尿沉渣分析儀課件

UF-100尿沉渣分析儀的原理與干化學(xué)

法結(jié)果的分析及注意事項(xiàng)

二、UF-100原理：應(yīng)用熒光染色劑將尿沉渣中不同物質(zhì)的細(xì)胞核或細(xì)胞膜進(jìn)行分別染色后，利用最先進(jìn)的流式細(xì)胞儀原理和技術(shù)，根據(jù)熒光、激光散射強(qiáng)度、散射波幅度及細(xì)胞大小的不同和細(xì)胞通過時產(chǎn)生的電阻抗分別落在不同的區(qū)域，來識別和計數(shù)尿內(nèi)細(xì)胞定量數(shù)據(jù)，并打印出RBC和WBC的直方圖。染色性9-氮雜菲（Phenanthridine）染色DNA和RNA發(fā)射熒光為:橙色對死細(xì)胞胞膜穿透性強(qiáng)羰花青（Carbocyanine）細(xì)胞膜、核膜以及線粒體等膜性物質(zhì)被染色發(fā)射熒光為：綠色尿沉渣全自動分析(UF-100尿沉渣分析儀介紹)一、特點(diǎn)：

簡化操作流程，提高分析效率，降低勞動強(qiáng)度。結(jié)果準(zhǔn)確，重復(fù)性好，提供定量數(shù)據(jù)，進(jìn)行有效篩選，可檢測各種有形成份信息，有效協(xié)助血尿來源的鑒別診斷。

UF-100為臨床檢驗(yàn)的常規(guī)分析,為體檢和疾病的篩選提供了較為全面﹑快速﹑準(zhǔn)確而靈活方便的分析手段,檢測重復(fù)性好,結(jié)果可靠,減少人為的誤差,報告以每微升含有多少個細(xì)胞,通過觀察尿中細(xì)胞數(shù)量可以幫助了解相關(guān)疾病(如腎炎﹑膀胱炎﹑腎結(jié)石﹑腎結(jié)核)等的診斷和鑒別診斷,通過觀察這種病人尿中紅細(xì)胞數(shù)量的變化,可了解病人的療效觀察。

由于紅細(xì)胞在尿液中直徑大約8um,沒有細(xì)胞核及線粒體,所以熒光強(qiáng)度很弱,紅細(xì)胞在尿液標(biāo)本中大小不均,部分溶解成小紅細(xì)胞碎片,或者在腎臟疾病時排除的紅細(xì)胞也大小不等,因此紅細(xì)胞前向散射光強(qiáng)度差異較大。一般來看,熒光幾乎極低和散射光大小不等都可為紅細(xì)胞。該儀器除給出尿紅細(xì)胞數(shù)量(每微升的細(xì)胞數(shù)和每高倍視野的平均細(xì)胞數(shù))參數(shù)外,還可報告尿中細(xì)胞其他參數(shù)。如均一性紅細(xì)胞(IsomorphicRBC)的百分比,非均一性紅細(xì)胞(Dysmorphic)的百分比,非溶血性紅細(xì)胞的數(shù)(Non–IysedRBC#)和百分比(Non–IysedRBC%)。如尿內(nèi)紅細(xì)胞多時,化驗(yàn)單上提示:新版本RBC—InfoMicyocytic

小紅細(xì)胞

Normocytic

正常紅細(xì)胞

Non—Classified不典型紅細(xì)胞1紅細(xì)胞及其相關(guān)參數(shù)的臨床意義①紅細(xì)胞數(shù)量變化的臨床意義:顯微鏡計數(shù)法,正常成人尿中紅細(xì)胞約為<100萬/24小時;UF-100儀器法參考值為男性0~12/ul,女性0~24/ul;離心后為0~偶見/HPF,如每高倍視野均可見1~2個為增多,≥3個/HPF為鏡下血尿。通過動態(tài)觀察病人尿紅細(xì)胞數(shù)量變化,可了解病人治療的效果。

