臨床科研設(shè)計(jì)報(bào)告基因檢測

雙熒光素酶報(bào)告基因?qū)嶒?yàn)pAP1-TA-Luc(碧云天公司-D2109)pP53-TA-Luc(碧云天公司-D2223)pARE-Luc(碧云天公司-D2112)pGRE-Luc(碧云天公司-D2152)ISRE-Luc(碧云天公司-D2152)-----STAT1/2pSIE-Luc(秦樾實(shí)驗(yàn)室)------------STAT3pNF-kB-Luc（上海健康所）pTNFα-promoter(500)-Luc（自己實(shí)驗(yàn)室構(gòu)建）ERE-LucpSTAT4-Luc(吉滿公司GM-021081)pSTAT5-Luc(吉滿公司GM-021054)pSTAT6-Luc(吉滿公司GM-021084)pSRE-Luc(吉滿公司GM-021086)IRF1-Luc(吉滿公司GM-021019)HIF-1-Luc(吉滿公司GM-021020)pARE-Luc(吉滿公司GM-021048)pE2F-Luc(吉滿公司GM-021046)pAP1-TA-luc質(zhì)粒的主要信息如下：

Basepairs

5653

AP1responseelement

26-67

MinimalTApromoter(pTA)

90-112

luc2reportergene

154-1806

SV40latepoly(A)signal

1841-2062

SV40earlyenhancer/promoter

2110-2528

Syntheticneomycinphosphotransferase

(Neor)codingregion

2553-3347

Syntheticpoly(A)signal

3372-3420

ReporterVectorprimer4(RVprimer4)bindingregion

3487-3506

ColE1-derivedplasmidreplicationorigin

3744

SyntheticBeta-lactamase(Ampr)codingregion

4535-5395

Syntheticpoly(A)signal/transcriptionalpausesite

5500-5653

ReporterVectorprimer3(RVprimer3)bindingregion

5602-5621pAP1-TA-luc是以碧云天的pGL6-TA質(zhì)粒為模板，在其多克隆位點(diǎn)插入了多個(gè)AP1結(jié)合位點(diǎn)，可以高靈敏度地檢測AP1的激活水平。AP-1(activatingprotein-1)是一類核轉(zhuǎn)錄因子參與轉(zhuǎn)化、分化、凋亡等多種生物學(xué)功能。AP-1報(bào)告基因主要應(yīng)用于細(xì)胞中MAPK/JNK信號(hào)通路、藥物研究、基因過表達(dá)和RNAi的表型分析等。pAP1-TA-Luc(碧云天公司-D2109)pP53-TA-Luc(碧云天公司-D2223)pp53-TA-luc質(zhì)粒的主要信息如下：

Basepairs

5659

p53responseelement

20-73

MinimalTApromoter(pTA)

96-118

luc2reportergene

160-1812

SV40latepoly(A)signal

1847-2068

SV40earlyenhancer/promoter

2116-2534

Syntheticneomycinphosphotransferase

(Neor)codingregion

2559-3353

Syntheticpoly(A)signal

3378-3426

ReporterVectorprimer4(RVprimer4)bindingregion

3493-3512

ColE1-derivedplasmidreplicationorigin

3750

SyntheticBeta-lactamase(Ampr)codingregion

4541-5401

Syntheticpoly(A)signal/transcriptionalpausesite

5506-5659

ReporterVectorprimer3(RVprimer3)bindingregion

5608-5627pp53-TA-luc是以碧云天的pGL6-TA質(zhì)粒為模板，在其多克隆位點(diǎn)插入了多個(gè)p53結(jié)合位點(diǎn)，可以高靈敏度地檢測p53的激活水平。p53是一個(gè)重要的抗癌基因使癌細(xì)胞自殺，防止癌變；還具有幫助細(xì)胞基因修復(fù)缺陷的功能。

p53報(bào)告基因主要應(yīng)用于細(xì)胞中p53/DNADamage信號(hào)通路、p53為靶點(diǎn)的新型抗腫瘤化合物的篩選以及基因過表達(dá)和RNAi的表型分析等。

