潔凈區(qū)環(huán)境測試操作規(guī)程

干凈區(qū)環(huán)境測試操作規(guī)程頒發(fā)部門：質(zhì)量部分發(fā)部門：生產(chǎn)部、設(shè)備部、質(zhì)量部、采購部、倉儲部、財務(wù)部一、目的：建立一種空氣干凈度監(jiān)測原則操作規(guī)程，規(guī)范空氣干凈度監(jiān)測操作程序，確保細(xì)胞生產(chǎn)干凈車間的空氣干凈度符合GMP規(guī)定。二、范疇：合用細(xì)胞生產(chǎn)干凈車間的空氣干凈度的監(jiān)控。三、職責(zé)/根據(jù)：質(zhì)量部負(fù)責(zé)該原則操作規(guī)程的制訂，并監(jiān)督制度的執(zhí)行；質(zhì)量確保部和質(zhì)量控制部門負(fù)責(zé)該原則操作規(guī)程的實(shí)施；質(zhì)量確保部門對進(jìn)行監(jiān)督與檢查。四、程序/內(nèi)容：1概述1.1干凈廠房是指根據(jù)需要對空氣的塵粒（涉及微生物）、風(fēng)速、溫濕度及壓力等進(jìn)行控制的密閉環(huán)境，其建筑構(gòu)造、裝備及其使用均含有減少該區(qū)域內(nèi)污染源的介入、產(chǎn)生和滯留的功效，并以其空氣干凈度等級符合《藥品生產(chǎn)質(zhì)量管理規(guī)范》的規(guī)定。1.2干凈廠房分為：D級、C級，B級、A級。我司細(xì)胞生產(chǎn)干凈區(qū)為D級、C級和局部A級。2沉降菌測試2.1辦法概述本測試辦法運(yùn)用沉降法，即通過自然沉降原理收集在空氣中的生物粒子于培養(yǎng)基平皿，經(jīng)48小時以上培養(yǎng)，在適宜的條件下讓其繁殖到可見的菌落數(shù)，來評定干凈環(huán)境內(nèi)的活微生物數(shù)，并以此來評定干凈室（區(qū)）的干凈度。2.2所用設(shè)備及儀器高壓滅菌鍋：使用時嚴(yán)格按照操作規(guī)程使用恒溫培養(yǎng)箱：定時對培養(yǎng)箱溫度進(jìn)行檢定2.3培養(yǎng)皿：普通采用ф90mm×15mm玻璃培養(yǎng)皿。2.4培養(yǎng)基：普通營養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基將培養(yǎng)基加熱熔化，冷卻至約45℃，在無菌操作條件下將培養(yǎng)基注入培養(yǎng)皿，每皿約15ml。待瓊脂培養(yǎng)基凝固后，將培養(yǎng)皿放入30~35℃恒溫培養(yǎng)箱中培養(yǎng)48小時，若培養(yǎng)基平皿上確無菌落生長，即可供采樣用，制備好的培養(yǎng)皿應(yīng)在2~8℃的環(huán)境中寄存。2.5測試環(huán)節(jié)1）采樣①將已制備好的培養(yǎng)皿放置在預(yù)先擬定的取樣點(diǎn)，然后從里到外逐個打開培養(yǎng)皿蓋，使培養(yǎng)基表面暴露在空氣中。②靜態(tài)測試時，培養(yǎng)皿暴露時間為30分鐘以上；動態(tài)測試時，培養(yǎng)皿暴露時間為4小時，單個沉降碟的暴露時間能夠少于4小時，同一位置可使用多個沉降碟持續(xù)進(jìn)行監(jiān)測并累積計數(shù)。③全部采樣結(jié)束后，將培養(yǎng)皿蓋上蓋子，倒置放置。2）培養(yǎng)①全部采樣結(jié)束，將培養(yǎng)皿倒置于恒溫培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。②在30~35℃培養(yǎng)，時間不少于72h。③每批培養(yǎng)基應(yīng)有對照實(shí)驗(yàn)，檢查培養(yǎng)基本身與否污染，可每批選定3只培養(yǎng)皿作對照培養(yǎng)。3）菌落計數(shù)①用肉眼直接計數(shù)。