新教材適用2024版高考生物二輪總復(fù)習(xí)第1部分核心考點(diǎn)突破專題9生物技術(shù)與工程第2講細(xì)胞工程核心考點(diǎn)一植物細(xì)胞工程及其應(yīng)用教師用書

第二講細(xì)胞工程8.1植物細(xì)胞工程包括組織培養(yǎng)和體細(xì)胞雜交等技術(shù)8.1.1闡明植物組織培養(yǎng)是在一定條件下，將離體植物器官、組織和細(xì)胞在適宜的培養(yǎng)條件下誘導(dǎo)形成愈傷組織，并重新分化，最終形成完整植株的過程8.1.2概述植物體細(xì)胞雜交是將不同植物體細(xì)胞在一定條件下融合成雜合細(xì)胞，繼而培育成新植物體的技術(shù)8.1.3舉例說明植物細(xì)胞工程利用快速繁殖、脫毒、次生代謝產(chǎn)物生產(chǎn)、育種等方式有效提高了生產(chǎn)效率8.2動(dòng)物細(xì)胞工程包括細(xì)胞培養(yǎng)、核移植、細(xì)胞融合和干細(xì)胞的應(yīng)用等技術(shù)8.2.1闡明動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)是從動(dòng)物體獲得相關(guān)組織，分散成單個(gè)細(xì)胞后，在適宜的培養(yǎng)條件下讓細(xì)胞生長(zhǎng)和增殖的過程。動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)是動(dòng)物細(xì)胞工程的基礎(chǔ)8.2.2闡明動(dòng)物細(xì)胞核移植一般是將體細(xì)胞核移入一個(gè)去核的卵母細(xì)胞中，并使重組細(xì)胞發(fā)育成新胚胎，繼而發(fā)育成動(dòng)物個(gè)體的過程8.2.3闡明動(dòng)物細(xì)胞融合是指通過物理、化學(xué)或生物學(xué)等手段，使兩個(gè)或多個(gè)動(dòng)物細(xì)胞結(jié)合形成一個(gè)細(xì)胞的過程8.2.4概述細(xì)胞融合技術(shù)是單克隆抗體制備的重要技術(shù)8.2.5簡(jiǎn)述干細(xì)胞在生物醫(yī)學(xué)工程中有廣泛的應(yīng)用價(jià)值8.3對(duì)動(dòng)物早期胚胎或配子進(jìn)行顯微操作和處理以獲得目標(biāo)個(gè)體8.3.1簡(jiǎn)述胚胎形成經(jīng)過了受精及早期發(fā)育等過程8.3.2簡(jiǎn)述胚胎工程包括體外受精、胚胎移植和胚胎分割等技術(shù)1．植物的每個(gè)細(xì)胞在植物體內(nèi)和體外都能表現(xiàn)出細(xì)胞的全能性。(×)2．在誘導(dǎo)離體菊花莖段形成幼苗的過程中，不會(huì)發(fā)生細(xì)胞的增殖和分化。(×)3．用纖維素酶和果膠酶水解法獲得的植物原生質(zhì)體失去了全能性。(×)4．細(xì)胞膜的流動(dòng)性是細(xì)胞融合的基礎(chǔ)。(√)5．若誘導(dǎo)植物細(xì)胞融合，則需先脫分化再誘導(dǎo)融合。(×)6．需使用纖維素酶和果膠酶處理植物細(xì)胞獲得原生質(zhì)體，然后選用滅活的病毒誘導(dǎo)原生質(zhì)體融合。(×)7．原生質(zhì)體雖無細(xì)胞壁但仍保持細(xì)胞的全能性，可用秋水仙素處理誘導(dǎo)細(xì)胞壁再生。(×)8．植物細(xì)胞雜交的最終目的是得到細(xì)胞的代謝產(chǎn)物。(×)9．制備肝細(xì)胞懸液時(shí)先用剪刀剪碎肝組織，再用胃蛋白酶處理。(×)10．