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文檔簡介

1實(shí)驗(yàn)二細(xì)胞中多糖的定性、定位與(半)定量

過碘酸雪夫反應(yīng)(PAS)顯示糖元和其它多糖物質(zhì)2一、實(shí)驗(yàn)原理:過碘酸(periodicacid)是一種氧化劑,它可把多糖的葡萄糖分子的兩個相鄰的帶有羥基的C-C-鍵打開,而生成醛基再與染色劑結(jié)合。Schiff試劑中的堿性復(fù)紅(fuchsinbasic)是一種混合物,經(jīng)亞硫酸和二氧化硫的作用,醌式結(jié)構(gòu)的雙鍵被破壞南而消失,已成為無色復(fù)紅,再經(jīng)過氧化后的醛基與無色復(fù)紅液進(jìn)行結(jié)合呈紫紅色。

3二、試劑配制1.過碘酸酒精溶液配法過碘酸(HIO4·2H2O)0.4克95%酒精35毫升M/5醋酸鈉(27.2克毫升H2O)5毫升蒸餾水或用0.5-0.1%過磺酸水溶液10毫升上液保存于冰箱,瓶加黑紙,溶液顯黃色即失效。2.Schiff氏酒精溶液配法(配后略帶紅色無妨)Schiff氏原液11.5毫升1N鹽酸0.5毫升純酒精23.0毫升或用Schiff氏原液,配法與Feulgen反應(yīng)所用相同。3.采取唾液的方法刷牙、喇口之后,用1%的醋酸在舌尖部稍稍接觸,唾液開始分泌之后,用燒杯盛接之,此唾液經(jīng)過過濾后即可應(yīng)用。4.亞硫酸水(與Feulgen反應(yīng)所用相同)。4三、操作方法1.把馬鈴薯塊莖用刀片徒手切成薄片。2浸入高碘酸溶液5-15min(EP管)3移入70%乙醇中侵入片刻(10秒)(EP管)。4Shiff試劑染色15min(EP管).5亞硫酸溶液洗3次,每次1分鐘(EP管)6蒸餾水洗片刻(EP管)7裝片鏡檢三、結(jié)果糖元呈紫紅顆粒。經(jīng)過唾液(37度)或淀粉酶消化者則無糖元的紫紅顆粒。染糖元的對照片須先用唾液配的0.1-1%淀粉酶消化30-60分鐘后再入染色液。(對照略)5碘酒染色法用碘酒染色5分鐘,漂洗后置于顯微鏡下觀察。6四、作業(yè)1實(shí)驗(yàn)的原理是什

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