疫苗預(yù)防脊髓灰質(zhì)炎課件

第二十章生物制品分析本章主要內(nèi)容生物制品的分類(lèi)生物制品的質(zhì)量要求生物制品鑒別試驗(yàn)、檢查內(nèi)容起源與發(fā)展

10世紀(jì)時(shí)，中國(guó)發(fā)明了種痘術(shù)，用人痘接種法預(yù)防天花，這是人工自動(dòng)免疫預(yù)防傳染病的創(chuàng)始。種痘不僅減輕了病情，還減少了死亡。17世紀(jì)時(shí)，俄國(guó)人來(lái)中國(guó)學(xué)習(xí)種痘，隨后傳到土耳其、英國(guó)、日本、朝鮮、東南亞各國(guó)，后又傳入美洲、非洲。1796年英國(guó)人E.詹納發(fā)明接種牛痘苗方法預(yù)防天花，他用弱毒病毒（牛痘）給人接種，預(yù)防強(qiáng)毒病毒（天花）感染，使人不得天花。此法安全有效，很快推廣到世界各地。牛痘苗可算作第一種安全有效的生物制品。19世紀(jì)中期，“免疫”概念已基本形成。1885年法國(guó)人L.巴斯德發(fā)明狂犬病疫苗，用人工方法減弱病毒的致病毒力，做成疫苗，被狂犬咬傷的人及時(shí)注射疫苗后，可避免發(fā)生狂犬病。巴斯德用同樣方法制成雞霍亂活疫苗、炭疽活疫苗，將過(guò)去以毒攻毒的辦法改為以弱制強(qiáng)。19世紀(jì)末日本人北里柴三郎和德國(guó)人貝林，E.(A.）用化學(xué)法處理白喉和破傷風(fēng)毒素，使其在處理后失去了致病力，接種動(dòng)物后的血清中和相應(yīng)的毒素，這種血清稱(chēng)為抗毒素，這種脫毒的毒素稱(chēng)為類(lèi)毒素。

抗原—抗體反應(yīng)概念的出現(xiàn)，有助于臨床診斷。這些為微生物和免疫學(xué)發(fā)展奠定了基礎(chǔ)，繼續(xù)發(fā)展出各種生物制品，在預(yù)防疾病方面越發(fā)顯得重要，是控制和消滅傳染病不可缺少的步驟之一。中國(guó)生物制品發(fā)展史

1978年WHO作出擴(kuò)大免疫規(guī)劃(EPI），目的是對(duì)全球兒童實(shí)施免疫。EPI是用四種疫苗預(yù)防六種疾病，即卡介苗預(yù)防結(jié)核病；麻疹活疫苗預(yù)防麻疹；脊髓灰質(zhì)炎疫苗預(yù)防脊髓灰質(zhì)炎；百白破三聯(lián)預(yù)防百日咳、白喉和破傷風(fēng)，有計(jì)劃地從兒童開(kāi)始，使世界兒童都得到免疫。1981年，中國(guó)響應(yīng)WHO的號(hào)召，實(shí)行計(jì)劃免疫，按要求用國(guó)產(chǎn)四種疫苗預(yù)防六種疾病。生物制品及檢定規(guī)程草案（1952年）生物制品制造檢定規(guī)程（1959年）中國(guó)生物制品規(guī)程6版（2000年）中華人民共和國(guó)藥典三部（2010年）生物制品質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)的發(fā)展中國(guó)生物制品規(guī)程并入2005年版中國(guó)藥典2010版《中國(guó)藥典》第三部生物制品131種,新增28種，修訂103種內(nèi)容：凡例、通則、各論、附錄和索引各論收載：疫苗；抗毒素及抗血清；血液制品；重組DNA制品；體內(nèi)診斷制品；其他制品

生物制品（biologicalproducts）：以微生物、細(xì)胞、動(dòng)物或人源組織和體液等為原料，應(yīng)用傳統(tǒng)技術(shù)或現(xiàn)代生物技術(shù)制成，用于人類(lèi)疾病的預(yù)防，治療和診斷的制品。第一節(jié)生物制品的分類(lèi)根據(jù)生物制品的用途分為三類(lèi)：預(yù)防類(lèi)：細(xì)菌類(lèi)疫苗、病毒類(lèi)疫苗和聯(lián)合疫苗治療類(lèi)：抗毒素及免疫血清、血液制品、細(xì)胞因子及DNA重組技術(shù)制品和單克隆抗體診斷類(lèi)：體內(nèi)診斷類(lèi)和體外診斷類(lèi)根據(jù)所采用的材料、制法或用途不同，可分為四類(lèi):疫苗類(lèi)藥物抗毒素及抗血清類(lèi)藥物血液制品重組DNA制品（一）疫苗類(lèi)藥物