動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)過程需要無菌環(huán)境，不需要無菌操作。(×)11．制備單克隆抗體時(shí)，要選用已免疫的B淋巴細(xì)胞和骨髓瘤細(xì)胞融合形成雜交瘤細(xì)胞。(×)12．通過體細(xì)胞核移植技術(shù)培育克隆牛的過程中，可用顯微操作技術(shù)處理次級(jí)卵母細(xì)胞，去除細(xì)胞核。(√)13．動(dòng)、植物細(xì)胞培養(yǎng)時(shí)都要在培養(yǎng)基中添加適量蔗糖。(×)14．酶處理細(xì)胞的時(shí)間過長(zhǎng)可能會(huì)改變細(xì)胞膜的通透性。(√)15．傳代培養(yǎng)超過50代的細(xì)胞可能失去接觸抑制的特性。(√)16．胚胎移植前要檢查胚胎質(zhì)量并在囊胚或原腸胚階段移植。(×)17．為了獲得更多的囊胚，可以采用注射激素的方法促進(jìn)成熟雌性個(gè)體超數(shù)排卵，然后將卵細(xì)胞從母體內(nèi)取出，在試管內(nèi)與人工采集的精子進(jìn)行體外受精，培育成胚胎。(√)18．從雄性奶牛中采集到的成熟精子可直接用于受精。(×)19．采用胚胎分割技術(shù)產(chǎn)生同卵多胚的數(shù)量是有限的。(√)20．胚胎移植時(shí)需使用免疫抑制劑以避免代孕牛對(duì)植入胚胎產(chǎn)生排斥反應(yīng)。(×)1．植物組織培養(yǎng)時(shí)通常選擇莖尖、幼葉等作為外植體，原因是莖尖、幼葉細(xì)胞分化程度低，容易誘導(dǎo)產(chǎn)生愈傷組織。2．“番茄—馬鈴薯”超級(jí)雜種植株沒有如科學(xué)家所想象的那樣，地上結(jié)番茄、地下長(zhǎng)馬鈴薯，主要原因是基因的表達(dá)不是孤立的，它們之間是相互調(diào)控、相互影響的，“番茄—馬鈴薯”雜種植株的細(xì)胞中雖然具備兩個(gè)物種的遺傳物質(zhì)，但這些遺傳物質(zhì)的表達(dá)相互干擾，不能像馬鈴薯或番茄植株中的遺傳物質(zhì)一樣有序地表達(dá)。3．動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)需要控制的氣體環(huán)境是95%空氣加5%CO2，各成分的作用是O2維持細(xì)胞代謝，CO2的主要作用是維持培養(yǎng)液的pH。4．動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)時(shí)，要將動(dòng)物組織分散成單個(gè)細(xì)胞的原因是①保證細(xì)胞所需要的營(yíng)養(yǎng)供應(yīng)；②保證細(xì)胞內(nèi)有害代謝產(chǎn)物的及時(shí)排出。5．動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)不同于植物組織培養(yǎng)，動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)時(shí)細(xì)胞只進(jìn)行生長(zhǎng)和增殖，不能得到完整個(gè)體，但是植物組織培養(yǎng)可以獲得完整個(gè)體。6．動(dòng)物細(xì)胞核移植技術(shù)中普遍使用的去核方法是顯微操作法。也有人采用梯度離心、紫外線短時(shí)間照射和化學(xué)物質(zhì)處理等方法，其實(shí)質(zhì)是在沒有穿透卵母細(xì)胞透明帶的情況下去核或使其中的DNA變性。7．超數(shù)排卵是指應(yīng)用外源促性腺激素，誘發(fā)卵巢排出比自然情況下更多的成熟卵子。進(jìn)行同期發(fā)情處理的目的是使供受體生殖器官的生理變化同步，保證相同的生理環(huán)境。8．為了實(shí)現(xiàn)體外受精需要采集良種公羊的精液，精液保存的方法是冷凍保存。在體外受精前要對(duì)精子進(jìn)行獲能處理，其原因是剛排出的精子必須發(fā)生相應(yīng)生理變化后才能受精。

