第五章 環(huán)境污染物的一般毒性及其評(píng)價(jià)方法課件

第五章環(huán)境污染物的一般毒性及其評(píng)價(jià)

生態(tài)毒理學(xué)

(Ecotoxicology)第五章環(huán)境污染物的一般毒性及其評(píng)價(jià)方法一般毒性和特殊毒性一般毒性特殊毒性急性毒性亞慢性毒性和慢性毒性蓄積毒性局部毒性致癌性致突變作用生殖和發(fā)育毒性第五章環(huán)境污染物的一般毒性及其評(píng)價(jià)方法5.1毒性評(píng)價(jià)的實(shí)驗(yàn)基礎(chǔ)

流行病學(xué)資料和臨床觀察，可以獲得環(huán)境污染物對(duì)人類健康的危害。毒理學(xué)實(shí)驗(yàn)為闡明毒性特點(diǎn)、毒作用機(jī)制、劑量-反應(yīng)關(guān)系，預(yù)測(cè)對(duì)人類健康的潛在危害一般規(guī)律，為制訂衛(wèi)生標(biāo)準(zhǔn)提供科學(xué)依據(jù)。一般毒性實(shí)驗(yàn)急性毒性實(shí)驗(yàn)亞慢性和慢性毒性實(shí)驗(yàn)

蓄積實(shí)驗(yàn)

第五章環(huán)境污染物的一般毒性及其評(píng)價(jià)方法毒理學(xué)試驗(yàn)?zāi)康?.闡明受試物毒性表現(xiàn)和性質(zhì)2.闡明毒性作用的劑量-反應(yīng)(效應(yīng))3.確定毒作用的靶器官4.闡明毒性機(jī)制5.確定損害的可逆性

5.1毒性評(píng)價(jià)的實(shí)驗(yàn)基礎(chǔ)第五章環(huán)境污染物的一般毒性及其評(píng)價(jià)方法一.實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的選擇1.實(shí)驗(yàn)動(dòng)物(laboratoryanimal)

經(jīng)人工培育，對(duì)其攜帶微生物實(shí)行控制，遺傳背景明確，來(lái)源清楚，可用于科學(xué)研究的動(dòng)物。Wistar

大鼠豚鼠5.1毒性評(píng)價(jià)的實(shí)驗(yàn)基礎(chǔ)第五章環(huán)境污染物的一般毒性及其評(píng)價(jià)方法2.選擇實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的基本原則1.毒性反應(yīng)及代謝特點(diǎn)與人類相近2.自然壽命適宜3.易于飼養(yǎng)和實(shí)驗(yàn)操作4.經(jīng)濟(jì)并易于獲得5.對(duì)受試物敏感一.實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的選擇第五章環(huán)境污染物的一般毒性及其評(píng)價(jià)方法3.毒理學(xué)實(shí)驗(yàn)常用動(dòng)物主要品系(strain）(1)

近交系動(dòng)物

采用連續(xù)20代以上兄妹間交配或親子交配而培育的純品系動(dòng)物。津白、津白165，BALB/C，C3HC57B/6J小鼠等。BALB/cA津白一.實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的選擇第五章環(huán)境污染物的一般毒性及其評(píng)價(jià)方法(2)

突變系動(dòng)物

動(dòng)物在生長(zhǎng)繁殖過(guò)程中，通過(guò)自然突變或人工定向突變的辦法，使其某個(gè)基因發(fā)生突變，并喪失了原有的正常功能。這種突變的基因可以世代相傳并保持遺傳基因特性的品系動(dòng)物。無(wú)胸腺裸鼠一.實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的選擇第五章環(huán)境污染物的一般毒性及其評(píng)價(jià)方法

兩個(gè)不同近交系之間有目的進(jìn)行交配，所產(chǎn)生的雜交第一代動(dòng)物。(3)