②利用紅細(xì)胞形態(tài)來鑒別血尿來源：1979年Birch和Fairley首先用相差顯微鏡觀察紅細(xì)胞形態(tài)變化，把血尿分為腎小球源性血尿(簡稱腎性)和非腎小球源性(簡稱非腎性)血尿兩大類,這種分類方法以后得到了許多學(xué)者的贊同。這種分類方法主要是根據(jù)紅細(xì)胞形態(tài)的變化,將均一性的紅細(xì)胞(紅細(xì)胞形態(tài)基本與正常紅細(xì)胞相似)歸為非腎性血尿,非均一性的紅細(xì)胞(紅細(xì)胞形態(tài)大小不等)歸為腎性血尿。但在顯微鏡檢查法是通過人眼觀察單個紅細(xì)胞的形態(tài),需要熟練的技術(shù)并受主觀因素的影響。Shichiri和叢玉隆等報道用尿液分析儀測量尿紅細(xì)胞體積來鑒別血尿來源,認(rèn)為較顯微鏡法準(zhǔn)確,但此法容易將與紅細(xì)胞體積相等或較小的成份(如細(xì)菌和結(jié)晶)誤認(rèn)為紅細(xì)胞。特別是霉菌,因?yàn)槟蛞悍胖脮r間較長時,細(xì)菌生長快,霉菌個體與小紅細(xì)胞相似,所以在UF-100尿沉渣儀器中誤認(rèn)是紅細(xì)胞,計數(shù)就多,這方面的文章最近有報導(dǎo)。

干化學(xué)法檢測尿中紅細(xì)胞:主要是紅細(xì)胞或紅細(xì)胞破碎后HB,HB中的亞鐵血紅素有類似過氧化物酶活性,催化分解過氧化物釋放新生態(tài)氧使鄰甲苯胺氧化顯色,此法可測定完整紅細(xì)胞,破碎紅細(xì)胞中的游離血紅蛋白及肌紅蛋白三部分。其顏色深淺與血紅蛋白含量有關(guān)。

試帶法對血紅蛋白檢測靈敏度約為0.015~0.03mg/dl,對紅細(xì)胞檢測靈敏度約為5~15個/ul。新鮮未離心尿,計數(shù)板法紅細(xì)胞為10×106/L時,試帶法的分析靈敏度為70~80%。與計數(shù)板法相比,若尿中紅細(xì)胞溶解,則試帶法紅細(xì)胞分析特異度降低。白細(xì)胞:

觀察尿液內(nèi)白細(xì)胞數(shù)量可幫助有關(guān)疾病(如泌尿系感染.膀胱炎.結(jié)核等)的診斷與鑒別診斷,通過動態(tài)觀察這些病人尿內(nèi)白細(xì)胞數(shù)量變化,來確定病人的療效觀察和愈后。白細(xì)胞在尿液內(nèi)分布直徑大約10um,稍比紅細(xì)胞大,前向散射光強(qiáng)度比紅細(xì)胞稍大一些,但白細(xì)胞含有細(xì)胞核而紅細(xì)胞無細(xì)胞核,因此它有高強(qiáng)度的前向熒光,就能將白細(xì)胞與紅細(xì)胞區(qū)別開來,白細(xì)胞出現(xiàn)在散射圖的正中央。白細(xì)胞也像紅細(xì)胞那樣有很多形狀，當(dāng)白細(xì)胞存活時，白細(xì)胞會呈現(xiàn)前向散射光強(qiáng)和前向熒光弱；當(dāng)白細(xì)胞受損害或死亡時，會呈現(xiàn)前向散射光弱和前向熒光強(qiáng)。利用白細(xì)胞激光散射強(qiáng)度和熒光強(qiáng)度的技術(shù)識別白細(xì)胞高活性和低活性的不同程度,來進(jìn)一步對急性感染和慢性感染,以及恢復(fù)期作出判斷。

