N-芴甲氧羰基-N-三苯甲基-天冬酰胺

1N-芴甲氧羰基-N-三苯甲基-天冬酰胺本文件規(guī)定了N-芴甲氧羰基-N-三苯甲基-天冬酰胺的技術(shù)要求、試驗(yàn)方法、檢驗(yàn)規(guī)則、標(biāo)志、包裝、運(yùn)輸、貯存、有效期。本文件適用于多肽藥物固相合成中使用的N-芴甲氧羰基-N-三苯甲基-天冬酰胺。分子式：C38H32N2O5結(jié)構(gòu)式：相對(duì)分子量：596.67（按2019年國(guó)際相對(duì)原子質(zhì)量）2規(guī)范性引用文件下列文件中的內(nèi)容通過(guò)文中的規(guī)范性引用而構(gòu)成本文件必不可少的條款。其中，注日期的引用文件,僅該日期對(duì)應(yīng)的版本適用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改單）適用于本文件。GB/T191包裝儲(chǔ)運(yùn)圖示標(biāo)志《藥品生產(chǎn)質(zhì)量管理規(guī)范》3術(shù)語(yǔ)和定義本文件無(wú)術(shù)語(yǔ)和定義。4技術(shù)要求應(yīng)符合表1的要求。2表1技術(shù)要求要求外觀白色至類(lèi)白色粉末溶解性1mmol在2mlDMF中溶解后應(yīng)澄清透明鑒別（IR）供試品的紅外光吸收?qǐng)D譜應(yīng)與結(jié)構(gòu)式一致純度（HPLC）≥99.0%H-Asn-OH(TLC)H-Asn(Trt)-OH(TLC)異構(gòu)體(Fmoc-D-Asn(Trt)-OH)（HPLC）≤0.2%水分（KF)≤1.0%比旋光度[20/D]-17.0°±2.0°（c=1，DMF）含量（滴定）≥98.0%5試驗(yàn)方法本試驗(yàn)所用試劑和水除特殊注明外，均為分析純?cè)噭┖图兓?.1外觀采用目視法測(cè)定。5.2溶解性5.2.1儀器50ml具塞比色管。5.2.2試劑DMF。5.2.3操作方法稱取本品約6.0g，置于一個(gè)干燥潔凈的50ml具塞比色管中，加DMF20ml，超聲溶解后應(yīng)澄清透5.3鑒別（IR）5.3.1儀器紅外光譜儀、電子天平。5.3.2測(cè)定方法取供試品適量，按照紅外光譜儀操作規(guī)程進(jìn)行測(cè)定，本品的紅外光吸收?qǐng)D譜應(yīng)與結(jié)構(gòu)式一致。5.4純度（HPLC）5.4.1儀器高效液相色譜儀、電子天平。5.4.2試劑乙腈（色譜級(jí)）、甲醇（色譜級(jí)）、三氟醋酸、高純水。5.4.3色譜條件色譜條件應(yīng)符合表2的要求。表2色譜條件設(shè)定參數(shù)設(shè)定值色譜柱型號(hào)：ZORBAXSB-C18（或等效的色譜柱）規(guī)格：4.6mm*25cm，5um流動(dòng)相A：0.1%三氟醋酸-水（v/v）B：0.1%三氟醋酸-乙腈（v/v）洗脫方式梯度流速1.0ml/min進(jìn)樣體積柱溫30℃檢測(cè)波長(zhǎng)220nm運(yùn)行時(shí)間35min稀釋劑供試品濃度0.5mg/ml梯度洗脫方案應(yīng)符合表3要求。4表3梯度洗脫方案時(shí)間（min）流動(dòng)相A（%）流動(dòng)相B（%）050502059525595265050355050保留時(shí)間應(yīng)參考表4。