定義:用病毒或立克次體接種于動(dòng)物、雞胚，或經(jīng)組織培養(yǎng)后加以處理制造。分類(lèi):（1）細(xì)菌類(lèi)疫苗：由有關(guān)細(xì)菌、螺旋體或其衍生物制成的減毒活疫苗、滅活疫苗、重組DNA疫苗、亞單位疫苗等。如：皮內(nèi)注射卡介苗、吸附破傷風(fēng)疫苗、乙型腦炎減毒疫苗、人用狂犬病疫苗等。

（2）減毒類(lèi)疫苗：由病毒、衣原體、立克次體或其衍生物制成的減毒活疫苗、滅活疫苗、重組DNA疫苗、亞單位疫苗等。如：口服脊髓灰質(zhì)炎減毒疫苗麻疹減毒活疫苗風(fēng)疹減毒活疫苗腮腺炎減毒活疫苗重組乙型肝炎疫苗甲型肝炎減毒活疫苗流感全病毒滅活疫苗

（3）聯(lián)合疫苗：指兩種或兩種以上疫苗原液按特定比例配合制成的具有多種免疫原性的滅活疫苗或活疫苗。如：傷寒副傷寒甲乙聯(lián)合疫苗吸附百白破聯(lián)合疫苗麻疹腮腺炎聯(lián)合減毒疫苗

（4）雙價(jià)疫苗及多價(jià)疫苗：由單一型抗原成分組成的疫苗通稱(chēng)單價(jià)疫苗。有兩個(gè)或兩個(gè)以上同一種但不同型抗原合并組成的含有雙價(jià)或多價(jià)抗原成分的一種疫苗，則分別稱(chēng)為雙價(jià)疫苗或多價(jià)疫苗。如雙價(jià)腎綜合征出血熱滅活疫苗。（二）抗毒素及抗血清類(lèi)藥物

定義：凡用細(xì)菌類(lèi)毒素或毒素免疫馬或其他大動(dòng)物所得的免疫血清叫抗毒素或抗毒血清。如：破傷風(fēng)抗毒素白喉抗毒素肉毒抗毒素凡用細(xì)菌或病毒本身免疫馬或其他大動(dòng)物所得的免疫血清叫抗菌或抗病毒血清。如：抗蝮蛇毒血清抗五步蛇毒血清抗狂犬病血清（三）血液制品定義：由健康人的血液或經(jīng)特異免疫的人血漿，經(jīng)分離、提純或重組DNA技術(shù)制成的血漿蛋白成分，以及血液細(xì)胞有形成分統(tǒng)稱(chēng)為血液制品。如：人血白蛋白人免疫球蛋白人凝血因子（四）重組DNA制品重組DNA制品的類(lèi)別：細(xì)胞因子類(lèi)生長(zhǎng)因子類(lèi)激素類(lèi)酶類(lèi)疫苗類(lèi)診斷制品生物制品的特點(diǎn)◆◆都是來(lái)自生物體或通過(guò)生物手段獲得◆分子量都較大：幾十KD～幾千KD，不是固定值化學(xué)結(jié)構(gòu)式難以確認(rèn)，單單是光譜分析方法難以進(jìn)行◆在生產(chǎn)過(guò)程中需要全面的質(zhì)量控制往往需要進(jìn)行安全性檢查熱源、過(guò)敏、異常毒性、致突變、生殖毒性◆第二節(jié)生物制品的質(zhì)量要求1、安全性：使用安全，副作用小。2、有效性：使用后能產(chǎn)生相應(yīng)的效力。3、可接受性：生產(chǎn)工藝、儲(chǔ)運(yùn)條件、成品的藥效、穩(wěn)定性、外觀、包裝、使用方法和價(jià)格是可接受的。生物制品的全程質(zhì)量控制