②若培養(yǎng)皿上有2個或2個以上菌落重疊，可分辨時仍以2個或2個以上的菌落計數(shù)。2.6注意事項1）測試用品要做滅菌解決，以確保測試的可靠性、精確性。2）采用一切方法避免人為對樣本的污染。3）對培養(yǎng)基、培養(yǎng)條件及其它參數(shù)作具體的統(tǒng)計。4）由于細(xì)菌種類繁多、差別甚大，計數(shù)時普通用透射光于培養(yǎng)皿背面或正面認(rèn)真觀察，不要漏計培養(yǎng)皿邊沿生長的菌落，并須注意細(xì)菌菌落與培養(yǎng)基沉淀物的區(qū)別，必要時用顯微鏡鑒別。5）采樣前應(yīng)認(rèn)真檢查每個培養(yǎng)皿的質(zhì)量，如發(fā)現(xiàn)變質(zhì)、破損或污染的應(yīng)剔除。2.7測試規(guī)則1）測試狀態(tài)①沉降菌測試前，被測試干凈室（區(qū)）的溫濕度須達(dá)成規(guī)定的規(guī)定，壓差必須控制在規(guī)定值內(nèi)。②沉降菌測試前，被測試干凈室（區(qū)）已通過消毒。③測試狀態(tài)有靜態(tài)和動態(tài)兩種，狀態(tài)的選擇必須符合生產(chǎn)的規(guī)定，并在報告及統(tǒng)計中注明測試狀態(tài)。2）測試人員①測試人員必須穿戴符合環(huán)境干凈度級別的工作服。②靜態(tài)測試時，室內(nèi)測試人員不得多于2個人。3）測試時間①靜態(tài)測試時，干凈廠房的空氣凈化調(diào)節(jié)系統(tǒng)的風(fēng)機(jī)啟動30分鐘后開始測試。②動態(tài)測試，在生產(chǎn)人員處在正常生產(chǎn)狀態(tài)下進(jìn)行的測試。③對單向流，測試應(yīng)在凈化空調(diào)系統(tǒng)正常運(yùn)行不少于10分鐘后開始。④對非單向流，測試應(yīng)在凈化空調(diào)系統(tǒng)正常運(yùn)行不少于30分鐘開始。4）沉降菌計數(shù)①采樣點(diǎn)數(shù)目及布置：采樣點(diǎn)布置參考圖1，工作區(qū)測試點(diǎn)位置離地0.8~1.5m左右（略高于工作面）。②最少采樣點(diǎn)數(shù)目，沉降菌的最少采樣點(diǎn)數(shù)可按表1擬定。③可在核心設(shè)點(diǎn)或核心工作活動范疇處增加測點(diǎn)，采樣點(diǎn)的布置應(yīng)力求均勻，避免采樣點(diǎn)在某局部區(qū)域過于集中，某局部區(qū)域過于稀疏。圖1沉降菌采樣點(diǎn)數(shù)目及布置圖表1最低程度采樣點(diǎn)數(shù)面積(m2)干凈級別A級B級C級D級<102～32～32210≤S＜20442220≤S＜40882240≤S＜100161642100≤S＜2004040103200≤S＜4008080206400≤S＜100016016040131000≤S＜4004001003280080020063注:表中面積，對于單向流(層流)干凈室,是指送風(fēng)面面積；對于亂流干凈室，是指房間面積。2.8統(tǒng)計：測試報告中應(yīng)統(tǒng)計房間測試狀態(tài)及測試數(shù)據(jù)。2.9成果計算1）用計數(shù)辦法提出各個培養(yǎng)皿的菌落數(shù)。2）平均菌落數(shù)的計算見下式：平均菌落數(shù)m=QUOTEEQ\F(m1+m1+……+mn,n)式中：m為平均菌落數(shù)；m1為1號培養(yǎng)血菌落數(shù)；m2為2號培養(yǎng)皿菌落數(shù)；mn號培養(yǎng)皿菌落數(shù)；n為培養(yǎng)皿總數(shù)。3）動態(tài)監(jiān)測時，如果培養(yǎng)皿暴露時間不大于4小時，最后的菌落計數(shù)（cfu／4h）應(yīng)為：最后菌落計數(shù)M=m/實(shí)際暴露時間×4式中：m為平均菌落數(shù)；M為最后累計4小時菌落計數(shù)。