表4保留時(shí)間保留時(shí)間（min)相對(duì)保留備注H-Asn(Trt)-OH3.8630.24雜質(zhì)Fmoc-Asn-OH3.9130.24雜質(zhì)乙酸乙酯4.0590.25溶劑Ac-Asn(Trt)-OH5.4490.34雜質(zhì)Fmoc-β-Ala-OH6.1770.38雜質(zhì)Fmoc-OH7.4240.46雜質(zhì)Fmoc-Osu10.2470.63雜質(zhì)Trt-OH13.4870.83雜質(zhì)Fmoc-β-Ala-Asn(Trt)13.6840.85雜質(zhì)Fmoc-Asn(Trt)-OH16.175主峰Fmoc-Asn(Trt)-Asn(Trt23.058雜質(zhì)5.4.4試驗(yàn)步驟供試品溶液的配制取本品約50mg，精密稱定，置于100ml的容量瓶中，用適量稀釋劑溶解后定容至刻度，搖勻。測(cè)定分別進(jìn)稀釋劑空白和供試品溶液各1針，按照5.4.3的色譜條件進(jìn)行測(cè)定。5.4.5定量方法5以峰面積歸一化法計(jì)算純度和雜質(zhì)。5.5H-Asn-OH(TLC)5.5.1儀器硅膠G薄層板、層析缸。5.5.2試劑正丁醇、冰醋酸、DMF、茚三酮、2%茚三酮丙酮溶液。5.5.3分析步驟對(duì)照品溶液的配制取H-Asn-OH約0.01g，精密稱定，置于100ml容量瓶中，加適量水溶解后定容至刻度，搖勻，做為對(duì)照品溶液。濃度：0.1mg/ml。供試品溶液的配制取本品約1.0g，精密稱定，置于10ml容量瓶中，加適量DMF溶解后定容至刻度，搖勻，做為供試品溶液。濃度：100mg/ml。點(diǎn)板精密吸取上述2種溶液各5μl，分別點(diǎn)于同一硅膠G薄層板上，用正丁醇：冰醋酸：水(2：1：1）（v/v/v)為展開(kāi)劑，展開(kāi)，晾干。顯色噴以2%茚三酮丙酮溶液，在105℃烘烤加熱至斑點(diǎn)出現(xiàn)，立即檢視。結(jié)果判定對(duì)照品溶液應(yīng)顯一個(gè)清晰的斑點(diǎn)，供試品溶液如顯雜質(zhì)斑點(diǎn)，其顏色與對(duì)照品溶液的主斑點(diǎn)比較，不得更深。5.6H-Asn(Trt)-OH(TLC)5.6.1儀器硅膠G薄層板、層析缸。5.6.2試劑6乙酸乙酯、乙醇、冰醋酸、甲醇、DMF、茚三酮、2%茚三酮乙醇溶液。5.6.3分析步驟對(duì)照品溶液的配制取H-Asn(Trt)-OH約0.01g，精密稱定，置于100ml容量瓶中，加適量甲醇溶解后定容至刻度，搖勻，做為對(duì)照品溶液。濃度：0.1mg/ml。供試品溶液的配制取本品約1.0g，精密稱定，置于10ml容量瓶中，加適量DMF溶解后定容至刻度，搖勻，做為供試品溶液。濃度：100mg/ml。點(diǎn)板精密吸取上述2種溶液各2μl，分別點(diǎn)于同一硅膠G薄層板上，用乙酸乙酯：乙醇：冰醋酸：水(8：1：1：1)（v/v/v/v)為展開(kāi)劑，展開(kāi)，晾干。顯色噴以2%茚三酮乙醇溶液，在105℃烘烤加熱至斑點(diǎn)出現(xiàn)，立即檢視。結(jié)果判定對(duì)照品溶液應(yīng)顯一個(gè)清晰的斑點(diǎn)，供試品溶液如顯雜質(zhì)斑點(diǎn)，其顏色與對(duì)照品溶液的主斑點(diǎn)比較，不得更深。5.7異構(gòu)體(HPLC)5.7.1儀器高效液相色譜儀、電子天平。5.7.2試劑甲醇（色譜級(jí)）、醋酸、醋酸銨。