核心考點(diǎn)一植物細(xì)胞工程及其應(yīng)用1.理清植物細(xì)胞工程兩大技術(shù)2.植物組織培養(yǎng)的兩個(gè)關(guān)鍵3.植物激素的使用細(xì)胞分裂素比例較高，促進(jìn)芽分化，抑制根形成；生長(zhǎng)素比例較高，促進(jìn)根分化，抑制芽形成。4.光照的使用脫分化階段不需要給予光照，再分化階段需要給予光照，以利于葉綠素的合成。5.植物體細(xì)胞雜交的關(guān)鍵(1)酶解法——用纖維素酶和果膠酶去除細(xì)胞壁。(2)促融劑——聚乙二醇。(3)雜種細(xì)胞的形成標(biāo)志——新細(xì)胞壁的形成。(4)培養(yǎng)雜種植株的技術(shù)——植物組織培養(yǎng)。6.植物繁殖的新途徑(1)快速繁殖：也叫微型繁殖，可對(duì)優(yōu)良品種進(jìn)行規(guī)模化的植物組織培養(yǎng)。(2)作物脫毒：植物頂端分生區(qū)附近的病毒極少，甚至無病毒，對(duì)離體莖尖進(jìn)行組織培養(yǎng)可獲得脫毒苗。真題感悟常考題型一植物組織培養(yǎng)典例1(2023·山東卷)利用植物細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù)在離體條件下對(duì)單個(gè)細(xì)胞或細(xì)胞團(tuán)進(jìn)行培養(yǎng)使其增殖，可獲得植物細(xì)胞的某些次生代謝物。下列說法正確的是(A)A．利用該技術(shù)可獲得某些無法通過化學(xué)合成途徑得到的產(chǎn)物B．植物細(xì)胞體積小，故不能通過該技術(shù)進(jìn)行其產(chǎn)物的工廠化生產(chǎn)C．次生代謝物是植物所必需的，但含量少，應(yīng)選擇產(chǎn)量高的細(xì)胞進(jìn)行培養(yǎng)D．該技術(shù)主要利用促進(jìn)細(xì)胞生長(zhǎng)的培養(yǎng)條件提高單個(gè)細(xì)胞中次生代謝物的含量【解析】有些產(chǎn)物不能或難以通過化學(xué)合成途徑得到，利用該技術(shù)可獲得某些無法通過化學(xué)合成途徑得到的產(chǎn)物，A正確；利用植物細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù)在離體條件下對(duì)單個(gè)細(xì)胞或細(xì)胞團(tuán)進(jìn)行培養(yǎng)使其增殖，可獲得植物細(xì)胞的某些次生代謝物，故可通過該技術(shù)進(jìn)行植物細(xì)胞產(chǎn)物的工廠化生產(chǎn)，B錯(cuò)誤；次生代謝產(chǎn)物不是植物生長(zhǎng)所必需的，其含量少，可以通過增加細(xì)胞的數(shù)量來增加次生代謝產(chǎn)物的產(chǎn)量，C錯(cuò)誤；細(xì)胞產(chǎn)物的工廠化生產(chǎn)主要是利用促進(jìn)細(xì)胞分裂的培養(yǎng)條件，提高了多個(gè)細(xì)胞中次生代謝物的含量，不能提高單個(gè)細(xì)胞中次生代謝物的含量，D錯(cuò)誤。故選A。典例2(2022·浙江6月卷)下列關(guān)于菊花組織培養(yǎng)的敘述，正確的是(D)A．