雜交群動(dòng)物

5年以上不從外部引進(jìn)新血緣，僅由同一品系的動(dòng)物在固定場(chǎng)所保存繁殖的動(dòng)物群。

昆明種小鼠、NIH小鼠、LACA小鼠、Wistar大鼠、SD大鼠、青紫藍(lán)兔、新西蘭兔等。(4)

封閉群動(dòng)物一.實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的選擇第五章環(huán)境污染物的一般毒性及其評(píng)價(jià)方法4.微生物控制級(jí)別(1)

無(wú)菌動(dòng)物

體內(nèi)外均無(wú)任何微生物和寄生蟲的動(dòng)物。(2)無(wú)特定病原體動(dòng)物（SPF）

體內(nèi)無(wú)特定的微生物和寄生蟲存在的動(dòng)物。容許攜帶非特定微生物，但不能攜帶傳染性病原菌。(3)清潔動(dòng)物

最低限度疾病動(dòng)物。動(dòng)物體內(nèi)外不攜帶人畜共患的病原體或動(dòng)物傳染病病原體?？贵w檢查常發(fā)現(xiàn)腦脊髓質(zhì)炎病毒、鼠肝炎病毒等抗體。但不應(yīng)有臨床癥狀、病理改變及自然死亡。飼養(yǎng)在半屏蔽系統(tǒng)。一.實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的選擇第五章環(huán)境污染物的一般毒性及其評(píng)價(jià)方法1.年齡2.性別3.生理狀態(tài)4.健康狀況

5.個(gè)體選擇要求一.實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的選擇第五章環(huán)境污染物的一般毒性及其評(píng)價(jià)方法可根據(jù)人類實(shí)際接觸方式和受試物的理化性質(zhì)等因素，選擇合適的染毒方式。1.經(jīng)口染毒灌胃，喂飼，膠囊2.經(jīng)呼吸道染毒靜式吸入染毒，動(dòng)式吸入染毒3.經(jīng)皮染毒4.皮下、靜脈注射和腹腔內(nèi)注射

5.其他

二.常用染毒方式第五章環(huán)境污染物的一般毒性及其評(píng)價(jià)方法三.毒理學(xué)試驗(yàn)中的常用對(duì)照組1.未處理對(duì)照組(空白對(duì)照組)

本底值，質(zhì)量控制2.陰性(溶劑／賦形劑)對(duì)照

與染毒組比較的基礎(chǔ)

3.陽(yáng)性對(duì)照

檢測(cè)試驗(yàn)體系的有效性和準(zhǔn)確性4.歷史性對(duì)照檢查試驗(yàn)體系的穩(wěn)定性，即進(jìn)行實(shí)驗(yàn)室質(zhì)量控制和保證

第五章環(huán)境污染物的一般毒性及其評(píng)價(jià)方法四.受試樣品要求

用同一種、同一批號(hào)受試物受試物成分和配方必須固定如存在異構(gòu)體混合物，則要求異構(gòu)體比例必須固定

活性成分的含量和雜質(zhì)的濃度應(yīng)固定受試物保質(zhì)期內(nèi)不發(fā)生分解，摻入到飼料惑溶液中也要求穩(wěn)定第五章環(huán)境污染物的一般毒性及其評(píng)價(jià)方法五.實(shí)驗(yàn)結(jié)果的判斷1.實(shí)驗(yàn)組與對(duì)照組比較有無(wú)顯著性差異2.劑量-反應(yīng)關(guān)系和劑量-效應(yīng)關(guān)系3.其他相關(guān)參數(shù)的改變4.是否在“正?！敝捣秶?/p>

第五章環(huán)境污染物的一般毒性及其評(píng)價(jià)方法一.急性毒性

急性毒性(acutetoxicity)指機(jī)體一次接觸或在24小時(shí)內(nèi)多次接觸化學(xué)物后，短期內(nèi)引起的毒效應(yīng)。死亡行為生理生化指標(biāo)的異常變化

病理學(xué)改變5.1急性毒性及其評(píng)價(jià)第五章環(huán)境污染物的一般毒性及其評(píng)價(jià)方法急性毒性實(shí)驗(yàn)?zāi)康?/p>

