高效液相色譜法測定麥麩中阿魏酸含量

高效液相色譜法測定麥麩中阿魏酸含量摘要：目的建立高效液相色譜法測定麥麩中阿魏酸含量的方法，學(xué)習(xí)高效液相色譜保留值定性方法和外標(biāo)法的標(biāo)準(zhǔn)曲線定量方法。方法采用RP-HPLC法對麥麩中的阿酸魏含量進行測定，色譜柱采用HypercloneBDSC18柱(150X184.60mm,5pm,phenomenex)，以甲醇-水-冰乙酸(25:75:0.75)為流動相，pH=3,柱溫30°C；流速1.0ml/min,進樣量為2.5》L。結(jié)果在320nm波長下測定分析，測得其保留時間為8.032min.結(jié)論高效液相色譜法簡便、準(zhǔn)確、快速、重現(xiàn)性好，適用于麥麩中阿魏酸的定量分析。關(guān)鍵詞：高效液相色譜法；阿魏酸；麥麩DeterminationofFerulicAcidinWheatBran:High

PerformanceLiquidChromatographyAbstract:ObjectiveToDeterminationoftheestablishmentofferulicacidinwheatbranmethod,learningHPLCretentionqualitativemethodsandastandardcurveofexternalstandardmethodofquantitative.MethodRP-HPLCmethodwasusedtomeasureferulicacidinwheatbran.HypercloneBDSC］gcolumn(150x4.60mm,5ym,phenomenex)andmobilephasemethanolwater-aceticacid(25:75:0.75),pH=3,temperatureofcolumnwas30C;flowrateof1.0ml/min,theinputdosagewas2.5gL.Resultmeasuredinthewavelengthof320nm,themeasuredretentiontimeofobtainingthe8.032min.ConclusionHPLCmethodissimple,accurate,rapid,reproducible,andissuitableforthequantitativeanalysisofferulicacidinwheatbran.Keywords:HPLC；ferulicacid；wheatbran;阿魏酸(FerulicAcid,FA)，化學(xué)名4-羥基-3-甲氧基--丙烯酸，是木質(zhì)素的降解產(chǎn)物,屬于酚類化合物。阿魏酸具有抗氧化、抗血栓形成、降血脂［1］，調(diào)節(jié)人體免疫功能等特性，現(xiàn)如今廣泛用于食品、保健品等領(lǐng)域，極具有開發(fā)的價值。我國是小麥種植的大國，麥麩是面粉加工中重要的副產(chǎn)品,而阿魏酸是麥麩中含量最高的酚酸⑵。麥麩通常占了小麥重量的14%—19%［3］，則阿魏酸的含量更值得研究了。通常有酶法處理提取阿魏酸⑷，薄層掃描法(TLCS)、高效毛細管電泳法等⑸測定阿魏酸的含量，而最為普遍的是用高效液相色譜法(HPLC)來定量分析。本文則是用此法來測定麥麩中阿魏酸的含量。儀器和試劑1.1儀器高效液相色譜儀；電子天平；純水儀；超聲波清洗機等。(記錄儀器型號規(guī)格)1.2試劑甲醇為色譜純、水為超純水、冰乙酸、乙醇以及鹽酸為分析純等；阿魏酸對照品(sigma公司提供)。材料和方法麥麩材料麥麩材料由四川農(nóng)業(yè)大學(xué)實驗室提供。樣品前處理稱取10g烘干至恒重的小麥籽粒用粉碎機粉碎后，浸入lOOmL蒸餾水中加淀粉酶0.2g,在55°C下，用4%NaOH調(diào)pH=8.0,于恒溫水浴鍋水浴1h(每lOmin定期振蕩)，再用胃蛋白酶0.1g在37C下，用6mol?L-iHCl溶液調(diào)pH=2，于恒溫氣浴搖床中再次震蕩攪拌lh。