DBT151-2023大豆疫霉根腐病菌生理小種鑒定技術(shù)規(guī)程

ICS65.020.20CCSB15

2301黑龍江省哈爾濱市地方標(biāo)準(zhǔn)DB2301/T151—2023大豆疫霉根腐病菌生理小種鑒定技術(shù)規(guī)程20232023122520240122哈爾濱市市場(chǎng)監(jiān)督管理局?發(fā)布DB2301/T151—2023前 言本文件按照GB/T1.1—2020《標(biāo)準(zhǔn)化工作導(dǎo)則第1部分：標(biāo)準(zhǔn)化文件的結(jié)構(gòu)和起草規(guī)則》的規(guī)定起草。請(qǐng)注意本文件的某些部分可能涉及專利。本文件的發(fā)布機(jī)構(gòu)不承擔(dān)識(shí)別專利的責(zé)任。本文件由哈爾濱市農(nóng)業(yè)農(nóng)村局提出并歸口。本文件起草單位：哈爾濱市農(nóng)業(yè)科學(xué)院。IIDB2301/T151DB2301/T151—2023DB2301/T151DB2301/T151—2023大豆疫霉根腐病菌生理小種鑒定技術(shù)規(guī)程范圍本文件規(guī)定了大豆疫霉根腐病菌生理小種鑒定技術(shù)規(guī)程的術(shù)語和定義、接種前準(zhǔn)備、接種體制備、鑒別寄主的培育、接種、病情調(diào)查、生理小種鑒定、滅活、建立鑒定檔案。本文件適用于大豆疫霉根腐病菌生理小種的室內(nèi)鑒定與評(píng)價(jià)。規(guī)范性引用文件（包括所有的修改單適用于本文件。GB5084農(nóng)田灌溉水質(zhì)標(biāo)準(zhǔn)NY/T496肥料合理使用準(zhǔn)則通則NY/T2114大豆疫霉病菌檢疫檢測(cè)與鑒定方法術(shù)語和定義下列術(shù)語和定義適用于本文件。下列術(shù)語和定義適用于本文件。3.1下胚軸傷口接種1（寬度不超過莖粗1/3、長度1cm），將接種體貼于傷口處。4接種前準(zhǔn)備蛭石的滅菌新蛭石經(jīng)121℃濕熱滅菌2h。鑒別寄主準(zhǔn)備8Harops1Harosoy13Xps1b，Williams（Rps6）和Harosoy（Rps7），以Sloan（rps）為感病對(duì)照。5接種體制備5.1病樣的采集1AA.1）。培養(yǎng)基V8mlV8900ml0.215g～2020min。病原菌分離純化30s～40s33刀切取0.5c2V8培養(yǎng)日期。253d～5d后，取菌落邊緣菌絲10×10倍顯微鏡下觀察，若菌絲無隔，直角分支，平均寬3.5μm，產(chǎn)生球形菌絲膨大體（平均直徑23μm）和同宗配合卵孢子（直徑30μm～35（35μm～58μm×34μm～45μN(yùn)Y/T2114的規(guī)定進(jìn)行PCRV84次～6病原菌保存V87d，10～17（3個(gè)月～4個(gè)月傳代一次或-80℃冰箱長期保存。5.5接種體的制備5.5接種體的制備將供試菌株置于V8培養(yǎng)基的培養(yǎng)皿上，25℃恒溫下黑暗培養(yǎng)8d，用滅菌解剖刀將含有大豆疫霉根腐病菌菌絲的培養(yǎng)基切成小方塊（3mm×3mm）。接種體在接種當(dāng)天制備。6鑒別寄主的培育89cm×12.5cm×12.5底徑×高×口徑的盆缽中，以滅菌蛭石做為基質(zhì)，播種量為15粒/盆，出苗后間苗至10株/盆，3次重復(fù)/處理，播種后置于18～26NY/T496GB50847接種接種時(shí)間大豆真葉期。接種方法下胚軸傷口接種法。接種后管理2將人工接種后的大豆苗置于相對(duì)濕度90%以上、溫度為20℃～25℃環(huán)境48h后，轉(zhuǎn)入20℃～30℃溫室正常管理，保持土壤含水量達(dá)到70%～80%。病情調(diào)查調(diào)查時(shí)間接種后5d～7d進(jìn)行病情調(diào)查。調(diào)查方法按照附錄B中規(guī)定的鑒別寄主對(duì)大豆疫霉根腐病菌生理小種反應(yīng)類型進(jìn)行調(diào)查記載。無效數(shù)據(jù)重復(fù)測(cè)定若某菌株對(duì)某鑒別寄主出現(xiàn)“中間類型（IRT）”反應(yīng)，或某菌株對(duì)所有鑒別寄主無致病力，則不能定類群，需重復(fù)實(shí)驗(yàn)或不計(jì)結(jié)果。生理小種鑒定8Rps55（C）確定生理小種。10滅活10滅活將接種鑒定的接種體、基質(zhì)等在121℃經(jīng)20min滅活處理，將生理小種鑒定后的病株集中焚燒處理，用于栽培應(yīng)用的盆缽80℃水浴處理2h以上。11建立鑒定檔案建立鑒定檔案，內(nèi)容包括大豆疫霉根腐病樣品采集、接種前準(zhǔn)備、鑒別寄主培育、接種、調(diào)查、生理小種鑒定、滅活及建立鑒定檔案。檔案保存3年以上，建檔備查。3附錄 A（資料性）大豆疫霉根腐病田間病樣采集信息表A.1大豆疫霉根腐病田間病樣采集信息表見表A.1。表A.1大豆疫霉根腐病田間病樣采集信息表地塊采樣時(shí)間詳細(xì)地點(diǎn)種植品種生育期記錄人123444附錄 B（規(guī)范性）鑒別寄主對(duì)大豆疫霉根腐病菌生理小種反應(yīng)類型B.1鑒別寄主對(duì)大豆疫霉根腐病菌生理小種反應(yīng)類型見表B.1。表B.1鑒別寄主對(duì)大豆疫霉根腐病菌生理小種反應(yīng)類型序號(hào)反應(yīng)類型植株死亡率1感病(S)100%≥P≥70%2抗病(R)0≤P≤30%3中間類型(IRT)30%＜P＜70%55附錄 C（資料性）大豆疫霉根腐病菌55個(gè)國際通用生理小種表C.1大豆疫霉根腐病菌55個(gè)國際通用生理小種表見表C.1。表C.1大豆疫霉根腐病菌55個(gè)國際通用生理小種表生理小種毒力公式生理小種毒力公式17291a,1b,1k,6,721b,7301a,1b,1k,3a,6,731a,7311b,1c,1d,1k,6,741a,1c,7321b,1k,6,751a,1c,6,7331a,1b,1c,1d,1k61a,1d,3a,6,7341a,1k,771a,3a,6,7351a,1b,1c,1d,1k81a,1d,6,7363a,691a,6,7371a,1c,3a,6,7101b,3a,6,7381a,1b,1c,1d,1k,3a,6,7111b,6,7391a,1b,1c,1k,3a,6,7121a,1c,1d,1k,3a401a,1c,1d,1k,7136,7411a,1b,1d,1k,7141c,7421a,1d,3a,7153a,7431a,1c,1d,7161b,1c,1k441a,1d,7171d,3a,6,7451a,1b,1c,1k,6,7181c461a,1c,3a,5,6191a,1b,1c,1d,1k,3a471a,1b,1c,7201a,1b,1c,3a,7485,7211a,3a,7491a,1c,4,6,7221a,1c,3a,6,7504,6,7231a,