1.致死劑量、急性閾劑量、初步估計(jì)對(duì)人類毒害的危險(xiǎn)性。

2.闡明急性毒性強(qiáng)度、特征、可能的靶器官、致死原因和劑量－反應(yīng)(效應(yīng))關(guān)系。

3.體內(nèi)生物轉(zhuǎn)運(yùn)和轉(zhuǎn)化，及其動(dòng)力學(xué)變化。

4.為設(shè)定蓄積性、亞慢性、慢性毒性實(shí)驗(yàn)的染毒劑量、觀察指標(biāo)提供參考依據(jù)。一.急性毒性第五章環(huán)境污染物的一般毒性及其評(píng)價(jià)方法急性毒性參數(shù)1.絕對(duì)致死劑量或濃度(LDl00/LC100)

2.最小致死劑量或濃度(MLD/MLC)

3.最大耐受劑量或濃度(MTD、LD0/MTC、LC0)

4.半數(shù)致死劑量或濃度(LD50/LC50)

5.急性毒性LOAEL6.急性毒性NOAEL7.急性毒作用帶(Zac)

一.急性毒性第五章環(huán)境污染物的一般毒性及其評(píng)價(jià)方法二.急性毒性實(shí)驗(yàn)的動(dòng)物選擇

健康成年動(dòng)物未曾交配或受孕

大鼠(180240g)小鼠(18

25g)

家兔(22.5kg)貓(1.52.0kg)氣態(tài)毒物的粘膜刺激—貓皮膚的局部刺激作用—豚鼠，家兔過(guò)敏反應(yīng)—豚鼠、家兔、狗、小鼠、貓嘔吐反應(yīng)—狗、貓哺乳動(dòng)物第五章環(huán)境污染物的一般毒性及其評(píng)價(jià)方法三.急性毒性實(shí)驗(yàn)染毒方式1.經(jīng)口(胃腸道)接觸

(1)一次灌胃體積小鼠0.10.5ml/10g體重大鼠0.51.0ml/100g體重

(2)吞咽膠囊家兔及貓、狗等大動(dòng)物

實(shí)驗(yàn)動(dòng)物染毒前應(yīng)禁食，染毒后也應(yīng)繼續(xù)禁食34小時(shí)。第五章環(huán)境污染物的一般毒性及其評(píng)價(jià)方法2.經(jīng)呼吸道接觸

常溫、常壓下為氣態(tài)，或以蒸氣態(tài)、氣溶膠、煙、塵狀態(tài)污染生產(chǎn)環(huán)境與生活環(huán)境空氣。①靜式染毒②動(dòng)式染毒3.經(jīng)皮膚接觸

應(yīng)當(dāng)盡量選擇皮膚解剖、生理與人類較近似的動(dòng)物為對(duì)象。家兔和豚鼠為首選，也可用大鼠代替。

三.急性毒性實(shí)驗(yàn)染毒方式第五章環(huán)境污染物的一般毒性及其評(píng)價(jià)方法四.半數(shù)致死量測(cè)定程序1實(shí)驗(yàn)動(dòng)物

性成熟、健康，雌雄各半2化學(xué)結(jié)構(gòu)、理化性質(zhì)和毒性參考資料

3預(yù)試驗(yàn)

求出全活、全死劑量

4正式實(shí)驗(yàn)在求出全活、全死劑量之間設(shè)5~6個(gè)實(shí)驗(yàn)組組距1.2~1.5倍小鼠、大鼠10只/組、家兔46只/組如化合物毒性有性別差異，則應(yīng)分別計(jì)算雌、雄性動(dòng)物各自的LD50(LC50)。第五章環(huán)境污染物的一般毒性及其評(píng)價(jià)方法觀察持續(xù)時(shí)間和飼養(yǎng)條件

