蠕蟲學完全剖檢術及蠕蟲標本采集與制作

蠕蟲學完全剖檢術及蠕蟲標本采集與制作一、實驗目的及要求掌握寄生蟲完全剖檢法，通過剖解采集家畜的全部寄生蟲標本，并進行鑒定和計數(shù)，為診斷和了解蠕蟲病的流行情況，防治和研究寄生蟲病提供科學依據。二、實驗器材解剖刀，解剖剪，鑷子，標本瓶，體視顯微鏡，透視顯微鏡，貝爾曼法裝置。瓷盆、瓷量杯、帶膠皮頭玻璃滴管、玻璃燒杯、載玻片、蓋玻片、普通玻璃塊、鐵水桶、肥皂粉、毛巾。藥品生理鹽水、20%福爾馬林、10%福爾馬林、5%福爾馬林、70%酒精、1%鹽水等三、實驗方法、步驟和操作要領根據實際工作中的要求不同，蠕蟲學完全剖檢術可分為寄生蟲學完全剖檢法、某個器官的寄生蟲剖檢法（如旋毛蟲的調查等）和對某些器官內的某一種寄生蟲的剖檢法（如牛血吸蟲的剖檢收集法）。（一）剖檢前的準備1．動物的選擇。對于因寄生蟲病感染而需作出診斷的動物及驅蟲藥物試驗的動物則可直接用于寄生蟲學剖檢。而為了查明某—地區(qū)的寄生蟲區(qū)系時，動物必須選擇確實在該地區(qū)生長的，并應盡可能包括不同的年齡和性別，同時瘦弱或有臨床癥狀的動物被視為主要的調查對象。也可以采用因病死亡的家畜進行剖解。死亡時間一般不能超過24小時（一般蟲體在病畜死亡24?48崩解消失）。對每頭用于寄生蟲學剖檢的動物都應在登記表上詳細填寫動物種類、品種、年齡、性別、編號、營養(yǎng)狀況、臨床癥狀等。2.選定做剖檢的家畜在剖檢前先絕食1?2天，以減少胃腸內容物，便于寄生蟲的檢出。3．對家畜進行剖解前，對其體表應作認真檢查和寄生蟲的采集工作。觀察體表的被毛和皮膚有無瘢痕、結痂、出血、皸裂、肥厚等病變，并注意對體外寄生蟲（虱、虱蠅、蜱、螨、皮蠅幼蟲等）的采集。4．在進行剖解前最好先取糞便進行蟲卵檢查、計數(shù)，初步確定該畜體內寄生蟲的寄生情況，對以后尋找蟲體時可能有所幫助。但也應注意，不要因為糞便檢查結果，而給工作者帶來不全面的主觀印象，忽視了未在糞便中發(fā)現(xiàn)蟲卵的那些蟲體的尋找。5．剖檢家畜進行動脈放血處死，如利用屠宰場的屠畜可按屠宰場的常規(guī)處理，但臟器的采集必須合乎寄生蟲檢查的要求。（二）家畜的完全剖檢技術及寄生蟲的采集在家畜死亡或捕殺后，首先制作血片，染色鏡檢，觀察血液中有無寄生蟲。然后進行剖解。剖檢程序如下：1．淋巴結和皮下組織的檢查及寄生蟲的采集。按照一般解剖方法進行剝皮，并隨檢觀察身體各部淋巴結和皮下組織有無蟲體寄生。發(fā)現(xiàn)蟲體隨即采集并作記錄。2．頭部各器官的檢查及寄生蟲的采集。頭部從枕骨后方切下，首先檢查頭部各個部位和感覺器官。然后沿鼻中隔的左或右約0.3cm處的矢狀面縱形鋸開頭骨，撬開鼻中隔，進行檢查。（1）檢查鼻腔鼻竇。檢查鼻腔鼻竇，取出蟲體，然后在水中沖洗，沉淀后檢查沉淀物?？从袩o羊鼻蠅蛆、水蛭（水牛）、疥癬蟲、鋸齒狀舌形蟲寄生。（2）檢查腦部和脊髓。打開腦腔和脊髓管后先用肉眼檢查有無絳蚴（腦多頭蚴或豬囊尾蚴），羊鼻蠅蛆寄生。再切成薄片壓薄鏡檢，檢查有無微絲蚴寄生。（3）檢查眼部。先眼觀檢查，再將眼臉結膜及球結膜在水中刮取表層，水洗沉淀后檢查沉淀物，最后剖開眼球，將眼房水收集在平皿內，在放大鏡下檢查是否有絲蟲的幼蟲、囊尾蚴、吸吮線蟲寄生。（4）檢查口腔。檢查唇、頰、牙齒間、舌肌、咽頭，有無囊尾蚴、蠅蛆、筒線蟲、蛭類寄生。3．腹腔各臟器的檢查及寄生蟲的采集。按照一般解剖方法剖開腹腔，首先檢查臟器表面的寄生蟲和病變。