臨床血液學(xué)檢驗(yàn)骨髓報(bào)告單(樣例)及臨床血液學(xué)骨髓報(bào)告單樣本及臨床血液學(xué)和血液學(xué)檢驗(yàn)知識(shí)點(diǎn)

臨床血液學(xué)檢驗(yàn)骨髓報(bào)告單樣本缺鐵性貧血(IDA)骨髓片：1、取材、涂片、染色良好。2、骨髓有核細(xì)胞增生活躍，粒系占35.5%，紅系占54.5%，粒紅比值為1.54:1。3、紅系增生明顯活躍，以中晚幼紅增生為主，晚幼紅增生尤其明顯，細(xì)胞體積小，胞漿藍(lán)染，胞漿量少，邊緣不整齊，成熟紅細(xì)胞中心淡染區(qū)擴(kuò)大，可見嗜多色性紅細(xì)胞。4、粒系增生活躍，各階段比值形態(tài)無異常改變。5、淋巴系統(tǒng)正常，均為成熟淋巴。6、單核細(xì)胞正常。7、其他非造血細(xì)胞未見。8、巨核細(xì)胞易見，血小板成群分布，形態(tài)正常。9、未見血液寄生蟲及其他異常細(xì)胞。血片：1、涂片、染色可，白細(xì)胞分布正常。2、白細(xì)胞分類正常，成熟紅細(xì)胞同骨髓樣改變。3、血小板易見，三五成群分布，形態(tài)正常。4、未見血液寄生蟲及其他異常細(xì)胞。組化染色：鐵染色：內(nèi)鐵（—），外鐵（—）網(wǎng)織紅計(jì)數(shù)：正常結(jié)合骨髓象、血象、組化染色，提示為缺鐵性貧血。再生障礙性貧血（AA）骨髓片：1、取材、涂片、染色良好。2、骨髓有核細(xì)胞增生減低，粒系占26.8%，紅系占10%，粒紅比值為2.68:1。3、紅系增生減低，幼稚紅細(xì)胞形態(tài)無異常改變，成熟紅細(xì)胞形態(tài)正常。4、粒系增生減低，各階段幼稚粒細(xì)胞形態(tài)正常。5、淋巴系統(tǒng)比值相對(duì)升高，均為成熟淋巴。6、單核細(xì)胞正常。7、其他非造血細(xì)胞可見。8、巨核細(xì)胞未見，血小板分布減少，體積小。9、未見血液寄生蟲及其他異常細(xì)胞。血片：1、涂片、染色可，白細(xì)胞分布減少。2、白細(xì)胞分類正常，成熟紅細(xì)胞形態(tài)正常。3、血小板分布減少，呈散在單個(gè)分布。4、未見血液寄生蟲及其他異常細(xì)胞。組化染色：鐵染色：內(nèi)鐵升高，外鐵正常網(wǎng)織紅計(jì)數(shù)：減少結(jié)合骨髓象、血象、組化染色，提示為再生障礙性貧血。急性髓細(xì)胞白血病部分成熟型（M2a型）骨髓片：1、取材、涂片、染色良好。2、骨髓有核細(xì)胞增生極度活躍，粒系占60.8%，紅系占13.2%，粒紅比值為4.61:1。3、粒系極度增生，比值明顯增大，以原粒增生為主，原粒38.9%，NFC86.8%，白細(xì)胞大小均勻，可見大原?；蛐≡?，核有畸形，胞漿少，可出現(xiàn)空泡及奧氏小體，核仁顯著，核分裂易見。4、紅系增生受抑制，比值減少，幼紅細(xì)胞和成熟紅細(xì)胞形態(tài)正常。5、淋巴系統(tǒng)比值相對(duì)減少。6、單核細(xì)胞減少。7、其他非造血細(xì)胞未見。8、巨核細(xì)胞難見，血小板分布減少。9、未見血液寄生蟲及其他異常細(xì)胞。血片：1、涂片、染色可，白細(xì)胞分布增多。2、白細(xì)胞分類幼稚粒增多，原粒比值升高，中性分葉核減少，成熟紅細(xì)胞同骨髓樣改變。3、血小板分布減少。4、未見血液寄生蟲及其他異常細(xì)胞。組化染色：POX:強(qiáng)陽性結(jié)合骨髓象、血象、組化染色，診斷為急性髓細(xì)胞白血病部分成熟型（M2a型）。急性早幼粒細(xì)胞白血?。∕3型）骨髓片：1、取材、涂片、染色良好。2、骨髓有核細(xì)胞增生顯著，粒系占65.2%，紅系占10.5%，粒紅比值為6.21:1。3、粒系增生顯著，以早幼粒增生為主，NFC50%，異常早幼粒細(xì)胞大小和核大小不一，胞漿內(nèi)出現(xiàn)大量粗大、密集或融合的嗜天青顆粒，細(xì)胞和核可有畸形，可見奧氏小體。4、紅系增生受抑制，比值減少，幼紅細(xì)胞和成熟紅細(xì)胞形態(tài)正常。5、淋巴系統(tǒng)比值相對(duì)減少。6、單核細(xì)胞減少。7、其他非造血細(xì)胞未見。8、巨核細(xì)胞難見，血小板分布減少。9、未見血液寄生蟲及其他異常細(xì)胞。血片：1、涂片、染色可，白細(xì)胞分布增多。2、白細(xì)胞分類幼稚粒增多，以早幼粒為主，中性分葉核減低，成熟紅細(xì)胞同骨髓樣改變。3、血小板分布減少。4、未見血液寄生蟲及其他異常細(xì)胞。組化染色：POX:強(qiáng)陽性結(jié)合骨髓象、血象、組化染色，診斷為急性早幼粒細(xì)胞白血病（M3型）。急性淋巴細(xì)胞白血?。ˋLL）骨髓片：1、取材、涂片、染色良好。2、骨髓有核細(xì)胞增生極度活躍，粒系占40.1%，紅系占12.8%，粒紅比值為3.13:1。3、粒系增生受抑制，比值減少，幼稚粒細(xì)胞分布減少，形態(tài)正常。4、紅系增生受抑制，幼紅細(xì)胞比值減少，幼紅細(xì)胞和成熟紅細(xì)胞形態(tài)正常。5、淋巴系統(tǒng)極度增生，比值明顯增高，以原淋、幼淋增生為主，原幼淋形態(tài)異常，核仁少，胞漿少，呈高核漿比。6、單核細(xì)胞減少。7、其他非造血細(xì)胞未見。8、巨核細(xì)胞難見，血小板分布減少。9、未見血液寄生蟲及其他異常細(xì)胞。血片：1、涂片、染色可，白細(xì)胞分布增多。2、白細(xì)胞分類原淋幼淋增多，中性分葉核減少，成熟紅細(xì)胞同骨髓樣改變。3、血小板分布減少。4、未見血液寄生蟲及其他異常細(xì)胞。組化染色：POX：陰性結(jié)合骨髓象、血象、組化染色，診斷為急性淋巴細(xì)胞白血病（ALL）。多發(fā)性骨髓瘤（MM）骨髓片：1、取材、涂片、染色良好。2、骨髓有核細(xì)胞增生活躍，粒系占15.5%，紅系占19%，粒紅比值為1.23:1。3、粒系增生受抑制，各階段細(xì)胞形態(tài)正常4、紅系增生受抑制，各階段細(xì)胞形態(tài)正常。5、淋巴系統(tǒng)比值正常。6、單核細(xì)胞正常。7、漿細(xì)胞增生明顯，形態(tài)異常，大小不一，核畸形，雙核或多核，胞漿量多，內(nèi)可見Russll小體，可見火焰細(xì)胞、葡萄細(xì)胞和Mott細(xì)胞。8、巨核細(xì)胞可見，血小板分布減少。9、未見血液寄生蟲及其他異常細(xì)胞。血片：1、涂片、染色可，白細(xì)胞分布正常。2、白細(xì)胞分類正常，亦可有淋巴細(xì)胞和嗜酸性粒細(xì)胞增多，可出現(xiàn)少量漿細(xì)胞和骨髓瘤細(xì)胞，成熟紅細(xì)胞同骨髓樣改變。3、血小板分布減少。4、未見血液寄生蟲及其他異常細(xì)胞。組化染色：POX：陰性結(jié)合骨髓象、血象、組化染色，診斷為多發(fā)性骨髓瘤（MM）。慢性粒細(xì)胞白血病（CML）骨髓片：1、取材、涂片、染色良好。2、骨髓有核細(xì)胞增生極度活躍，粒系占62.8%，紅系占20.5%，粒紅比值為3.06:1。3、粒系極度增生，比值顯著增高，以中性中幼粒、中性晚幼粒及桿狀核細(xì)胞增多為主，原粒+早幼?？蛇_(dá)13%，可有嗜酸性粒細(xì)胞和嗜堿性粒細(xì)胞增多，粒細(xì)胞大小不一，核漿發(fā)育不平衡，核分裂象易見。4、紅系早期增生，晚期受抑制，幼紅細(xì)胞比值相對(duì)減少，幼紅細(xì)胞和成熟紅細(xì)胞形態(tài)正常，可見嗜多色性和嗜堿性點(diǎn)彩。。5、淋巴系統(tǒng)比值減少。6、單核細(xì)胞減少。7、其他非造血細(xì)胞未見。8、巨核細(xì)胞易見，血小板分布增多。9、未見血液寄生蟲及其他異常細(xì)胞。血片：1、涂片、染色可，白細(xì)胞分布顯著增多。2、白細(xì)胞分類中性粒細(xì)胞比值明顯增高，以中性中幼粒，中性晚幼粒及中性桿狀核粒細(xì)胞增高為主，中性粒細(xì)胞分葉核降低，嗜酸性粒細(xì)胞和嗜堿性粒細(xì)胞增高。3、血小板分布增多。4、未見血液寄生蟲及其他異常細(xì)胞。組化染色：NAP積分降低結(jié)合骨髓象、血象、組化染色，診斷為慢性粒細(xì)胞白血病（CML）。臨床血液學(xué)骨髓報(bào)告單樣本一、缺鐵性貧血(IDA)骨髓片：1、取材、涂片、染色良好。2、骨髓有核細(xì)胞增生活躍，粒系占35.5%，紅系占54.5%，粒紅比值為1.54:1。3、紅系增生明顯活躍，以中晚幼紅增生為主，晚幼紅增生尤其明顯，細(xì)胞體積小，胞漿藍(lán)染，胞漿量少，邊緣不整齊，成熟紅細(xì)胞中心淡染區(qū)擴(kuò)大，可見嗜多色性紅細(xì)胞。4、粒系增生活躍，各階段比值形態(tài)無異常改變。5、淋巴系統(tǒng)正常，均為成熟淋巴。6、單核細(xì)胞正常。7、其他非造血細(xì)胞未見。8、巨核細(xì)胞易見，血小板成群分布，形態(tài)正常。9、未見血液寄生蟲及其他異常細(xì)胞。血片：1、涂片、染色可，白細(xì)胞分布正常。2、白細(xì)胞分類正常，成熟紅細(xì)胞同骨髓樣改變。3、血小板易見，三五成群分布，形態(tài)正常。4、未見血液寄生蟲及其他異常細(xì)胞。