2.10成果評定：用平均菌落數(shù)判斷干凈室的空氣中的微生物。1）干凈室（區(qū)）內(nèi)的平均菌落數(shù)必須低于所選定的評定原則，見表3。表3評定原則干凈級別A級B級C級D級原則（平均）cfu/4小時<15501002）若某干凈室（區(qū)）較平均菌落數(shù)超出評定原則，則必須對此區(qū)域先行消毒，然后重新測試兩次，測試成果必須符合規(guī)定。3.塵埃粒子測試3.1概述：干凈區(qū)懸浮粒子監(jiān)測采用計數(shù)濃度法，即通過測定干凈區(qū)環(huán)境內(nèi)單位體積空氣中含某粒徑的懸浮粒子數(shù)，來評定干凈室（或干凈區(qū)）的懸浮粒子干凈度等級。3.2儀器：Metone-3400型微塵粒子計數(shù)器。3.3監(jiān)測原理：空氣中懸浮粒子在光的照射下產(chǎn)生光散射現(xiàn)象，散射光的強(qiáng)度與粒子的體積成正比。3.4Metone-3400型微塵粒子計數(shù)器使用要點(diǎn)。1）使用儀器時應(yīng)嚴(yán)格按照《Metone-3400型微塵粒子計數(shù)器原則操作規(guī)程》進(jìn)行操作。2）儀器開機(jī)預(yù)熱至穩(wěn)定后，方可按闡明書的規(guī)定對儀器進(jìn)行設(shè)立。3）采樣管口置采樣點(diǎn)采樣時，在確認(rèn)計數(shù)穩(wěn)定后方可開始持續(xù)讀數(shù)。4）采樣管必須干凈，嚴(yán)禁滲漏。5）采樣管的長度應(yīng)根據(jù)儀器的允許長度。除另有規(guī)定外，長度不得不不大于1.5m。6）計數(shù)器采樣口和儀器工作位置應(yīng)處在同一氣壓和溫度下，以免產(chǎn)生測量誤差。7）必須按照儀器的檢定周期，定時對儀器作檢定，以確保測試數(shù)據(jù)的可靠性。3.5測試規(guī)則1）測試條件①溫度和濕度：干凈室（區(qū)）的溫度和相對溫度應(yīng)與其生產(chǎn)及工藝規(guī)定相適應(yīng)（溫度控制在18~26℃，相對濕度控制在45~65%之間為宜）。②壓差：有干凈級別規(guī)定的干凈室（區(qū)）相對非干凈室（區(qū)）的壓差應(yīng)不不大于10Pa，空氣干凈度不同的干凈室（區(qū)）之間的壓差應(yīng)不不大于10Pa，空氣干凈度等級相似的區(qū)域，產(chǎn)塵量大的操作室應(yīng)保持相對負(fù)壓（≤-5Pa）。2）測試狀態(tài)①靜態(tài)測試：干凈室（區(qū)）凈化空氣調(diào)節(jié)系統(tǒng)已處在正常運(yùn)行狀態(tài)，工藝設(shè)備已安裝，干凈室（區(qū)）內(nèi)沒有生產(chǎn)人員的狀況下進(jìn)行測試，靜態(tài)測試時，室內(nèi)測試人員不得多于2人。②動態(tài)測試：干凈室（區(qū)）已處在正常生產(chǎn)狀態(tài)下進(jìn)行測試。③測試報告中應(yīng)標(biāo)明測試時所采用的狀態(tài)。3）測試時間①對單向流測試應(yīng)在凈化空氣調(diào)節(jié)系統(tǒng)正常運(yùn)行時間不少于10min后開始。②對非單向流測試應(yīng)在凈化空氣調(diào)節(jié)系統(tǒng)正常運(yùn)行時間不少于30min后開始。4）懸浮粒子計數(shù)①采樣點(diǎn)數(shù)目及其布置A、最少采樣點(diǎn)數(shù)目：懸浮粒子干凈度測試的最少采樣點(diǎn)數(shù)目能夠按照表1擬定。B、采樣點(diǎn)的布置a、采樣點(diǎn)普通在離地面0.8～1.5m高度的水平面上均勻布置。B、采樣點(diǎn)的布置還可根據(jù)需要在生產(chǎn)及工藝核心操作區(qū)增加采樣點(diǎn)。