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1溶血性曼氏桿菌病診斷技術(shù)規(guī)范GB/T6682-2008分析實(shí)驗(yàn)室用水規(guī)格和試驗(yàn)方法GB/T14926.43-2001實(shí)驗(yàn)動(dòng)物細(xì)Mh：溶血性曼氏桿菌（Mannheimiahaemolytica）LKTA：白細(xì)胞毒素蛋白A（LeukotoPCR：聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)（PolymerasechainreactDNA：脫氧核糖核酸（DeoxyribonucleicacidNTPs：脫氧核糖核苷三磷酸（DeoxyribonucleosidetripTSB：胰蛋白胨大豆肉湯（TrypticsoybrPBS：磷酸鹽緩沖液（PhosphatebuffersolutiELISA：酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)（Enzymelinkedimmunosorbenta25.2臨床癥狀5.3病理變化采樣袋、5mL凍存管、2mL凍存管、手6.2病料采集存管中，編號(hào)，記錄。采集的樣品密封后，于2℃~87.2儀器高壓滅菌鍋、恒溫培養(yǎng)箱、光學(xué)顯微鏡、生物安全柜、組織7.3樣品處理7.4細(xì)菌分離中培養(yǎng)的圓形、光滑、濕潤(rùn)并伴有溶血現(xiàn)象的菌落，37.5染色鏡檢7.6生化鑒定8.2儀器PCR擴(kuò)增儀、電泳儀、水平電泳槽、凝膠成將7.4.1中增菌培養(yǎng)后菌液或7.4.2中純培養(yǎng)菌落用商品化試劑盒進(jìn)行基因組DNA提取。提取方法按8.4PCR擴(kuò)增8.5PCR產(chǎn)物電泳4液（配制方法見(jiàn)附錄A.8）、終止液（配制方法見(jiàn)9.2儀器9.3檢測(cè)步驟16h。用洗滌緩沖液洗板5次，每孔200μL，每次3min，洗滌結(jié)束后拍干。然后按200μL/孔的用量加6A.1胰蛋白胨大豆肉湯培養(yǎng)基A.3綿羊血瓊脂平板分裝三角瓶，121℃高壓滅菌15min，加入10%綿羊脫纖血充分A.4包被緩沖液（0.05molA.9終止液8TGGGCAATACGAACTACTCGGGGAATCAATTGATGATGCTGCCGGTGAAGCCTTTGACAAAACAGGCAAACTACTCGGTTTACCCTGCCGGTGTAGCGATGTCAAAATTAGCCGAATCCGGCACGCCAAATCGTTTTAAATTCCCTCGTCCAATGACCGACAGAACTGGATTTCAGTTTC
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