組化染色：鐵染色：內(nèi)鐵（—），外鐵（—）網(wǎng)織紅計(jì)數(shù)：正常結(jié)合骨髓象、血象、組化染色，提示為缺鐵性貧血。二、再生障礙性貧血（AA）骨髓片：1、取材、涂片、染色良好。2、骨髓有核細(xì)胞增生減低，粒系占26.8%，紅系占10%，粒紅比值為2.68:1。3、紅系增生減低，幼稚紅細(xì)胞形態(tài)無異常改變，成熟紅細(xì)胞形態(tài)正常。4、粒系增生減低，各階段幼稚粒細(xì)胞形態(tài)正常。5、淋巴系統(tǒng)比值相對(duì)升高，均為成熟淋巴。6、單核細(xì)胞正常。7、其他非造血細(xì)胞可見。8、巨核細(xì)胞未見，血小板分布減少，體積小。9、未見血液寄生蟲及其他異常細(xì)胞。血片：1、涂片、染色可，白細(xì)胞分布減少。2、白細(xì)胞分類正常，成熟紅細(xì)胞形態(tài)正常。3、血小板分布減少，呈散在單個(gè)分布。4、未見血液寄生蟲及其他異常細(xì)胞。組化染色：鐵染色：內(nèi)鐵升高，外鐵正常網(wǎng)織紅計(jì)數(shù)：減少結(jié)合骨髓象、血象、組化染色，提示為再生障礙性貧血。三、急性髓細(xì)胞白血病部分成熟型（M2a型）骨髓片：1、取材、涂片、染色良好。2、骨髓有核細(xì)胞增生極度活躍，粒系占60.8%，紅系占13.2%，粒紅比值為4.61:1。3、粒系極度增生，比值明顯增大，以原粒增生為主，原粒38.9%，NFC86.8%，白細(xì)胞大小均勻，可見大原?；蛐≡?，核有畸形，胞漿少，可出現(xiàn)空泡及奧氏小體，核仁顯著，核分裂易見。4、紅系增生受抑制，比值減少，幼紅細(xì)胞和成熟紅細(xì)胞形態(tài)正常。5、淋巴系統(tǒng)比值相對(duì)減少。6、單核細(xì)胞減少。7、其他非造血細(xì)胞未見。8、巨核細(xì)胞難見，血小板分布減少。9、未見血液寄生蟲及其他異常細(xì)胞。血片：1、涂片、染色可，白細(xì)胞分布增多。2、白細(xì)胞分類幼稚粒增多，原粒比值升高，中性分葉核減少，成熟紅細(xì)胞同骨髓樣改變。3、血小板分布減少。4、未見血液寄生蟲及其他異常細(xì)胞。組化染色：POX:強(qiáng)陽性結(jié)合骨髓象、血象、組化染色，診斷為急性髓細(xì)胞白血病部分成熟型（M2a型）。四、急性早幼粒細(xì)胞白血?。∕3型）骨髓片：1、取材、涂片、染色良好。2、骨髓有核細(xì)胞增生顯著，粒系占65.2%，紅系占10.5%，粒紅比值為6.21:1。3、粒系增生顯著，以早幼粒增生為主，NFC50%，異常早幼粒細(xì)胞大小和核大小不一，胞漿內(nèi)出現(xiàn)大量粗大、密集或融合的嗜天青顆粒，細(xì)胞和核可有畸形，可見奧氏小體。4、紅系增生受抑制，比值減少，幼紅細(xì)胞和成熟紅細(xì)胞形態(tài)正常。5、淋巴系統(tǒng)比值相對(duì)減少。6、單核細(xì)胞減少。7、其他非造血細(xì)胞未見。8、巨核細(xì)胞難見，血小板分布減少。9、未見血液寄生蟲及其他異常細(xì)胞。血片：1、涂片、染色可，白細(xì)胞分布增多。2、白細(xì)胞分類幼稚粒增多，以早幼粒為主，中性分葉核減低，成熟紅細(xì)胞同骨髓樣改變。3、血小板分布減少。4、未見血液寄生蟲及其他異常細(xì)胞。組化染色：POX:強(qiáng)陽性結(jié)合骨髓象、血象、組化染色，診斷為急性早幼粒細(xì)胞白血?。∕3型）。五、急性淋巴細(xì)胞白血病（ALL）骨髓片：1、取材、涂片、染色良好。2、骨髓有核細(xì)胞增生極度活躍，粒系占40.1%，紅系占12.8%，粒紅比值為3.13:1。3、粒系增生受抑制，比值減少，幼稚粒細(xì)胞分布減少，形態(tài)正常。4、紅系增生受抑制，幼紅細(xì)胞比值減少，幼紅細(xì)胞和成熟紅細(xì)胞形態(tài)正常。5、淋巴系統(tǒng)極度增生，比值明顯增高，以原淋、幼淋增生為主，原幼淋形態(tài)異常，核仁少，胞漿少，呈高核漿比。6、單核細(xì)胞減少。7、其他非造血細(xì)胞未見。8、巨核細(xì)胞難見，血小板分布減少。9、未見血液寄生蟲及其他異常細(xì)胞。血片：1、涂片、染色可，白細(xì)胞分布增多。2、白細(xì)胞分類原淋幼淋增多，中性分葉核減少，成熟紅細(xì)胞同骨髓樣改變。3、血小板分布減少。4、未見血液寄生蟲及其他異常細(xì)胞。組化染色：POX：陰性結(jié)合骨髓象、血象、組化染色，診斷為急性淋巴細(xì)胞白血?。ˋLL）。六、多發(fā)性骨髓瘤（MM）骨髓片：1、取材、涂片、染色良好。2、骨髓有核細(xì)胞增生活躍，粒系占15.5%，紅系占19%，粒紅比值為1.23:1。3、粒系增生受抑制，各階段細(xì)胞形態(tài)正常4、紅系增生受抑制，各階段細(xì)胞形態(tài)正常。5、淋巴系統(tǒng)比值正常。6、單核細(xì)胞正常。7、漿細(xì)胞增生明顯，形態(tài)異常，大小不一，核畸形，雙核或多核，胞漿量多，內(nèi)可見Russll小體，可見火焰細(xì)胞、葡萄細(xì)胞和Mott細(xì)胞。8、巨核細(xì)胞可見，血小板分布減少。9、未見血液寄生蟲及其他異常細(xì)胞。血片：1、涂片、染色可，白細(xì)胞分布正常。2、白細(xì)胞分類正常，亦可有淋巴細(xì)胞和嗜酸性粒細(xì)胞增多，可出現(xiàn)少量漿細(xì)胞和骨髓瘤細(xì)胞，成熟紅細(xì)胞同骨髓樣改變。3、血小板分布減少。4、未見血液寄生蟲及其他異常細(xì)胞。組化染色：POX：陰性結(jié)合骨髓象、血象、組化染色，診斷為多發(fā)性骨髓瘤（MM）。七、慢性粒細(xì)胞白血?。–ML）骨髓片：1、取材、涂片、染色良好。2、骨髓有核細(xì)胞增生極度活躍，粒系占62.8%，紅系占20.5%，粒紅比值為3.06:1。3、粒系極度增生，比值顯著增高，以中性中幼粒、中性晚幼粒及桿狀核細(xì)胞增多為主，原粒+早幼?？蛇_(dá)13%，可有嗜酸性粒細(xì)胞和嗜堿性粒細(xì)胞增多，粒細(xì)胞大小不一，核漿發(fā)育不平衡，核分裂象易見。4、紅系早期增生，晚期受抑制，幼紅細(xì)胞比值相對(duì)減少，幼紅細(xì)胞和成熟紅細(xì)胞形態(tài)正常，可見嗜多色性和嗜堿性點(diǎn)彩。。5、淋巴系統(tǒng)比值減少。6、單核細(xì)胞減少。7、其他非造血細(xì)胞未見。8、巨核細(xì)胞易見，血小板分布增多。9、未見血液寄生蟲及其他異常細(xì)胞。血片：1、涂片、染色可，白細(xì)胞分布顯著增多。2、白細(xì)胞分類中性粒細(xì)胞比值明顯增高，以中性中幼粒，中性晚幼粒及中性桿狀核粒細(xì)胞增高為主，中性粒細(xì)胞分葉核降低，嗜酸性粒細(xì)胞和嗜堿性粒細(xì)胞增高。3、血小板分布增多。4、未見血液寄生蟲及其他異常細(xì)胞。組化染色：NAP積分降低結(jié)合骨髓象、血象、組化染色，診斷為慢性粒細(xì)胞白血?。–ML）。臨床血液學(xué)和血液學(xué)檢驗(yàn)知識(shí)點(diǎn)（一）粒細(xì)胞系統(tǒng)1.原始粒細(xì)胞（myeloblast）：10~18μm，胞體圓或類圓形，核占細(xì)胞的2/3以上，居中或略偏位，核染色質(zhì)呈細(xì)顆粒狀排列均勻，核仁2~5個(gè)、較小、清楚；胞漿量少，染天藍(lán)色，有透明感，無顆粒。2.早幼粒細(xì)胞（promyelocyte）：12~20μm，較原粒細(xì)胞大，核染色質(zhì)較原粒細(xì)胞粗糙，染色質(zhì)顆粒開始有聚集，核仁可見或消失；胞漿染淡藍(lán)色、藍(lán)色或深藍(lán)色，含大小不等、形態(tài)不一的紫紅色顆粒（即非特異性顆粒）。3.中幼粒細(xì)胞（myelocyte）①中性中幼粒（neutrophilicmyelocyte）：10~18μm，胞核橢圓形或一側(cè)開始扁平，可有凹陷，其凹陷處約占細(xì)胞的2/3~1/2，核染色質(zhì)聚集呈索塊狀，核仁隱約可見或消失；胞漿量多，染淡紅或少數(shù)區(qū)域略偏藍(lán)，含大小一致的紅色顆粒、即特異性顆粒（致少有一個(gè)區(qū)域）。②嗜酸性中幼粒（eosinophilic）：15~20μm：核與中性中幼粒相似；胞漿內(nèi)充滿粗大而均勻、排列緊密的橘紅色特異性嗜酸性顆粒。③嗜堿性中幼粒（basphilic）：10~15μm，核圓形或橢圓形、但常常輪廓不清，核染色質(zhì)較模糊；胞漿內(nèi)及核上含有排列零亂、大小不等數(shù)量不多的紫黑色嗜堿性顆粒。4、晚幼粒細(xì)胞（metamyelocyte）①中性晚幼粒（neutropilicmetamyelocyte）：10~16μm，核明顯凹陷呈腎形，馬蹄形，半月形，但其核凹陷程度不超過假設(shè)直徑的一半，核染色質(zhì)粗糙，排列更緊密，無核仁；胞漿量多，淺紅色，充滿中性特異性顆粒。②嗜酸性晚幼粒（eosinophilicmetamyelocyte）：10~16μm，核形及結(jié)構(gòu)與中性晚幼粒相似；胞漿內(nèi)充滿橘紅色的、大小一致的嗜酸性特異性顆粒。