5.7.3色譜條件色譜條件應(yīng)符合表5的要求。7表5色譜條件設(shè)定參數(shù)設(shè)定值色譜柱型號(hào)：CHIRALPAKQD-AX規(guī)格：4.6mm*150mm，5um流動(dòng)相甲醇：醋酸：醋酸銨=980ml：20ml：10g洗脫方式等度流速0.5ml/min進(jìn)樣體積5μl柱溫25℃檢測(cè)波長(zhǎng)254nm運(yùn)行時(shí)間20min稀釋劑供試品濃度0.5mg/ml保留時(shí)間應(yīng)參考下列要求：——Fmoc-L-Asn(Trt)-OH：12.2min——Fmoc-D-Asn(Trt)-OH：15.8min5.7.4試驗(yàn)步驟對(duì)照品溶液的配制取消旋體約（Fmoc-DL-Asn(Trt)-OH）50mg，精密稱定，置于100ml的容量瓶中，用適量稀釋劑溶解后定容至刻度，搖勻。供試品溶液的配制取本品約50mg，精密稱定，置于100ml的容量瓶中，用稀釋劑溶解后定容至刻度，搖勻。測(cè)定取稀釋劑溶液、供試品溶液和對(duì)照品溶液各進(jìn)1針，按照5.7.3的色譜條件進(jìn)行測(cè)定。5.7.5定量方法以峰面積歸一化法計(jì)算異構(gòu)體（Fmoc-D-Asn(Trt)-OH）的含量。5.8水分（KF)5.8.1儀器8分析天平、自動(dòng)水分測(cè)定儀。5.8.2試劑卡爾費(fèi)休氏試劑、無(wú)水甲醇。5.8.3操作方法取本品約0.2~0.5g，按照水分測(cè)定儀操作規(guī)程進(jìn)行測(cè)定。5.9比旋光度5.9.1儀器旋光儀、電子天平。5.9.2試劑DMF。5.9.3操作方法稱取本品約1.0g，精密稱定，溫度為20℃,置于100ml的容量瓶中，加適量DMF溶解后定容至刻度，搖勻。按照旋光測(cè)定儀操作規(guī)程進(jìn)行測(cè)定。5.9.4計(jì)算公式比旋度[20/D]=---------------式中:α——為測(cè)得的旋光度；l——為測(cè)定管的長(zhǎng)度，dm；c——為100ml溶液中含有被測(cè)物質(zhì)的重量，g/100ml。5.10含量（滴定）5.10.1試劑和溶液應(yīng)包含下列試劑和溶液：——中性DMF：取DMF500ml，加入2滴酚酞指示劑，用0.1mol/L氫氧化鈉標(biāo)準(zhǔn)溶液滴定至溶液顯淡紅色，保持30s不褪。——?dú)溲趸c標(biāo)準(zhǔn)溶液（0.1mol/L)——酚酞指示劑5.10.2操作方法9取本品約1.2g，精密稱定，置于一個(gè)干燥潔凈的150ml錐形瓶中，加入50ml中性DMF，振搖使供試品溶解后加入2滴酚酞指示劑，用0.1mol/L氫氧化鈉標(biāo)準(zhǔn)溶液滴定至溶液顯粉紅色，保持30s不褪。記錄消耗標(biāo)準(zhǔn)溶液的體積。5.10.3計(jì)算公式c×V×0.59667含量%=-------------------------×100m式中：c——為氫氧化鈉標(biāo)準(zhǔn)溶液的濃度，mol/L；V——為供試品消耗氫氧化鈉標(biāo)準(zhǔn)溶液的體積，ml；0.59667——為1.00ml氫氧化鈉標(biāo)準(zhǔn)溶液（0.1000mol/L]相當(dāng)于Fmoc-Asn(Trt)-OH的質(zhì)量；m——為供試品的重量，g。