用自然生長(zhǎng)的莖進(jìn)行組培須用適宜濃度的乙醇和次氯酸鈉的混合液消毒B．培養(yǎng)瓶用專用封口膜封口可防止外界雜菌侵入并阻止瓶?jī)?nèi)外的氣體交換C．組培苗鍛煉時(shí)采用蛭石作為栽培基質(zhì)的原因是蛭石帶菌量低且營(yíng)養(yǎng)豐富D．不帶葉片的菊花莖切段可以通過器官發(fā)生的途徑形成完整的菊花植株【解析】自然生長(zhǎng)莖段的消毒屬于外植體消毒，先用70%酒精，再用無菌水清洗，再用5%次氯酸鈉消毒處理，最后再用無菌水清洗，A錯(cuò)誤；培養(yǎng)瓶用專用封口膜封口的目的是防止雜菌污染，并不影響氣體交換，B錯(cuò)誤；組培苗鍛煉時(shí)采用蛭石作為栽培基質(zhì)的原因是蛭石比較松軟，持水性也較好，有利于幼苗的生根和葉片的生長(zhǎng)，C錯(cuò)誤；不帶葉片的菊花莖的切段可通過植物組織培養(yǎng)分化出芽和根這種器官發(fā)生的途徑形成完整的菊花植株，D正確。典例3(2020·江蘇卷)農(nóng)作物秸稈的回收利用方式很多，其中之一是將秸稈碎化后作為食用菌的栽培基質(zhì)。碎化秸稈中纖維所起的作用，相當(dāng)于植物組織培養(yǎng)中固體培養(yǎng)基的(A)A．瓊脂＋蔗糖 B．蔗糖＋激素C．激素＋無機(jī)鹽 D．無機(jī)鹽＋瓊脂【解析】據(jù)題干的信息，“秸稈碎化后作為食用菌的栽培基質(zhì)”，秸稈中的纖維素在食用菌菌絲生長(zhǎng)過程中大量降解，提供碳源和能源，這相當(dāng)于植物組織培養(yǎng)基中添加的蔗糖；秸稈中的纖維素是固體，可以作為培養(yǎng)基的支持物，使培養(yǎng)基呈固體狀態(tài)，這相當(dāng)于植物組織培養(yǎng)基中添加的瓊脂。故選A。典例4(2020·天津卷)某植物有A、B兩品種?？蒲腥藛T在設(shè)計(jì)品種A組織培養(yǎng)實(shí)驗(yàn)時(shí)，參照品種B的最佳激素配比(見下表)進(jìn)行預(yù)實(shí)驗(yàn)。品種B組織培養(yǎng)階段細(xì)胞分裂素濃度(μmol/L)生長(zhǎng)素濃度(μmol/L)Ⅰ誘導(dǎo)形成愈傷組織m1n1Ⅱ誘導(dǎo)形成幼芽m2n2Ⅲ誘導(dǎo)生根m3n3據(jù)表回答：(1)Ⅰ階段時(shí)通常選擇莖尖、幼葉等作為外植體，原因是細(xì)胞分化程度低，容易誘導(dǎo)產(chǎn)生愈傷組織。(2)在Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ階段中發(fā)生基因選擇性表達(dá)的是Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ階段。(3)為確定品種A的Ⅰ階段的最適細(xì)胞分裂素濃度，參照品種B的激素配比(m1>2.0)，以0.5μmol/L為梯度，設(shè)計(jì)5個(gè)濃度水平的實(shí)驗(yàn)，細(xì)胞分裂素最高濃度應(yīng)設(shè)為m1＋1.0μmol/L。(4)Ⅲ階段時(shí)，科研人員分別選用濃度低于或高于n3μmol/L的生長(zhǎng)素處理品種A幼芽都能達(dá)到最佳生根效果，原因是處理幼芽時(shí)，選用低濃度生長(zhǎng)素時(shí)的處理方法為浸泡法(長(zhǎng)時(shí)間處理)，選用高濃度生長(zhǎng)素時(shí)的處理方法為沾蘸法(短時(shí)間處理)。(5)在Ⅰ階段用秋水仙素對(duì)材料進(jìn)行處理，最易獲得由單個(gè)細(xì)胞形成的多倍體?！