中藥卷柏水提物化學成分研究

中藥卷柏水提物化學成分研究

柏樹，多年生草本植物。這是柏樹科的一個整體。它是長生不死草、九死還魂草、蓮花等的一種草本植物。功能破血散瘀,活血止血。主治腹痛、閉經(jīng)、■瘕淋結(jié)及吐血便血尿血等癥。它和墊狀卷柏(Selaginellapulvinata(HooketGrev.)Maxim.)一直被中國藥典收載作為臨床規(guī)范藥材使用。現(xiàn)代藥理及臨床研究表明卷柏有防癌治癌、抗炎、抗病毒、鎮(zhèn)痛、降血壓、降血糖和增強人體免疫功能等作用,我國民間用其降血壓及治療癌癥,療效顯著。作者的藥理實驗結(jié)果表明,卷柏水提取物對小鼠肉瘤S180、肝癌H22的生長有明顯的抑制作用。為闡明其活性成分,本文首次報道從其水提取物中得到的9個苯丙素類化合物:(2R,3S)-二氫-2-(3′,5′-二甲氧基-4′-羥基苯基)-3-羥甲基-7-甲氧基-5-乙?；今夁秽?1),3-羥基-苯丙酸-(2′-甲氧基-4′-羧基苯酚)酯(卷柏酯A,2),丁香脂素(3),1-(4′-羥基-3′-甲氧基苯基)丙三醇(4),阿魏酸(5),咖啡酸(6),香莢蘭酸(7),丁香酸(8),7-羥基香豆素(9)。其中化合物1,2為新化合物,其余化合物均為首次從卷柏屬植物中分離得到?；衔?淡黃色樹脂狀物,三氯化鐵-鐵氰化鉀顯藍色,示有酚羥基存在。HRFAB-MS給出其分子式為C20H22O7(實測值:375.1440,計算值:375.1438[M+1]+),其1HNMR的芳香區(qū)域出現(xiàn)3組質(zhì)子峰:δ7.63(1H,brs),7.50(1H,brs),6.75(2H,s),結(jié)合13CNMR推斷此化合物含有兩個苯環(huán),其中1個具有對稱性;質(zhì)子峰δ5.65(1H,d,J=7.2Hz,2-H),3.65(1H,m,3-H)的出現(xiàn),提示為二氫苯駢呋喃類化合物,相應的碳原子信號分別出現(xiàn)在δ89.60(CH),53.79(CH)處;1HNMR上在δ3.85左右出現(xiàn)3個三質(zhì)子單峰,說明此化合物上連有3個甲氧基;在δ2.51處出現(xiàn)有1個三質(zhì)子單峰,推斷是1個與吸電子基羰基(δ197.10)相連的甲基,HMBC進一步證明了δ2.51(3H,s)與δ197.10相關,并證明C=O連在B環(huán)上。DEPT譜證明δ197.10為季碳,δ63.72為仲碳。[α]25DD25-9.6°(c1.80,CH3OH),經(jīng)與文獻對照,確定此化合物的結(jié)構(gòu)為(2R,3S)-二氫-2-(3′,5′-二甲氧基-4′-羥基苯)-3-羥甲基-7-甲氧基-5-乙?；今夁秽?為一新化合物。其NMR數(shù)據(jù)見表1。化合物2白色針狀結(jié)晶(MeOH),mp109～110℃,TLC上與三氯化鐵-鐵氰化鉀試劑反應顯藍色,溴酚藍溶液反應顯黃色,同時其紅外光譜中在3485cm-1有一強吸收峰,在3250～2511cm-1有一寬峰,羰基吸收峰出現(xiàn)在1685cm-1處,推斷分子中含有酚羥基和羧基。由NEGHRFAB-MS主要裂解碎片的組成和NMR譜確定其分子式為C17H16O6。NMR譜表明其含有兩個苯環(huán),在δ3.90處有一三質(zhì)子單峰,表明存在1個甲氧基。根據(jù)1H-1HCOSY和偶合常數(shù)表明1個苯環(huán)(B環(huán))上的3個質(zhì)子為1個ABX系統(tǒng),分別位于δ7.51(1H,d,J=1.6Hz,3′-H),6.89(1H,d,J=8.0Hz,6′-H),7.55(1H,dd,J=1.6,8.0Hz,5′-H),根據(jù)HMQC與HMBC確定B環(huán)上各C原子信號分別出現(xiàn)在δ151.89(1′-C),147.95(2′-C),113.25(3′-C),122.78(4′-C),124.56(5′-C),115.33(6′-C),這與香莢蘭酸苯環(huán)上的H和C信號基本一致,另外通過HMBC,表明羧基C原子(δ167.94)與苯環(huán)B上的3′-H(δ7.51)和5′-H(δ7.55)質(zhì)子相關,同時其HRFAB-MS的碎片離子峰167.0349也證明1個羧基和甲氧基連在B環(huán)上,說明此化合物的B環(huán)部分為香莢蘭酸部分;另一苯環(huán)(A環(huán))上4個H質(zhì)子分別位于δ6.68(2H,m,2-H,6-H),6.62(1H,dd,J=2.0,8.0Hz,4-H),7.05(1H,t,J=8.0Hz,5-H)。