新試驗(yàn)一 蘆丁的提取、分離與鑒定

PAGEPAGE1實(shí)驗(yàn)一蘆丁的提取、精制與鑒定一、實(shí)驗(yàn)?zāi)康呐c要求l、以蘆丁為例學(xué)習(xí)黃酮類化合物的提取方法；2、掌握黃酮類成分的主要性質(zhì)及黃酮苷，苷元和糖部分的鑒定方法。R=-glu-rha蘆丁R=H槲皮素蘆丁溶解度：冷水1：8000熱水1：200冷乙醇1：300熱乙醇1：30難溶于乙酸乙酯、丙酮，不溶于苯、氯仿、乙醚、及石油醚等溶劑。槲皮素溶解度：冷乙醇1：650熱乙醇1：60可溶于甲醇、冰醋酸、乙酸乙酯、丙酮、吡啶，不溶于石油醚、乙醚、氯仿和水中。二、實(shí)驗(yàn)原理本實(shí)驗(yàn)是利用蘆丁在熱水中和冷水中溶解度相差較大的性質(zhì)，用熱水提取和精制；蕓香苷屬于苷類化合物，可被稀酸水解成槲皮素（苷元），葡萄糖和鼠李糖。蘆丁和槲皮素通過(guò)化學(xué)反應(yīng)，色譜法和光譜分析進(jìn)行檢識(shí)與鑒定。三、實(shí)驗(yàn)內(nèi)容（一）提取分離和純化l、蘆丁的提?。?、精制（重結(jié)晶）：3、蘆丁的水解：流程圖如下：

槐米（20g）研碎，于500ml燒杯中，加350，250ml水煮沸15min,10min棉花過(guò)濾提取液放置1-1.5h抽濾濾液（棄去）沉淀物（粗品蘆丁）水解精制1/2粗品蘆丁1/2粗品蘆丁150ml，1%H2SO480倍水加熱溶解，趁熱抽濾直火加熱水解30min 放冷抽濾，沉淀水洗至中性不溶物（棄去）濾液放置1-1.5h，抽濾濾液粗品槲皮素精品蘆丁氫氧化鈣調(diào)pH至中性過(guò)濾濾渣（棄去）水解液（水浴濃縮至2ml）(二)鑒定l、化學(xué)檢識(shí)取蘆丁和槲皮素少量，置2支試管中分別加乙醇8ml使溶解(1)鹽酸—鎂粉反應(yīng)：取蘆丁和槲皮素乙醇液0.5ml，置2支試管中分別加濃鹽酸5滴，再加少量鎂粉，觀察顏色變化。(2)Molish反應(yīng)：取蘆丁和槲皮素乙醇液0.5ml，置2支試管中分別加10%α—萘酚0.5ml搖勻，傾斜試管，沿管壁緩緩滴加濃硫酸0.5ml，靜置，觀察二層溶液界面處顏色變化，并比較蘆丁和槲皮素的區(qū)別。(3)FeCL3反應(yīng)：取蘆丁和槲皮素乙醇液0.5ml，置2支試管中分別加1%三氯化鐵乙醇液幾滴，觀察顏色變化。(4)AlCl3反應(yīng)：取蘆丁和槲皮素乙醇液0.5ml，置2支試管中分別加1%三氯化鋁乙醇液幾滴，先置可見光下觀察后，置紫外燈下觀察顏色變化。(5)Mg(Ac)2反應(yīng)：取蘆丁和槲皮素乙醇液0.5ml，置2支試管中分別加1%乙酸鎂乙醇液幾滴，觀察顏色變化。2、色譜鑒定(1)槲皮素和蘆丁的紙色譜鑒定點(diǎn)樣：取圓形濾紙，距圓心1厘米處用鉛筆劃一同心圓，為起始線，間隔1厘米處點(diǎn)樣品（a,b,c,d）。將點(diǎn)好樣品的濾紙置于培養(yǎng)皿中分別用展開劑①、②徑向展開。a自制蘆丁乙醇液b蘆丁對(duì)照品乙醇液c自制槲皮素乙醇液d槲皮素對(duì)照品乙醇液。展開劑：①正丁醇—醋酸—水(4：1：5，上層)②正丁醇—醋酸—水(4：1：5，下層)顯色：①可見光下觀察色斑。②噴1％AlCl3乙醇液，再置紫外燈下觀察熒光。(2)糖的紙層析鑒定點(diǎn)樣：取圓形濾紙，同上法點(diǎn)樣和展開（e,f,g）。e水解液f葡萄糖對(duì)照品水溶液g鼠李糖對(duì)照品水溶液展開劑：正丁醇—醋酸—水(4：1：5，上層)顯色：噴灑苯胺-鄰苯二甲酸，電爐上加熱烘烤至色斑出現(xiàn)。四，分析討論蘆丁酸水解時(shí)有何現(xiàn)象，如何解釋？槲皮素和蘆丁紙色譜鑒定時(shí)，用BAW（4：1：5）上層和下層展開后，解釋兩者的相對(duì)比移值大小關(guān)系？葡萄糖和鼠李糖的紙層析鑒定時(shí)，用BAW（4：1：5）上層展開后，何者相對(duì)比移值較大，為什么？蘆丁，槲皮素鑒定（二）槲皮素衍生物的制備槲皮素五乙?；锏闹苽洌喝￠纹に亟Y(jié)晶200㎎，置于干燥三角錐形瓶中，加5ml醋酐，用毛細(xì)管滴加農(nóng)硫酸一小滴，振搖使完全溶解，水浴上加熱30分鐘（注意應(yīng)避免反應(yīng)過(guò)程中引入水份），放冷后將反應(yīng)液在攪拌下傾入100ml水中，一直攪拌至油滴消失，且有固體沉淀析出為止，抽濾沉淀并洗滌，干燥后以95％乙醇重結(jié)晶，即得槲皮素五乙?；餆o(wú)色結(jié)晶。蘆丁的UV,HPLC,IR分析（一）蘆丁的UV分析（實(shí)驗(yàn)地點(diǎn)，二號(hào)試驗(yàn)樓A棟411室）：（二）蘆丁的HPLC分析（實(shí)驗(yàn)地點(diǎn)，二號(hào)試驗(yàn)樓A棟411室）：1，色譜條件與系統(tǒng)適應(yīng)性試驗(yàn)以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑，以甲醇－1％冰乙酸溶液（32：68）為流動(dòng)相，檢測(cè)波長(zhǎng)為257nm，理論塔板數(shù)按蘆丁峰計(jì)算不低于20002，對(duì)照品溶液的制備：精密稱取在1203，供試品溶液的制備：取自制精制品約g，精密稱定，置ml