生物制品品名定義、組成及用途基本要求制造檢定（原液,半成品,成品）保存運(yùn)輸及有效期使用說(shuō)明（僅預(yù)防類(lèi)含此項(xiàng)）化學(xué)藥品品名化學(xué)結(jié)構(gòu)、分子式性狀鑒別檢查含量測(cè)定藥典三部各論內(nèi)容藥典二部各論內(nèi)容

第三節(jié)鑒別試驗(yàn)

免疫學(xué)法：體外抗體抗原試驗(yàn)（1）免疫雙擴(kuò)散法在瓊脂糖凝膠板上按一定距離打數(shù)個(gè)小孔，在相鄰的兩孔內(nèi)分別加入抗原與抗體，若抗原、抗體互相對(duì)應(yīng)，濃度、比例適當(dāng)，則一定時(shí)間后，在抗原與抗體孔之間形成免疫復(fù)合物的沉淀線。（2）免疫電泳法將供試品通過(guò)電泳分離成區(qū)帶的各抗原，然后與相應(yīng)的抗體進(jìn)行雙相免疫擴(kuò)散，當(dāng)兩者比例合適時(shí)形成可見(jiàn)的沉淀弧。（3）免疫印跡法以供試品與特異性抗體結(jié)合后，抗體再與酶標(biāo)抗體特異性結(jié)合，通過(guò)酶學(xué)反應(yīng)的顯色，對(duì)供試品的抗原特異性進(jìn)行檢查。（4）免疫斑點(diǎn)法同免疫印跡法，具體操作有所不同。（5）酶聯(lián)免疫法（ELISA法）讓抗體與酶復(fù)合物結(jié)合，然后通過(guò)顯色來(lái)檢測(cè)。第四節(jié)生物制品檢查內(nèi)容理化檢定安全檢定效力檢定（一）物理性狀的檢查1、外觀通過(guò)特定的人工光源進(jìn)行目測(cè)，不同的制品有不同的要求。2、真空度及溶解速率3、裝量容量法測(cè)試。（二）蛋白質(zhì)含量測(cè)定檢測(cè)有效成分，計(jì)算純度和比活度。凱氏定氮法、酚試劑法和雙縮脲法（三）防腐劑和滅活劑含量測(cè)定非有效成分，控制限度

（四）純度檢查電泳法或高效液相色譜法。（五）相對(duì)分子質(zhì)量或分子大小的測(cè)定對(duì)提純的蛋白質(zhì)制品和多糖疫苗測(cè)定分子質(zhì)量或大小。凝膠層析法、SDS法和超速離心分析法

（六）其他水分測(cè)定、酸堿度、氯化鈉測(cè)定等（七）安全檢查1、安全檢查對(duì)象菌毒種和主要原材料、半成品（包括原液）和成品。2、安全檢查內(nèi)容（1）過(guò)敏性物質(zhì)的檢查1）過(guò)敏性試驗(yàn)2）牛血清含量的測(cè)定3）血型物質(zhì)的檢測(cè)（2）殺菌、滅活和脫毒檢查無(wú)菌試驗(yàn)、活毒檢查和解毒試驗(yàn)。（3）殘余毒力和毒性物質(zhì)的檢查1）殘余毒力檢查2）無(wú)毒性檢查3）毒性檢查4）防腐劑檢查（4）外源性污染檢查1）野毒檢查2）熱原試驗(yàn)3）乙型肝炎表面抗原（八）生物制品的效力測(cè)定

生物學(xué)方法:利用生物體來(lái)測(cè)定待檢品的生物活性或效價(jià)的一種方法。1、免疫力試驗(yàn)2、活菌數(shù)和活病毒滴度測(cè)定3、血清學(xué)試驗(yàn)

一般雜質(zhì)檢查（同化學(xué)藥）

特殊雜質(zhì)檢查：生物污染物、產(chǎn)品相關(guān)雜質(zhì)和工藝添加劑

（九）雜質(zhì)檢查特殊雜質(zhì)檢查1、宿主細(xì)胞蛋白殘留量的檢查目的：控制異源蛋白的含量以防超量后引起機(jī)體免疫反應(yīng)測(cè)定法：酶聯(lián)免疫吸附劑測(cè)定法－ELISA2、外源性DNA殘留量的檢查目的：防止外源性DNA對(duì)人類(lèi)的危害測(cè)定法：DNA探針雜交法、熒光染色法