無菌生產(chǎn)車間的環(huán)境監(jiān)控

無菌生產(chǎn)車間的環(huán)境監(jiān)控微生物室無菌生產(chǎn)車間的環(huán)境監(jiān)控背景知識環(huán)境監(jiān)控的目的、要求以及關鍵因素環(huán)境監(jiān)控實際情況討論背景知識-法規(guī)文件ISO14644潔凈室及相關控制環(huán)境美國聯(lián)邦標準209EFDAcGMP—無菌藥品的生產(chǎn)，2004版USP1116潔凈室及其它環(huán)境控制區(qū)的微生物學評價歐盟GMP附錄一“無菌藥品的生產(chǎn)〞(2003)8-G41-2-M環(huán)境監(jiān)測指南中國藥品生產(chǎn)質(zhì)量管理標準空氣懸浮粒子計數(shù)〔也稱總懸浮粒子計數(shù)〕：檢測粒徑大于等于0.5μm的粒子數(shù)?？諝饣钚粤Ｗ佑嫈?shù)〔也稱空氣浮游菌計數(shù)〕：以總懸浮粒子數(shù)為依據(jù)的級區(qū)劃分標準中所給定的相應空氣浮游菌限度。潔凈室〔cleanroom〕：指空氣懸浮粒子水平符合特定衛(wèi)生級別要求的房間。潔凈區(qū)〔cleanzone〕：指空氣懸浮粒子及環(huán)境微生物均符合特定衛(wèi)生級別要求的區(qū)域。產(chǎn)品接觸區(qū)：在環(huán)境控制區(qū)內(nèi)與產(chǎn)品、容器或密封件直接接觸的區(qū)域或外表，這些會導致產(chǎn)品和容器-密封件系統(tǒng)被微生物污染。環(huán)境監(jiān)控方案：通過SOP執(zhí)行的書面性方案，對用于監(jiān)測空氣懸浮粒子及環(huán)境微生物〔如空氣、設施設備外表及人員衣服〕的方法和規(guī)那么有詳細規(guī)定。監(jiān)控方案不僅包括取樣點、取樣頻率，還包括超出警戒或糾偏標準時所要進行的調(diào)查和糾偏措施。還應說明監(jiān)測數(shù)據(jù)的趨勢分析方法。糾偏標準：在SOP中規(guī)定的環(huán)境控制區(qū)的微生物和懸浮粒子限度，如果超出此限度，必須進行偏差調(diào)查并進而采取相應糾偏措施。警戒標準：在SOP中規(guī)定的環(huán)境控制區(qū)的微生物和懸浮粒子限度，如果超出此限度，那么需要進行偏差調(diào)查，確認生產(chǎn)工藝仍處于受控狀態(tài)。趨勢分析：對與時間、班次、設施等相關的環(huán)境取樣結(jié)果進行匯總分析。這些資料可用于評估一個生產(chǎn)工藝是否處于受控狀態(tài)，并確定環(huán)境控制區(qū)是否需要進行再驗證或維修和消毒。背景知識-潔凈區(qū)的劃分背景知識-環(huán)境微生物的生態(tài)

空氣微生物即使空氣中的水分和營養(yǎng)很少，但在未凈化的空氣中發(fā)現(xiàn)了大量的微生物。細菌：產(chǎn)芽孢類－芽孢桿菌屬、生孢梭菌屬 不產(chǎn)芽孢－葡萄球菌屬、鏈球菌屬和棒桿菌屬霉菌：青霉、曲霉、毛霉等酵母菌：紅酵母菌屬空氣中的微生物數(shù)量與環(huán)境內(nèi)的活動和分布的顆粒數(shù)以及濕度有關。微生物往往是由顆粒、皮膚、衣服、液滴以及講話、咳嗽和噴嚏造成的唾液帶入空氣中的。空氣微生物的處理有三個方法：過濾、化學消毒和紫外消毒背景知識-環(huán)境微生物的生態(tài)

水系統(tǒng)微生物水中微生物的狀況對制藥企業(yè)尤其是無菌產(chǎn)品生產(chǎn)企業(yè)來說是至關重要的。未經(jīng)處理的水：假單胞菌屬、產(chǎn)堿桿菌屬、產(chǎn)黃菌屬、沙雷氏菌屬主要特征：對營養(yǎng)要求比較低，適合較低溫度成長的革蘭染色陰性桿菌背景知識-環(huán)境微生物的生態(tài)