③嗜堿性晚幼粒（basophilicmetamyelocyte）：10~14μm，核固縮呈腎形，輪廓模糊；胞漿內(nèi)及核上分布有少量嗜堿性非特異顆粒。5.桿狀核粒細(xì)胞（stabgranulocyte）①中性桿狀核粒細(xì)胞（neutrophilicstabgranulocyte）：10~15μm，核凹陷程度超過假設(shè)直徑的一半，核徑最窄處大于最寬處1/3以上，呈帶狀彎曲，核染色質(zhì)粗糙呈塊狀；胞漿充滿中性顆粒。②嗜酸性桿狀核粒細(xì)胞（eosinophilicstabgranulocyte）：11~16μm，核與中性桿狀相似；漿內(nèi)充滿嗜酸性顆粒。③嗜堿性桿狀核粒細(xì)胞（basophilicstabgranulocyte）：10~12μm，核呈模糊桿狀；胞漿內(nèi)及核上分布有少量嗜堿性顆粒。6.分葉核粒細(xì)胞（segmentedgranulocyte）①中性分葉核粒細(xì)胞（neutrophilicsegmentedgranulocyte）：10~14μm，核呈分葉狀，葉與葉之間有細(xì)絲相連或全斷開，常分2~5葉，核染色質(zhì)已濃集呈粗的小塊狀，染深紫紅色；胞漿豐富，內(nèi)含淡紅色均勻細(xì)小顆粒。②嗜酸性分葉核粒細(xì)胞（（eosinophilicsegmentedgranulocyte）：11~16μm，核多分2葉，核染色質(zhì)結(jié)構(gòu)與中性分葉核相似；胞漿內(nèi)充滿粗大均勻一致的橘紅色嗜酸性顆粒。③嗜堿性分葉核粒細(xì)胞（basophilicsegmentedgranulocyte）：10~12μm，核可分3~4葉或分葉不明顯；胞漿分布有少量大小不等的紫黑色嗜堿性顆粒。（二）紅細(xì)胞系統(tǒng)①原始紅細(xì)胞（pronormoblast）：15~20μm，呈圓形或橢圓形，邊緣常呈鈍角狀或瘤狀突起，核呈圓形，居中或偏位，約占細(xì)胞體的4/5左右，核染色質(zhì)呈顆粒狀較原粒細(xì)胞粗而密集，核仁1~3個(gè)不等，且大小不一，形狀不規(guī)則，呈淺藍(lán)色或暗藍(lán)色；胞漿量少，染深藍(lán)色、不透明，有油畫藍(lán)感，無顆粒。②早幼紅細(xì)胞（earlynormoblast）：10~18μm，核圓形或橢圓形，約占細(xì)胞的2/3以上，核染色質(zhì)顆粒有濃集現(xiàn)象，較原紅細(xì)胞粗糙，核仁模糊或消失；胞漿量增多，染不透明藍(lán)色或深藍(lán)色，邊緣可見瘤狀突起。③中幼紅細(xì)胞（polychromaticnormoblast）：8~15μm，核圓形，約占細(xì)胞的1/2，核染色質(zhì)凝聚呈條索狀或塊狀，中間有明顯空隙，如壓碎餅干樣或打碎墨硯感，無核仁；胞漿量相對(duì)較多，漿內(nèi)由于已合成不等量的血紅蛋白，可染呈不同程度的嗜多色性。④晚幼紅細(xì)胞（orthochromaticnormoblast）：7~10μm，核圓形居中或偏位，占細(xì)胞的1/2以下，核染色質(zhì)致密聚集成結(jié)構(gòu)不清的紫黑色團(tuán)塊狀，無核仁；胞漿量較多，因已合成大量血紅蛋白，常染淺灰紅色或淺紅色。⑤網(wǎng)織紅細(xì)胞（reticulocyte）：7.2~7.5μm,為晚幼紅細(xì)胞剛脫核而成，是尚未完全成熟的紅細(xì)胞，瑞氏染色為多嗜性紅細(xì)胞,用煌焦油藍(lán)活體染色后在細(xì)胞內(nèi)可見藍(lán)色細(xì)顆?；虺示€狀或網(wǎng)狀結(jié)構(gòu)。⑥紅細(xì)胞（erythrocyte）：正常紅細(xì)胞平均為7.2μm，呈雙面微凹之圓盤狀，中央較薄，染色淺，邊緣較厚，染色深，呈粉紅色，無核。（三）單核細(xì)胞系統(tǒng)①原始單核細(xì)胞（monoblast）：15~20μm，胞體圓形或橢圓形，核較大圓形或類圓形，核染色質(zhì)纖細(xì)，呈疏松網(wǎng)狀結(jié)構(gòu)，核仁1~3個(gè)；胞漿量較其它原始細(xì)胞豐富，灰藍(lán)色，不透明，邊緣不規(guī)則或有偽足狀突起。②幼稚單核細(xì)胞（promonocyte）：15~25μm，核圓形或不規(guī)則形，易見扭曲、凹陷、切跡等改變，核染色質(zhì)較原始單核細(xì)胞粗糙疏松，核仁可有可無；胞漿淺灰藍(lán)色，不透明，可見細(xì)小顆粒。③單核細(xì)胞（monocyte）：12~20μm，核形態(tài)常不規(guī)則，有腎形，馬蹄形，“S”形，分葉狀，筆架形等，核染色質(zhì)疏松呈絲網(wǎng)狀或條紋狀結(jié)構(gòu)，無核仁；胞漿量較多，染不透明的灰藍(lán)色，可見細(xì)小紅色顆粒。（四）淋巴細(xì)胞系統(tǒng)1．原始淋巴細(xì)胞（lymphoblast）：10~18μm，胞體圓形或橢圓形，核呈圓形或橢圓形，核染色質(zhì)呈細(xì)顆粒狀，核仁1~2個(gè)；胞漿量少，呈淡藍(lán)色，透明，無顆粒。2．幼稚淋巴細(xì)胞（prolymphocyte）：10~16μm，核圓形或橢圓形，核染色質(zhì)仍較細(xì)致，核仁可有可無；胞漿量較少，淡藍(lán)色，偶見有少許紅色顆粒。3．淋巴細(xì)胞（lymphocyte）①大淋巴細(xì)胞：12~15μm，核圓形稍偏于一側(cè)，核染色質(zhì)排列緊密均勻，深紫紅色；胞漿量相對(duì)較多，染透明淡藍(lán)色，可有少量大小不等的紅色嗜天青顆粒。②小淋巴細(xì)胞：6~9μm，核相對(duì)較小，呈圓形，核染色質(zhì)緊密呈大塊狀，結(jié)構(gòu)不清楚，染深紫紅色；胞漿極少，似裸核樣，如可見則呈淡藍(lán)色，一般無顆粒。（五）漿細(xì)胞系統(tǒng)1.原始漿細(xì)胞（plasmablast）：14~18μm，胞體圓形或橢圓形，核圓形，占細(xì)胞的2/3以上，居中或偏位，核染色質(zhì)呈粗顆粒網(wǎng)狀，染紫紅色，核仁2~5個(gè)；胞漿量多，染深藍(lán)色，不透明，無顆粒。2.幼稚漿細(xì)胞（proplasmacyte）：12~16μm，胞體多呈橢圓形，核圓形或橢圓形，占細(xì)胞的1/2，居中或偏位，核染色質(zhì)較原漿細(xì)胞粗糙緊密，開始聚集，染深紫紅色，核仁模糊或消失；胞漿量多，深藍(lán)色或紫藍(lán)色或呈藍(lán)色火焰狀，不透明，有時(shí)可有空泡及少數(shù)嗜天青顆粒。3.漿細(xì)胞（plasmacyte）：8~15μm，核明顯縮小，圓形，占細(xì)胞的1/3以下，偏于一側(cè)，核染色質(zhì)濃集成塊狀，常排列呈車輪狀，無核仁；胞漿量豐富，染藍(lán)色或紫藍(lán)色，不透明，有時(shí)有泡沫感，漿內(nèi)可含有小空泡及/或少量嗜天青顆粒，偶見胞漿中有較大的紅色或淡藍(lán)色透明的球狀物，稱Russell小體，是球蛋白聚集而成。（六）巨核細(xì)胞系統(tǒng)1．原始巨核細(xì)胞（megakaryoblast）：15~30μm，胞體圓形或不規(guī)則形，核大，呈圓形或不規(guī)則形，核染色質(zhì)較其他原始細(xì)胞粗，呈粗網(wǎng)狀或細(xì)條索狀結(jié)構(gòu)，染深紫紅色，核仁2~3個(gè)，淡藍(lán)色，不清晰，不規(guī)則；胞漿量較少，不均勻，不規(guī)則，染深藍(lán)色，無顆粒。2．幼稚巨核細(xì)胞（promegkaryocyte）：30~50μm，外形不規(guī)則，核亦不規(guī)則，有重疊，可扭轉(zhuǎn)呈腎形或分葉狀，核染色質(zhì)呈粗顆?；虼志W(wǎng)狀或局部濃集呈小塊狀，排列緊密，核仁可有可無；胞漿量增多，常有偽足狀突出，染藍(lán)色或淺藍(lán)色，在近核處出現(xiàn)或多或少的很細(xì)小紅色嗜天青顆粒。3．巨核細(xì)胞（megakarycyte）①顆粒型巨核細(xì)胞：40~70μm，可達(dá)100μm，外形不規(guī)則，核較大，形態(tài)不規(guī)則，多呈分葉狀，核染色質(zhì)較粗糙，排列緊密呈團(tuán)塊狀，紫紅色，無核仁；胞漿量豐富，染粉紅色，夾雜有藍(lán)色，內(nèi)含大量細(xì)小紅色顆粒，常聚集呈簇，但無血小板形成。②產(chǎn)板型巨核細(xì)胞：40~70μm，可達(dá)100μm，形態(tài)大致與顆粒型巨核細(xì)胞相似，唯有不同的一點(diǎn)是胞漿內(nèi)充滿細(xì)小的紅色顆粒及數(shù)量不等的血小板。③裸核型巨核細(xì)胞：是產(chǎn)板型巨核細(xì)胞的胞漿解體后，釋放出大量血小板，僅剩一個(gè)細(xì)胞核，稱之為裸核。4.血小板（platelet）：胞體很小，2~4μm，呈圓形、橢圓形，逗點(diǎn)狀，不規(guī)則形，中心部位有細(xì)小紫紅色顆粒，無細(xì)胞核，涂片上血小板常三五成群堆集出現(xiàn)。（七）其他細(xì)胞1．組織嗜細(xì)胞（tissuebasophiliccell）：又稱肥大細(xì)胞（mastcell），12~20μm，呈圓形，橢圓形，梭形，三角形等，核小，呈圓形或橢圓形，居中或偏位，核染色質(zhì)模糊，結(jié)構(gòu)不清；胞漿充滿圓形、大小一致的深紫色嗜堿性顆粒。