大鼠急性切割痛過程中焦慮樣行為的產(chǎn)生及機制研究

大鼠急性切割痛過程中焦慮樣行為的產(chǎn)生及機制研究第一部分大鼠后足切割急性痛過程中焦慮樣行為與機械性痛敏的關(guān)系目的：觀察大鼠后足切割急性疼痛過程中是否伴有焦慮樣行為,及其與機械性痛敏的關(guān)系,并探討嗎啡與加巴噴丁對焦慮樣行為和機械性痛敏的影響。方法：采用大鼠后足縱行切割急性疼痛模型,以vonFrey尼龍纖維刺激足底觀察其縮足閾值來評價其機械性痛敏,以高架十字迷宮實驗、曠場實驗評估大鼠的焦慮樣行為,并在手術(shù)后即刻一次性腹腔注射不同劑量嗎啡(2.5mg/kg、10mg/kg),或在手術(shù)前0.5h一次性腹腔注射不同劑量加巴噴丁(30mg/kg、300mg/kg),然后觀察大鼠在不同時間點的機械性痛敏及焦慮樣行為的變化。結(jié)果：1.大鼠后足切割后不同時間點的縮足閾值結(jié)果：術(shù)后1h、3h、6h、1d大鼠的縮足閾值明顯低于術(shù)前基礎(chǔ)縮足閾值(p<0.01),而在術(shù)后3d、5d、7d其縮足閾值與術(shù)前基礎(chǔ)縮足閾值比較差異無顯著性(P>0.05)。2.大鼠后足切割后不同時間點的大鼠焦慮樣情緒行為評定結(jié)果：高架十字迷宮實驗結(jié)果顯示在術(shù)后1h,大鼠在開放臂停留的時間百分比明顯低于術(shù)前0h(P<0.01),即呈現(xiàn)焦慮樣行為,并且這種焦慮樣行為在術(shù)后3d、5d依然存在,至術(shù)后7d焦慮樣行為與術(shù)前比較差異無顯著性(P>0.05)。在曠場實驗中,術(shù)后1h、1d、3d、5d大鼠在中央格停留時間百分比明顯低于術(shù)前(P<0.05),即呈現(xiàn)焦慮樣行為,至術(shù)后7d大鼠在中央格停留時間百分比與術(shù)前比較差異無顯著性(P>0.05)。另外大鼠活動的總距離術(shù)前和術(shù)后比較差異無顯著性(P>0.05)。3.注射嗎啡與加巴噴丁對機械性痛敏的影響：術(shù)后注射大劑量嗎啡(10mg/kg)、大劑量加巴噴丁(300mg/kg),小劑量嗎啡(2.5mg/kg)與小劑量加巴噴丁(30mg/kg)聯(lián)合應用均可觀察到1h、3h的縮足閾值與對照組比較明顯增高(P<0.01),說明大鼠機械性痛敏有明顯減輕。4.注射嗎啡與加巴噴丁對焦慮樣行為的影響：高架十字迷宮實驗中,術(shù)后注射大劑量嗎啡(10mg/kg)和大劑量加巴噴丁(300mg/kg)均可增加大鼠術(shù)后1h、3h在開放臂的停留時間百分比(P<0.05),說明其焦慮樣行為有所減輕。但術(shù)后小劑量嗎啡(2.5mg/kg)與小劑量加巴噴丁(30mg/kg)聯(lián)合應用并不能增加術(shù)后大鼠在開放臂的停留時間百分比(P>0.05),說明不能減輕其焦慮樣行為。結(jié)論：大鼠后足切割急性疼痛過程中可引起焦慮樣行為及機械性痛敏的產(chǎn)生,但焦慮樣行為和機械性痛敏持續(xù)和恢復的時間不一致,并且小劑量嗎啡和小劑量加巴噴丁聯(lián)合應用對焦慮樣行為和機械性痛敏的影響也不一致,推測急性切割痛過程中焦慮樣行為與機械性痛敏的誘導和維持的調(diào)控機制可能不同,因此專門針對抗焦慮治療可能是臨床上促進術(shù)后病人恢復的重要輔助手段。第二部分前扣帶回皮質(zhì)磷酸化ERK的表達對大鼠后足切割急性痛過程中機械性痛敏與焦慮樣行為的作用目的：研究前扣帶回皮質(zhì)(anteriorcingulatecortex,ACC)中的磷酸化細胞外信號調(diào)節(jié)激酶(phosphorylatedextracellularsignal-regulatedkinase,p-ERK)在大鼠后足切割后不同時間點的表達變化,并選取不同時間點在ACC內(nèi)注射MEK的抑制劑U0126和PD98059,觀察在不同時間點的機械性痛敏和焦慮樣行為的變化,探討p-ERK在急性切割痛過程中對機械性痛覺過敏與焦慮樣行為的作用。方法：采用大鼠后足縱行切割急性疼痛模型,利用免疫組織化學和westernblot等方法觀察切割后不同時間點(0-72h)ACC內(nèi)p-ERK的表達變化。并在切割前30min或切割后6hACC內(nèi)注射MEK抑制劑U0126和PD98059,以vonFrey尼龍纖維刺激足底觀察其縮足閾值作為機械痛敏的評價方法,以高架十字迷宮實驗、曠場實驗評估大鼠的焦慮樣行為,觀察大鼠急性疼痛過程中不同時間點機械性痛覺過敏和焦慮樣行為的變化。結(jié)果：1.大鼠后足切割后ACC內(nèi)p-ERK表達呈雙相性升高：切割后15min、30minp-ERK在雙側(cè)ACC內(nèi)表達即明顯上調(diào),p-ERK免疫陽性細胞數(shù)明顯高于正常對照組(P<0.01),切割后1h、3h恢復至接近正常對照組水平,兩組比較無顯著性差異(P>0.05)；切割后6h雙側(cè)ACC內(nèi)p-ERK表達再次上調(diào),p-ERK免疫陽性細胞數(shù)明顯高于正常對照組(P<0.01),并持續(xù)至切割后3d,westernblot結(jié)果同樣證實了這一表達變化趨勢。2.大鼠后足切割前30minACC內(nèi)注射MEK的抑制劑U0126和PD98059對縮足閾值及焦慮樣行為的評定結(jié)果：切割前30minACC內(nèi)注射MEK的抑制劑U0126和PD98059的縮足閾值在切割后30min、1h、3h明顯高于溶媒對照組(p<0.05)；高架十字迷宮實驗和曠場實驗結(jié)果顯示：切割前30minACC內(nèi)注射抑制劑可明顯增加大鼠在開放臂和中央格的停留時間百分比,與溶媒對照組比較差異有顯著性(P<0.01)。3.大鼠后足切割后6hACC內(nèi)注射MEK的抑制劑U0126對縮足閩值及焦慮樣情緒的評定結(jié)果：大鼠后足切割后6hACC內(nèi)注射MEK抑制劑U0126,在注射后1h,大鼠的縮足閾值與溶媒對照組相比較差異無顯著性(P>0.05)；大鼠在開放臂的停留時間百分比(P<0.01)和中央格的停留時間百分比(P<0.0