再逐一對各個內臟器官進行檢查。然后收集腹水，沉淀后觀察其中有無寄生蟲寄生。（1）消化系統(tǒng)檢查及寄生蟲采集。在結扎食道末端和直腸后，先切斷食道、胃腸上相連的肝、胰臟以及腸系膜、直腸末端，取出消化系統(tǒng)。消化系統(tǒng)所屬的肝、脾、胰也一并取出。再將食道、胃（反芻動物的四個胃應分開）、小腸、大腸、盲腸分段作二重結扎后分離。胃腸內有大量的內容物，應在1%鹽水中剖開，將內容物洗入液體中，然后對粘膜循序仔細檢查，洗下的內容物則反復加1%鹽水沉淀，待液體清澈無色為止，再取沉渣進行檢查。為了檢查沉渣中細小的蟲體，可在沉渣中滴加碘液，使糞渣和蟲體均染成棕黃色，繼之以5%的硫代硫酸鈉溶液脫色，但蟲體著色后不脫色，仍然保持棕黃色，而糞渣和纖維均脫色，故棕色蟲體易于辨認。食道。先檢查食道的漿膜面，觀察食道肌肉內有無蟲體，必要時可取肌肉壓片鏡檢。再剖開或用筷子將食道反轉，仔細檢查食道粘膜面，有無寄生蟲的寄生。用小刀或裁玻片刮取粘膜表層，壓在兩塊載玻片之間檢查，當發(fā)現(xiàn)蟲體時，揭開上面的載玻片，用挑蟲針將蟲體挑出。應注意粘膜面有無筒線蟲、紋皮蠅（牛）、毛細線蟲（鴿子等鳥類）、狼旋尾線蟲（犬、貓），漿膜面有無肉孢子蟲（牛羊）寄生。胃。應先檢查胃壁外面。對于單胃動物，可沿胃大彎剪開，將內容物倒在指定的容器內，檢出較大的蟲體。然后用1%的鹽水將胃壁洗凈，取出胃壁并刮取胃壁粘膜的表層，把此刮下物放在兩塊玻片之間作壓片鏡檢。洗下物應加1%的鹽水，反復多次洗滌，沉淀，等液體清凈透明后，分批取少量沉渣，洗入大培養(yǎng)皿中，先后放在白色或黑色的背景上，仔細觀察并檢出所有蟲體。在胃內寄生的有馬的胃線蟲、胃蠅蛆、馬蛔蟲，豬的蛔蟲，豬雞的棘頭蟲，多種動物的顎口蟲和毛園線蟲等。如有腫瘤時可切開檢查。對反芻獸可以先把第一、二、三、四胃分開。檢查第一胃時注意檢出胃粘膜上的蟲體，然后注意觀察與胃壁貼近的胃內容物中的蟲體，發(fā)現(xiàn)蟲體全部檢出來，胃內容物不必沖洗。第二、三胃的檢查方法同第一胃，但對第三胃延伸到第四胃的相連處要仔細檢查，必要時可以把部分切下，采取同第四胃的檢查方法。第四胃的檢查方法同單胃動物胃的檢查方法。腸系膜。分離前先以雙手提起腸管，把腸系膜充分展開，然后對著光線從十二指腸起問后依次檢查，看靜脈中有無蟲體（血吸蟲）寄生，分離后剝開淋巴結，切成小塊，壓片鏡檢。小腸。把小腸分為十二指腸、空腸、回腸3段，分別檢查。先將每段內容物倒入指定的容器內，再將腸壁翻轉（即將腸漿膜內翻入腸腔內，使其粘膜面翻到外面）。然后用1%鹽水洗滌腸粘膜面，仔細檢出殘留在上面的蟲體，洗下物和沉淀物分別用反復沉淀法處理后，檢查沉淀物中所有的蟲體。看是否有毛圓線蟲、鉤蟲、蛔蟲、旋毛蟲、同盤吸蟲、華支睪吸蟲、棘頭蟲以及寄生于各種動物的相應的絳蟲、胃蠅蛆和球蟲寄生。大腸。大腸分為盲腸、結腸和直腸3段，分段進行檢查。在分段以前先對腸系膜淋巴結進行檢查。在腸系膜附著部的對側沿縱軸剪開腸壁，傾出內容物，以反復沉淀法檢查沉淀物內寄生蟲，對叮咬在腸粘膜上的寄生蟲可直接采取，然后把腸壁用1%鹽水洗凈，仍用反復沉淀法檢出洗下物中所有的蟲體，已洗凈的腸粘膜面再作一次仔細檢查，最后再取腸粘膜壓片檢查，以免遺漏蟲體。肝臟。首先觀察肝表面有無寄生蟲結節(jié)，如有可作壓片檢查。然后沿輸膽管剪開肝臟，檢查有無寄生蟲，其次把肝臟自膽管的橫斷面切成數(shù)塊放在水中用兩手擠壓，或將其撕成小塊，置37弋溫水中，待其蟲體自行走出（即貝爾曼法原理）。