觀察期一般為14天內(nèi)的總死亡數(shù)。速死性毒物求其LD50(LC50)，應(yīng)計(jì)算24小時(shí)的死亡率。

LD50值的表示應(yīng)注明染毒途徑和觀察時(shí)間，以便于在進(jìn)行毒性比較時(shí)有可比性。在觀察期間，應(yīng)保障實(shí)驗(yàn)動(dòng)物有完全的膳食、充足的飲水及適宜的溫濕度環(huán)境，以防止動(dòng)物出現(xiàn)非中毒性死亡。四.半數(shù)致死量測(cè)定程序第五章環(huán)境污染物的一般毒性及其評(píng)價(jià)方法中毒癥狀觀察

應(yīng)詳細(xì)地觀察記錄動(dòng)物的中毒癥狀、發(fā)生和發(fā)展過(guò)程及規(guī)律，死亡前癥狀特點(diǎn)、死亡時(shí)間等。很多毒物初期往往初期先出現(xiàn)興奮或抑制現(xiàn)象。應(yīng)注意體重變化。粘膜刺激癥狀，如出汗、流涎，甚至有血性分泌物，瞳孔改變等。四.半數(shù)致死量測(cè)定程序第五章環(huán)境污染物的一般毒性及其評(píng)價(jià)方法病理學(xué)檢查和其它指標(biāo)觀察

在觀察期間中毒死亡動(dòng)物應(yīng)及時(shí)解剖，檢查器官有無(wú)充血、出血、水腫或其它改變，并對(duì)有變化的臟器作病理組織學(xué)檢查。對(duì)存活動(dòng)物在觀察期結(jié)束時(shí)，應(yīng)做全部動(dòng)物解剖，逐一進(jìn)行病理學(xué)檢查。四.半數(shù)致死量測(cè)定程序第五章環(huán)境污染物的一般毒性及其評(píng)價(jià)方法計(jì)算LD50和LD5095%可信限1.霍恩式法2.簡(jiǎn)化寇式法3.直接回歸法四.半數(shù)致死量測(cè)定程序第五章環(huán)境污染物的一般毒性及其評(píng)價(jià)方法五.急性毒性分級(jí)單位：mg/kgWHO化學(xué)品毒性分級(jí)劇毒<1高毒 1~中等毒50~低毒 500~實(shí)際無(wú)毒5000~極毒<1劇毒 1~50中等毒51~500低毒 501~5000實(shí)際無(wú)毒5001~15000無(wú)毒 >15000

中國(guó)衛(wèi)生部根據(jù)大鼠一次經(jīng)口LD50的急性毒性分級(jí)第五章環(huán)境污染物的一般毒性及其評(píng)價(jià)方法急性毒性閾劑量(濃度)

一次染毒引起某種毒性反應(yīng)的最小劑量，屬于非致死性指標(biāo)。未知毒性污染物：可選擇綜合性、非特異性指標(biāo)。如體重，活動(dòng)能力，應(yīng)激狀態(tài)、條件反射等。已知毒性比較了解的可選擇最敏感的指標(biāo)刺激性氣體或蒸汽：可選擇眼睛和嗅覺(jué)刺激閾濃度。觀察指標(biāo)的選擇第五章環(huán)境污染物的一般毒性及其評(píng)價(jià)方法急性毒性試驗(yàn)的局限性1.消耗的動(dòng)物量大2.獲得的信息有限3.測(cè)得的LD50僅僅是一個(gè)近似值4.在安全性評(píng)價(jià)中僅評(píng)價(jià)動(dòng)物死亡和簡(jiǎn)單的癥狀觀察是不夠的，更需要的是生理學(xué)、血液學(xué)及其它化驗(yàn)檢查所提供的深入細(xì)致的毒性信息。第五章環(huán)境污染物的一般毒性及其評(píng)價(jià)方法急性毒性閾劑量實(shí)驗(yàn)方法游泳實(shí)驗(yàn)

反映體力和活動(dòng)能力刺激閾實(shí)驗(yàn)