泌尿系感染時,在尿液中往往同時存在白細(xì)胞和細(xì)菌。因此,檢查尿液中白細(xì)胞和細(xì)菌存在,是診斷泌尿系感染的重要指標(biāo).另外用白細(xì)胞數(shù)來判斷急、慢性泌尿系感染,結(jié)果顯示:急性泌尿感染白細(xì)胞數(shù)>60/uL,而白細(xì)胞前向散射光強(qiáng)度強(qiáng)和熒光弱;慢性泌尿系感染白細(xì)胞>10/uL,而白細(xì)胞前向散射光強(qiáng)度弱和熒光強(qiáng)度強(qiáng),大多數(shù)是受損害和死亡的白細(xì)胞。干化學(xué)法:

根據(jù)嗜中性粒細(xì)胞中含有的特異性脂酶,水解試紙條中吡咯氨酸脂為吡咯氨酸,再與重氮物發(fā)生重氮反應(yīng)而顯色。干化學(xué)法和顯微鏡檢查法也能測定白細(xì)胞數(shù),但干化學(xué)法粗糙,不能準(zhǔn)確反映數(shù)量變化,顯微鏡的報告法(每高倍視野XX∽XX個白細(xì)胞)或滿視野/HPF,不能將治療前后白細(xì)胞數(shù)量變化反應(yīng)出來,使用UF-100尿沉渣儀能夠觀察到這種數(shù)量微弱變化,指導(dǎo)臨床進(jìn)一步的用藥治療。在化驗(yàn)單上有時出現(xiàn)干化學(xué)法白細(xì)胞數(shù)少,而尿沉渣白細(xì)胞計數(shù)多,這是因?yàn)楦苫瘜W(xué)法測定的白細(xì)胞特異性脂酶,由于白細(xì)胞吞噬細(xì)菌時,白細(xì)胞核內(nèi)含有溶菌酶,溶菌酶殺滅細(xì)菌時,大部分白細(xì)胞變成了膿球,所以干化學(xué)法測定數(shù)少,而尿沉渣計數(shù)多,白細(xì)胞雖然變成膿球,但白細(xì)胞的形狀還存在,計數(shù)時仍然計數(shù),如果是過敏性或變態(tài)反應(yīng)性引起的腎炎,尿沉渣中的細(xì)胞,多是淋巴細(xì)胞或嗜酸性粒細(xì)胞。干化學(xué)法:10~20個/uL少、50~75個/uL+、100~150個/uL++、150~250個/uL+++、500個/uL++++、

尿沉渣報告方式對照表

報告結(jié)果陰性偶見1＋2＋3＋4＋

RBC/HPF00~23~1011~30>30滿視野

WBC/HPF00~34~1011~30>30滿視野上皮細(xì)胞/HPF0男0~34~1011~30>30滿視野女0~56~10

管型/LPF00~11~56~1011~30>30

正常參考值紅細(xì)胞0~3/HPF,白細(xì)胞0~5/HPF,尿結(jié)晶和鹽類數(shù)量,以每高倍視野+2+3+4+報告。管型(透明管型)低倍視野0~1/全片?，F(xiàn)代臨床檢驗(yàn)學(xué)2000年出版.上皮細(xì)胞:

上皮細(xì)胞由泌尿道上皮脫落而來,種類較多,大小不等。因?yàn)樯掀ぜ?xì)胞體積大,散射光程度強(qiáng),都含有細(xì)胞核,線粒體等,熒光程度也比較強(qiáng)。儀器除了給出上皮細(xì)胞數(shù)量參數(shù)外,還標(biāo)出小圓上皮細(xì)胞(SRC),并在第二個屏幕上顯示每微升小圓細(xì)胞數(shù)。正常尿液中可見少量上皮細(xì)胞,主要是鱗狀上皮細(xì)胞和移行上皮細(xì)胞,如果數(shù)量增多,可見小圓上皮細(xì)胞,可認(rèn)為泌尿道炎癥的表現(xiàn)。小圓上皮細(xì)胞:

來自腎小管上皮或移行上皮的底層,通常不見于尿中。其中細(xì)胞呈多邊形,核較大,核大者來自腎小管,稱腎小管上皮細(xì)胞或腎細(xì)胞;依形態(tài)又稱多邊形細(xì)胞。此細(xì)胞與白細(xì)胞相似,但較白細(xì)胞略大(大1/3左右),(直徑一般不超過15um),含一大而明顯的核,漿中常見脂肪滴和小空泡,此細(xì)胞出現(xiàn)或增多,表示腎小管有病變,多見于急性腎小球腎炎,如成堆出現(xiàn),常表示腎小管有壞死性病變。

572例健康人群尿樣RBC、WBC、EC、CAST參考范圍(個/um95%可信界線)

RBCWBCECCAST

NXS95%XS95%XS95%XS95%

男3616.073.860~116.474.610~125.173.720~70.390.270~1

女2118.946.120~199.326.990~218.337.540~200.410.250~1

標(biāo)本對結(jié)果的影響尿液標(biāo)本必須新鮮,留尿后盡量立既測定,以免紅細(xì)胞,白細(xì)胞破壞,導(dǎo)致干化學(xué)與鏡檢法人為實(shí)驗(yàn)誤差。干化學(xué)法即能測定完整的細(xì)胞成份,又能測定因細(xì)胞破壞胞漿內(nèi)涵物來辨別細(xì)胞的有無(通過特異或非特異性酯酶檢測白細(xì)胞,通過血紅蛋白的過氧化物酶反應(yīng)檢測紅細(xì)胞),因此報告時要了解臨床診斷,綜合分析,排除相互結(jié)果的干擾。某些腎病患者的終尿,由于各種原因使細(xì)胞裂解,可導(dǎo)致儀器法與目測法的差異。⒈對干擾物對紅.白細(xì)胞測定的影響白細(xì)胞試驗(yàn)的干擾干化學(xué)法檢測尿內(nèi)白細(xì)胞的原理,位于粒細(xì)胞漿內(nèi)含有酯酶,可作為試劑帶膜塊中的吲哚酚酯。操作時應(yīng)注意:⑴應(yīng)了解此法只能測定粒細(xì)胞,不與淋巴細(xì)胞反應(yīng),在腎移植病人發(fā)生排異反應(yīng)尿中以淋巴細(xì)胞為主時,會出現(xiàn)陰性結(jié)果,此類病人不應(yīng)用干化學(xué)法檢查,應(yīng)該以顯微鏡檢查法為準(zhǔn)。⑵尿液中污染甲醛,或高濃度膽紅素,或使用某些藥物(如呋喃旦啶)時,可產(chǎn)生假陽性;尿蛋白≥5g/L,或尿液中含有大劑量先鋒Ⅳ、慶大霉素等藥物時,可使結(jié)果偏低或出現(xiàn)假陰性。2.對紅細(xì)胞試驗(yàn)的干擾尿液中含有對熱不穩(wěn)定酶、肌紅蛋白或菌尿,可引起干化學(xué)法測定尿紅細(xì)胞呈假陽性;易使檢測紅細(xì)胞出現(xiàn)假陽性的原因主要是熱不穩(wěn)定過氧化物酶的干擾。尿液大量維生素C的存在,可競爭性抑制反應(yīng)致使干化學(xué)法產(chǎn)生假陰性,應(yīng)注意細(xì)胞破壞造成的“假陰性”現(xiàn)象。所述“假陽性”、“假陰性”現(xiàn)象,是以顯微鏡檢查為基礎(chǔ)的。