響初步報(bào)告生長(zhǎng)特性14整理課件平板生長(zhǎng)特性經(jīng)24h~48h的培養(yǎng)后，可形成圓形、凸起、濕潤(rùn)、光滑、半透明或灰白色菌落，似露水珠，易乳化，直徑為0.5mm~1.0mm。15整理課件平板生長(zhǎng)形態(tài)16整理課件鏡檢形態(tài)從菌落上取材作涂片，革蘭染色后可見(jiàn)到菌的大小及染色的深度有差異，排列也不一致，呈典型革蘭陰性雙球菌。17整理課件鏡檢形態(tài)18整理課件鏡檢形態(tài)來(lái)自泌尿生殖道符合初步鑒定標(biāo)準(zhǔn)的別離株，一般可診斷為淋球菌，準(zhǔn)確率達(dá)98%。對(duì)于菌落形態(tài)不典型的別離株，來(lái)自咽部、眼睛或其他泌尿生殖道外部位的別離株，應(yīng)作確診試驗(yàn)。19整理課件鑒定試驗(yàn)氧化酶試驗(yàn)糖分解試驗(yàn)〔葡萄糖、麥芽糖、蔗糖〕30％過(guò)氧化氫試驗(yàn)20整理課件鑒定依據(jù)形態(tài)染色典型：革蘭陰性球菌培養(yǎng)特性：光滑、濕潤(rùn)、易乳化菌落生化反響：氧化酶陽(yáng)性、僅分解葡萄糖〔麥芽糖、乳糖、蔗糖、果糖均不分解〕21整理課件奈瑟菌屬鑒定菌名生長(zhǎng)產(chǎn)酸硝酸鹽還原DNA酶巧克力平皿上特點(diǎn)巧克力或血瓊脂(22℃)營(yíng)養(yǎng)瓊脂(35℃)葡萄糖麥芽糖乳糖蔗糖果糖淋病奈瑟菌--+------光滑,灰白色,透明腦膜炎奈瑟菌--++-----光滑,灰,無(wú)色,透明,個(gè)別淡黃粘膜奈瑟菌++++-+++-黃綠,光滑卡他布蘭漢d+-----++灰白→棕色、易乳化奈瑟菌屬與布蘭漢菌屬的鑒別注意：d:表示不定22整理課件