反映對(duì)上呼吸道、眼睛和口腔等粘膜的刺激作用貓置于染毒柜內(nèi)，加入受試物，觀察癥狀30min癥狀：流淚、流締、噴嚏、嗆咳、流涎等50%實(shí)驗(yàn)動(dòng)物出現(xiàn)癥狀的最小濃度—刺激閾濃度水槽水溫20℃

動(dòng)物放入水中，記錄從放入到沉沒(méi)5秒所需要的時(shí)間記錄游泳速度和游泳姿勢(shì)

第五章環(huán)境污染物的一般毒性及其評(píng)價(jià)方法一.慢性毒性和亞慢性毒性

在日常生活環(huán)境中，人類接觸環(huán)境污染物的濃度遠(yuǎn)低于急性致死濃度，但接觸的時(shí)間則較長(zhǎng)。為了評(píng)價(jià)在較長(zhǎng)的一段時(shí)間內(nèi)反復(fù)接觸低濃度環(huán)境污染物的毒性作用，獲得接近于人類實(shí)際接觸條件下的毒性資料，需進(jìn)行亞慢性或慢性毒性試驗(yàn)。5.2

環(huán)境污染物的亞慢性、慢性毒性及其評(píng)價(jià)第五章環(huán)境污染物的一般毒性及其評(píng)價(jià)方法亞慢性毒性(subchronictoxicity)

在一段時(shí)間內(nèi)（1~3個(gè)月）連續(xù)攝入、較大劑量環(huán)境污染物引起的毒性效應(yīng)。慢性毒性(chronictoxicity)

長(zhǎng)期連續(xù)、低劑量攝入環(huán)境污染物（6個(gè)月~終生）引起的毒性效應(yīng)。5.2

環(huán)境污染物的亞慢性、慢性毒性及其評(píng)價(jià)第五章環(huán)境污染物的一般毒性及其評(píng)價(jià)方法二.亞慢性毒性及評(píng)價(jià)方法1.在急性毒性試驗(yàn)的基礎(chǔ)上，在較短時(shí)間內(nèi)了解受試物對(duì)機(jī)體長(zhǎng)期作用時(shí)的主要毒性性質(zhì)和特點(diǎn)、靶器官和最大耐受劑量2.探討敏感指標(biāo)及其劑量-反應(yīng)（效應(yīng)）關(guān)系3.為慢性毒性試驗(yàn)設(shè)計(jì)提供依據(jù)。亞慢性毒性評(píng)價(jià)目的第五章環(huán)境污染物的一般毒性及其評(píng)價(jià)方法實(shí)驗(yàn)動(dòng)物和分組

大鼠或小鼠健康，幼齡每組10~20只雌雄各半染毒途徑染毒劑量和實(shí)驗(yàn)期限1.1/20~1/5LD50范圍內(nèi)設(shè)三個(gè)劑量組，設(shè)對(duì)照組2.無(wú)蓄積作用，排泄快的毒物還可適當(dāng)加大劑量3.低劑量組動(dòng)物不會(huì)產(chǎn)生可觀察到的毒性反應(yīng)4.高劑量組動(dòng)物出現(xiàn)明顯的中毒反應(yīng)，但不引起動(dòng)物死亡（或10%）5.1~3個(gè)月與人類實(shí)際接觸的方式和途徑相同亞慢性毒性試驗(yàn)二.亞慢性毒性及評(píng)價(jià)方法第五章環(huán)境污染物的一般毒性及其評(píng)價(jià)方法亞慢性毒性實(shí)驗(yàn)觀察指標(biāo)1一般性指標(biāo)

體重、食物利用率、活動(dòng)能力等指標(biāo)2特異指標(biāo)

特異性反應(yīng),能更確切地闡明受試物引起的有害影響的閾劑量及最大無(wú)作用劑量。應(yīng)盡量選用特異指標(biāo)。3血液學(xué)及生化學(xué)指標(biāo)

血常規(guī)，骨髓細(xì)胞成分、血清和尿液生化學(xué)檢查

4有害物質(zhì)在體內(nèi)的分布、代謝及排泄指標(biāo)