檢測基于順式作用元件antioxidant

response

element(ARE，抗氧化響應(yīng)元件)的轉(zhuǎn)錄活性水平的報(bào)告基因質(zhì)粒。pARE-luc是以碧云天的pGL6質(zhì)粒為模板，在其多克隆位點(diǎn)插入了2個(gè)ARE結(jié)合位點(diǎn)，可以高靈敏度地檢測順式作用元件ARE的激活水平，可以用于檢測細(xì)胞的抗氧化水平或氧化應(yīng)激狀態(tài)。

pARE-luc質(zhì)粒的主要信息如下：

Basepairs

5622

AREresponseelement(ARERE)

32-77

luc2reportergene

123-1775

SV40latepoly(A)signal

1810-2031

SV40earlyenhancer/promoter

2079-2497

Syntheticneomycinphosphotransferase

(Neor)codingregion

2522-3316

Syntheticpoly(A)signal

3341-3389

ReporterVectorprimer4(RVprimer4)bindingregion

3456-3475

ColE1-derivedplasmidreplicationorigin

3713

SyntheticBeta-lactamase(Ampr)codingregion

4504-5364

Syntheticpoly(A)signal/transcriptionalpausesite

5469-5622

ReporterVectorprimer3(RVprimer3)bindingregion

5571-5590pARE-Luc(碧云天公司-D2112)pARE-luc的多克隆位點(diǎn)及AREresponseelement

BglI

KpnI

NheI

XhoI

AREresponseelement

1

GGCCTAACTGGCCGGTACCGCTAGCCTCGAGACTGAGGGTGACTCAGCAA

CCGGATTGACCGGCCATGGCGATCGGAGCTCTGACTCCCACTGAGTCGTT

BglII

HindIII

51

AATCACTGAGGGTGACTCAGCAAAATCAGATCTGCAGAAGCTTGGCAATC

TTAGTGACTCCCACTGAGTCGTTTTAGTCTAGACGTCTTCGAACCGTTAG用于檢測糖皮質(zhì)激素響應(yīng)元件(glucocorticoidresponseelement,GRE)

轉(zhuǎn)錄激活水平的報(bào)告基因質(zhì)粒。pGRE-luc是以碧云天的pGL6質(zhì)粒為模板，在其多克隆位點(diǎn)插入了多個(gè)GRE位點(diǎn)，可以高靈敏度地檢測GRE的激活水平，檢測糖皮質(zhì)激素介導(dǎo)的信號(hào)途徑(glucocorticoid-mediatedsignalingpathway)的激活水平。

pGRE-luc的多克隆位點(diǎn)及GREresponseelement的詳細(xì)圖譜如下

BglI

KpnI

NheI

GRE

1GGCCTAACTGGCCGGTACCGCTAGCGGTACATTTTGTTCTAGAACAAAAT

CCGGATTGACCGGCCATGGCGATCGCCATGTAAAACAAGATCTTGTTTTA

BglII

HindIII

51

GTACCGGTACATTTTGTTCT

AGATCTGCAGAAGCTTGGCAATCCGGTACT

CATGGCCATGTAAAACAAGA

TCTAGACGTCTTCGAACCGTTAGGCCATGApGRE-Luc(碧云天公司-D2152)檢測ISRE轉(zhuǎn)錄活性水平的報(bào)告基因質(zhì)粒。

pISRE-TA-luc是以碧云天的pGL6-TA質(zhì)粒為模板，在其多克隆位點(diǎn)插入了多個(gè)ISRE結(jié)合位點(diǎn)，可以高靈敏度地檢測ISRE的激活水平。