②采樣點(diǎn)的限定：對于任何干凈室面積較小或局部空氣凈化區(qū)域，采樣點(diǎn)的數(shù)目不得少于2個，總采樣次數(shù)不得少于5次。每個采樣點(diǎn)的采樣次數(shù)能夠多于1次，且不同采樣點(diǎn)的采樣次數(shù)能夠不同。普通狀況下，測點(diǎn)的位置以下圖2所示：注：為采樣點(diǎn)。③采樣量：不同干凈級別每點(diǎn)·最小的采樣量，見表5。表5不同干凈級別每點(diǎn)最小采樣量干凈級別采樣量（L/次）A級1000B級1000C級100D級100④采樣注意事項A、在確認(rèn)干凈室（區(qū)）壓差達(dá)成規(guī)定后，方可進(jìn)行采樣。B、對于單向流，計數(shù)器采樣管口朝向應(yīng)正對氣流方向，對于非單向流，采樣管口垂直向上。C、當(dāng)采樣點(diǎn)與設(shè)備重疊時，可取消該采樣點(diǎn)（在確保最少采樣點(diǎn)數(shù)目的前提下），或?qū)⒉蓸狱c(diǎn)設(shè)在設(shè)備的上風(fēng)側(cè)。D、布置采樣點(diǎn)時，應(yīng)避開回風(fēng)口。E、采樣時測試人員應(yīng)站在采樣口的下風(fēng)側(cè)。3.6成果計算：懸浮粒子濃度的采樣數(shù)據(jù)應(yīng)按下述環(huán)節(jié)統(tǒng)計計算1）以測試打印的數(shù)據(jù)為根據(jù)進(jìn)行計算。2）打印數(shù)據(jù)上應(yīng)涉及的內(nèi)容：采樣點(diǎn)（A）、采樣次數(shù)（L）、年月日、測試時間、測量周期（F）、粒徑（含0.5μm和5μm）及測試數(shù)據(jù)、每M3空氣中的粒子數(shù)、UCL值、級別。B1+B2+…+BB1+B2+…+BNNA=A=式中：A：某一采樣點(diǎn)的平均粒子濃度（粒∕m3）N：某一采樣點(diǎn)的采樣次數(shù)Bi：某一采樣點(diǎn)的粒子濃度（i=1，2，3…N）粒∕m3A1+AA1+A2+…+ALLM=式中：M：平均值的均值，即干凈室（區(qū)）的平均粒子濃度，粒∕m3。Ai：某一采樣點(diǎn)的平均粒子濃度（i=1，2，3…L），粒∕m3。L：某一干凈室（區(qū)）的總采樣點(diǎn)數(shù)，個。5）原則誤差式中：SE：平均值均值的原則誤差，粒∕m3。6）置信上限UCL=M+t×SE式中：UCL：平均值均值的95%置信上限，粒∕m3；t：95%置信上限的t分布系數(shù)，見表6。表6t分布系數(shù)表采樣點(diǎn)數(shù)L23456789＞9t6.312.922.352.132.021.941.901.86----備注：在采樣點(diǎn)只有1個，或多于9個時，不用計算95%置信上限。7）打印取值范疇①A級干凈度打印取值范疇：采樣量1000升，采樣時間10分鐘，取三次打印值按以上公式進(jìn)行計算。②C級干凈度打印取值范疇：粒子的采樣量100升，采樣時間1分鐘，取三次打印值按以上公式進(jìn)行計算。③D級干凈度打印取值范疇：粒子的采樣量100升，采樣時間1分鐘，取三次打印值按以上公式進(jìn)行計算。3.7成果評定：判斷懸浮粒子干凈度級別應(yīng)根據(jù)下述兩個條件：1）每個采樣點(diǎn)的平均粒子濃度必須低于或等于干凈級別規(guī)定的級別界限，即A≤級別界限。2）全部采樣點(diǎn)的粒子濃度平均值均值的95%置信度必須低于或等于規(guī)定的級別界限，即UCL≤級別界限。3.8懸浮粒子級別界限(見表7)：表7懸浮粒子級別界限干凈級別懸浮粒子最大允許數(shù)（粒/M3）靜態(tài)動態(tài)≥0.5μm≥5μm≥0.5μm≥5μmA級352020352020B級352029352900C級352900≤350≤29000D級35029000不作規(guī)定不作規(guī)定3.9報告：根據(jù)檢測的數(shù)據(jù)進(jìn)行計算后，填寫“懸浮粒子檢測統(tǒng)計”和“懸浮粒子檢測報告書”。