薄層色譜掃描儀校準規(guī)范

1薄層色譜掃描儀校準規(guī)范1范圍本規(guī)范適用于薄層色譜掃描儀(以下簡稱儀器)的校準。2引用文件本規(guī)范引用了以下文件：GB/T9008—2007液相色譜法術語柱色譜法和平面色譜法凡是注日期的引用文件，僅注日期的版本適用于本規(guī)范；凡是不注日期的引用文件，其最新版本(包括所有的修改單)適用于本規(guī)范。3術語GB/T9008—2007中界定的及以下術語和定義適用于本規(guī)范。平面色譜法中，溶質遷移距離除以流動相遷移距離，可由下式表示。薄層色譜法是將樣品溶液點于薄層板上，在展開容器內用展開劑展開，使樣品所含成分分離。儀器的基本原理為：樣品在薄層板上展開后，形成斑點或經顯色后形成斑點，用一定波長的光照射到斑點上，對斑點進行光譜掃描，根據掃描得到的比移值、吸收曲線的最大吸收波長進行定性，斑點的峰面積或峰高進行定量。儀器一般由氘燈-鎢燈組合光源、單色器、薄層板及檢測器等組成，可進行單光束、雙光束或雙波長測定，有反射模式和透射模式，掃描方式有線性掃描和鋸齒掃描。儀器的結構簡圖見圖1。25計量特性儀器主要計量技術指標見表1。序號1線性誤差不超過±0.003mg·mL-12同點比移值重復性同點峰面積重復性同板峰面積重復性6校準條件6.1實驗室環(huán)境條件6.1.1環(huán)境溫度：(10～35)℃。6.1.2濕度：(15～70)RH%。6.1.3周圍無強烈振動，無強電、磁場干擾。6.1.4供電電源電壓(220±22)V,(50±1)Hz。6.2校準用標準物質及設備6.2.1點樣器：經校準的10μL平頭微量注射器。6.2.2食用合成色素莧菜紅溶液標準物質：0.500mg·mL-1,相對擴展不確定度7校準項目和校準方法7.1薄層板的準備3準備一片空白高效硅膠板，硅膠粒度為(5～10)μm,厚度為(0.2～0.3)mm,規(guī)格為10cm×10cm。使用前檢查板的均勻度，觀察其透射光和反射光，透射光反映硅膠涂布的均一性，反射光反映質地的均一性，表面應均勻、平整、光滑、無麻點、無氣泡、無破損及污染。在潔凈干燥的環(huán)境下，先用鉛筆在板上距末端2cm處輕輕畫一橫線，用微量注射器吸取表2中的各濃度的食用合成色素莧菜紅標準溶液2μL在橫線上依次點樣，點樣所形成的樣品斑點直徑不大于4mm,兩個斑點中心之間間距至少為10mm,點樣時注意不要損傷薄層板表面，并晾干。表2食用合成色素莧菜紅標準溶液mg·ml-1標準溶液編號1234標準溶液濃度注：食用合成色素莧菜紅標準溶液的制備參見附錄C。7.2線性誤差將點好食用合成色素莧菜紅標準溶液的薄層板固定于主機的裝載臺上，選擇反射模式，調節(jié)主機上的光斑，使之能掃描到整個樣品斑點，在主機或工作站的控制面板上設置掃描的起止位置，樣品組的數量和掃描間距，掃描波長為520nm,分別掃描3次，計算峰面積A,將A和標準溶液濃度c。按最小二乘法擬合校準曲線，建立線性方程，見公式(1)。A=a+bcsA——峰面積的測量值，峰面積單位；a——校準曲線的截距，峰面積單位；b——校準曲線的斜率，峰面積單位/(mg·mL-1);cs——標準溶液的濃度，mg·mL-1。式(2)。按照公式(3)計算標準曲線各測量點擬合濃度的線性誤差。7.3測量重復性7.3.1同點比移值重復性和同點峰面積重復性對表2中濃度為0.04mg·mL-1的食用合成色素莧菜紅標準溶液所形成的斑點連4續(xù)掃描7次，記錄7次掃描圖譜的比移值和峰面積，按公式(4)計算相對標準偏差即為儀器的同點重復性：n——重復測量次數(n=7);A:——第i次測量比移值或峰面積的測量值；An次重復測量比移值或峰面積的平均值。7.3.2同板峰面積重復性對表2中濃度為0.04mg·mL-1的食用合成色素莧菜紅標準溶液按7.1中的方法在薄層板上平行點樣7次，每次點樣體積1μL。記錄7個樣品斑點掃描圖譜的峰面積，按公式(4)計算相對標準偏差，即為同板峰面積重復性。8校準結果表達校準結果應在校準證書上反映。校準證書至少包括以下信息：b)實驗室名稱和地址；c)進行校準的地點(如果與實驗室的地址不同);d)證書的唯一性標識(如編號),每頁及總頁數的標識；e)客戶的名稱和地址；f)被校對象的描述和明確標識；g)進行校準的日期，如果與校準結果的有效性和應用有關時，應說明被校對象的接收日期；h)如果與校準結果的有效性和應用有關時，應對被校樣品的抽樣程序進行說明；i)校準所依據的技術規(guī)范的標識，包括名稱及代號；j)本次校準所用測量標準的溯源性及有效性說明；k)校準環(huán)境的描述；1)校準結果及測量不確定度的說明；m)對校準規(guī)范的偏離的說明；n)校準證書或校準報告簽發(fā)人的簽名、職務或等效標識；o)校準結果僅對被校對象有效的聲明；p)未經實驗室書面批準，不得部分復制證書的聲明。