沙棘籽渣和果渣中黃酮對(duì)糖尿病大鼠降糖作用的研究

沙棘籽渣和果渣中黃酮對(duì)糖尿病大鼠降糖作用的研究

沙棘是胡頹科的一種多年生落葉灌木，具有很高的藥物價(jià)值。這是中國(guó)古代和蒙古醫(yī)學(xué)中常用的藥物。唐朝的《四書(shū)》和《清代的珍珠草本植物》等古典醫(yī)學(xué)書(shū)籍都記錄了沙棘。1977年，衛(wèi)生部首次將沙棘列入《中華人民共和國(guó)藥典》。目前，國(guó)內(nèi)外學(xué)者主要集中于沙棘油、沙棘果汁及沙棘葉的研究。表明沙棘可以抗腫瘤、防輻射、增強(qiáng)心血管系統(tǒng)功能等。但至今，有關(guān)對(duì)沙棘籽渣和果渣的營(yíng)養(yǎng)成分和藥效的研究甚少。籽渣、果渣分別是沙棘籽榨油、果實(shí)軋汁后的殘?jiān)?，也是傳統(tǒng)藥用部位果實(shí)初級(jí)利用后的棄物，其中亦含較多活性物質(zhì)。我們的前期研究表明：沙棘籽渣和果渣中黃酮能體外清除自由基及抗脂質(zhì)過(guò)氧化；對(duì)正常小鼠的血糖、血脂具一定的降低作用，并抑制糖異生。本研究進(jìn)一步探討沙棘籽渣和果渣中黃酮對(duì)STZ誘導(dǎo)糖尿病大鼠的降糖作用及對(duì)體內(nèi)物質(zhì)代謝的影響。1材料和方法1.1材料表面1.1.1和3種植物沙棘籽渣黃酮(flavonoidsfromseedre-siduesofHippophaerhamnoidesL.,FSH)和果渣黃酮(flavonoidsfromfruitresiduesofHippophaerhamnoidesL.,FFH)由本院植物化學(xué)實(shí)驗(yàn)室制備。1.1.2動(dòng)物雄性SD大鼠體重（253.07±16.17)g（上海西普爾-必凱公司）。1.1.3血清、糖代謝和理化指標(biāo)的測(cè)定鏈脲佐菌素（streptozotocin,STZ,Sigma公司產(chǎn)品），鹽酸二甲雙胍片（Metformin,上海華氏制藥有限公司，批號(hào)：021101）；血清葡萄糖、膽固醇（TC）、甘油三酯（TG）、果糖胺和白蛋白測(cè)定試劑盒購(gòu)自上海科欣生物技術(shù)研究所；乳酸、乳酸脫氫酶（LDH）、谷胱甘肽（GSH）、谷胱甘肽還原酶（GR）和丙二醛（MDA）測(cè)定試劑盒購(gòu)自南京建成生物工程研究所；肝糖原用蒽酮硫酸法測(cè)定；蛋白含量用Folin酚試劑法。1.1.4分光器sartoris,wh-65、wh-65型螺旋混合器721型光柵分光光度計(jì)（上海第三分析儀器廠），紫外分光光度計(jì)，BS210S電子天平（Sartorius）,WH-85型旋渦混合器（上海手術(shù)器械廠）。1.2方法1.2.1模型大鼠的分組正常雄性大鼠適應(yīng)性飼養(yǎng)5d，禁食10h后，根據(jù)預(yù)試驗(yàn)選用57mg/kg劑量腹腔注射滅菌檸檬酸緩沖液（pH4.6）配制的4%STZ溶液。96h后，尾靜脈采血，測(cè)定禁食6h后空腹血糖值，取血糖值>15.00mmol/L的大鼠為模型大鼠。模型大鼠隨機(jī)分為模型對(duì)照組、二甲雙胍組、FSH組和FFH組，組間的血糖差異小于0.1mmol/L；同時(shí)另設(shè)一正常對(duì)照組。1.2.2灌胃時(shí)間及模型對(duì)照組和正常對(duì)照組灌胃FSH、FFH組均以劑量150mg/(kg·d)，二甲雙胍組則按劑量200mg/(kg·d)每天一次性灌胃，模型對(duì)照組和正常對(duì)照組灌胃等體積的蒸餾水。連續(xù)4w，每周測(cè)血糖一次，稱體重，每天測(cè)攝食量飲水量，4w后眼竇脈采血并處死，進(jìn)行血液和臟器分析。1.2.3統(tǒng)計(jì)處理用Excel軟件，結(jié)果以表示，組間差異經(jīng)t檢驗(yàn)。2結(jié)果與分析2.1ffh和二甲雙乍試驗(yàn)與模型對(duì)照組比，F(xiàn)SH極顯著地減少糖尿病大鼠的飲水量、攝食量，效果優(yōu)于二甲雙胍，而FFH對(duì)飲水量影響不大，對(duì)攝食量有顯著作用。三者對(duì)STZ糖尿病大鼠試驗(yàn)前后體重?zé)o明顯影響。提示FSH和FFH可調(diào)節(jié)糖尿病大鼠飲食水平。