4浮游菌測試4.1辦法概述本辦法采用計數(shù)濃度法，即通過收集懸游在空氣中的生物性粒子于專門的培養(yǎng)基，經(jīng)48小時后，在適宜的生長條件下讓其繁殖到可見的菌落進(jìn)行計數(shù)，從而鑒定干凈環(huán)境內(nèi)單位體積空氣中的活微生物數(shù)，以此來評定干凈室（區(qū)）的干凈度。4.2所用的儀器和設(shè)備1）高壓消毒鍋：使用時應(yīng)嚴(yán)格按照操作規(guī)程進(jìn)行。2）恒溫培養(yǎng)箱：必須定時對培養(yǎng)箱的溫度計進(jìn)行檢定。3）浮游菌采樣器：MAS100NT空氣浮游菌采樣器。4.3空氣采樣量：根據(jù)需要選定，已知采樣器的流量（L/min），設(shè)定采樣時間（min），兩者相乘即采樣量（L）。4.4注意事項1）采樣口必須用便于消毒及化學(xué)性能穩(wěn)定的材料制造。4.5測試環(huán)節(jié)1）測試前儀器、培養(yǎng)皿表面必須嚴(yán)格消毒。2）采樣者應(yīng)穿戴與被測干凈區(qū)域?qū)?yīng)的工作服，在轉(zhuǎn)盤上放入或調(diào)換培養(yǎng)皿前，雙手用消毒劑消毒。3）全部采樣結(jié)束后，將培養(yǎng)皿倒置于恒溫培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。在30～35℃培養(yǎng)箱中培養(yǎng)，時間不少于48h。4）每批培養(yǎng)基應(yīng)有對照實(shí)驗(yàn)，檢查培養(yǎng)基本身與否污染。可每批選定3只培養(yǎng)皿作對照培養(yǎng)。4.6測試規(guī)則1）測試狀態(tài)①浮游菌測試前，被測試干凈室（或干凈區(qū)）溫、濕度須達(dá)成規(guī)定的規(guī)定，靜壓差、換氣次數(shù)、空氣流速必須控制在規(guī)定值內(nèi)。②浮游菌測試前，被測試干凈室（或干凈區(qū)）已通過消毒。③測試狀態(tài)有靜態(tài)和動態(tài)兩種，測試狀態(tài)的選擇必須符合生產(chǎn)的規(guī)定，并在報告中注明測試狀態(tài)。2）測試人員①測試人員必須穿戴符合環(huán)境級別的工作服。②靜態(tài)測試時，室內(nèi)測試人員不得多于2人。3）測試時間①對單向流，測試應(yīng)在凈化空調(diào)系統(tǒng)正常運(yùn)行不少于10min后開始。②對非單向流，測試應(yīng)在凈化空調(diào)系統(tǒng)正常運(yùn)行不少于30min后開始。4）浮游菌濃度計算①采樣點(diǎn)數(shù)量及其布置A、最少采樣點(diǎn)數(shù)目：懸浮粒子干凈度測試的最少采樣點(diǎn)數(shù)目能夠按照表1擬定。B、采樣點(diǎn)的位置：采樣點(diǎn)位置能夠同懸浮粒子測試點(diǎn)。a、工作區(qū)測點(diǎn)位置離地0.8m～1.5m左右（略高于工作面）。b、可在核心設(shè)備或核心工作活動范疇處增加測點(diǎn)。②最小采樣量：采樣量根據(jù)日常檢測及環(huán)境證明，每次最小采樣量見表9。表9浮游菌測試最少采樣量干凈級別采樣量L/次A級1000LB級1000LC級500LD級100L③采樣次數(shù)：每個采樣點(diǎn)普通采樣一次。④采樣注意事項A、對于單向流或送風(fēng)口，采樣器采樣管口朝向應(yīng)正對氣流方向；對于非單向流，采樣管口向上。B、布置采樣點(diǎn)時，最少應(yīng)離開塵粒較集中的回風(fēng)口1m以上。C、采樣時，測試