IVF實驗室的基本操作

IVF實驗室的根本操作整理ppt實驗室操作原那么

防止污染配子標本的標記；受精、胚胎移植；

兩人核對毒性測試；培養(yǎng)液、耗材的使用；實驗室的質量控制和管理無誤無菌無毒整理ppt輔助生殖技術根本操作配子、胚胎培養(yǎng)系統(tǒng)1配子的收集和處理2體外受精技術3胚胎培養(yǎng)和移植4胚胎冷凍和解凍5整理ppt培養(yǎng)液的準備培養(yǎng)液的根本組分無機鹽離子---維持pH和滲透壓碳水化合物---能量來源蛋白質來源抗生素礦物油有利于維持培養(yǎng)液溫度、pH值和滲透壓穩(wěn)定防護屏障，減少污染吸收脂溶性毒素防止液體蒸發(fā)整理ppt培養(yǎng)液的準備取卵前一日下午進行原那么：高效、方便、平安、經(jīng)濟四孔培養(yǎng)皿—卵處理精液所需培養(yǎng)液微滴培養(yǎng)—受精卵、胚胎胚胎移植液37℃，5%或6%CO2培箱內(nèi)平衡過夜整理ppt卵母細胞的獲取注射hCG后36-38小時取卵陰道超聲探頭引導下經(jīng)陰道穿刺抽吸卵泡核對姓名解剖顯微鏡下識別卵冠丘復合物OCCC37℃,5－6%CO2培養(yǎng)操作迅速，避光整理ppt精液處理正常精液：同IUI極度少精：增加離心力死精癥：低滲腫脹實驗附睪穿刺精子：睪丸穿刺或活檢精子：

1ml注射器針頭挑碎組織，離心懸液附睪、睪丸精子的冷凍整理ppt常規(guī)受精

取卵后4-8h

適應癥：精液正常，輕度少、弱精癥受精率：65－80％〔MII卵〕受精時間：長受精、短受精整理ppt整理ppt卵母細胞漿內(nèi)單精子顯微注射適應癥：嚴重少弱精、梗阻性無精、畸精癥、既往IVF常規(guī)受精失敗史、某些不明原因不孕等時間：取卵后2小時剝卵：利用透明質酸酶〔80mIU/ml)和機械法剝除顆粒細胞整理ppt卵母細胞漿內(nèi)單精子顯微注射卵母細胞成熟度的評價GVMIMII整理ppt卵母細胞漿內(nèi)單精子顯微注射操作滴的準備：7％PVP加精裝針顯微注射受精率：70％整理ppt受精方式的選擇ICSI的平安性？逃避了自然選擇過程垂直傳遞遺傳缺陷操作過程對配子的損傷嚴格掌握ICSI適應癥整理ppt非男性因素不孕ICSI治療結局非男性因素不孕癥，ICSI未顯現(xiàn)出優(yōu)勢整理ppt檢查受精時間：受精后15－18小時機械法除去顆粒細胞及放射冠正常受精：兩個原核，兩個極體整理ppt整理ppt整理ppt合子形態(tài)評價原核的大小、位置及方向核仁前體的數(shù)目、大小、分布胞漿的外觀早期卵裂情況整理ppt異常受精－1PN發(fā)生率1－5％卵裂率74%染色體二倍體率5％囊胚形成率29%(Noyes2021)機制：雌雄原核發(fā)育不同步雌雄原核融合孤雌來源ICSI多見整理ppt異常受精－多PN發(fā)生率：IVF5-8%ICSI1%發(fā)生機制：

2精子進入第2極體滯留雙倍體卵母細胞整理ppt未見原核－未受精可能機制卵母細胞未成熟卵母細胞染色體異常卵裂率<10%染色體二倍體率3%優(yōu)胚率低(12/38)囊胚形成(0/12)(Noyes2021)

整理ppt受精失敗受精率<20%受精率低下所有成熟卵均未受精受精失敗常規(guī)受精周期失敗率10％精子功能障礙卵母細胞成熟障礙補打ICSI?ICSI周期失敗率2－3％嚴重精子畸形卵母細胞激活鈣離子載體？機械激活？

整理ppt胚胎培養(yǎng)整理ppt胚胎質量評價胚胎評價標準細胞數(shù)碎片:無碎片碎片<10%

碎片10－30％碎片30－50％碎片>50%

卵裂球均勻程度

整理ppt囊胚的評分體系4AA囊胚腔的大小內(nèi)細胞團細胞分級滋養(yǎng)層分級三位評分法1:不到整個胚胎的一半2:超過了胚胎體積的一半3:完全占據(jù)整個胚胎4:擴張囊胚5:孵化囊胚6:孵化后囊胚A包裹緊密，大量細胞B結構松散，少量細胞C極少量細胞A許多細胞緊密結合B少量細胞，結構松散C極少量細胞整理ppt

2AA5AA4BA4CC整理ppt胚胎移植操作選擇需要移植的胚胎,移入移植滴內(nèi)

35歲以下，首次移植的病人移植2枚胚胎

35歲以上，或非首次移植的病人移植3枚胚胎確認核對患者姓名D3orD5移植？整理ppt移植液移植液移植液和胚胎氣～20μl 氣胚胎移植操作整理ppt胚胎冷凍意義：提高累計妊娠率，防止多胎，減少卵巢過度刺激風險溫度的急劇變化形成冰晶機械性損傷溶質性損傷滲透壓損傷核心：防止冰晶形成冷凍方法：慢凍速融法玻璃化冷凍法冷凍保護劑滲透性保護劑：EGPRON甘油非滲透性保護劑：蔗糖大分子物質整理ppt胚胎的冷凍:慢速冷凍室溫15min室溫5min室溫15minPBS1.5M丙二醇1.5M丙二醇0.1M蔗糖整理ppt慢凍速融法冷凍程序

20℃→－7℃3℃/min-7℃人工植冰

-7℃→－30℃0.3℃/min-30℃→－120℃30℃/min整理ppt胚胎復蘇12340.5M丙二醇0.2M蔗糖

5min0.2M蔗糖

5minPBS5min1.0M丙二醇0.2M蔗糖5min預防冰晶的再形成復蘇程序：室溫40s→30℃水浴1min整理ppt胚胎凍融損傷復蘇胚胎評價：>50%卵裂球完整存活復蘇率>90%無損傷胚胎著床率高局部損傷胚胎著床能力下降整理ppt玻璃化冷凍原理條件：高濃度冷凍保護劑極快的降溫速度載體：開放式密閉式適應癥：卵母細胞囊