高效液相色譜設計方案

藥物分析設計性實驗

設計方案維生素C及其制劑的含量測定藥學2011級(2)班李智(1103501275)李集毅(1103501276)指導教師：2014年4月一、實驗目的掌握一般藥物含量測定實驗的設計方法掌握維生素C高效液相色譜法含量測定的原理和方法掌握標準曲線法在藥品含量測定檢驗中的運用二、實驗器材儀器：島津高效液相色譜儀，色譜柱C18;電子天平;燒杯，棕色容量瓶（50ml*7）0.145口m濾膜，棕色容量瓶（20ml*2）試劑：維生素C片（0.1g/片）（市售），維生素C標準對照品（0.1mg/ml）;二次蒸餾水，甲醇（0.1mg/ml色譜純），草酸（分析純），磷酸二氫鉀（分析純），磷酸氫二鉀（分析純）三、實驗原理標準曲線法：采用梯度濃度稀釋法，將對照品溶液稀釋至不同濃度的待測溶液，制備成標準溶液，用高效液相色譜法按標準進樣得樣品吸收峰（峰面積），繪制成標準曲線。將供試品制劑制成規(guī)定含量的待測品，進行高效液相色譜測定，對比對照品溶液標準曲線，查看供試品是否符合含量測定要求1色譜條件色譜柱C18,流動相：磷酸鹽緩沖溶液（pH=5.18）:甲醇=95：5,流速0.18ml/min,紫外檢測器，檢測波長254nm,進樣10ul。2供試品溶液與對照品溶液的制備（1）取本品20片（規(guī)格0.1g）,精密稱定，研細，取本品1片（約相當于維生素C100mg）,將待測樣品用0.1%的草酸溶解至20ml容量瓶，定容；取上述樣品1ml于50ml的容量瓶中，用0.1%的草酸精確定容，制成每1ml含0.1mg的溶液，分

析前用0.145口m濾膜過濾。(2)維生素C對照品溶液的制備:精密稱取維生素C對照品適量，加0.1%的草酸使溶解制成0.1mg/ml的標準溶液。3標準工作曲線的繪制精密稱取對照品50.80mg置50ml量瓶中，用0.1%草酸溶液稀釋至刻度，精密量取0.5ml,2.5ml,5ml,12.5ml,25ml分別置50ml量瓶中，用0.1%草酸溶液稀釋至刻度，制成維生素C標準溶液，用0.45um濾膜過濾，用微量進樣器進樣10ul,依次測出峰面積,然后以維生素C標準溶液質(zhì)量濃度(mg/ml)作自變量，相對應的峰面積作因變量，繪制標準工作曲線，標準曲線的相關系數(shù)R=0.9999,說明曲線的線性關系良好。4計算維生素C片的標示量％根據(jù)《中國藥典》本品含維生素C(CHO)應為標示量90.0%?110.0%686計算方法：y=aC+bCxDxV—標示量％標示量％=xlOO%xlOO%豐二：口.

標示里五、注意事項1.維生素C溶液熱穩(wěn)定性較差，在中性或堿性水溶液中易被氧化，但在酸性溶液中卻很穩(wěn)定，因此用0.1%草酸溶液作溶劑來溶解樣品及標樣。2.由于維生素C對光不穩(wěn)定，遇氧易分解，故本實驗應避光操作，整個實驗均用棕色容量瓶定容［2］，流動相脫氣后盡量不要引起氣泡。3?維生素C溶液需現(xiàn)用現(xiàn)配，且最好在2h內(nèi)使用，超過2h,所以配制的VC溶液可能因為氧化降解而導致溶度下降，從而影響實驗結(jié)果。六思考題1?高效液相色譜測維生素C的優(yōu)缺點？答:維生素C測定的方法一般有化學法、比色法、紫外分光光度法、熒光法等，這些方法所需試劑較多、操作繁瑣,由上述分析可知,采用高效液相色譜法測定維生素C片的含量是可靠的，操作簡便、快速、穩(wěn)定，結(jié)果準確可靠。2溶解試樣時，為什么要加入新煮沸的冷蒸餾水？答:維生素C的E°=0.18V,凡能被12直接氧化的物質(zhì)均有干擾。此試樣平行測定的精密度不高，故本實驗要求適當