由于干化學(xué)法是檢測細(xì)胞胞漿內(nèi)涵物來辨別細(xì)胞的有無(通過特異或非特異性酯酶檢測白細(xì)胞,通過血紅蛋白的過氧化物酶反應(yīng)檢測紅細(xì)胞),在實(shí)際工作中可能存在下列問題:①由于尿液在膀胱貯存時間過長或標(biāo)本放置時間延長,導(dǎo)致白細(xì)胞破壞,酯酶釋放到尿液中,造成干化學(xué)法陽性、鏡檢陰性的所為“假陽性”現(xiàn)象。②腎病患者的紅細(xì)胞在腎臟或泌尿道破壞,或尿比重過低、尿PH偏高,均易造成紅細(xì)胞破壞,血紅蛋白放出并出現(xiàn)在尿中,造成所謂紅細(xì)胞干化學(xué)檢查的“假陽性”現(xiàn)象。因此在干化學(xué)法結(jié)果與顯微鏡下所見出現(xiàn)矛盾時,要結(jié)合臨床綜合分析,甚至要動態(tài)觀察,切不一概否定干化學(xué)法結(jié)果。鏡檢法與干化學(xué)法的相應(yīng)關(guān)系有作者報道干化學(xué)與鏡檢兩種方法檢查尿紅細(xì)胞實(shí)驗(yàn)結(jié)果的對應(yīng)關(guān)系,發(fā)現(xiàn)這兩種方法雖然結(jié)果沒有明顯的對應(yīng)關(guān)系,但每一等級尿分析儀結(jié)果對應(yīng)鏡檢紅細(xì)胞計數(shù)有較好的百分比范圍,特別是干化學(xué)“neg”檔,<3/HP占100%,紅細(xì)胞<10/ul,鏡檢正常占99.82%。鑒于此種現(xiàn)象,認(rèn)為在排除上述病理或其他干擾因素存在下,儀器結(jié)果為“紅細(xì)胞≤10ul”時,可以省略顯微鏡檢查,而其他檔次(25/ul、50/ul、150/ul、250/ul、)均有較大的交叉,必須鏡檢。原理不同,報告方式是兩種不同的概念,很難找出兩者的對應(yīng)關(guān)系,迄今還沒有一種直接的換算方式,有文章報道計算板計數(shù)與儀器結(jié)果的內(nèi)在關(guān)系,Alwall報道每高倍視野白細(xì)胞數(shù)大約是儀器法報告(WBC/ul)數(shù)的11%;Loosyt等指出,白細(xì)胞/ul是白細(xì)胞/高倍視野的10.8倍,叢玉隆的實(shí)驗(yàn)結(jié)果是8.7倍。因此儀器法白細(xì)胞檢測只是一個篩選實(shí)驗(yàn),決不可代替顯微鏡檢查。干化學(xué)結(jié)果異常,鏡檢結(jié)果正常,視為假陽性;反之干化學(xué)結(jié)果正常,鏡檢結(jié)果異常,視為假陰性.由于過篩的目的是篩出正常,鏡檢病理性標(biāo)本,因?yàn)檫^篩的原則是不能出現(xiàn)假陰性,否則就要漏診。干化學(xué)結(jié)果假陽性的標(biāo)本經(jīng)過鏡檢后即可得到糾正。雖然假陽性不如假陰性那么重要,但假陽性結(jié)果過多,達(dá)不到過篩的目的。尿沉渣檢查標(biāo)準(zhǔn)化

塑料離心管離心后需要搖勻的尿液量離心條件的標(biāo)準(zhǔn)化(時間和速度)用標(biāo)準(zhǔn)刻度離心管倒入混勻后的尿液10毫升,用回轉(zhuǎn)半徑15CM的標(biāo)準(zhǔn)離心機(jī),速度1500r/min,離心5min.