充分水洗后，取出肝組織碎塊并用反復沉淀法檢查沉淀物。對有膽囊的動物要注意檢查膽囊，可以先把膽囊從肝上剝離，把膽汁傾入大平皿內，加生理鹽水稀釋，檢出所有的蟲體最后檢查膽汁，粘膜上有無蟲體附著，也可用水沖洗，把沖洗后的水沉淀后，詳細檢查。胰腺。用剪刀沿胰管剪開，檢查其中蟲體，而后將其撕成小塊，用貝爾曼法分離蟲體，并用手擠壓組織，最后在液體沉淀中尋找蟲體。脾臟。檢查法與胰腺相同。（2）泌尿系統(tǒng)檢查及寄生蟲采集。骨盆腔臟器亦以與消化系統(tǒng)同樣的方式全部取出。先行眼觀檢查腎周圍組織有無寄生蟲。注意腎周圍脂肪和輸尿管壁有無腫瘤及包囊，如發(fā)現(xiàn)后切開檢查，取出蟲體。隨后切取腹腔大血管，采取腎臟。剖開腎臟，先對腎盂進行肉眼檢查，再刮取腎盂粘膜檢查，最后將腎實質切成薄片，壓于兩玻片間，在放大鏡或解剖鏡下檢查。剪開輸尿管、膀胱和尿道檢查其粘膜，并注意粘膜下有無包囊。收集尿液，用反復沉淀法處理。檢查有無腎蟲的寄生。（3）生殖器官的檢查及寄生蟲采集。檢查內腔，并刮取粘膜表面作壓片及涂片鏡檢。懷疑為馬媾疫或牛胎兒毛滴蟲時，應涂片染色后油浸鏡檢查。4．胸腔各器官的檢查及寄生蟲的采集。胸腔臟器的采取，按一般解剖方法切開胸壁，注意觀察臟器表面有無寄生蟲蚴及其自然位置與狀態(tài)，然后連同食管及氣管采取胸腔內的全部臟器，并收集儲留在胸腔內的液體，用水洗沉淀法進行寄生蟲檢查。（1）呼吸系統(tǒng)檢查及寄生蟲檢查（肺臟和氣管）。從喉頭沿氣管支氣管剪開，注意不要把管道內的蟲體剪壞，發(fā)現(xiàn)蟲體即應直接采取。然后用載片刮取粘液加水稀釋后鏡檢。再將肺組織在水中撕碎，按肝臟處理法檢查沉淀物。對反芻獸肺臟的檢查應特別注意小型肺線蟲，可把寄生性結節(jié)取出放在盛有微溫生理鹽水的平皿內，然后分離結節(jié)的結締組織，仔細摘出蟲體，洗凈后，即行固定。（2）心臟及大血管。先觀察心臟外面，檢查心外膜及冠狀動脈溝然后剪開心臟仔細的觀察內腔及內壁。將內容物洗于1%的鹽水中，用反復沉淀法檢查。對大血管也應剪開，特別是腸系膜動脈和靜脈要剪開檢查，注意是否有吸蟲、線蟲以及絳蟲幼蟲的存在。（對血管內的分體吸蟲的收集見后），如有蟲體，小心取出。馬匹應檢查腸系膜動脈根部有無寄生性腫瘤。對血液應作涂片檢查。5．其他部位的檢查及寄生蟲的采集。（1）膈肌及其他部位肌肉的檢查。從膈肌腳及其他部位的肌肉切取小塊，仔細眼觀檢查，然后作壓片鏡檢。取咬肌、腰肌及臀肌檢查囊尾蚴，取膈肌檢查旋毛蟲及住肉孢子蟲。（2）腱與韌帶的檢查。有可疑病變時檢查相應部位的腱與韌帶。注意觀察蟠尾絲蟲等。（三）禽類的完全剖檢技術及寄生蟲的采集先分別采集體表的寄生蟲，然后殺死，檢查皮膚表面的所有的贅生物和結節(jié)，腹部向上置于解剖盤內，拔去頸、胸和腹部羽毛，剝開皮膚后，注意檢查皮下組織。用外科刀切斷連接兩個肩胛骨和肱骨背面的肌肉，然后用一手固定頭的后部，以另一手提取切斷的胸骨部，逐漸向脊部翻折，最后完全掀下帶肌肉的胸骨，用解剖刀柄把整個腹部的皮膚和肌肉分離開，向兩側拉開皮膚，露出所有的器官。檢查時除應特別注意各臟器的采取外，還可以把消化道分為食管、嗦囊、肌胃、腺胃、小腸、盲腸、直腸等部位，每段進行兩端結扎，分別進行寄生蟲的檢查。嗦囊的檢查，剪開囊壁后，倒出內容物作一般眼觀檢查。然后把囊壁拉緊透光檢查。肌胃的檢查，切開胃壁，倒出內容物，作一般檢查后，剝離角質膜再作眼觀檢查。仔細檢查氣囊和法氏囊。