pISRE-TA-luc的多克隆位點(diǎn)及ISREresponseelement的詳細(xì)圖譜如下：

BglI

KpnI

NheI

ISREresponseelement

1

GGCCTAACTGGCCGGTACCGCTAGCGAAACTGAAACTGAAACTGAAACTG

CCGGATTGACCGGCCATGGCGATCGCTTTGACTTTGACTTTGACTTTGAC

BglII

HindIII

51

AAACTGAAACTGAAACTGAAACTGAAACTGAAACTAGATCTGCAGAAGCT

TTTGACTTTGACTTTGACTTTGACTTTGACTTTGATCTAGACGTCTTCGA

MinimalTApromoter

101TAGACACTAGAGGGTATA

ATCTGTGATCTCCCATATISRE報(bào)告基因是吉滿生物自主研發(fā)的用于檢測STAT1/STAT2轉(zhuǎn)錄活性水平為目的的報(bào)告基因。STATs是一類重要的核轉(zhuǎn)錄因子，共包括STAT1~STAT4，STAT5a，STAT5b及STAT67個(gè)成員，它們與細(xì)胞增殖、分化和凋亡密切相關(guān)，其中STAT1和STAT2參與了細(xì)胞的凋亡控制。ISRE報(bào)告基因主要檢測細(xì)胞TypeIInterferon信號(hào)通路中STAT1/STAT2的轉(zhuǎn)錄活性ISRE-Luc(碧云天公司-D2152)激活STAT3后形成STAT3二聚體和STAT1/STAT3異質(zhì)二聚體，它們與SIS-inducibleelement（SIE）反應(yīng)元件進(jìn)行相互作用調(diào)控細(xì)胞的生長和凋亡。STAT3(signaltransducersandactivatorsoftransduction-3)報(bào)告基因與多種惡性腫瘤的發(fā)生、發(fā)展和侵襲轉(zhuǎn)移關(guān)系密切。pSTAT3-TA-luc的多克隆位點(diǎn)及STAT3responseelement的詳細(xì)圖譜如下：