5病理組織學(xué)檢查

死亡的動(dòng)物應(yīng)作病理檢查。實(shí)驗(yàn)結(jié)束時(shí)，全部動(dòng)物進(jìn)行剖檢，測(cè)定臟器系數(shù)，應(yīng)特別注意靶器官的變化。

肝、腎等組織應(yīng)列為常規(guī)檢查項(xiàng)目。二.亞慢性毒性及評(píng)價(jià)方法第五章環(huán)境污染物的一般毒性及其評(píng)價(jià)方法試驗(yàn)結(jié)果評(píng)價(jià)1

確定毒性作用

闡明亞慢性毒性的性質(zhì)、特點(diǎn)、毒效應(yīng)類型、作用強(qiáng)度和靶器官。2確定毒性作用的敏感指標(biāo)3

中毒閾劑量和最大無(wú)作用劑量二.亞慢性毒性及評(píng)價(jià)方法第五章環(huán)境污染物的一般毒性及其評(píng)價(jià)方法慢性毒性實(shí)驗(yàn)的目的

本實(shí)驗(yàn)?zāi)康氖窃u(píng)價(jià)環(huán)境污染物在長(zhǎng)期、小劑量、反復(fù)作用條件下，對(duì)機(jī)體產(chǎn)生的損害及其特點(diǎn)，確定其慢性毒性閾劑量和最大無(wú)作用劑量，為制訂環(huán)境中有害物質(zhì)的最高容許濃度(MAC)和人類每日容許攝入量(ADI)提供科學(xué)依據(jù)。三.慢性毒性及評(píng)價(jià)方法第五章環(huán)境污染物的一般毒性及其評(píng)價(jià)方法慢性毒性試驗(yàn)設(shè)計(jì)初斷乳的大鼠或小鼠。每組20~40只，雌雄各半。設(shè)3~4個(gè)實(shí)驗(yàn)組和一個(gè)對(duì)照組。實(shí)驗(yàn)動(dòng)物和分組染毒劑量和實(shí)驗(yàn)期限對(duì)照組溶劑對(duì)照低劑量組1/100

亞慢性毒性閾劑量不出現(xiàn)中毒反應(yīng)無(wú)作用劑量組NOAEL中劑量組1/10

可出現(xiàn)輕微的毒效應(yīng)LOAEL高劑量組1/5

出現(xiàn)明顯的毒效應(yīng)甚至亞致死狀態(tài)實(shí)驗(yàn)期間6~終生實(shí)驗(yàn)結(jié)束后可停止染毒觀察恢復(fù)狀況染毒方式和觀察指標(biāo)

選擇原則同亞慢性試驗(yàn)，盡量選擇在亞慢性試驗(yàn)中觀察到的特異和敏感指標(biāo)。三.慢性毒性及評(píng)價(jià)方法第五章環(huán)境污染物的一般毒性及其評(píng)價(jià)方法慢性毒性實(shí)驗(yàn)注意事項(xiàng)

1

控制實(shí)驗(yàn)條件

排除干擾因素對(duì)實(shí)驗(yàn)結(jié)果的影響

2

試驗(yàn)前應(yīng)對(duì)觀察指標(biāo)，尤其是血、尿常規(guī)及重點(diǎn)測(cè)定的生化指標(biāo)進(jìn)行正常值測(cè)定，篩除個(gè)體差異過(guò)大的動(dòng)物

3

染毒期間進(jìn)行動(dòng)態(tài)觀察的各項(xiàng)指標(biāo)，應(yīng)與對(duì)照組同步測(cè)定

4各化驗(yàn)測(cè)定方法應(yīng)精確、可靠、需要進(jìn)行質(zhì)量控制。

5

應(yīng)重視病理組織學(xué)的檢查。凡試驗(yàn)期間死亡的動(dòng)物，都應(yīng)做病理組織學(xué)檢查。三.慢性毒性及評(píng)價(jià)方法第五章環(huán)境污染物的一般毒性及其評(píng)價(jià)方法慢性毒性實(shí)驗(yàn)結(jié)果評(píng)價(jià)