在δ2.78(7-H)與δ2.51(8-H)處分別有兩個相關的雙質(zhì)子三重峰,HMQC幫助確定C-7,C-8分別位于δ31.33與δ35.93處,同時DEPT譜證明C-7,C-8為仲碳,表明分子中含有-CH2-CH2-基團。綜合分析其1HNMR,13CNMR,HMQC,HMBC及HRFAB-MS等波譜數(shù)據(jù),確定其結(jié)構(gòu)為3-羥基-苯丙酸-(2′-甲氧基-4′-羧基苯酚)酯。為一個新化合物,命名為卷柏酯A,根據(jù)結(jié)構(gòu)與生源關系推斷此酯由香莢蘭酸和3-羥基苯丙酸脫去一分子H2O形成。柱色譜填充劑和儀器Kofler顯微測熔儀,未經(jīng)校正;ShimadzuPC8201紅外分光光度計;ShimadzuUV-VIS2201紫外分光光度計;Brukeresquire300000142質(zhì)譜儀;APEXII型傅立葉變換離子回旋質(zhì)譜儀;DPX-400(TMS為內(nèi)標)核磁共振儀;Perkin-ElmebPolarimeter341微量旋光儀。柱色譜填充劑所用SephadexLH-20系日本三菱公司生產(chǎn);所用試劑均為分析純及化學純。卷柏采自河南省西峽縣,經(jīng)河南中醫(yī)學院劉若庸教授鑒定為卷柏科(Selaginellaceae)卷柏屬(Selaginella)植物卷柏(Selaginellatamariscina(Beauv.)Spring全草。標本存于本實驗室(編號:2000070815)。1主要化合物3-3-4e-5-氯-2o,2卷柏10kg用沸水煎煮提取兩次,合并濾液并減壓濃縮后,依次用Et2O,EtOAC,n-BuOH萃取。取EtOAC萃取物12g先通過SephadexLH-20柱色譜,用水及含水MeOH洗脫,合并水洗脫部分Fr.3～9,經(jīng)硅膠柱色譜純化,得化合物2(11mg),7(10mg)和8(16mg)[EtOAc-EtOH-H2O(18∶2∶1)洗脫,TLC檢識,三氯化鐵-鐵氰化鉀顯藍色];合并水洗脫部分Fr.15～39,經(jīng)硅膠柱色譜純化,得化合物9(11mg)[EtOAc-EtOH-H2O(25∶2∶1)洗脫,TLC檢識,三氯化鐵-鐵氰化鉀顯藍色];合并10%MeOH洗脫部分Fr.5～15,得化合物5(7mg)和6(8mg)[EtOAc-EtOH-H2O(30∶2∶1)洗脫,TLC檢識,三氯化鐵-鐵氰化鉀顯藍色];合并10%甲醇洗脫部分Fr.18～40,經(jīng)硅膠柱色譜純化[EtOAc-EtOH-H2O(18∶2∶1)洗脫,TLC檢識,三氯化鐵-鐵氰化鉀顯藍色]得化合物1(13mg)和3(8mg)。取n-BuOH萃取物12g先通過SephadexLH-20柱色譜,用H2O及含水MeOH洗脫,合并水洗脫部分Fr.43～64經(jīng)硅膠柱色譜純化[EtOAc-EtOH-H2O(16∶2∶1)洗脫,TLC檢識,三氯化鐵-鐵氰化鉀顯藍色]得到化合物4(6mg)。2-4-羥基-3-甲氧基苯基丙三醇ld50化合物1淡黃色樹脂狀物,TLC上三氯化鐵-鐵氰化鉀噴霧反應顯藍色。[α]25DD25-9.6°(c1.80,CH3OH)。IR(KBr)cm-1:3455(-OH),2968,1694(C=O),1605,1514,1460,1385,1266,1219,1113,1027,785。UVλmaxnm:210,280。其NMR數(shù)據(jù)見表1?；衔?白色針狀結(jié)晶(MeOH),mp109～110℃,TLC上與三氯化鐵-鐵氰化鉀試劑反應顯藍色,溴酚藍溶液反應顯黃色。NEGHRFAB-MS:碎片A-,m/z165.0556(計算值165.0552),碎片B-m/z167.0349(計算值167.0344)。IR(KBr)cm-1:3485,3400～2794(寬峰),3131,2925,2853,1685,1598,1523,1456,1434,1384,1298,1239,1205,1165,1112,1029,882,758,698,505。其NMR(inacetone-d6+D2O,400MHz)數(shù)據(jù)見表1?；衔?白色方晶,mp175～177℃。TLC上三氯化鐵-鐵氰化鉀噴霧顯藍色。IR(KBr)cm-1:3450,3090,1600,1510,1450,1420,1375,1190,1100,980,840,730。1HNMR(inCDCl3,400MHz)δ6.59(4H,s,2,6,2′,6′-H),4.73(2H,d,J=4.4Hz,7,7′-H),3.89,4.29(4H,m,9,9′-H),3.09(2H,m,8,8′-H),3.91(12H,s,-OCH3×4)。