2．內(nèi)皮細(xì)胞（endothelialcell）：8~22μm，形態(tài)極不規(guī)則，多呈梭形，核呈圓形或橢圓形，核染色質(zhì)呈網(wǎng)狀，多無核仁；胞漿量少，染淡藍(lán)色，邊緣常模糊不清，常沿核長軸的兩側(cè)或一端呈尾狀伸出，可有細(xì)小紫紅色顆粒。3．纖維細(xì)胞（fibrocyte）：胞體較大，不規(guī)則，多為長尾形，核圓形或橢圓形（1~數(shù)個(gè)），核染色質(zhì)呈或細(xì)或粗的網(wǎng)狀結(jié)構(gòu)，核仁1~2個(gè)，不清晰,成熟者無核仁；胞漿豐富，多在細(xì)胞兩端，染淡藍(lán)色，邊界模糊，內(nèi)含纖維網(wǎng)狀物及少許嗜天青顆粒。4．成骨細(xì)胞（osteoblast）：胞體較大，20~40μm，長橢圓形或不規(guī)則形，單個(gè)或多個(gè)成群分布，核圓形或橢圓形，常偏于細(xì)胞一側(cè)，核染色質(zhì)排列呈粗網(wǎng)狀，染深紫紅色，核仁可有1~3個(gè)；胞漿豐富，染深藍(lán)色或灰藍(lán)色，邊緣常呈模糊云霧狀。5．破骨細(xì)胞（osteoclast）：胞體巨大，60~100μm，形態(tài)不規(guī)則，頗象巨核細(xì)胞，核小、數(shù)量較多，3~100個(gè)不等，圓形或橢圓形，大小大致相等，邊緣清晰，彼此獨(dú)立，無核絲相連，隨意排列，核染色質(zhì)呈粗網(wǎng)狀，幾乎每個(gè)核都有一個(gè)藍(lán)色核仁；胞漿豐富，染淡藍(lán)色或淺紅色，含大小不等的紫紅細(xì)小顆粒。6．脂肪細(xì)胞（fattycell）：30~50μm，胞體圓形或橢圓形，核較小，形狀不規(guī)則，常被擠壓在一邊，核染色質(zhì)呈細(xì)致密網(wǎng)狀，無核仁；胞漿內(nèi)充滿大量空泡。7．組織細(xì)胞（histiocyte）：胞體較大，20~50μm，形態(tài)多樣，一般呈圓形或橢圓形及不規(guī)則形，核可有圓形，橢圓形，腎形，核染色質(zhì)呈疏松網(wǎng)狀結(jié)構(gòu)，核仁2~4個(gè)不等；胞漿多少不一，染色也常不一致，有深藍(lán)，淡藍(lán)，灰藍(lán)色等，邊緣多不規(guī)則或不清楚，無顆粒或含有少量或細(xì)或粗或粗細(xì)不一的嗜天青顆粒，可有空泡或含異物等。8．吞噬細(xì)胞（phagocyte）：不是一種獨(dú)立的細(xì)胞，而是胞漿內(nèi)含有吞噬物質(zhì)的一組細(xì)胞的總稱。具有吞噬功能的細(xì)胞有單核細(xì)胞、組織細(xì)胞、血管內(nèi)皮細(xì)胞，纖維細(xì)胞等。吞噬細(xì)胞的形態(tài)極不一致，由吞噬物的類型及吞噬物的多少而定。其胞核圓形、橢圓形或不規(guī)則形，常一個(gè)核，有時(shí)為雙核，核常被擠壓至一側(cè)，核染色質(zhì)較疏松，核仁可有可無。胞漿多少不一，淡藍(lán)色或淡紅色，常有空泡，并有數(shù)量不等的吞噬物，吞噬物有空泡、色素、顆粒、有核細(xì)胞、紅細(xì)胞、血小板、碳核、細(xì)菌等。有時(shí)吞噬細(xì)胞成堆存在。異常血細(xì)胞形態(tài)學(xué)（4學(xué)時(shí)）了解：初步認(rèn)識(shí)各種異常血細(xì)胞形態(tài)，并畫出每一臺(tái)顯微鏡下的細(xì)胞圖像。血細(xì)胞形態(tài)在病理情況下，可在胞體、胞核、胞漿等方面發(fā)生異常改變。（一）粒細(xì)胞系統(tǒng)形態(tài)異常1．白血病時(shí)粒細(xì)胞改變①胞體：大小不等、畸形。②胞漿：Auer小體，顆粒粗大、增多。Auer小體：是在細(xì)胞漿內(nèi)出現(xiàn)結(jié)構(gòu)均勻一致的紅色細(xì)棒狀小體。產(chǎn)生原因是嗜天青顆粒融合而成。常見于急性非淋巴細(xì)胞性白血病細(xì)胞漿內(nèi)。③胞核：畸形、切跡、折疊、凹陷、扭曲、分葉等。如急淋時(shí)核易破碎，核分裂象增多。④核漿比：增大、發(fā)育不平衡（M2b）。⑤核仁：大、數(shù)量增多、亦可不清楚。2．巨大粒細(xì)胞：可見于中、晚、桿、分階段。常見巨晚幼、巨桿狀。①形態(tài)特征：與同期相比，胞體大、核大、核染色質(zhì)較同階段細(xì)胞細(xì)致。②形成原因：核酸代謝障礙。③常見疾?。壕抻棕?、M6、MDS、M2b、抗葉酸類藥物治療后。3．中性粒細(xì)胞分葉過多：分5葉以上，常見于巨幼貧、嚴(yán)重感染恢復(fù)期。4．粒細(xì)胞中毒變性改變①中毒顆粒：胞漿顆粒大小不等、分布不均、染紫黑色或深紫紅色。見于嚴(yán)重感染、大面積燒傷等。②空泡：漿或核內(nèi)空泡。見于嚴(yán)重感染。③杜勒小體（Dohle）：藍(lán)斑，在細(xì)胞漿內(nèi)直徑約1~2μm的藍(lán)色區(qū)域。見于嚴(yán)重感染，肝硬化等。④核變性：核固縮、核腫脹、核碎裂、核溶解。見于嚴(yán)重感染。（二）紅細(xì)胞系形態(tài)異常1．巨幼紅細(xì)胞①形態(tài)特征：與同期細(xì)胞相比，胞體大、核大、核染色質(zhì)細(xì)致、排列疏松“幼核老漿”。②產(chǎn)生原因：核酸代謝障礙。③常見疾?。壕抻棕?、M6、MDS、抗葉酸治療后等。2．低色素性紅細(xì)胞①形態(tài)特征：與同期細(xì)胞相比，漿量少、嗜堿性、著色偏藍(lán)，核染色質(zhì)無明顯異常改變“幼漿老核”。成熟紅細(xì)胞中心淡染區(qū)明顯擴(kuò)大。②產(chǎn)生原因：Hb合成障礙（不能說缺鐵）。③常見疾病：IDA、Hb病、慢性感染性貧血等。3．紅細(xì)胞大小不等、形態(tài)不整：見于各種增生性貧血。4．球形紅細(xì)胞：＜6.4μm，中心淡染區(qū)明顯縮小或消失。見于遺傳性球形紅細(xì)胞增多癥。5．橢圓形紅細(xì)胞：橫徑/長徑＜0.78。見于遺傳性橢圓形紅細(xì)胞增多癥。6．靶形紅細(xì)胞：見于低色素性貧血、地貧等。7．嗜多色性紅細(xì)胞：成熟紅細(xì)胞染灰藍(lán)色或淺灰色。多表示骨髓造血功能活躍，多見于溶貧、失血性貧血等。8．嗜堿性點(diǎn)彩紅細(xì)胞：瑞氏染色后在紅細(xì)胞漿中有藍(lán)黑色細(xì)小顆粒存在。表示骨髓再生加速。鉛中毒時(shí)多見。9．裂紅細(xì)胞：即紅細(xì)胞碎片?？梢娪谖⒀懿⌒匀茇殹IC及損傷性。10．紅細(xì)胞中出現(xiàn)異常結(jié)構(gòu)①豪-周小體（Howoll-Jolly，s）：屬核殘余物。可見于巨幼貧、溶貧、脾切除后、鉛中毒等。②卡波環(huán)（Cabot，sring）：可見于鉛中毒、巨幼貧等。（三）淋巴細(xì)胞形態(tài)異常1．異型淋巴細(xì)胞：分漿細(xì)胞型、單核細(xì)胞、幼稚型。可見于出血熱、傳單及其它病毒感染。2．原、幼淋巴細(xì)胞：淋巴細(xì)胞白血病、淋巴瘤等。（四）單核-巨噬細(xì)胞系統(tǒng)形態(tài)異常1．惡組：多形性、多核異組。2．急單、類單核細(xì)胞白血病反應(yīng)等。3．戈謝細(xì)胞（Gaucher）：戈謝病。4．尼曼-皮克細(xì)胞（Niemann-pick）：尼曼-皮克病。（五）巨核細(xì)胞系統(tǒng)形態(tài)異常1．幼巨產(chǎn)板：ITP。2．小巨核：大小與成熟淋巴細(xì)胞相似，形態(tài)不規(guī)則，有偽足突起，核染色質(zhì)濃集，無明核仁?？梢娪诎籽　DS等。3．巨大血小板：見于巨大血小板綜合癥。檢驗(yàn)的基本方法第一節(jié)制片方法（1學(xué)時(shí)）掌握：制片及染色的基本方法。了解：染液及緩沖液的配制方法。一、骨髓制片1．第一次骨髓穿刺患者，骨髓涂片8張以上或?qū)⑺楣撬枰喝客客?，同時(shí)涂外周血片4張。2．復(fù)查病人，骨髓涂片4張，同時(shí)涂外周血片2張。二、脫落細(xì)胞制片1．一般包塊穿刺，涂片1～2張。2．胸腹水及尿液標(biāo)本，取50ml以上離心（3000r/分）10分鐘，取沉淀物涂片2張。3．腦脊液標(biāo)本，將全部送檢物離心（3000r/分）沉淀，取沉淀物涂片1張。4．痰液標(biāo)本，取可疑部分涂片3～5張。第二節(jié)血細(xì)胞及脫落細(xì)胞瑞氏-姬姆薩染色（1學(xué)時(shí)）一、試劑1.瑞氏染色液：稱1克瑞氏染粉，加入1瓶甲醇（分析純，約500ml）中混勻，室溫放置3個(gè)月后應(yīng)用或每天混勻1次，放置室溫連續(xù)7天后應(yīng)用。2.姬姆薩染色液：稱0.5克姬姆薩（吉氏）染粉，加入33ml丙三醇（甘油，分析純）中混勻，放56℃3.磷酸鹽緩沖液（PH=6.4～6.8）：磷酸二氫鉀（無水，分析純）5克磷酸氫二鈉（含12.H2O，分析純）5克蒸餾水10000ml溶解混勻備用4.姬姆薩染色液—磷酸鹽緩沖液混合比例：姬姆薩染色液約2～3ml，加磷酸鹽緩沖液約30～40ml混勻即可應(yīng)用。