2.2ffh組與對(duì)照組血糖含量比較灌胃1、2、3、4w后，F(xiàn)SH組大鼠的血糖值都顯著地低于模型對(duì)照組，降糖的幅度分別5.66%、14.86%、16.68%、23.33%，與試驗(yàn)開(kāi)始相比，亦出現(xiàn)下降趨勢(shì)；FFH組僅在2w時(shí)血糖值顯著地低于模型對(duì)照組；二甲雙胍組在3w,4w時(shí)血糖值明顯的降低，降低率為15.84%、7.27%。表明FSH在劑量150mg/(kg·d)對(duì)糖尿病大鼠具有效的降糖作用。2.3fpss的表達(dá)在高糖環(huán)境中血清蛋白與血清中葡萄糖發(fā)生非酶促反應(yīng)形成具有酮胺鍵糖化血清蛋白，又稱果糖胺（FTS）。FTS在血清中的濃度比較穩(wěn)定，不受血糖暫時(shí)波動(dòng)影響，可反應(yīng)2～3w的血糖水平。進(jìn)一步分析結(jié)果(表3)：與模型對(duì)照組比，F(xiàn)SH組FTS水平顯著降低；FFH和二甲雙胍組FTS水平無(wú)顯著差異（P>0.05）。結(jié)合表2綜合分析，提示FSH能有效控制血糖水平。2.4鼠肝糖原、血清乳酸、ldh與模型對(duì)照組相比，F(xiàn)SH和FFH對(duì)STZ糖尿病大鼠的肝糖原、血清乳酸、LDH沒(méi)有明顯作用。提示FSH和FFH可能未通過(guò)增加肝糖原含量來(lái)降低血糖，沒(méi)有加強(qiáng)葡萄糖的無(wú)氧代謝作用，不會(huì)產(chǎn)生過(guò)多的乳酸。2.5ffh對(duì)tg的影響與模型對(duì)照組比，F(xiàn)SH能顯著降低STZ糖尿病大鼠血清TG水平，F(xiàn)FH對(duì)TG影響不大；FSH和FFH組的血清TC與模型組比無(wú)顯著差異（P>0.05）；二甲雙胍對(duì)血清TG和TC都無(wú)明顯的影響。提示FSH對(duì)STZ糖尿病大鼠并發(fā)的高脂血癥具一定的調(diào)節(jié)作用。2.6ffh、fsh、二甲雙鉞對(duì)血清蛋白及腎重指數(shù)的影響與模型組比，F(xiàn)SH組血清白蛋白、血清總蛋白及血清總蛋白/白蛋白水平顯著升高；FFH組血清白蛋白與模型組沒(méi)有差異，血清總蛋白及總蛋白/白蛋白水平顯著升高；而二甲雙胍對(duì)三者均無(wú)影響。同時(shí)FSH、FFH及二甲雙胍對(duì)腎重和腎重指數(shù)均無(wú)明顯影響。提示FSH和FFH可增加糖尿病大鼠血清蛋白水平，調(diào)節(jié)蛋白質(zhì)代謝紊亂。2.7甲雙fig對(duì)gsh和gr的影響結(jié)果顯示：FSH可顯著地增加糖尿病大鼠體內(nèi)的GSH水平和GR的活性；FFH同樣顯著地增加GSH水平，但對(duì)GR影響不大；而二甲雙胍對(duì)GSH和GR的作用均不明顯。MDA是機(jī)體內(nèi)不飽和脂肪酸在自由基的作用下產(chǎn)生脂質(zhì)過(guò)氧化最終產(chǎn)物，表7結(jié)果顯示：FSH、FFH和二甲雙胍對(duì)糖尿病大鼠體內(nèi)MDA的產(chǎn)生均有顯著的抑制作用，且FSH的效果最好。3fsh與ffh單次給藥對(duì)大鼠血糖的影響高血糖是糖尿病臨床重要指標(biāo)，果糖胺水平變化則反映糖基化程度。本研究表明：與模型組比，隨著療程延長(zhǎng)，F(xiàn)SH降糖效果逐漸明顯，4w后，降糖幅度達(dá)23.33%，20%的有效降糖；FSH組果糖胺水平也顯著低于模型對(duì)照組，因此FSH能穩(wěn)定有效地控制血糖水平。FFH組僅在2w時(shí)顯著低于模型對(duì)照組，果糖胺水平?jīng)]顯著性差異，如果延長(zhǎng)療程，可否提高藥效，尚待探究。糖尿病所致的脂質(zhì)代謝異常是導(dǎo)致動(dòng)脈粥樣硬化的重要危險(xiǎn)因素之一。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明：FSH對(duì)血清TG有顯著的降低作用，可調(diào)節(jié)糖尿病大鼠并發(fā)的高脂血癥，糾正其脂質(zhì)代謝異常。糖尿病亦引起蛋白質(zhì)代謝紊亂,研究證實(shí)，脂蛋白可刺激腎小球系膜細(xì)胞增殖，引起腎小球硬化，使腎臟損害加重，同時(shí)使血中白蛋白丟失增多，加重低蛋白血癥，而低蛋白血癥反過(guò)來(lái)又可刺激脂蛋白合成，從而造成惡性循環(huán)。本實(shí)驗(yàn)中，F(xiàn)SH和FFH組大鼠血清白蛋白或總蛋白水