13CNMR(inCDCl3,100MHz)δ132.05(1,1′-C),102.61(2,6,2′,6′-C),147.11(3,5,3′,5′-C),134.22(4,4′-C),86.06(7,7′-C),54.32(8,8′-C),71.78(9,9′-C),56.35(-OCH3×4)。ESI-MS測其分子量為418,經(jīng)與文獻對照,以上數(shù)據(jù)與丁香脂素一致。化合物4無色粉末,三氯化鐵-鐵氰化鉀噴霧顯藍色。1HNMR(inacetone-d6,400MHz)δ7.04(1H,d,J=1.8Hz),6.78(1H,d,J=8.0Hz),6.85(1H,dd,J=1.8,8.0Hz),4.57(1H,d,J=6.2Hz),3.65(1H,m),3.51(1H,dd,J=4.0,11.2Hz),3.40(1H,dd,J=6.1,11.2Hz),3.85(3H,s);13CNMR(inacetone-d6,100MHz)δ134.96,111.51,148.07,146.65,115.55,120.51,74.66,77.16,63.76,52.23。經(jīng)與文獻對照,確定其結(jié)構(gòu)為1-(4-羥基-3-甲氧基苯基)丙三醇?；衔?白色結(jié)晶(MeOH),mp170～171℃。TLC上與三氯化鐵-鐵氰化鉀試劑反應顯藍色,溴酚藍溶液反應顯黃色。UVλmaxnm:210,280,313。IR(KBr)cm-1:3438～3000(寬峰),2842,2618,1691(C=O),1665,1620,1591,1516,1466,1431,1379,1326,1204,1177,1035,947,853,804。1HNMR(inDMSO,400MHz)δ7.27(1H,d,J=1.6Hz,2-H),6.80(1H,d,J=8.0Hz,5-H),7.09(1H,dd,J=1.6,8.0Hz,6-H),7.46(1H,d,J=16Hz,7-H),6.33(1H,d,J=16Hz,8-H),3.81(3H,s,-OCH3);13CNMR(inDMSO,100MHz)δ125.7(1-C),111.2(2-C),147.8(3-C),149.0(4-C),115.6(5-C),122.7(6-C),144.4(7-C),115.5(8-C),167.9(9-C),55.7(-OCH3)。其TLCRf與阿魏酸標準品完全一致,與文獻對照,其各種數(shù)據(jù)與阿魏酸一致,故確定為阿魏酸?；衔?黃白色結(jié)晶(MeOH),mp223～225℃。TLC上與三氯化鐵-鐵氰化鉀試劑反應顯藍色,溴酚藍溶液反應顯黃色。UVλmaxnm:210,280,313。1HNMR(inacetone-d6,400MHz)δ7.15(1H,d,J=1.6Hz,2-H),6.86(1H,d,J=8.0Hz,5-H),7.06(1H,dd,J=1.6,8.0Hz,6-H),7.30(1H,d,J=16Hz,7-H),6.24(1H,d,J=16Hz,8-H);13CNMR(inacetone-d6,100MHz)δ127.5(1-C),115.6(2-C),146.1(3-C),148.4(4-C),116.1(5-C),122.3(6-C),145.7(7-C),114.9(8-C),167.9(9-C)。其Rf與對照品咖啡酸一致,與文獻對照,確認為咖啡酸?；衔?白色結(jié)晶(MeOH),mp211～212℃。TLC上與三氯化鐵-鐵氰化鉀試劑反應顯藍色,溴酚藍溶液反應顯黃色。UVλmaxnm:290,259,218,208。IR(KBr)cm-1:3484,3400～2760(寬峰),2794,2610,1685,1598,1523,1434,1378,1281,1233,1204,1166,1112,1029,918,882,765。1HNMR(inacetone-d6+D2O,400MHz)δ7.54(1H,d,J=2.0Hz,2-H),6.87(1H,d,J=8.0Hz,5-H),7.56(1H,dd,J=2.0,8.0Hz,6-H),3.87(3H,s,-OCH3)。13CNMR(inacetone-d6+D2O,100MHz)δ123.1(1-C),115.2(2-C),147.9(3-C),151.7(4-C),113.3(5-C),124.6(6-C),167.6(7-C),56.1(-OCH3)。與文獻對照,其結(jié)構(gòu)確認為香莢蘭酸?；衔?白色粉末,mp211～212℃。TLC上與三氯化鐵-鐵氰化鉀試劑反應顯藍色,溴酚藍溶液反應顯黃色。IR(KBr)cm-1:3485(-OH),3400～2790(寬峰