每天上下午各新鮮配制1次。二、染色方法1．血或骨髓涂片在瑞氏染色液中固定5～8秒鐘。2．放入姬姆薩染色液—磷酸鹽緩沖液混合液中染色15～20分鐘，慢性粒細(xì)胞白血病患者涂片染色30分鐘，取出涼干或用濾紙吸干即作鏡下觀察。第三、四節(jié)血象及骨髓象檢驗(yàn)分析步驟（2學(xué)時(shí)）掌握：血象檢驗(yàn)結(jié)果及骨髓象檢驗(yàn)結(jié)果的正常值，正常骨髓象的正常形態(tài)特征。熟悉：常見血液病的臨床表現(xiàn)及血象、骨髓象的形態(tài)學(xué)改變特征。了解：其他系細(xì)胞的正常形態(tài)及異常形態(tài)。（一）血象檢驗(yàn)1．在做骨髓穿刺的同時(shí)須做血象檢驗(yàn)⑴BRC、RC、WBC、PLT計(jì)數(shù)。⑵涂片染色觀察。①紅細(xì)胞形態(tài)有無異常。②白細(xì)胞形態(tài)有無異常。③血小板形態(tài)及數(shù)量有無異常。④有無寄生蟲及其他異常細(xì)胞。2、作用⑴提供思路①一系減少：Hb↓、WBC及PLT正?！鷨渭冐氀BC↓、Hb及PLT正?！＜?xì)胞減少或缺乏。PLT↓Hb及WBC正?！鶬TP。②二系減少：Hb及PLT↓WBC正?！鶬TP、急白、MDS、巨幼貧。③三系減少：Hb、PLT及WBC均↓→AA、急白、巨幼貧。⑵提供診斷依據(jù)①骨髓象相似，血象有區(qū)別如：球形RBC↑癥骨髓紅系↑、血象有核紅↑、球形RBC↑。IDA骨髓紅系↑、血象無有核紅、RBC中心淡染區(qū)擴(kuò)大。②血象相似，骨髓象不同如：AA血象三系↓、骨髓巨核細(xì)胞↓及無白血病細(xì)胞。非白血病性白血病血象三系↓、骨髓有白血病細(xì)胞。MA血象三系↓，骨髓粒系、紅系、巨核系均有巨幼變。③血象有明顯變化、骨髓無變化如：傳單血象淋巴細(xì)胞↑、異淋↑（＞10%）、骨髓無變化。傳淋血象淋巴細(xì)胞↑、異淋↓、骨髓無變化。④骨髓有變化、血象無明顯變化如：戈謝病骨髓有戈謝細(xì)胞、血象無明顯變化。尼曼-皮克病骨髓有尼曼-皮克細(xì)胞、血象無明顯變化。（二）骨髓象檢查凡疑有血液系統(tǒng)或并發(fā)血液系統(tǒng)疾病均應(yīng)作骨髓穿刺檢查1、適應(yīng)癥①檢查血常規(guī)有問題：血象增高、減少。⑵臨床體征有不明原因貧血、出血、發(fā)熱、骨痛、肝脾淋巴結(jié)腫大。2、禁忌癥①由于凝血因子缺陷引起的出血性疾病，如血友病。②晚期妊娠作骨穿檢查要慎重。③小兒及不合作患者不宜作胸骨穿刺術(shù)。3、標(biāo)本采集：一般由臨床醫(yī)生作。⑴采集部位：胸骨、脊突、髂骨、脛骨粗隆（2歲以下小兒）。⑵采集質(zhì)量保證①無菌、嚴(yán)防感染。②死亡病例應(yīng)在30分鐘內(nèi)完成。③量不能多，一般不超過0.2ml，否則導(dǎo)致血?。ɑ煅?，影響判定診斷。④對(duì)某些疾病采取多部位穿刺可提高診斷率。如轉(zhuǎn)移癌、骨髓瘤等在病變或骨痛部位穿刺其陽性率較高；如AA多部位穿刺有利確診。⑶涂片質(zhì)量保證①推片時(shí)角度太大、太快都使涂片厚，反之則薄。②先涂血片、后涂骨髓片。③骨髓抽太多，制片人應(yīng)將剩骨髓液的玻片斜立，用棉花在斜面的底部吸去部分血液，再行涂片，底片不能丟。④作好標(biāo)識(shí)：姓名、血片（B）、骨髓（M）。⑤涂片中前3張涂片，對(duì)估計(jì)PLT量較好。⑷判定骨髓取材滿意的幾項(xiàng)指標(biāo)①抽吸骨髓時(shí)病人有特殊的痛感。②骨髓液及涂片均可見骨髓小粒（骨髓渣）和脂肪滴。③顯微鏡觀察涂片可發(fā)現(xiàn)骨髓特有細(xì)胞。④含有大量幼粒幼紅細(xì)胞，粒細(xì)胞桿狀核與分葉核的比值大于血片中的比值。⑸干抽的概念：是指非技術(shù)錯(cuò)誤或穿刺位置不當(dāng)而抽不出骨髓液或只得到少量血液。其常見疾病有：①原發(fā)性或繼發(fā)性骨髓纖維化。②骨髓增生極度活躍，細(xì)胞過于濃集。如：白血病、真紅。③骨髓增生減低：AA。④腫瘤骨髓浸潤：惡淋、MM、轉(zhuǎn)移癌等。4、檢驗(yàn)的方法及步驟（1）低倍鏡觀察①取材、涂片、染色情況：采用“良好”、“尚可”、“欠佳”等標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行評(píng)價(jià)。②判定骨髓有核細(xì)胞增生程度：有核細(xì)胞與成熟紅細(xì)胞之比，分五級(jí)：增生極度活躍：平均約1：1增生明顯活躍：平均約1：10增生活躍：平均約1：20增生減低：平均約1：50增生極度減低：平均約1：200③觀察涂片尾部及邊緣有無大的或成群（團(tuán)）的異常細(xì)胞，同時(shí)計(jì)數(shù)全片巨核細(xì)胞。（2）油鏡觀察①選擇部位：在涂片體、尾交界處，選擇細(xì)胞分布比較均勻處。②有核細(xì)胞分類計(jì)數(shù)：可根據(jù)增生程度確定分類總數(shù)增生減低及極度減低：分100或200個(gè)細(xì)胞。增生活躍：分200或500個(gè)細(xì)胞。增生明顯活躍及極度活躍：分500個(gè)細(xì)胞。③觀察細(xì)胞形態(tài)粒系：中毒顆粒、空泡、有無巨幼變粒細(xì)胞、Aure小體等。紅系：幼紅細(xì)胞及成熟紅細(xì)胞有無異常變化。巨核系：小巨核、幼巨產(chǎn)板、巨大血小板、估計(jì)血小板量。④注意有無寄生蟲。⑤判定低倍鏡下觀察到的異常細(xì)胞性質(zhì)。（3）計(jì)算結(jié)果①根據(jù)分類結(jié)果計(jì)算出各系統(tǒng)及各階段細(xì)胞的百分率。②計(jì)算粒紅比值：粒細(xì)胞系總和/紅細(xì)胞系總和。（4）填寫報(bào)告①根據(jù)骨髓象分類結(jié)果，按報(bào)告單要求逐項(xiàng)進(jìn)行填寫。②做好骨髓象所見的形態(tài)特征描述。（5）骨髓報(bào)告分析及意見①取材、涂片、染色情況：良好、尚可、欠佳。②骨髓增生程度，粒：紅=？：？。③粒系：④紅系：⑤淋巴系或單核系：⑥全片巨核細(xì)胞數(shù)，根據(jù)血小板分布估計(jì)其量是多、正常、少。⑦有無寄生蟲。⑧血片分類及所見進(jìn)行描述。⑨寫出診斷意見：根據(jù)血象、骨髓象和細(xì)胞化學(xué)染色所見，結(jié)合臨床資料，提出具體診斷意見或供參考的意見。診斷意見分為以下幾種：肯定性診斷：骨髓有特異性變化，臨床表現(xiàn)又典型者，如各種白血病、MA、MM、轉(zhuǎn)移癌、戈謝病、尼曼-皮克病等。支持性診斷：血象、骨髓象有形態(tài)改變，可解釋臨床表現(xiàn)，如IDA、AA、溶貧等?？梢尚栽\斷：骨髓象有部分變化或出現(xiàn)少量異常細(xì)胞，臨床表現(xiàn)又不典型，可能為某種疾病的早期或前期或不典型病例者，如難治性貧血等，要結(jié)合臨床、作相應(yīng)的檢查，并動(dòng)態(tài)觀察其變化。排除性診斷：如臨床上懷疑ITP的患者，其骨髓中血小板易見（不少），巨核細(xì)胞無成熟障礙，即可排除ITP的可能性。形態(tài)學(xué)描寫：骨髓有些改變，但提不出上述性質(zhì)診斷意見，可簡述其形態(tài)學(xué)變化的主要特點(diǎn)，并建議作動(dòng)態(tài)觀察，盡可能提出進(jìn)一步檢查的建議。⑩填寫報(bào)告日期并簽名。5、骨髓象檢查的注意事項(xiàng)①由于細(xì)胞形態(tài)變化多種多樣，故觀察細(xì)胞時(shí)不能根據(jù)某一、二個(gè)特點(diǎn)就輕易作出肯定性診斷或否定性診斷，要全面觀察細(xì)胞的形態(tài)變化，結(jié)合臨床綜合分析作出判斷。②同一病人的骨髓涂片，可因制作涂片不佳（太厚、太?。?、染色不好、選擇分類或觀察的部位不當(dāng)均易導(dǎo)致判斷錯(cuò)誤。③觀察細(xì)胞形態(tài)要認(rèn)識(shí)到血細(xì)胞的發(fā)育是一個(gè)連續(xù)不斷的過程，對(duì)各系細(xì)胞劃分為若干階段是人為劃分的，在實(shí)際觀察中常會(huì)遇到一些細(xì)胞既有上一階段的某些特征，又有下一階段的某些特點(diǎn)，由于血細(xì)胞是向成熟方向發(fā)育，故一般遇此情況歸入下一階段。④對(duì)于個(gè)別介于兩系統(tǒng)之間的細(xì)胞難以判斷時(shí)，可采用大數(shù)歸類法（即將此類難以判斷的細(xì)胞歸入細(xì)胞多的細(xì)胞系）。如在紅系較多的骨髓片中，將介于漿細(xì)胞與幼紅細(xì)胞之間的細(xì)胞歸入紅系細(xì)胞；介于原粒細(xì)胞與原淋巴細(xì)胞之間的細(xì)胞，一般情況原粒細(xì)胞較原淋巴細(xì)胞易見，故應(yīng)歸入原粒；如為急性淋巴細(xì)胞白血病的病人，應(yīng)歸入原淋巴細(xì)胞。切忌在急性白血病骨髓象中分出多種原始細(xì)胞（如原粒、原單、原淋都有）的現(xiàn)象。