之后再用四層紗布過濾，取濾渣于105C下烘干2h滅酶，得干沉淀，再次稱重記錄實際稱量質(zhì)量)。干沉淀用體積比2:1的堿醇(質(zhì)量分?jǐn)?shù)4%的NaOH、無水乙醇)溶液按料液比1：12(w/v)浸潤，在40C下加入0.3g無水Na^SO,超聲0.5h。用6mol?L-1HCL溶液調(diào)節(jié)pH=2，6000r?min-1離心15min，去殘渣。上清液于50C旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)出其中的乙醇。將余液用流動相定容至50mL，搖勻，用0.45pm微孔濾膜濾過即可。2.3色譜條件色譜柱：HypercloneBDSC柱(150X4.60mm，5pm，phenomenex)；流動相：甲醇-水-18冰乙酸(25:75:0.75)，pH=3；柱溫30C；流速l.OmL?min-1，檢測波長320nm，進樣量2.5pL。結(jié)果與分析3.1標(biāo)準(zhǔn)曲線的制備及關(guān)系分別吸取濃度為&72ug/L的L標(biāo)準(zhǔn)溶液2.5ML、5ML、7.5pL、10》L、15Ml，注入高效液相色譜儀中，記錄數(shù)據(jù)得到表1,以峰面積為縱坐標(biāo)(Y)，以標(biāo)準(zhǔn)進樣量(ug)為橫坐標(biāo)(X)繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線見圖1。得阿魏酸的回歸方程為：y:峰面積x：標(biāo)準(zhǔn)進樣量(ug)表1阿魏酸標(biāo)準(zhǔn)樣品測定結(jié)果文圧名進樣體和山保留時間進樣量ug峰面和212.58.0072118184240.62257.99843.6361196.2,237.57.97365.4547164.624107.96587.2737606.925157.915130.81094270由表可得到阿魏酸的保留時間為7.976min,結(jié)果表明阿魏酸進樣量在21.8-130.8ug之間與峰面積呈良好的線性關(guān)系。3.2、樣品含量的測定本實驗中選取甲醇-水-冰乙酸比例為25:75:0.75作為流動相，是因為在此條件下流動相為最佳流動相配比，流動相的恰當(dāng)選擇對改善分離效果能產(chǎn)生輔助效應(yīng)［6］，色譜圖的保留時間、峰形都比較適宜。對此，分別將樣品按2.2處理后在上述色譜條件下取樣品2.5》L進樣測定，色譜圖見下圖3。ab圖3標(biāo)準(zhǔn)樣品(a)和樣品3(b)的色譜圖根據(jù)圖1和表1得出的線性回歸方程y=8386.6x-151.68(R2=0.9999)以及圖3中樣品的峰面積，得到結(jié)果如下表2。表2文件名進樣體積ul保留時間r.、厶冃進樣里ug峰面積Cug/ml樣品2.58.03222.57903189209.69031.61334討論在實驗過程中，應(yīng)注意進樣的準(zhǔn)確性、出峰時間等。本次試驗中標(biāo)準(zhǔn)回歸方程的R2值為0.9999，即說明其準(zhǔn)確度很高。本實驗采用甲醇-水-冰乙酸25:75:0.75作為流動相，色譜峰的保留時間、峰面積等都是最適宜的，方法簡單、分離效果好。用高效液相色譜法比其他方法更準(zhǔn)確、更科學(xué)，是值得推廣的檢測麥麩中阿魏酸的含量。參考文獻黃瑾,胡晉紅,朱全剛.阿魏酸及其衍生物的藥理作用.中草藥,2001,24(7):522-525程三六，嚴(yán)克華,朱德文，等.2BTP2120型水稻育秧播種設(shè)備的研發(fā)[J].農(nóng)業(yè)裝備技術(shù)，2006,33(4):14-15.CMaes,JADelcour.Structuralcharacterizationofwaterextractableandwater-unextractablearabinoxylansinwheatbran[J].JournalofCerealSc