其他各臟器的檢查方法和上述方法基本相同。各臟器的內容物如限于時間不能當日檢查完畢，可在反復沉淀之后，將沉淀物中加入4%福爾馬林保存，以待隨后檢查。在應用反復沉淀法時，應注意防止微小蟲體隨水倒掉。采取蟲體時應避免將其損壞，拾出的蟲體應隨時放入預先盛有生理鹽水和記有編號和臟器名標簽的平皿內。禽類胃腸道的蟲體應在尸體冷卻前檢出。（四）食肉動物的完全剖檢技術及寄生蟲的采集食肉動物如犬、狼、狐等的寄生蟲，有些種（如球坳絳蟲）是人獸共患寄生蟲，在剖檢動物時，必須嚴防操作者被感染和污染環(huán)境。所以，剖檢時要求按照如下操作方法來做。1．剖檢前準備。（1）防護用品的準備。緊袖口工作服，長統(tǒng)膠靴，乳膠手套，口罩，白帽。(2)器材、藥品的準備。直徑30?40cm瓷盆3?4個，長方大型瓷盤3?4個，500?1000ml瓷量杯2個，20cm左右長柄鑷子2把，15cm長鈍頭剪刀2把，無齒組織鑷子3把，直徑55mm的平皿4副，直徑10cm左右的平皿10付，有刻度(0.5?2ml)帶膠皮頭的玻璃滴管10支，300ml玻璃燒杯5個，載玻片2盒,20x20蓋玻片1盒，12x6cm的普通玻璃塊10?120塊，鐵水桶1個，肥皂粉2包，毛巾2條，生理鹽水500ml,20%福爾馬林2000ml,10%福爾馬林1000ml,5%福爾馬林500ml,70%酉精500ml,1%鹽水20L,汽油噴燈丨臺，生石灰若干公斤。(3)地坑的準備。在較偏辟處事前挖一個地坑，深2?3m，為掩埋剖檢處理后的尸體、內臟，以及所有污物之用。有焚尸爐設備的，應將上列各物投入焚尸爐內燒掉。2．剖檢操作順序。剖檢前先觀察體表有無寄生蟲，如有寄生蟲如蚤、虱、蜱、螨等，直接采集保存于70%酉精中，然后將動物固定于解剖臺上(腹部向上)，切開腹壁，先檢查體腔內有無寄生蟲，再查看內臟有無寄生蟲病變，然后分別采取胸、腹腔內器官，分別置于盆內。先將瓷盆編號，并于其內壁劃出盛1000?1500ml記號，用于放置不同腸段內容物，以便計算總蟲數(shù)用。在1000ml瓷燒杯中，盛20%福爾馬林400ml，把剖檢時需用的鑷子、剪刀、無齒組織鑷子、長膠皮頭滴管等插入其中，隨用隨拿。用后即時又插入杯中，禁止在實驗臺面或地面上隨便亂放，以防污染。剖檢及蟲體標本的采取。操作者應穿戴個人防護衣帽、膠靴，手套、口罩，兩人為一組，先在每個瓷盆內加入1%鹽水1000ml。操作動作要輕快、穩(wěn)準，防止盛臟器內容物的鹽水濺出。一人手持鑷子，另一人手握腸管、剪刀，兩人合作。剖檢消化道時，先剪離腸系膜，注意不要損破腸壁，使腸管能拉直，把腸管分段，再把小腸放在另一盆內，其余腸段留在原盆內。徐徐剪開小腸壁，邊剪邊仔細觀察有無寄生蟲，有蟲時則把腸內容物及腸粘膜一起刮入盆中，刮時要慢要穩(wěn)，防止內容物濺出。如內容物中小型蟲體很多，可把盆內容物攪勻后，即用帶刻度的長膠皮頭滴管吸取10?15ml，置直徑55mm玻璃平皿中（每皿內盛5ml），在低倍鏡下依次全面查蟲，分類計數(shù)，然后計算出盆內各類蟲體的總數(shù)。對大型絳蟲標本采取時，應將吸附有頭節(jié)的腸壁部分剪下，連同整個蟲體浸入清水中數(shù)小時，則絳蟲頭節(jié)即自然與腸壁脫離，如果強行拉下蟲體，則吸附于腸壁的頭節(jié)易與鏈體斷離，損壞標本。完整的絳蟲標本取得后，再移置于清水中漂洗除去粘附的污物，再浸入清水中8?12小時，使蟲體松弛，然后將蟲體放置于較大的長方形瓷盤中，傾入5%福爾馬林液固定。