1觀察指標(biāo)與對(duì)照組比較，是否超出正常值范圍，是否具有顯著性差異和劑量-效應(yīng)(反應(yīng))關(guān)系

2根據(jù)實(shí)驗(yàn)期間和恢復(fù)期的觀察和檢測(cè)結(jié)果，進(jìn)行全面的綜合分析。結(jié)合受試物的理化性質(zhì)和結(jié)構(gòu)特性，應(yīng)用生物學(xué)和醫(yī)學(xué)理論，闡明慢性毒性的性質(zhì)、特點(diǎn)、毒作用類型、靶器官和中毒機(jī)理。

3確定敏感指標(biāo)的慢性毒性閾劑量(LOAEL)和最大無(wú)作用劑量(NOAEL)。三.慢性毒性及評(píng)價(jià)方法第五章環(huán)境污染物的一般毒性及其評(píng)價(jià)方法5.3

蓄積毒性

連續(xù)多次攝入的環(huán)境毒物總量（或速度），大于代謝和排泄速度時(shí)，毒物或其代謝產(chǎn)物在體內(nèi)逐漸增加并貯留現(xiàn)象叫做毒物的蓄積作用(Accumulation)。蓄積作用功能蓄積FunctionalAccumulation物質(zhì)蓄積MaterialAccumulation第五章環(huán)境污染物的一般毒性及其評(píng)價(jià)方法蓄積毒性評(píng)價(jià)方法蓄積系數(shù)法K=LD50(n)LD50(1)<1高度蓄積1~明顯蓄積3~中等蓄積5~輕度蓄積≥5蓄積性固定劑量法1.先測(cè)定一次經(jīng)口LD502.每日固定劑量(1/20~1/5LD50）選定一個(gè)劑量，固定時(shí)間和相同途經(jīng)連續(xù)染毒，至一半實(shí)驗(yàn)動(dòng)物死亡。3.如果累積劑量達(dá)到5個(gè)LD50，即使未引起一半動(dòng)物死亡，也可以終止試驗(yàn)。第五章環(huán)境污染物的一般毒性及其評(píng)價(jià)方法劑量遞增法染毒天數(shù)累積劑量（LD50）0.400.600.901.362.003.004.484天內(nèi)染毒總量（LD50）

0.10.150.220.340.500.751.12每日染毒劑量（LD50/kg/day）1~45~89~1213~1617~2021~2425~280.401.001.903.265.268.2612.74固定劑量的20天蓄積實(shí)驗(yàn)陰性對(duì)照實(shí)驗(yàn)組：1/20LD50,1/10LD50,1/5LD50,1/2LD50結(jié)果判定：

1.各實(shí)驗(yàn)組均無(wú)死亡，無(wú)蓄積性2.1/20LD50組，有死亡，其他組無(wú)死亡，弱蓄積性3.除1/20LD50組之外，其他組均有死亡，中等蓄積性4.各組均有死亡，且呈劑量反應(yīng)關(guān)系，強(qiáng)蓄積性連續(xù)染毒20天第五章環(huán)境污染物的一般毒性及其評(píng)價(jià)方法5.4局部毒性測(cè)定實(shí)驗(yàn)急性皮膚刺激/腐蝕試驗(yàn)

豚鼠或家兔皮膚染毒4~24h

洗去殘留毒物，觀察染毒后24、48、72小時(shí)涂抹部位的皮膚反應(yīng)急性眼睛刺激/腐蝕試驗(yàn)

家兔0.1ml受試物滴入眼結(jié)膜囊內(nèi)，記錄染毒后1、12、24、48、72、96h的局部反應(yīng)。檢查結(jié)膜充血和損傷、角膜透明度、虹膜紋理和角膜損傷第五章環(huán)境污染物的一般毒性及其評(píng)價(jià)方法毒理學(xué)研究方法的優(yōu)缺點(diǎn)比較

流行病學(xué)研究受控的臨床