窘馕觥?1)在誘導(dǎo)愈傷組織形成時(shí)，通常采用莖尖、幼葉做外植體，因?yàn)檫@些部位的細(xì)胞分裂能力強(qiáng)、分化程度低，全能性容易表達(dá)，容易誘導(dǎo)產(chǎn)生愈傷組織。(2)Ⅰ過程愈傷組織形成是離體的植物細(xì)胞脫分化的結(jié)果，脫分化過程中細(xì)胞的結(jié)構(gòu)和功能發(fā)生明顯改變，成為未分化狀態(tài)；Ⅱ、Ⅲ過程形成幼芽、根的過程存在細(xì)胞的分化，分化和脫分化都存在基因的選擇性表達(dá)，故Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ階段都存在基因的選擇性表達(dá)。(3)根據(jù)題意，表中數(shù)據(jù)為品種B的最佳激素配比，若要確定品種A的Ⅰ階段最佳細(xì)胞分裂素濃度，以0.5μmol/L為梯度，可參考m1為中間值，故實(shí)驗(yàn)中細(xì)胞分裂素最高濃度可設(shè)為m1＋1.0μmol/L。(4)實(shí)驗(yàn)中用生長(zhǎng)素處理插條的方法可選用浸泡法或沾蘸法，浸泡法時(shí)間長(zhǎng)、所需濃度低，而沾蘸法處理時(shí)間短、所需濃度高；因此Ⅲ過程中分別選用濃度低于或高于n3μmol/L的生長(zhǎng)素處理品種A的幼苗芽，選用低濃度生長(zhǎng)素時(shí)的處理方法為浸泡法，時(shí)間長(zhǎng)，而選用高濃度生長(zhǎng)素時(shí)處理方法為沾蘸法，時(shí)間短，都能達(dá)到比較適宜的濃度，達(dá)到最佳生根效果。(5)秋水仙素可抑制紡錘體形成，導(dǎo)致染色體加倍形成多倍體，愈傷組織分裂旺盛，故在Ⅰ階段用秋水仙素處理，最易獲得由單個(gè)細(xì)胞形成的多倍體。歸納提升：植物激素對(duì)植物組織培養(yǎng)的影響(1)按照不同的順序使用生長(zhǎng)素、細(xì)胞分裂素這兩類激素，會(huì)得到不同的實(shí)驗(yàn)結(jié)果使用順序?qū)嶒?yàn)結(jié)果先使用生長(zhǎng)素，后使用細(xì)胞分裂素有利于細(xì)胞分裂，但細(xì)胞不分化先使用細(xì)胞分裂素，后使用生長(zhǎng)素細(xì)胞既分裂也分化同時(shí)使用分化頻率提高簡(jiǎn)記：先“生”分裂不分化，后“生”分裂又分化，同“使”分化頻率高(2)當(dāng)同時(shí)使用生長(zhǎng)素、細(xì)胞分裂素這兩類激素時(shí)，兩者用量的比值影響植物細(xì)胞的發(fā)育方向生長(zhǎng)素/細(xì)胞分裂素植物細(xì)胞的發(fā)育方向比值高有利于根的分化、抑制芽的形成比值低有利于芽的分化、抑制根的形成比值適中促進(jìn)愈傷組織的形成簡(jiǎn)記：“高”根，“低”芽，“中”愈傷常考題型二植物體細(xì)胞雜交典例5(2023·廣東卷)人參皂苷是人參的主要活性成分。科研人員分別誘導(dǎo)人參根與胡蘿卜根產(chǎn)生愈傷組織并進(jìn)行細(xì)胞融合，以提高人參皂苷的產(chǎn)率。下列敘述錯(cuò)誤的是(C)A．細(xì)胞融合前應(yīng)去除細(xì)胞壁B．高Ca2＋—高pH溶液可促進(jìn)細(xì)胞融合C．融合的細(xì)胞即為雜交細(xì)胞D．雜交細(xì)胞可能具有生長(zhǎng)快速的優(yōu)勢(shì)【解析】在細(xì)胞融合前，必須先用纖維素酶和果膠酶去除細(xì)胞壁，再誘導(dǎo)原生質(zhì)體融合，A正確；人工誘導(dǎo)原生質(zhì)體融合有物理法和化學(xué)法，用高Ca2＋—高pH溶液可促進(jìn)細(xì)胞融合，B正確；融合的細(xì)胞中有人參根—人參根細(xì)胞、人參根—胡蘿卜根細(xì)胞、胡蘿卜根—胡蘿卜根細(xì)胞，只有人參根—胡蘿卜根細(xì)胞才是雜交細(xì)胞，C錯(cuò)誤；雜交細(xì)胞含兩種細(xì)胞的遺傳物質(zhì)，可能具有生長(zhǎng)快速的優(yōu)勢(shì)，D正確。