⑤急性白血病時(shí)，各系統(tǒng)原始細(xì)胞在理論上雖各有特征，但有時(shí)及為相似，很難鑒別，這時(shí)應(yīng)注意觀察伴隨出現(xiàn)的幼稚細(xì)胞、成熟細(xì)胞，并與其比較，同時(shí)要結(jié)合細(xì)胞化學(xué)染色、血象細(xì)胞形態(tài)等綜合考慮，推測原始細(xì)胞的歸屬。⑥有時(shí)可見到難以識(shí)別的細(xì)胞，可參考涂片上其他細(xì)胞后作出判斷，如仍不能確定可歸入“分類不明細(xì)胞”，但不宜太多，若有一定數(shù)量，則應(yīng)通過細(xì)胞化學(xué)染色、集體閱片或會(huì)診等方法弄清類別。⑦骨髓涂中巨核細(xì)胞減少或血小板減，而外周血象中血小板數(shù)正常時(shí)，則往往是由穿刺凝固或涂片凝固所致。⑧作骨髓細(xì)胞學(xué)檢查時(shí)，應(yīng)同時(shí)作血象細(xì)胞學(xué)檢查，這有助于疾病的診斷及化療后療效判斷。（三）判定骨髓計(jì)數(shù)值的高低根據(jù)骨髓各系統(tǒng)各階段細(xì)胞的計(jì)數(shù)值與其相應(yīng)的X±SD的離散程度進(jìn)行判斷。計(jì)數(shù)值：在X±1SD以內(nèi)視為正常在X－1SD以下視為減低在X＋1SD~2SD之間視為增高在X＋2SD以上視為明顯增高從第五節(jié)起以下的實(shí)驗(yàn)課均讓學(xué)生自已動(dòng)手做，教師輔導(dǎo)。第五節(jié)大致正常骨髓象（4學(xué)時(shí)）掌握：血象檢驗(yàn)結(jié)果及骨髓象檢驗(yàn)結(jié)果的正常值，骨髓各系統(tǒng)各階段細(xì)胞的正常形態(tài)特征，正常骨髓象報(bào)告的書寫方法。熟悉：其他系細(xì)胞的正常形態(tài)。一般符合列情況者，可視為大致正常骨髓象。1．骨髓有核細(xì)胞增生活躍。2．粒紅比值：2~4：1。3．各系統(tǒng)各階段細(xì)胞比值在正常范圍，形態(tài)無明顯異常。①粒系：約占40~60%，其中原粒＜2%，早幼粒＜5%，中性中幼粒8%~12%，中性晚幼粒10%~15%，中性桿狀核15%~20%，中性分葉核12%~20%，且桿狀＞分葉，嗜酸＜5%，嗜堿＜1%。②紅系：約占20%~25%，原紅＜1%，早幼紅＜5%，以中、晚幼紅細(xì)胞為主、各約占10%，形態(tài)無異常。③淋巴細(xì)胞系：約占15~25%，均為成熟淋巴細(xì)胞，原幼淋巴細(xì)胞小兒偶見。④單核及漿細(xì)胞系：各＜4%。無原幼單及原幼漿細(xì)胞。⑤巨核系：通常在1.5×3cm的涂片膜上,可見7~35個(gè)巨核細(xì)胞。其中原巨0或罕見，幼巨0~5%，顆粒巨10~27%，產(chǎn)板巨44%~60%，裸核0~30%。血小板易見，呈堆存在。⑥其它細(xì)胞：可見少量非造血細(xì)胞，如組織細(xì)胞、內(nèi)皮細(xì)胞、肥大細(xì)胞、破骨細(xì)胞、成骨細(xì)胞、脂肪細(xì)胞等。⑦核分裂象少。⑧無異常細(xì)胞及寄生蟲。⑨各系細(xì)胞形態(tài)正常。第六節(jié)臨床血液生化和血細(xì)胞化學(xué)一、細(xì)胞化學(xué)染色（4學(xué)時(shí)）掌握：NAP染色、鐵粒染色、POX染色方法、結(jié)果判定、正常值及臨床意義。熟悉：NAP染色、鐵粒染色、POX染色方法的試劑配制。了解：NAP染色、鐵粒染色、POX染色方法的。（一）堿性磷酸酶染色（NAP）———鈣鈷法1.原理細(xì)胞內(nèi)的堿性磷酸酶在PH9.2~9.8時(shí)，將底物β-甘油磷酸鈉水解，產(chǎn)生磷酸根，后者與其質(zhì)液中的鈣離子作用形成磷酸鈣，再與硝酸鈷起反應(yīng)，形成磷酸鈷，最后與硫化銨作用形成硫化鈷黑色沉淀定位于胞漿中。2.試劑（1）備用試劑：①95%乙醇②2%CaCl2③2%硝酸鈷④1%硫化銨⑤β-甘油磷酸鈉⑥Tris-HCl緩沖液(PH9.5):Tris6g溶于400ml水中,加0.1MHCl80ml,調(diào)PH9.5,加水至500ml（2）孵育液(每次必須新鮮配制)：Tris緩沖液20ml，2%CaCl220ml,β－甘油磷酸鈉200mg。3.方法（1）新鮮血片用95%乙醇固定10min,取出，自然干燥。（2）將孵育液放入45℃水浴箱中先預(yù)溫5min后，再放入涂片孵育30min,取出涂片(不沖洗)立即放入2%硝酸鈷中5min，取出用自來水充分沖洗干凈。（3）放入1%硫化銨溶液（每次必須新鮮配制）中2min，用自來水沖洗干凈，用核固紅復(fù)染30min。4.結(jié)果陽性：中性粒細(xì)胞胞漿內(nèi)有棕黑色沉淀。陰性：中性粒細(xì)胞胞漿內(nèi)無棕黑色沉淀。5.正常參考值成人：積分80分左右。兒童：因年齡而異。6.臨床意義（1）細(xì)菌：積分球菌↑↑>GN桿菌，病毒減低或無變化。但NAP積分正常/↓，不能除外細(xì)菌感染。（2）慢?！?，類白↑～↑↑。（3）ALL↑，ANLL↓。（4）AA↑↑，PNH正常/↓。（5）惡組↓↓，反應(yīng)性組織細(xì)胞增多↑～↑↑。（6）增性紅細(xì)胞增多癥↑，繼發(fā)性紅細(xì)胞增多正常。（7）激素治療后NAP↑。（8）妊娠期NAP↑。7.質(zhì)量保證（1）孵育液、1%硫化銨每次實(shí)驗(yàn)必須新鮮配制。（2）Tris-HCl緩沖液的PH應(yīng)控制在9.2~9.8之間。（3）溫度應(yīng)嚴(yán)格控制在45℃左右（上下不超過1℃）。（4）涂片在孵育液中準(zhǔn)確溫育30分鐘。（5）涂片從孵育液中取出時(shí)不能沖洗，應(yīng)直接放入硝酸鈷，否則實(shí)驗(yàn)失敗。（6）涂片從硝酸鈷中取出時(shí)應(yīng)用自來水沖洗3分鐘，否則涂片太臟，結(jié)果不好觀察。（7）每次染色必須作對(duì)照。（二）鐵染色1.原理骨髓小粒中的含鐵血黃素稱細(xì)胞外鐵，其中的三價(jià)鐵與分子中的蛋白質(zhì)結(jié)合不牢固，經(jīng)稀鹽酸處理后而游離，并能在酸性亞鐵氰化鉀溶液中產(chǎn)生普魯士藍(lán)反應(yīng)。細(xì)胞內(nèi)鐵也可用此法顯示。根據(jù)反應(yīng)的強(qiáng)弱了解骨髓中鐵的含量。2.試劑（1）酸性亞鐵氰化鉀溶液200g/L亞鐵氰化鉀溶液5份濃鹽酸1份取200g/L亞鐵氰化鉀溶液置于試管中，緩緩滴加濃鹽酸，邊滴邊搖勻，至出現(xiàn)白色沉淀，再滴加200g/L亞鐵氰化鉀溶液，亦邊滴邊搖勻，至白色沉淀消失為止，備用。（2）2g/L核固紅—硫酸鋁溶液取硫酸鋁2g溶于100ml蒸餾水中，再加入核固紅0.2g，置37℃水浴中1小時(shí)，并隨時(shí)振搖，使溶解，過濾后使用。3.方法選髓粒豐富的骨髓片，用甲醇固定10分鐘。髓片上滴滿酸性亞鐵氰化鉀溶液，染色30分鐘。用蒸餾水沖洗后，用核固紅復(fù)染20分鐘。4.結(jié)果判斷幼紅細(xì)胞內(nèi)出現(xiàn)藍(lán)綠色顆粒為陽性。5.正常參考值正常：細(xì)胞內(nèi)鐵>20%，細(xì)胞外鐵+~++。IDA：細(xì)胞內(nèi)鐵<15%，細(xì)胞外鐵陰性。6.質(zhì)量保證需觀察外鐵時(shí)玻片最好作去鐵處理，取材涂片后應(yīng)盡量減少污染鐵，最好立即進(jìn)行染色。亞鐵氰化鉀溶液少量配制，如與鹽酸混合后出現(xiàn)藍(lán)色必須重配。酸性亞鐵氰化鉀溶液必須新鮮配制。選擇髓粒豐富的骨髓涂片。胞外鐵較規(guī)則，呈圓或橢圓，與細(xì)胞存在于同一平面，污染鐵與細(xì)胞不在同一平面。瑞氏染色后的骨髓片，用甲醇脫色后仍可作鐵染色。（7）作陽性對(duì)照。7.臨床意義（1）細(xì)胞內(nèi)、外鐵“↓”、吞噬細(xì)胞內(nèi)無貯存鐵，可診斷為IDA。（2）細(xì)胞內(nèi)鐵“↓”、外鐵“↑”、吞噬細(xì)胞內(nèi)有貯存鐵，可診斷為ACD。（3）細(xì)胞內(nèi)鐵“↑”、外鐵“↑/N”、紅細(xì)胞形態(tài)小、低色素，提示可能為Hb病。（4）細(xì)胞內(nèi)鐵“↑”、外鐵“↑/N”、環(huán)形鐵粒幼紅細(xì)胞＞15%，可考慮為環(huán)形鐵粒幼細(xì)胞性貧血（RAS）。（5）MDS、AA：細(xì)胞內(nèi)、外鐵均“↑”。（三）過氧化物酶染色法（POX）1.原理細(xì)胞內(nèi)的過氧化物酶（peroxidase）能將底物的過氧化氫分解，產(chǎn)生新生態(tài)氧。后者將試劑中的聯(lián)苯胺氧化為聯(lián)苯胺藍(lán)，它是一種不穩(wěn)定的中間產(chǎn)物，無需酶的作用進(jìn)而變成棕色化合物沉淀于酶的所在部位。2．試劑（1）第一液聯(lián)苯胺0.3g360g/L亞硝基鐵氧化鈉飽和液1ml95%乙醇加至100ml貯存于棕色瓶中，可保存一年。小瓶分裝備用。（2）第二液（稀過氧化氫液，新鮮配制）3%過氧化氫0.3ml蒸餾水25ml3．方法（1）于新鮮干燥血涂片或骨髓涂片上,滴加第一液5~8滴,使蓋滿整個(gè)血膜，作用1~2分鐘。（2）滴加等量的第二液，混勻，染4~8分鐘。（3）勿傾去染液，直接用水沖洗。