尿沉渣量及傾棄方式要一致,尿沉渣的殘留量應(yīng)為0.2毫升,輕輕搖動離心管,使尿沉渣有形成分混勻.采混合后尿沉渣1滴置于載玻片上，用蓋玻片覆蓋尿沉渣后鏡檢。

因此，在世界上許多國家開始采用尿沉渣定量分析板來定量分析尿沉渣。以××/μl

的形式來報告實(shí)驗(yàn)結(jié)果，國內(nèi)某些大醫(yī)院開始使用引有意大利生產(chǎn)的尿沉渣定量分析板（FAST-READ10）。該系統(tǒng)結(jié)構(gòu)為每塊分析板有10個統(tǒng)一厚度(0.1mm)的計算池,每一個計算池內(nèi)有固定體積為1μl

的計算區(qū)(計算區(qū)劃分為10個大方格,每個大方格分9個小方格).該系統(tǒng)的操作完全同玻片法,不同的是該法是定量計數(shù)每μl

的紅細(xì)胞﹑白細(xì)胞、上皮細(xì)胞和管型的數(shù)量。

使用固定的檢驗(yàn)?zāi)虺猎亢褪褂脴?biāo)準(zhǔn)的玻片及覆蓋玻片.

計算和報告尿沉渣中各種有形成分,XX/HPF或XX/ml.舉例:

高倍鏡視野的直徑=0.35mm,

高倍鏡視野的面積=0.096mm2

蓋玻片的面積(22mmX22mm)=484mm2

換算系數(shù)

HPF體積=0.18μl

1/HPF=1(0.18μl)=(1/0.18)/μl=5.56/μl

LPF體積=2.9μl

1/LPF=1/(2.9μl)=(1/2.9)/μl=0.34/μl

收集標(biāo)本注意事項(xiàng):⑴我們工作人員應(yīng)指導(dǎo)病人正確留取尿標(biāo)本的方法。⑵:容器應(yīng)清潔干燥。⑶:女性病人應(yīng)避免在月經(jīng)期留取尿標(biāo)本,防止混入陰道分泌物,男性病人則要避免前列腺液或精液混入,女性病人必要時沖洗外陰后留取中段尿或?qū)?。?新生兒及嬰兒在收取尿標(biāo)本時,應(yīng)注意用0.1%新潔爾滅消毒尿?qū)虻揽诩皶幉咳缓髮⑶鍧嵉臉?biāo)本杯緊貼尿道口收取標(biāo)本,或采取特殘留尿方式。⑸:標(biāo)本留取后應(yīng)立即送檢,不能立即送檢的標(biāo)本應(yīng)妥善保存,在2小時內(nèi)送化驗(yàn)室檢測。⑹:應(yīng)根據(jù)不同實(shí)驗(yàn)室要求留取不同種類的尿液標(biāo)本及不同取樣方式。每次收集尿標(biāo)本量不少于20-50ml,以備標(biāo)本的復(fù)查檢測。

標(biāo)本保存尿標(biāo)本留取后到檢驗(yàn)應(yīng)在2小時內(nèi)完成,最遲不宜超過2小時。否則,可引起如下的變化:1.尿液排出放置一定時間后,可導(dǎo)致細(xì)胞和管型發(fā)生變形.變質(zhì);2.細(xì)菌在尿中生長繁殖,分解尿素產(chǎn)生氨,使尿液PH上升,在堿性環(huán)境中有形成份更易分解破壞。

3.細(xì)菌和真菌分解葡萄糖,使病理性糖尿減弱或消失;4.菌體干擾病理性蛋白尿的檢驗(yàn);5.尿中某些化學(xué)成份(如尿膽原)因尿久置而變性,分解;6.尿中鹽類成份因尿久置而析出結(jié)晶,干擾鏡檢。如尿標(biāo)本不能及時檢驗(yàn),可按下述方法進(jìn)行保存。

(1)冰箱冷藏此為較好的保存尿液方法,能抑制微生物生長,維持尿液PH恒定,可保持尿中有形成份的形態(tài)基本不變(但堿性尿中的有形成份仍可發(fā)生變化).冷藏時間不宜超過8小時,冷藏與防腐劑聯(lián)用,效果更好。有時,冷藏可使尿液析出尿酸鹽,磷酸鹽的沉淀。(2)加入防腐劑①甲苯:于尿液中加入適量(1-2ml/100ml尿)甲苯,使其呈薄膜狀覆蓋于尿液表面,