對小型蟲體如棘球屬絳蟲，放在1%鹽水中洗，再移入緩沖液中洗，把洗凈的蟲體用滴管吸上置載玻片上，以2?3條為一組，蓋玻片稍加壓力，使蟲體變扁薄，但又不破裂，從旁滴加10%福爾馬林固定4小時以上，然后連載玻片，蟲體和蓋玻片一同置入盛10%福爾馬林的燒杯中，浸泡1?2天，再將蟲體移入5%福爾馬林液中保存。對中型線蟲，檢出后放在生理鹽水中漂洗，和其他腸段的線蟲一樣，洗凈后用5%甘油酒精固定保存。其他各種內臟的處理和標本的采集方法，同前。在整個剖檢過程中，特別是對棘球絳蟲患犬的剖檢，應時刻注意凡是用過的任何用具、腸管、內容物，洗液等，絕不能到處亂放，必須煮沸半小時后，待自然冷卻到30弋左右，蟲卵已被殺滅，再把腸及內容物倒入地坑內。對所有用具要用肥皂、清水洗凈。操作者雖然穿戴著防護服裝，但應盡量做到不污染。所用手套可浸泡在10%福爾馬林液中1?2天，工作服煮沸消毒，地面可撒生石灰或用噴燈噴燒。四、實驗注意事項1．各種寄生蟲都有它自己的固定寄生部位，在進行畜禽全身解剖、檢查并采集寄生蟲時，解剖某器官組織時，應注意到該器官、組織部位可能有什么寄生蟲的寄生而進行仔細的觀察與檢查。有些季節(jié)性寄生蟲，還應注意剖檢的季節(jié)。有些寄生蟲受年齡免疫的影響，則應考慮到年齡問題，避免某些寄生蟲被遺漏。2．檢查過程中，若臟器內容物不能立即檢查完畢、可在反復水洗沉淀后，在沉淀物內加4%的福爾馬林保存．以后再詳細進行檢查。3．注意觀察寄生蟲所寄生器官的病變，對蟲體進行計數(shù)，為寄生蟲病的準確診斷提供依據。病理組織或含蟲組織標本用10%的福爾馬林溶液固定保存。對有疑問的病理組織應做切片檢查。4．采集的寄生蟲標本分別置于不同的容器內。按有關各類寄生蟲標本處理方法和要求進行處理保存（具體方法參見寄生蟲標本的固定與保存部分），以備鑒定。由不同臟器、部位取得的蟲體，應按種類分別計數(shù)，分別保存，均采用雙標簽，即投入容器中的內標簽和在容器外再貼上外標簽，最后把容器密封。內標簽可用普通鉛筆書寫，標簽上應記明畜別、編號、蟲體類別、數(shù)目以及檢查日期等。在采集標本時，尚應有登記本或登記表，將標本采集時的有關情況，按標本編號，記于登記表（表12-1）或登記本上。對蟲體所引起的宿主的主要病理變化也應做詳細的記載。然后統(tǒng)計寄生蟲的種類，感染率和感染強度，以便匯總。5．對所有蟲體標本必須逐一觀察，鑒定到種或屬，遇有疑問時應將蟲體取出單放，注明來自何種動物臟器及有關資料，然后寄交有關單位協(xié)助鑒定。并在原登記表中注明寄出標本的種類、數(shù)量、寄出的日期等。對于特殊和有價值的標本應進行繪圖，測定各部尺寸，并進行顯微鏡照像。已鑒定的蟲體標本可按寄生部位和寄生蟲種類分別保存，井更換新的標鑒。表12-1畜禽寄生蟲剖檢記錄表（自趙輝元．畜禽寄生蟲與防治學）編號檢查日期年月日地區(qū)畜禽別品種性別年齡營養(yǎng)產地病例及其他寄生部位蟲名數(shù)目（條）瓶號瓶數(shù)主要病變備注采集寄生蟲情況附記剖檢單位剖檢者姓名五、實驗報告1．總結家畜蠕蟲學完全剖檢術的方法與步驟。2．總結家禽蠕蟲學完全剖檢術的方法與步驟。3．總結蠕蟲標本的采集、制作與觀察方法。附：參考資料（一）吸蟲和絳蟲的整體染色裝片制作方法1．吸蟲類。（1）吸蟲的采集。在各臟器或其沖洗物沉淀中，如發(fā)現(xiàn)吸蟲時應以彎頭解剖針或毛筆將蟲體挑出（注意不要采用鑷子夾取，否則鑷子夾住的部位，會使蟲體損壞變形，影響以后的觀察）。