故選C。典例6(2020·山東卷)兩種遠(yuǎn)緣植物的細(xì)胞融合后會(huì)導(dǎo)致一方的染色體被排出。若其中一個(gè)細(xì)胞的染色體在融合前由于某種原因斷裂，形成的染色體片段在細(xì)胞融合后可能不會(huì)被全部排出，未排出的染色體片段可以整合到另一個(gè)細(xì)胞的染色體上而留存在雜種細(xì)胞中。依據(jù)該原理，將普通小麥與耐鹽性強(qiáng)的中間偃麥草進(jìn)行體細(xì)胞雜交獲得了耐鹽小麥新品種，過程如下圖所示。下列說法錯(cuò)誤的是(C)A．過程①需使用纖維素酶和果膠酶處理細(xì)胞B．過程②的目的是使中間偃麥草的染色體斷裂C．過程③中常用滅活的病毒誘導(dǎo)原生質(zhì)體融合D．耐鹽小麥的染色體上整合了中間偃麥草的染色體片段【解析】過程①是獲得植物細(xì)胞的原生質(zhì)體，需要用纖維素酶和果膠酶將細(xì)胞壁分解，A正確；根據(jù)題干信息“將其中一個(gè)細(xì)胞的染色體在融合前斷裂，形成的染色體片段在細(xì)胞融合后可能不會(huì)被全部排出，未排出的染色體片段可以整合到另一個(gè)細(xì)胞的染色體上而留存在雜種細(xì)胞中，將普通小麥與耐鹽性強(qiáng)的中間偃麥草進(jìn)行體細(xì)胞雜交獲得了耐鹽小麥新品種，”故過程②通過紫外線照射是使中間偃麥草的染色體斷裂，B正確；滅活的病毒誘導(dǎo)是動(dòng)物細(xì)胞融合特有的方法，誘導(dǎo)植物原生質(zhì)體融合常用物理法、化學(xué)法，C錯(cuò)誤；實(shí)驗(yàn)最終將不抗鹽的普通小麥和抗鹽的偃麥草整合形成耐鹽小麥，說明耐鹽小麥染色體上整合了中間偃麥草的染色體片段，D正確。故選C。典例7(2021·福建卷)科研人員利用植物體細(xì)胞雜交技術(shù)培育矮牽牛新品種，技術(shù)流程示意圖如下。下列敘述正確的是(D)A．愈傷組織是幼嫩葉片通過細(xì)胞分化形成的B．獲得的雜種植株都能表現(xiàn)雙親的優(yōu)良性狀C．可用聚乙二醇誘導(dǎo)原生質(zhì)體甲和乙的融合和細(xì)胞壁再生D．用纖維素酶和果膠酶處理愈傷組織以獲得原生質(zhì)體【解析】愈傷組織是幼嫩葉片通過細(xì)胞脫分化形成的，A錯(cuò)誤；由于基因的選擇性表達(dá)和基因間的互作效應(yīng)，獲得的雜種植株不一定能夠表現(xiàn)親本的優(yōu)良性狀，B錯(cuò)誤；可用聚乙二醇誘導(dǎo)原生質(zhì)體甲和乙的融合，但不能誘導(dǎo)細(xì)胞壁的再生，C錯(cuò)誤；由于植物細(xì)胞壁的成分主要是纖維素和果膠，故可以用纖維素酶和果膠酶處理愈傷組織以獲得原生質(zhì)體，D正確。故選D。典例8(2023·浙江1月卷)甲植物細(xì)胞核基因具有耐鹽堿效應(yīng)，乙植物細(xì)胞質(zhì)基因具有高產(chǎn)效應(yīng)。某研究小組用甲、乙兩種植物細(xì)胞進(jìn)行體細(xì)胞雜交相關(guān)研究，基本過程包括獲取原生質(zhì)體、誘導(dǎo)原生質(zhì)體融合、篩選融合細(xì)胞、雜種植株再生和鑒定，最終獲得高產(chǎn)耐鹽堿再生植株?；卮鹣铝袉栴}：(1)根據(jù)研究目標(biāo)，在甲、乙兩種植物細(xì)胞進(jìn)行體細(xì)胞雜交前，應(yīng)檢驗(yàn)兩種植物的原生質(zhì)體是否具備再生的能力。