皮膚微生物細菌－葡萄球菌屬〔金黃色葡萄球菌〕、不動桿菌屬、產(chǎn)堿桿菌屬真菌－瓶形酵母、表皮蘚菌屬、小孢子菌屬等鼻腔微生物含有大量的金黃色葡萄球菌和腐生性的鏈球菌防止人員身上的微生物污染產(chǎn)品必須要對人員進行有效的衛(wèi)生和工藝培訓以及定期的身體檢查。環(huán)境監(jiān)控的目的、要求以及關鍵因素Monitoring:observationsmadebymeasurementinaccordancewithadefinedmethodandplantoprovideevidenceoftheperformanceofandinstallation. (ISO14644-2)環(huán)境監(jiān)控目的：對清潔、消毒措施的效果進行評估對操作人員本身的行為標準進行評價提供足夠的環(huán)境信息以證明環(huán)境是否處于受控狀態(tài)及時確定污染的可能途徑，以便在產(chǎn)品污染發(fā)生前采取措施來防止環(huán)境監(jiān)控根本要求必須有一份符合法規(guī)要求的書面監(jiān)控方案來對潔凈室的環(huán)境進行監(jiān)控，該方案的設計應考慮到該區(qū)域的工藝，并基于對該區(qū)域的風險評估。環(huán)境監(jiān)控方案必須由有資質(zhì)的人員執(zhí)行并進行結(jié)果分析。使用的監(jiān)控設備和儀表必須有嚴格的校驗程序管理。必須定期地提供報告，來描述環(huán)境監(jiān)控的結(jié)果和糾偏的措施。環(huán)境監(jiān)控〔方案〕的關鍵因素取樣點和取樣頻率 取樣類型警戒標準、糾偏標準的設立 數(shù)據(jù)及趨勢分析 細菌鑒定 取樣點和取樣頻率確實定取樣點和取樣頻率那些與產(chǎn)品相鄰近的區(qū)域，以及可能與產(chǎn)品直接接觸的空氣及設備外表或是容器和密封件系統(tǒng)的外表，均應考慮取樣。對于這些關鍵區(qū)域的取樣，應盡量在工藝結(jié)束后進行，以防止直接接觸無菌外表，帶來外源性的污染。在SOP中詳細闡述所有環(huán)境監(jiān)控取樣點位置，以便可以對固定的監(jiān)控點進行重復取樣，使數(shù)據(jù)結(jié)果更具可比性和科學性。USP29<1116>表2.指導性取樣頻率〔依潔區(qū)的重要性而定〕潔凈區(qū)取樣頻率100級或更高級別每班一次100級區(qū)毗連的支持性區(qū)域(如：10,000級)每班一次其它支持性區(qū)域(100,000級)每周二次可能與產(chǎn)品/容器相接觸的區(qū)域每周二次無菌生產(chǎn)區(qū)的其它支持性區(qū)域（該區(qū)域不與產(chǎn)品相接觸，通常為100,000級或更低）每周一次取樣類型懸浮粒子微生物空氣浮游菌取樣外表微生物取樣培養(yǎng)基及培養(yǎng)條件的選擇培養(yǎng)時間和溫度空氣懸浮粒子原理：光脈沖信號經(jīng)光電二極管轉(zhuǎn)變成電脈沖信號，電脈沖次數(shù)反映粒子數(shù)，幅值反響粒徑。常見品牌為PMS,MetOne等?？諝飧∮尉鲃硬蓸悠饔脕頊y定空氣浮游菌，它們主要分為離心式，撞擊式和膜過濾式三種形式?？諝獬两稻鷥r廉、輕便空氣干擾較小時間較長，至少為半小時，但不應超過4小時接觸碟和棉拭子接觸碟適用于對平整的規(guī)那么性外表進行取樣監(jiān)測，取樣面積為25cm2,屬于定量測試法拭子通常用于對不規(guī)那么外表(尤其是設備外表)進行取樣，取樣面積為24～30cm2警戒標準、糾偏標準的設立糾偏限度：符合中國GMP和歐洲GMP的要求，并且按照較嚴的標準執(zhí)行。另外，連續(xù)三次超過以下警戒限度視為超過一次糾偏限度。警戒限度：警戒標準是根據(jù)驗證和歷史的運行監(jiān)測結(jié)果制定的。警戒限度潔凈級別空氣浮游菌（CFU/m3）表面微生物一般/地面（CFU/plate,25cm2）B22/5Ca105/10Cb205/10人員監(jiān)測潔區(qū)內(nèi)的主要污染源來自于其中的人員，所以，控制人員帶來的污染是環(huán)境控制方案的最重要內(nèi)容之一。通過培訓使所有在潔凈室及環(huán)境控制區(qū)工作的人員掌握相關的微生物學知識。培訓應包括無菌工藝的根本原理以及生產(chǎn)和操作程序與產(chǎn)品污染的相關性。工作于環(huán)境控制區(qū)的所有人員，均應嚴格監(jiān)測。被監(jiān)測人員不限于生產(chǎn)操作人員，同時也包括環(huán)境監(jiān)測人員。對人員的監(jiān)測一般應在生產(chǎn)開始前或生產(chǎn)結(jié)束后進行。細菌鑒定GCM8－G41－2－MAprogrammeshallexisttodeterminethefrequencyofidentifyingenvironmentalisolates.必須制訂細菌鑒定程序來對環(huán)境檢出菌進行頻率分析。對關鍵區(qū)及其鄰近區(qū)域內(nèi)所發(fā)現(xiàn)的污染菌進行鑒別應優(yōu)先于其他非關鍵區(qū)域的別離菌的鑒別。培養(yǎng)基灌裝采用培養(yǎng)基代替藥品進行無菌灌裝對無菌工藝進行驗證。此模擬工藝稱之為“培養(yǎng)基灌封〞。將裝有培養(yǎng)基的密閉容器進行培養(yǎng)以檢查微生物的生長，然后對結(jié)果進行評價，借以確定實際生產(chǎn)中產(chǎn)品污染的概率。培養(yǎng)基模擬灌封試驗中由環(huán)境監(jiān)控獲得的數(shù)據(jù)，對評估生產(chǎn)線也是十分有益的。接