挑出的蟲體，體表常附有糞渣、粘膜等污物，應先用生理鹽水洗凈，較小的蟲體，可和鹽水一起放入小試管中，加塞塞緊，充分振蕩將污物除去洗凈。較大的蟲體可用毛筆刷洗。有些蟲體的腸管內含有大量的食物，可在生理鹽水中放置過夜，等其食物消化或排出。然后投入常水中，使其伸展并逐漸死亡。（2）吸蟲的固定。從水中將吸蟲取出，放在濾紙上吸干，較大較厚的蟲體，為了以后制作壓片標本的方便，可用兩片載玻片將蟲體壓薄，為了不使蟲體壓得過薄可在玻片兩端墊以適當厚度的紙片，玻片兩端用棉線或膠皮圈綁扎緊，在玻片間夾的小紙片上寫明動物編號等資料。對于較小的蟲體，可先在薄荷腦溶液（配制方法：取薄荷腦（Menthol）24g溶于95%酒精10ml中，即為薄荷腦飽和酒精溶液，使用時將此液一滴，加入100ml水中即可）中使蟲體松弛。然后將蟲體投入固定液中固定。固定吸蟲時常用的固定液有如下各種：勞氏（Looss）固定液。適用于小型吸蟲。取飽和升汞溶液（約含升汞7%）100ml，加冰醋酸2ml，混合即成。固定蟲體時，將蟲體放于一小試管中，加入鹽水，達試管的1/2處，充分搖洗，再加入勞氏固定液搖勻,12h后，將蟲體取出移入加有0.5%碘的70%的酒精中，并更換溶液數(shù)次，直到碘酒精溶液不再褪色為止，再將蟲體移到70%酒精溶液中保存，若欲長期保存應在酒精中加5%甘油。酒精一福爾馬林一醋酸固定液（A.F.A固定液）。本液以95%酒精50份，福爾馬林（含甲醛40%）10份，醋酸2份，水40份混合而成。大型的已夾于玻片間的蟲體，可浸入此固定液中過夜。小的蟲體可先放于充滿2/3生理鹽水的小瓶內，用力搖振，待蟲體疲倦而伸展時，將鹽水傾去1/2，再加入本固定液（投入時應慢慢由一端先投入，便于將空氣趕出），視蟲體大小至少固定24小時以上。次日將蟲體取出，保存于加有5%甘油的70%酒精中。福爾馬林固定液。一般用10%甲醛（即取福爾馬林1份與水9份混合即得）或4%甲醛作固定液。將小型吸蟲蟲體或夾于玻片間的蟲體投入固定液中，經24h即固定完畢。較大的夾于兩玻片間的吸蟲，固定液較難滲入，可在固定數(shù)小時后，將兩玻片分開，這時蟲體將貼附于一玻片上，將附有蟲體的玻片繼續(xù)投入固定液中過夜。最后將蟲體置3%?5%的福爾馬林溶液中保存或用于制片。酒精固定液。用70%酒精固定0.5?3h，視蟲體大小而定，再移至新的70%酒精中保存。經以上幾種方法中任何一種固定的標本，在保存時均應給以標簽。標簽應用較硬的紙片（如道林紙）用鉛筆書寫，內容應包括標本編號、采集地點、宿主及其產地、寄生部位、蟲名、保存液種類和采集時間，將以上內容一式兩份書寫，一份與蟲體一同放于瓶內，一份貼于瓶外。（3）吸蟲的染色和制片。吸蟲標本的形態(tài)觀察常需制成染色裝片標本或切片標本。切片標本的制作與組織切片相同。如需要做成染色整體裝片標本，則把投入上述酒精福爾馬林溶液內固定的夾于兩玻片之間的蟲體取出，經水洗后進行染色、調色、脫水、透明、封固、干燥，制成永久性玻片標本。整體裝片標本的制片方法有以下數(shù)種。①蘇木素法。常用的為德氏（Delafield）蘇木素染液，其配法如下：先將蘇木素4g溶于95%酒精25ml中，再向其中加入400ml的飽和銨明磯（AmmoniumAlum）溶液（約含銨明磯11%）。將此混合液曝曬于日光及空氣中3?7天（或更長時間），待其充分氧化成熟，再加入甘油100ml和甲醇100ml保存，并待其顏色充分變暗，濾紙過濾，裝于密閉的瓶中備用。