BglI

KpnI

NheI

XhoI

STAT3responseelement

1

GGCCTAACTGGCCGGTACCGCTAGCCTCGAGTGCTTCCCGAACGTTGCTT

CCGGATTGACCGGCCATGGCGATCGGAGCTCACGAAGGGCTTGCAACGAA

BglII

HindIII

51

CCCGAACGTTGCTTCCCGAACGTTGCTTCCGAACGTAGATCTGCAGAAGC

GGGCTTGCAACGAAGGGCTTGCAACGAAGGCTTGCATCTAGACGTCTTCG

MinimalTApromoter

101TTAGACACTAGAGGGTATA

AATCTGTGATCTCCCATATpSIE-Luc(秦樾實(shí)驗(yàn)室)pNFkB-Luc（上海健康所）

BglI

KpnI

NheI

NFkBresponseelememt

1GGCCTAACTGGCCGGTACCGCTAGCGGGAATTTCCGGGAATTTCCGGGAA

CCGGATTGACCGGCCATGGCGATCGCCCTTAAAGGCCCTTAAAGGCCCTT

BglII

HindIII

MinimalTApromoter

51

TTTCCGGGAATTTCCAGATCTGCAGAAGCTTAGACACTAGAGGGTATATA

AAAGGCCCTTAAAGGTCTAGACGTCTTCGAATCTGTGATCTCCCATATATNF-κB基因在炎癥反應(yīng)、免疫應(yīng)答和抑制細(xì)胞凋亡等方面有著重要的作用。pSTAT4-Luc(吉滿公司GM-021081)REPOTMSTAT4報(bào)告基因是吉滿生物自主研發(fā)的用于檢測STAT4轉(zhuǎn)錄活性水平為目的的報(bào)告基因。STAT4主要是被IL-12激活，它在Th1/Th2的分化調(diào)控及因此失調(diào)引發(fā)的各種炎癥性疾病中發(fā)揮著重要的作用。REPOTMSTAT4報(bào)告基因主要應(yīng)用于Inflammation信號(hào)通路、藥物研究、相關(guān)基因的調(diào)控和功能的研究。pSTAT5-Luc(吉滿公司GM-021054)REPOTMSTAT5報(bào)告基因是吉滿生物自主研發(fā)的用于檢測STAT5轉(zhuǎn)錄活性水平為目的的報(bào)告基因。Stat5是信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)和轉(zhuǎn)錄活化蛋白(signaltransductionandactivatoroftranscription,Stat)家族的重要成員，參與了Jak/Stat信號(hào)通路調(diào)控。Stat5能夠影響細(xì)胞的增殖、分化、存活與凋亡,并且在乳腺發(fā)育、免疫應(yīng)答、干細(xì)胞自我更新調(diào)控、造血作用以及腫瘤的發(fā)生發(fā)展等中具有重要作用。REPOTMSTAT5報(bào)告基因主要用于檢測Jak/Stat信號(hào)通路、藥物研究、pSTAT6-Luc(吉滿公司GM-021084)REPOTMSTAT6報(bào)告基因是吉滿生物自主研發(fā)的用于檢測STAT6轉(zhuǎn)錄活性水平為目的的報(bào)告基因。信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)及轉(zhuǎn)錄激活蛋白6(Signaltransducerandactivatoroftranscription6，STAT6)是具有重要意義的一類轉(zhuǎn)錄因子，它對(duì)白細(xì)胞介素4（Interleukin4,IL-4）和白細(xì)胞介素13（Interleukin13,IL-13）有應(yīng)答反應(yīng)，并且與傳導(dǎo)通路的異?；钴S與過敏性疾病的發(fā)生密切相關(guān)。REPOTMSTAT6報(bào)告基因主要檢測細(xì)胞STAT6信號(hào)通路中STAT6的轉(zhuǎn)錄活性、藥物研究以及基因過表達(dá)和RNAi的表型分析等。REPOTMSRE報(bào)告基因是吉滿生物自主研發(fā)的用于檢測SBE轉(zhuǎn)錄活性水平為目的的報(bào)告基因。Smads家族蛋白在TGF-β信號(hào)從細(xì)胞表面受體傳導(dǎo)至細(xì)胞核的過程中起關(guān)鍵作用，且不同的Smads介導(dǎo)不同的TGF-β家族成員的信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)。TGF-β作為配體形成的受體復(fù)合物，激活Smads進(jìn)入核內(nèi)，共同激活或抑制它們調(diào)節(jié)的靶基因的轉(zhuǎn)錄。。REPOTMSRE報(bào)告基因主要檢測細(xì)胞TGF-β信號(hào)通路中Smads的轉(zhuǎn)錄活性、藥物研究以及基因過表達(dá)和RNAi的表型分析等。pGMSRE-Lu是吉滿生物改造后的哺乳動(dòng)物真核表達(dá)載體，在其多克隆位點(diǎn)插入了多個(gè)SRE結(jié)合位點(diǎn)，可以高靈敏度地檢測SRE的激活水平pSRE-Luc(吉滿公司GM-021086)REPOTMIRF1報(bào)告基因是吉滿生物自主研發(fā)的用于檢測IRF1轉(zhuǎn)錄活性水平為目的的報(bào)告基因。IRF1(InterferonRegulatoryFactor1)是IRF家族中最早被發(fā)現(xiàn)的核轉(zhuǎn)錄因子，具有廣泛的生物學(xué)功能，它調(diào)節(jié)干擾素系統(tǒng)，抑制細(xì)胞生長，抑制腫瘤形成。REPOTMIRF1報(bào)告基因主要用于檢測細(xì)胞中的InterferonRegulation信號(hào)通路、藥物研究以及基因過表達(dá)和RNAi的表型分析等。pGMIRF1-Lu是吉滿生物改造后的哺乳動(dòng)物真核表達(dá)載體，在其多克隆位點(diǎn)插入