為了便于觀察細(xì)胞融合的狀況，通常用不同顏色的原生質(zhì)體進(jìn)行融合，若甲植物原生質(zhì)體采用幼苗的根為外植體，則乙植物可用幼苗的葉為外植體。(2)植物細(xì)胞壁的主要成分為纖維素和果膠，在獲取原生質(zhì)體時(shí)，常采用相應(yīng)的酶進(jìn)行去壁處理。在原生質(zhì)體融合前，需對(duì)原生質(zhì)體進(jìn)行處理，分別使甲原生質(zhì)體和乙原生質(zhì)體的細(xì)胞質(zhì)和細(xì)胞核失活。對(duì)處理后的原生質(zhì)體在顯微鏡下用血細(xì)胞計(jì)數(shù)板計(jì)數(shù)，確定原生質(zhì)體密度。兩種原生質(zhì)體1∶1混合后，通過添加適宜濃度的PEG進(jìn)行融合；一定時(shí)間后，加入過量的培養(yǎng)基進(jìn)行稀釋，稀釋的目的是降低PEG濃度，使其失去融合作用。(3)將融合原生質(zhì)體懸浮液和液態(tài)的瓊脂糖混合，在凝固前倒入培養(yǎng)皿，融合原生質(zhì)體分散固定在平板中，并獨(dú)立生長(zhǎng)、分裂形成愈傷組織。同一塊愈傷組織所有細(xì)胞源于同一個(gè)雜種融合原生質(zhì)體。下列各項(xiàng)中能說明這些愈傷組織只能來自于雜種細(xì)胞的理由是哪幾項(xiàng)？ABDA．甲、乙原生質(zhì)體經(jīng)處理后失活，無法正常生長(zhǎng)、分裂B．同種融合的原生質(zhì)體因甲或乙原生質(zhì)體失活而不能生長(zhǎng)、分裂C．培養(yǎng)基含有抑制物質(zhì)，只有雜種細(xì)胞才能正常生長(zhǎng)、分裂D．雜種細(xì)胞由于結(jié)構(gòu)和功能完整可以生長(zhǎng)、分裂(4)愈傷組織經(jīng)再分化可形成胚狀體或芽。胚狀體能長(zhǎng)出根和芽，直接發(fā)育形成再生植株。(5)用PCR技術(shù)鑒定再生植株。已知甲植物細(xì)胞核具有特異性DNA序列a，乙植物細(xì)胞質(zhì)具有特異性DNA序列b；M1、M2為序列a的特異性引物，N1、N2為序列b的特異性引物。完善實(shí)驗(yàn)思路：Ⅰ.提取純化再生植株的總DNA，作為PCR擴(kuò)增的模板。Ⅱ.將DNA提取物加入PCR反應(yīng)體系，M1、M2為特異性引物，擴(kuò)增序列a；用同樣的方法擴(kuò)增序列b。Ⅲ.得到的2個(gè)PCR擴(kuò)增產(chǎn)物經(jīng)凝膠電泳后，若每個(gè)PCR擴(kuò)增產(chǎn)物在凝膠中均出現(xiàn)了預(yù)期的1個(gè)條帶，則可初步確定再生植株來自于雜種細(xì)胞。【解析】(1)在甲、乙兩種植物細(xì)胞進(jìn)行體細(xì)胞雜交前，應(yīng)檢驗(yàn)兩種植物的原生質(zhì)體是否具備再生的能力。為了便于觀察細(xì)胞融合的狀況，通常用不同顏色的原生質(zhì)體進(jìn)行融合，若甲植物原生質(zhì)體采用幼苗的根為外植體，則乙植物可用幼苗的葉為外植體。(2)植物細(xì)胞壁的主要成分為纖維素和果膠，在獲取原生質(zhì)體時(shí)，常采用相應(yīng)的酶進(jìn)行去壁處理。甲植物細(xì)胞核基因具有耐鹽堿效應(yīng)，乙植物細(xì)胞質(zhì)基因具有高產(chǎn)效應(yīng)，在原生質(zhì)體融合前，需對(duì)原生質(zhì)體進(jìn)行處理，分別使甲原生質(zhì)體和乙原生質(zhì)體的細(xì)胞質(zhì)和