染色時步驟如下：a將保存于福爾馬林溶液中的蟲體，取出以流水沖洗。如蟲體原保存于70%酒精中，則先后將蟲體移經50%和30%酒精中各1h，再移入蒸餾水中。b將德氏蘇木素染液加蒸餾水10?15倍，使呈濃葡萄酒色。將以上蟲體移入此稀釋的染液內，染色過夜。c取出染色后的蟲體，在蒸餾水中除去多余的染液，再依次通過30%,50%,70%酒精各0.5?1h。d蟲體移入酸酒精中褪色（酸酒精是在80%酒精100ml中加入鹽酸2ml）,待蟲體變成淡紅色。e再將蟲體移回80%酒精中，再循序通過90%、95%和100%酒精中各0.5?1h。f將蟲體由100%的酒精中移入二甲苯或水楊酸甲酯（亦稱冬綠油或冬青油）中，透明0.5?lh。g將透明的蟲體放于載玻片上，滴一滴加拿大樹膠，加蓋玻片封固，待干，即成。②卡紅染色法。以卡紅為原料，常用的染色液有鹽酸卡紅和硼砂卡紅等。鹽酸卡紅的配制是以蒸餾水15ml加鹽酸2ml，煮沸，趁熱加入卡紅染粉4g，再加入85%的酒精95ml，再滴加濃氨水以中和，等出現(xiàn)沉淀，放涼，過濾，濾液即為鹽酸卡紅染液。硼砂卡紅是以4%硼砂（Na2B4O7）溶液100ml，加入卡紅染粉1g，加熱使其溶解，再加入70%酒精100ml，過濾，濾液即為硼砂卡紅染液。染色方法是：a原保存于70%酒精內的標本，可直接取出投入染色液中染色。保存于福爾馬林液內的蟲體標本，應先取出水洗1?2h,爾后循序通過30%,50%,70%的酒精各0.5?lh，再投入染液中，在染液中過夜使蟲體染成深紅色。b自染液中取出蟲體，放入酸酒精中褪色，（酸酒精是以70%酒精100ml加濃鹽酸2ml），使顏色深淺分明，即蟲體外層呈淡紅色，內部構造呈深紅色。c蟲體移入80%,95%和純酒精中各0.5?1h。d移入二甲苯或水楊酸甲酯中透明。e已透明的蟲體，移置載玻片上，加一滴加拿大樹膠，加蓋玻片封固。2．絳蟲類。（1） 絳蟲的采集。大部分絳蟲寄生于腸管中，并以頭節(jié)牢固的附著于腸壁上。采標本時為了保證蟲體的完整，切勿用力猛拉，而應將附著有蟲體的腸段剪下，連同蟲體浸入清水中。5?6小時后，蟲體會自行脫落，體節(jié)也自行伸直。（2） 絳蟲的固定。將收集到的完整的絳蟲（有頭節(jié)）蟲體用生理鹽水洗凈后，浸入勞氏固定液或70%酒精或5%福爾馬林液中固定。如欲做瓶裝陳列標本，以福爾馬林溶液固定為好。在固定之前，必須將蟲體放在1%鹽水中充分洗凈，為了使蟲體松弛，也可將其放入含1%氨基甲酸乙酯的生理鹽水中一定時候，有利于蟲體充分伸展，便于以后觀察。絳蟲有時很長（可達數(shù)米），易于斷裂而又易于相互纏結，故固定時應注意，可將蟲體排列在玻璃板上，用線扎起來，或者將蟲體纏繞在玻璃瓶上。亦可在大燒杯中，先放入以固定液浸潤的濾紙一張，提取蟲體后端，使蟲體由頭節(jié)始逐步放落在濾紙上，加蓋一層濕濾紙；再以同樣操作，放上第2條蟲體；如是操作，全部放好所有蟲體，最后將固定液輕輕注滿燒杯內，固定24h后取出。不太長的蟲體，可提住蟲體后端，將蟲體懸空伸長，爾后將蟲體下放，逐步地浸入固定液內。保存于瓶內的標本應登記并加標簽，其注意事項同吸蟲。如要制作染色標本，用勞氏固定液或70%酒精固定為好。挑選絳蟲的頭節(jié)（連同后方的若干頸節(jié)）、蟲體前1/3的成熟節(jié)片及蟲體后部的孕卵節(jié)片，剪成若干段，每段的長短約2?4cm。將此片段放在吸水紙上吸干水分，再如前述吸蟲一樣壓薄、固定，以至封固成永久保存標本。