（4）干燥后再用瑞氏染液復(fù)染。4．結(jié)果陰性：無藍(lán)色或藍(lán)棕色顆粒。弱陽性：藍(lán)色或藍(lán)棕色顆粒小，分布較稀疏。陽性：藍(lán)色或藍(lán)棕色顆粒略粗，分布較密集。強(qiáng)陽性：藍(lán)色或藍(lán)棕色顆粒粗大。5.質(zhì)量保證（1）聯(lián)苯胺配制在85%~88%的乙醇溶液中染色效果較好，勿用90%~95%的乙醇，否則細(xì)胞表面蛋白質(zhì)很快凝固，妨礙試劑向內(nèi)滲入而作用減弱。（2）過氧化氫需新鮮配制，其濃度與加入量勿隨意更改。6.臨床意義（1）白血病類型：原始及幼稚細(xì)胞陽性強(qiáng)：AML①陽性率≥3%：ANLL弱陽性：AMOL②陽性率＜3%：ALL（2）成熟中性粒細(xì)胞過氧化物酶變化（3）活性↑：ALL、CLL、感染、AA等?；钚浴篈ML、AMOL。惡組細(xì)胞：（－）二、血液生化試驗(yàn)（選做4學(xué)時(shí)）掌握：Coombs試驗(yàn)、蔗糖溶血試驗(yàn)、Hb電泳及HbF等試驗(yàn)的操作方法，結(jié)果判定，正常值及臨床意義。熟悉：Coombs試驗(yàn)、蔗糖溶血試驗(yàn)、Hb電泳及HbF等試驗(yàn)的原理。了解：Coombs試驗(yàn)、蔗糖溶血試驗(yàn)、Hb電泳等試驗(yàn)的試劑配制方法。（一）抗人球蛋白試驗(yàn)（Coombs試驗(yàn)，直接法）1.原理抗人球蛋白試驗(yàn)（Coombs試驗(yàn)）是用于檢驗(yàn)不完全抗體的試驗(yàn)。用正常人血清、血漿或血漿球蛋白注射免疫家兔，使兔體內(nèi)產(chǎn)生抗人球蛋白抗體（溫反應(yīng)抗體）。其方法有直接試驗(yàn)和間接試驗(yàn)兩種。直接試驗(yàn)的目的是檢查病人紅細(xì)胞表面的不完全抗體、即經(jīng)鹽水洗滌后的致敏紅細(xì)胞懸液中加入抗人球蛋白血清，觀察是否發(fā)生凝集，發(fā)生凝集者為Coombs直接試驗(yàn)陽性。2.試劑抗人球蛋白血清，生理鹽水。3.方法（1）取受檢者脫纖維紅細(xì)胞用生理鹽水洗滌3次。然后配成20%紅細(xì)胞生理鹽水懸液。（2）將抗人球蛋白血清按1:2、1:4、1:8、1:16的比例稀釋。（3）取一塊白瓷板，將上述各稀釋度抗血清各1滴，然后分別加20%紅細(xì)胞1滴，混勻，5分鐘后觀查結(jié)果。4.結(jié)果不凝集為陰性，凝集為陽性。按效價(jià)報(bào)告。5.正常參考值正常紅細(xì)胞Coombs試驗(yàn)直接反應(yīng)呈陰性。6.質(zhì)量保證（1）標(biāo)本應(yīng)新鮮。當(dāng)天進(jìn)行試驗(yàn)，否則反應(yīng)減弱甚至呈陰性。（2）紅細(xì)胞應(yīng)充分冼滌，除去吸附的血漿球蛋白，以免中和抗人球蛋白而出現(xiàn)假陰性。（3）冷凝集素很高的血標(biāo)本，試驗(yàn)前應(yīng)保持在37℃，并用溫?zé)猁}水冼滌。（4）抗凝劑對(duì)強(qiáng)抗體無明顯影響，但可能對(duì)弱抗體或補(bǔ)體有影響。因此以脫纖維蛋白血為好。7.臨床意義（1）自身免疫性溶血性貧血時(shí)Coombs直接試驗(yàn)常為陽性。（2）部分慢性淋巴細(xì)胞白血病、淋巴瘤、傳染性單核增多癥、巨球蛋白血癥、-重鏈病、SLE、Evan綜合征（ITP伴自免溶貧）可出現(xiàn)Coombs直接試驗(yàn)陽性。（二）糖水試驗(yàn)1.原理低離子濃度的庶糖溶液在37℃2．試劑100g/L蔗糖溶液，38g/L枸櫞酸鈉溶液。3．方法（1）取患者枸櫞酸鈉抗凝血0.5ml，放于4.5ml100g/L蔗糖溶液中。（2）混合后置37℃水浴中30分鐘。（3）低速離心，觀察上清液有無溶血。4．結(jié)果陰性：無溶血；陽性：有溶血。5.質(zhì)量保證器皿必須清潔干燥，以免溶血。每次實(shí)驗(yàn)時(shí)作正常對(duì)照。6.臨床意義（1）PNH患者常呈陽性，AA-PNH綜合征患者亦可陽性。（2）部分自身免疫性溶血性貧血、巨幼細(xì)胞性貧血、遺傳性球形紅細(xì)胞增多癥患者可呈陽性。（3）健康人呈陰性反應(yīng)。（三）酸溶血試驗(yàn)（Ham’s試驗(yàn)）1.原理陣發(fā)性睡眠性血紅蛋白尿癥（PNH）病人的紅細(xì)胞由于膜有缺陷，對(duì)補(bǔ)體溶血效應(yīng)的敏感性增加，在酸化的正常血清中（PH6.6~6.8），經(jīng)37℃2．試劑（1）25molHCl溶液。（2）8.5g/LnaCl溶液。3．方法（1）取患者血4ml于有小玻璃珠的三角燒瓶內(nèi)，輕搖使脫纖維，將此去纖維血用生理鹽水洗滌紅細(xì)胞3次,配成50%紅細(xì)胞懸液。（2）取患者血4ml（不抗凝），待凝固后分離血清。（3）按（1）、（2）方法取與患者同型或AB型正常對(duì)照的血制備紅細(xì)胞懸液和血清。（4）取2支小試管，按下表操作。實(shí)驗(yàn)操作步驟反應(yīng)物待測管對(duì)照管健康人血清(ml)0.50.5患者50%RBC懸液(ml)0.025—健康人50%RBC懸液(ml)—0.0250.25molHCl(ml)0.5—（5）兩管均加塞，置37℃水浴中1小時(shí)。（6）直接觀察或低速離心后觀察兩管有無溶血現(xiàn)象。4．結(jié)果判斷待測管溶血、對(duì)照管無溶血為陽性；兩管均無溶血即為陰性。5.質(zhì)量保證（1）本試驗(yàn)不用抗凝血，因抗凝劑會(huì)阻礙溶血，降低靈敏度。一般用脫纖維蛋白血或抽血后立即注入生理鹽水中洗滌。（2）一切用具要干燥，針頭要粗，紅細(xì)胞懸液要直接滴入液體，不要沿管壁流下，以免溶血。（3）正常血清要新鮮，以免補(bǔ)體失活，造成假陰性。（4）血清酸化后試管用塞蓋好，避免因二氧化碳逸出降低了血清的酸度，以致溶血程度降低。6.臨床意義結(jié)果陽性主要見于PNH。（四）高鐵血紅蛋白還原試驗(yàn)（MHb-RT）1.原理高鐵血紅蛋白還原試驗(yàn)(methemogobinreductiontest,MHb-RT)是用亞硝酸鈉使血液中的亞鐵血紅蛋白氧化成高鐵血紅蛋白,當(dāng)紅細(xì)胞內(nèi)的G6PD含量正常時(shí),由磷酸戊糖代謝途徑生成的NADPH,可作為血液中高鐵血紅蛋白還原酶的輔酶,在遞氫體美藍(lán)的參與下,使高鐵血紅蛋白還原為亞鐵血紅蛋白。如G6PD含量不足或缺乏時(shí)，則高鐵血紅蛋白還原速度減慢，甚至不能還原。通過測定高鐵血紅蛋白的還原速度來間接反應(yīng)G6PD活性。2.試劑：（1）12.5g/L亞硝酸鈉—葡萄糖溶液：亞硝酸鈉1.25g，葡萄糖5g，加水至100ml，棕色瓶4℃可保存一個(gè)月。（2）0.0004mol/L美藍(lán)溶液：美藍(lán)15mg放乳缽中，加少量蒸餾水研磨后過濾，再加水至100ml，室溫可保存1~2個(gè)月。（3）0.02M磷酸鹽緩沖液（PBS，pH7.4）：Na2HPO4229.5mg，KH2PO452.2mg，加水至100ml。3.方法（1）取靜脈血3ml，加入已有0.3ml38g/L枸櫞酸鈉和30mg葡萄糖的抗凝管內(nèi)。（2）離心，使紅細(xì)胞與血漿之比為1:1(去掉多余的血漿)。（3）搖勻，取1.0ml全血，加亞硝酸鈉－葡萄糖液和美藍(lán)溶液各50ul，顛倒混勻12次，使與空氣中的氧充分接觸。加塞，37℃水中浴孵育3小時(shí)。剩余血未加試劑亦同時(shí)放入37℃水浴中孵育3小時(shí)。（4）取出孵育后搖勻的全血0.1ml加入含10ml0.02MPBS溶液的試管中，2min后于721分光光度計(jì)635nm處比色，水調(diào)零，測其光密度為A。（5）另取未加試劑的全血0.1ml，同（4）操作，測其光密度為B。再于此液中加亞硝酸鈉-—葡萄糖液1滴，搖勻，放置5min后比色，測其光密度為S。4.計(jì)算高鐵血紅蛋白還原率%=（1-）×100%5.正常參考值高鐵血紅蛋白還原率>75%為正常，74%~31%為中間缺乏者（雜合子），<30%為顯著缺陷（半合子或純合子）。6.質(zhì)量保證（1）紅細(xì)胞比積對(duì)結(jié)果有一定影響，比積<30%時(shí)，高鐵血紅蛋白還原率可明顯降低。故血漿與紅細(xì)胞之比應(yīng)嚴(yán)格控制在1：1（相當(dāng)于紅細(xì)胞比積35%~45%）。（2）抗凝劑以38g/L的枸櫞酸鈉或ACD液為好。草酸鹽不適于本法。（3）血液保溫后必須充分混勻，再吸取，否則結(jié)果可能稍大于100%。（4）如果溶血液顯示混濁，則不能直接比色，可能有不穩(wěn)定血紅蛋白存在，也可能因患者有珠蛋白生成障礙性貧血以致紅細(xì)胞脆性降低。前者可離心后用上清液比色，后者可加入0.1%的皂素1滴，放置10~15min，待紅細(xì)胞溶解后再比色。7.臨床意義G6PD缺乏時(shí),高鐵血紅蛋白還原率下降。蠶豆病和伯氨喹啉型藥物溶血性貧血等患者，均可出現(xiàn)下降結(jié)果。G6PD中間缺乏值（雜合子）還原率為31%~74%，臍血為41%~76%；G6PD嚴(yán)重缺乏值（純合子）還原率小于或等于30%，臍血小于40%。