5.10.4允許誤差取兩次平行實(shí)驗(yàn)結(jié)果的平均值為測(cè)定結(jié)果，兩次平行實(shí)驗(yàn)結(jié)果之間的RSD不得大于0.3%。6檢驗(yàn)規(guī)則6.1檢驗(yàn)分類(lèi)產(chǎn)品的檢驗(yàn)分為出廠檢驗(yàn)和型式檢驗(yàn)。6.2組批以相同材料、相同生產(chǎn)工藝、連續(xù)生產(chǎn)或同一班次生產(chǎn)的同一規(guī)格的產(chǎn)品為一批，每批產(chǎn)品不應(yīng)超過(guò)150t。6.3抽樣6.3.1固體產(chǎn)品按《藥品生產(chǎn)質(zhì)量管理規(guī)范》執(zhí)行。6.3.2將采樣品置于干燥清潔，取固體樣品1000g,分別裝于2個(gè)潔凈、干燥的容器瓶中，密封并貼上標(biāo)簽，注明生產(chǎn)廠名稱、產(chǎn)品名稱、批量、取樣日期等，一份檢測(cè)使用，一份用于留樣。6.4出廠檢驗(yàn)6.4.1產(chǎn)品應(yīng)經(jīng)本公司質(zhì)檢部門(mén)按本標(biāo)準(zhǔn)要求進(jìn)行檢驗(yàn)，檢驗(yàn)合格后方可出廠。6.4.2出廠檢驗(yàn)項(xiàng)目為感官要求、溶解性、鑒別、純度、游離氨基酸、異構(gòu)體、水分、比旋光度、含量（滴定）。6.5型式檢驗(yàn)6.5.1每年進(jìn)行一次型式檢驗(yàn)，有下列情況之一時(shí)，亦須進(jìn)行型式檢驗(yàn)：——更換主要設(shè)備或主要工藝；——長(zhǎng)期停產(chǎn)再恢復(fù)生產(chǎn)時(shí)；——出廠檢驗(yàn)結(jié)果與上次型式檢驗(yàn)有較大差異時(shí);——國(guó)家質(zhì)量監(jiān)督機(jī)構(gòu)進(jìn)行抽查時(shí)。6.5.2型式檢驗(yàn)項(xiàng)目為要求中的全部項(xiàng)目。6.6判定規(guī)則6.6.1出廠檢驗(yàn)時(shí)，檢驗(yàn)結(jié)果應(yīng)符合本標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定。如有不合格項(xiàng)，允許加倍抽樣對(duì)不合格項(xiàng)進(jìn)行復(fù)驗(yàn)，若仍不合格，則判定產(chǎn)品為不合格，產(chǎn)品不得出廠。6.6.2型式檢驗(yàn)時(shí)，若有2項(xiàng)不合格，判為不合格；若有1項(xiàng)不合格，允許加倍抽樣進(jìn)行復(fù)驗(yàn)。復(fù)驗(yàn)合格，判定為合格；若加倍檢驗(yàn)中仍有一項(xiàng)不合格，則判定該批產(chǎn)品不合格。7標(biāo)志、包裝、運(yùn)輸、貯存、有效期7.1標(biāo)志7.1.1銷(xiāo)售包裝上應(yīng)至少標(biāo)有以下內(nèi)容：——產(chǎn)品名稱；——產(chǎn)品批號(hào)；——商品責(zé)任單位名稱及地址；——產(chǎn)品凈重；——產(chǎn)品生產(chǎn)日期和復(fù)檢期；——執(zhí)行標(biāo)準(zhǔn)號(hào)；——產(chǎn)品合格標(biāo)識(shí)。7.1.2包裝箱上的包裝儲(chǔ)運(yùn)圖示標(biāo)志按GB/T1