絳蟲頭節(jié)是決定絳蟲種類的重要依據，應選為裝片標本的材料。因其太小，不須用大的壓力壓薄，可將它放在載玻片上，加蓋普通小玻片之后，由一端滴入固定液，另一端以吸水紙吸出固定液，如此反復使固定液通過數(shù)次，即可達到固定的目的，不必綁扎。約1小時之后即可放在水中將頭節(jié)從玻片上取下，然后進行染色。（3）染色程序與制片。絳蟲頭節(jié)和節(jié)片標本固定1?2天后，經過水洗即可染色，不論什么染液都要著染半小時至數(shù)天，再進行調色數(shù)秒至數(shù)分鐘，然后轉入脫水階段，用70%酒精脫水2次，每次15分鐘，80%酒精30分鐘，95%酒精1小時，純酒精3次，每次15分鐘；經過修整后，入二甲苯中透明，用加拿大樹膠封固。如用福爾馬林固定的標本，必須在染色前充分水洗，才能著色均勻，染好的標本必須經水洗后才進行調色（脫色劑）。染色、調色中都應隨時翻動標本，使其著色均勻，透明時不宜時間過長，觀察到已透明即可，立即用樹膠封固；封固時切忌留有氣泡在內，修整后選用適當蟲體或蟲段制出來的標本，應達到上下左右排列對稱，標本蟲體宜放置載玻片的右1/3與中1/3交界處，而且應該將蟲體的前端向下，便于在玻片左端貼標簽后，鏡檢時為正像，顯得美觀大方，而且便于觀察繪圖。（二）線蟲的透明觀察法1．線蟲的采集。在剖檢家畜時，按上節(jié)尋找蟲體的方法，發(fā)現(xiàn)蟲體后，以彎頭解剖針或分離針（將縫衣針綁扎在竹簽上即可代用），或毛筆將蟲體挑出，大型的線蟲如蛔蟲（含棘頭蟲），收集后在生理鹽水中仔細洗凈，除去蟲體上的糞便和粘液后，投入固定液；寄生于肺部的線蟲、絲蟲目的線蟲和馬、牛、羊胃腸道內的各種線蟲，用分離針小心地挑出，用生理鹽水反復振蕩洗凈后即應盡快地放于固定液中固定，否則蟲體易于破裂。線蟲雌雄異體，雌蟲一般較雄蟲大，在蟲體鑒定時，常需依雄蟲的某些形態(tài)特征作為依據，因此，采集蟲體時不可忽視較小蟲體的采集。一些有較大口囊的線蟲（如圓線蟲、夏伯特線蟲、鉤口線蟲等）和有發(fā)達交合傘的線蟲，其口囊或交合傘中，常包含有大量雜質，妨礙以后的觀察，應在固定前用毛筆洗去，或充分振蕩以洗去，爾后固定。2．線蟲的固定?？刹捎镁凭蚋栺R林固定。（1）用甘油酒精固定。把蟲體投入煮沸的甘油酒精（5%甘油5.0ml、80%酒精95.0ml）中，使蟲體伸直，然后即保存在甘油酒精內?；蛳劝?0%酒精加熱到70弋左右（在火焰上加熱時，酒精中有小氣泡升起時即約為70弋），將洗凈的蟲體移入，蟲體在熱固定液中伸直而固定，待酒精冷后，將蟲體移入甘油酒精中，加標簽保存。標簽的書寫內容與吸蟲同。（2）4%福爾馬林固定液固定。先將福爾馬林固定液加熱到70弋，再投入蟲體，蟲體即保存于福爾馬林固定液內?；虬严x體投入30弋左右的生理鹽水中30分鐘左右，蟲體伸展后再保存于福爾馬林固定液內，也可以移入含5%甘油的80%酒精中加標簽保存。大型線蟲（如馬副蛔蟲）采取后，應用生理鹽水洗凈，以4%福爾馬林或巴氏液固定保存。為了獲得最好的固定，更宜保存在10ml福爾馬林、10ml冰醋酸加80ml蒸餾水中。小型線蟲采取后，用生理鹽水洗凈，并計算蟲體數(shù)目，為以后透明蟲體方便計算，可用熱的5%甘油酒精固定后保存。3．線蟲的透明與制片。線蟲經固定后，是不透明的，欲進行線蟲形態(tài)的觀察必先進行透明或裝片。為了能從不同的側面對蟲體形態(tài)進行觀察，以不做固定裝片為好，這樣可以在載玻片上將蟲