（五）Hb電泳(HbA2定量)1.原理血紅蛋白電泳（hemoglobinelectrophresis）的目的是檢出和確認(rèn)正常和異常血紅蛋白。由于不同血紅蛋白所帶的電荷的差別，可將其分離和鑒別。正常人血紅蛋白A、F、A2，在PH8.6緩沖液中電泳，它們均由負(fù)極端移向正極端。其移行速度以HbA最快、HbF次之、HbA2速度最慢。以醋酸纖維素薄膜作支持物作血紅蛋白電泳具有簡便、快速的優(yōu)點(diǎn)。2.試劑（1）電泳緩沖液(巴比妥緩沖液，離子強(qiáng)度0.06，PH8.6)巴比妥鈉6.38g(分子量206.18)巴比妥0.83g(分子量184.19)水加到500ml（2）浸膜緩沖液(TEB緩沖液，PH9.0,0.12M)Tris20.2gEDTANa2·2H2O2g硼酸1.5g加蒸餾水至1000ml（3）染色液：氨基黑10B0.5g甲醇50ml冰醋酸25ml水40ml（4）漂洗液：無水乙醇45ml,冰醋酸5ml,水50ml。（5）浸出液：0.4MNaOH3.方法（1）制備Hb液：新鮮抗凝血（枸櫞酸鈉抗凝）離心去血漿，用生理鹽水洗滌紅細(xì)胞3次，然后加入與紅細(xì)胞等體積的蒸餾水，劇烈震蕩，使紅細(xì)胞徹底溶解，加1/2體積的四氯化碳，震蕩，用4000r/min離心20min，吸取上層血紅蛋白液備用（此血紅蛋白液濃度為100g/L）。（2）點(diǎn)樣：取出醋纖膜（已用浸膜液浸泡至少20min）用濾紙吸去多余液體，在粗糙面距陰極端1cm處點(diǎn)上血紅蛋白液。同時(shí)平行點(diǎn)上正常血紅蛋白液作對(duì)照。點(diǎn)樣要求均勻、直、細(xì)。將膜置于電泳槽支持板的濾紙橋上（點(diǎn)樣面向下）。（3）電泳：110V，40min。（4）染色、漂洗：取出電泳后的醋纖膜放于氨基黑10B染液中染色5min，然后用漂洗液漂洗數(shù)次至無血紅蛋白區(qū)帶處接近無染料色為止。（5）定量：剪下HbA2和HbA帶,分別放入3ml和12ml的0.4MNaOH溶液中，振搖，使色帶完全洗脫，620nm波長，用空白調(diào)零。4.計(jì)算HbA2=5.正常參考值：<0.03。6.質(zhì)量保證（1）點(diǎn)樣過多，色帶易脫落或染色不透（尤其是HbA帶），會(huì)造成HbA2相對(duì)增高，出現(xiàn)假陽性結(jié)果。（2）電泳后的HbA2和HbA要充分分開，否則影響測定結(jié)果。（3）洗脫時(shí)要將Hb完全洗脫，否則影響測定結(jié)果。（4）剪帶時(shí)將HbF部份剪入HbA，HbA2帶要嚴(yán)格控制。7.臨床意義（1）通過與正常人的血紅蛋白電泳圖譜進(jìn)行比較，可發(fā)現(xiàn)異常血紅蛋白區(qū)帶。如HbH、HbE、HbBarts、HbS、HbD、HbC等血紅蛋白異常疾病。（2）HbA2增多時(shí)，見于珠蛋白合成障礙性貧血，為珠蛋白合成障礙性貧血雜合子的重要實(shí)驗(yàn)室診斷指標(biāo)。HbE病時(shí)也在HbA2區(qū)帶位置處可使HbA2增濃，但含量較大，在10%以上。HbA2輕度增加還可見于肝病、腫瘤和某些血液病。（六）抗堿血紅蛋白（HbF）測定1.原理HbF對(duì)堿性物質(zhì)有較大的抵抗力。當(dāng)血紅蛋白溶液中加入1/12mol/L氫氧化鉀作用1分鐘，HbF不發(fā)生變性、而其它Hb在堿性溶液中可變性，被加入的酸性半飽硫酸銨沉淀而終止反應(yīng)，測定其濾液中Hb含量求抗堿血紅蛋白百分含量。試劑（1）1/12mol/LKOH溶液：用1mol/LKOH溶液稀釋后標(biāo)定。（2）酸性半飽和硫酸銨：取硫酸銨400g于500ml水中，置37℃水浴24小時(shí)，不斷攪拌使達(dá)到飽和，再冷卻至25℃，攪拌一次，使過量的硫酸銨析出，上清液為飽和硫酸銨溶液。取出此液400ml，加1mol/LHCL20ml，蒸餾水加至800ml，混勻后室溫保存。方法（1）取2支試管，1支為對(duì)照管，別1支為測定管。對(duì)照管先加蒸餾水10ml，再加Hb液50ul，混勻待測。（2）于測定管加入1/12mol/LKOH1.6ml，在于25℃水浴中預(yù)溫，待溫度衡定后，加入0.1mlHb液，同時(shí)開動(dòng)秒表，搖勻數(shù)秒鐘，至1分鐘整，立即加入半飽和硫酸銨3.4ml，倒轉(zhuǎn)混勻6次，靜置10min，濾取上清液待測。用721分光光度計(jì)比色，540nm波長，水調(diào)零。計(jì)算HbF=5.正常參考值新生兒很高，占0.31~0.96，以后逐漸下降，三個(gè)月后迅速下降，2歲降至正常成人水平。正常成人<0.022（血研所）。6.質(zhì)量保證（1）Hb溶液必須新鮮，最好當(dāng)天制備，不能在冰箱中反復(fù)凍溶，否則HbF變性后抗堿性能力減弱，可使結(jié)果偏低。（2）堿液的濃度和堿化時(shí)間要準(zhǔn)確。（3）不同濾紙對(duì)結(jié)果有影響，故所用濾紙須經(jīng)選擇，而且固定品種，不要隨意更換。（4）經(jīng)變性后的濾液應(yīng)在1小時(shí)內(nèi)進(jìn)行比色。臨床意義（1）HbF絕對(duì)增多珠蛋白合成障礙性貧血時(shí)HbF增加，重型者30%~90%，中間型常5%~30%，輕型小于5%。遺傳性胎兒血紅蛋白持續(xù)性綜合征HbF高達(dá)100%。（2）HbF相對(duì)增多骨髓纖維化、白血病、漿細(xì)胞瘤、再障、PNH、卟啉病等均可出現(xiàn)相對(duì)增多。（3）HbF生理性增多孕婦和新生兒期HbF增加。（七）異丙醇試驗(yàn)1.原理非極性溶劑異丙醇，會(huì)使不穩(wěn)定血紅蛋白分子內(nèi)氫鍵結(jié)合減弱，穩(wěn)定性下降。正常血紅蛋白在40min內(nèi)保持穩(wěn)定。不穩(wěn)定血紅蛋白在加入異丙醇后5min內(nèi)即變混濁，20min形成絮狀沉淀。2.試劑（1）0.1mom/LTris緩沖液：Tris1.21g，溶于20ml水中，用1mol/LHCl（約8ml）調(diào)pH至7.4，加水至100ml。（2）17%異丙醇-Tris緩沖液：取異丙醇17ml，加0.1mom/LTris緩沖液至100ml，搖勻，室溫可保存1周。3.方法（1）取小試管2支，各加入17%異丙醇-Tris緩沖液1ml，加塞，于37℃水浴中預(yù)溫5min。（2）分別加入新鮮正常Hb液和待檢Hb液0.1ml，混勻，計(jì)時(shí)，若在37℃水浴中5min出現(xiàn)混濁，40min出現(xiàn)沉淀，則為陽性。4.正常參考值正常Hb在40min內(nèi)保持穩(wěn)定不出現(xiàn)混濁。5.質(zhì)量保證（1）Hb液要新鮮，否則會(huì)因Hb自動(dòng)氧化為高鐵Hb，肽鏈結(jié)合力減弱，出現(xiàn)假陽性結(jié)果。（2）異丙醇濃度和溫度要嚴(yán)格控制，pH不能低于7.2。（3）Hb溶液中HbF>4%，即可發(fā)生假陽性。（4）若正常對(duì)照管出現(xiàn)混濁，則要求重作此實(shí)驗(yàn)。6.臨床意義（1）不穩(wěn)定血紅蛋白的患者該試驗(yàn)常于5分鐘時(shí)出現(xiàn)混濁，20分鐘開始出現(xiàn)絨毛狀沉淀。（2）在HbF、HbH、HbE含量>4%、G6PD缺乏、珠蛋白合成障礙性貧血時(shí)均可出現(xiàn)陽性結(jié)果。第三章異常骨髓象檢查第一節(jié)急性髓細(xì)胞白血病一、M1、M2a型：（4學(xué)時(shí)）掌握：急性白血病（M1、M2a）的形態(tài)學(xué)特征及FAB及我國診斷標(biāo)準(zhǔn)，骨髓報(bào)告書寫方法。了解：急性白血病的臨床表現(xiàn)。（一）臨床特點(diǎn)1．起病急、重、常有嚴(yán)重感染、發(fā)熱、出血。2．肝、脾、淋巴結(jié)腫大較急淋輕。3．綠色瘤常見于此型。（二）實(shí)驗(yàn)室檢查1：血常規(guī)（1）Hb、PLT↓，WBC不定。（2）多數(shù)可見一定數(shù)量的原粒及早幼粒，Auer小體。（3）易見有核紅細(xì)胞。2．骨髓象（1）增生明顯～極度活躍。（2）粒系↑：M1型白血病細(xì)胞（原粒Ⅰ型+Ⅱ型+早幼粒）＞90%；M2a型白血病細(xì)胞（原粒Ⅰ型+Ⅱ型+早幼粒）30%～89%。（3）易見Auer小體。（三）細(xì)胞化學(xué)染色1．POX或SB染色：白血病細(xì)胞陽性率≥3%，但部分M1型可＜3%。2．NAP染色：積分明顯↓。二、M3型（4學(xué)時(shí)）掌握：急性白血病（M3）的形態(tài)學(xué)特征及FAB及我國診斷標(biāo)準(zhǔn)，骨髓報(bào)告書寫方法。了解：急性白血?。∕3）的臨床表現(xiàn)。（一）臨床特點(diǎn)1．易出血：常是本病的特點(diǎn)，以皮膚粘膜最明顯，其次為呼吸道、胃腸道、泌尿道、陰道、顱內(nèi)等。2．易并發(fā)DIC發(fā)生機(jī)制：（1）PLT減少和功能異?！鲅?。（2）異常早幼粒細(xì)