9復校時間間隔儀器的復校時間間隔建議不超過1年，更換重要部件、維修、重新安裝或對儀器性能有懷疑時，應隨時校準。5附錄A校準記錄參考格式標準濃度123擬合濃度線性誤差1234567平均%同點比移值峰面積同板6校準證書(內頁)參考格式證書編號××××××-×××××××是×××法定計量技術機構?！痢痢恋馁|量管理體系符合ISO/IEC17025標準，經中國合格評定國家認可委員會認可，證書號：No.×××。校準結果不確定度的評估和表述均符合JJF1059.1的要求。校準所依據/參照的技術文件(代號、名稱):名稱測量范圍準確度等級證書編號7證書編號××××××-××××校準結果1.線性誤差：標準濃度/(mg·mL-1)擬合濃度/(mg·mL-1)線性誤差/(mg·mL-1)2.測量重復性：校準項目同點比移值重復性同點峰面積重復性同板峰面積重復性(以下空白)說明：根據客戶要求和校準規(guī)范的規(guī)定，通常情況個月校準一次。聲明：1.我院(所)僅對加蓋“×××”的完整證書負責。2.本證書的校準結果僅對本次所校準的計量器具有效。3.未經實驗室書面批準，不得部分復制本證書。8附錄C校準用標準溶液的配制C.1標準物質與試劑食用合成色素莧菜紅溶液標準物質：0.500mg·mL-1,相對擴展不確定度≤1%C.2設備使用經檢定或校準的可調移液器、容量瓶，見表C.1。表C.1設備及規(guī)格名稱名稱C.3校準用標準溶液的配制配制校準用標準溶液的體積與所需母液的體積與濃度見表C.2,準確吸取表C.2中表C.2食用合成色素莧菜紅標準溶液配制方法濃度/(mg·mL-1)濃度/(mg·mL-1)9附錄D線性誤差測量不確定度評定示例D.1測量方法和測量模型將點好食用合成色素莧菜紅標準溶液的薄層板固定于主機的裝載臺上，選擇反射模式，調節(jié)主機上的光斑，使之能掃描到整個樣品斑點，在主機或工作站的控制面板上設置掃描的起止位置，樣品組的數量和掃描間距，掃描波長為520nm,分別掃描3次，計算峰面積A,將A和標準溶液濃度c,按最小二乘法擬合校準曲線，得到線性方程(D.1)。A=a+bcs(D.1)將各斑點3次掃描的峰面積計算平均值A,用線性方程求得擬合濃度cp;按照公式(D.3)計算校準曲線各測量點的擬合濃度線性誤差△c:因此，校準曲線各測量點的擬合濃度線性誤差△c的標準不確定度u(△c)由2部分(1)4種標準溶液的濃度c。與測量值A擬合的校準曲線求得c,時測量所產生的不確定度u(cp);(2)由標準物質母液配制成4種標準溶液時帶來的不確定度u(cs)。擬合濃度線性誤差的測量不確定度u(△c)為：以測量0.04mg·mL-1溶液擬合濃度的線性D.2.1校準曲線擬合值c,的標準不確定度u(cp)采用0.500mg·mL-1的食用合成色素莧菜紅溶液標準物質配制4種標準溶液，其濃度分別為0.01mg·mL-1、0.02mg·mL-1、0.03mg·mL-1、0.04mg·mL-1。測量4種標準溶液濃度的峰面積測量值A,每個濃度測量3次，結果列于表D.1:表D.14種標準溶液的峰面積測量值濃度/(mg/mL)23p——擬合濃度的測定次數，其值為3;n——標準溶液的測定總次數，其值為12;D.2.2由母液稀釋配制成標準溶液時產生的不確定度分量u(cs)D.2.2.1移液器和容量瓶、稀釋因子的不確定度分量u(f)將母液0.500mg·mL-1經8:100稀釋得到0.04mg·mL-1溶液，由1000μL移式中：對1000μL移液器和10mL容量瓶進行不確定度分析，由校準、定容和使用溫度3個不確定度來源進行分析，1000μL移液器的體積的不確定度分析如下：(1)校準體積引起的標準不確定度20℃時，1000μL移液器標稱容量的允許差為±1%,按均勻分布：(2)定容的重復性查校準證書得測量重復性為0.5%,即0.0040mL。(3)配制溶液時溫度與移液器校準時溫度不同溫度變化的范圍為士2℃,近似于矩形分布：以上3項合成為1000μL移液器的標準不確度u(V?oo):u(V?oooL)=√0.00462+0.00402+0.000922=0.0062同樣得到10mL容量瓶的體積的標準不確定度為：u(V1?mL)=0.019mL表D.2移液器和容量瓶的不確定度由移液器和容量瓶、稀釋因子產生的不確定度分量為：D.2.2.2母液的不確定度分量u(co.s)母液0.500mg·mL-1食用合成色素莧菜紅溶液標準物質的相對擴展不確定度為1%(k=2),