DB21-T 3286-2020水中 5種磺胺類抗生素的測定 液相色譜-質(zhì)譜法

ICS13.020.40

Z10

備案號：73748-2020DB21

遼寧省地方標(biāo)準(zhǔn)

DB21/T3286—2020

水質(zhì)5種磺胺類抗生素的測定

固相萃取/高效液相色譜-三重四極桿串聯(lián)

質(zhì)譜法

DB21/T3286—2020

前言

本標(biāo)準(zhǔn)按照GB/T1.1—2009《標(biāo)準(zhǔn)化工作導(dǎo)則第1部分：標(biāo)準(zhǔn)的結(jié)構(gòu)和編寫》給出的規(guī)則編寫。

本標(biāo)準(zhǔn)附錄A為資料性附錄。

本標(biāo)準(zhǔn)由大連市市場監(jiān)督管理局提出。

本標(biāo)準(zhǔn)由遼寧省生態(tài)環(huán)境廳歸口。

本標(biāo)準(zhǔn)主要起草單位：遼寧省大連生態(tài)環(huán)境監(jiān)測中心。

本標(biāo)準(zhǔn)主要起草人：付曉燕、劉蓮蓮、楊碩、楊萌。

本標(biāo)準(zhǔn)發(fā)布實施后，任何單位和個人如有問題和意見建議，均可以通過來電和來函等方式進(jìn)行反饋，

我們將及時答復(fù)并認(rèn)真處理，根據(jù)實際情況依法進(jìn)行評估及復(fù)審。

歸口管理部門通訊地址：遼寧省生態(tài)環(huán)境廳（沈陽市渾南區(qū)雙園路30甲），聯(lián)系電話

標(biāo)準(zhǔn)起草單位通訊地址：遼寧省大連生態(tài)環(huán)境監(jiān)測中心（遼寧省大連市沙河口區(qū)連山街58號），聯(lián)

系電話

II

DB21/T3286—2020

水質(zhì)5種磺胺類抗生素的測定

固相萃取/高效液相色譜-三重四極桿串聯(lián)質(zhì)譜法

警告：實驗中所使用的甲醇、磺胺類抗生素屬于有毒有機物，實驗操作時應(yīng)避免接觸皮膚和衣物，

溶液配制過程應(yīng)在通風(fēng)櫥內(nèi)進(jìn)行。

1適用范圍

本標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定了測定水中磺胺嘧啶、磺胺甲基嘧啶、磺胺二甲嘧啶、磺胺間甲氧嘧啶和磺胺甲惡唑等

5種磺胺類抗生素的高效液相色譜-三重四極桿串聯(lián)質(zhì)譜法。

本標(biāo)準(zhǔn)適用于地表水、地下水、海水、工業(yè)廢水和生活污水中5種磺胺類抗生素的測定。

當(dāng)樣品體積為100ml，濃縮定容至1.0ml，進(jìn)樣體積為10.0μl時，本方法磺胺嘧啶、磺胺甲基嘧

啶、磺胺二甲嘧啶、磺胺間甲氧嘧啶和磺胺甲惡唑的檢出限分別為0.01μg/L、0.01μg/L、0.01μg/L、

0.009μg/L和0.01μg/L，測定下限分別為0.04μg/L、0.04μg/L、0.04μg/L、0.036μg/L和0.04

μg/L，測定上限均為100μg/L。

2規(guī)范性引用文件

下列文件對于本文件的應(yīng)用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，僅所注日期的版本適用于本文

件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改單）適用于本文件。

GB/T6682分析實驗室用水規(guī)格和試驗方法

GB/T14581水質(zhì)湖泊和水庫采樣技術(shù)指導(dǎo)

HJ91.1污水監(jiān)測技術(shù)規(guī)范（部分代替HJ/T91污水監(jiān)測技術(shù)規(guī)范）

HJ/T91地表水和污水監(jiān)測技術(shù)規(guī)范

HJ/T164地下水環(huán)境監(jiān)測技術(shù)規(guī)范

HJ442近岸海域環(huán)境監(jiān)測規(guī)范

HJ493水質(zhì)樣品的保存和管理技術(shù)規(guī)定

3方法原理

水樣經(jīng)固相萃取后，水中磺胺類抗生素經(jīng)液相色譜儀分離，用串聯(lián)質(zhì)譜儀在多反應(yīng)監(jiān)測（MRM）條

件下測定，根據(jù)保留時間和特征離子對定性，內(nèi)標(biāo)法以峰面積（或峰高）定量。

4干擾和消除

當(dāng)樣品中存在基質(zhì)干擾時，可通過優(yōu)化色譜條件、稀釋樣品、減少進(jìn)樣體積以及對樣品進(jìn)行預(yù)處理

等方式降低或消除。

5試劑

1

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除非另有說明，分析時均使用符合國家標(biāo)準(zhǔn)的優(yōu)級純試劑，實驗用水符合GB/T6682，一級。

5.1甲醇（CH3OH）：液相色譜純。

5.2甲酸（HCOOH）。

5.3甲酸溶液：1+1000（V/V）。

量取1.0ml甲酸（5.2）緩慢加入1L實驗用水中，混勻。

5.4標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)

5.4.1磺胺嘧啶、磺胺甲基嘧啶、磺胺二甲嘧啶、磺胺間甲氧嘧啶、磺胺甲惡唑標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)：純度≥99%。

13

5.4.2磺胺甲基嘧啶-C6內(nèi)標(biāo)標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)：純度≥99%。

5.5標(biāo)準(zhǔn)溶液

5.5.1磺胺類抗生素標(biāo)準(zhǔn)貯備液：ρ=100.0mg/L。

準(zhǔn)確稱取適量的每種磺胺類標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)（5.4.1），用甲醇配成100.0mg/L的標(biāo)準(zhǔn)貯備液，或直接購

買有證標(biāo)準(zhǔn)溶液，貯備液在0~4℃冷藏避光保存，可穩(wěn)定保存20天，或參照制造商的產(chǎn)品說明保存。

5.5.2磺胺類抗生素標(biāo)準(zhǔn)使用液：ρ=1.00mg/L。

將磺胺類抗生素標(biāo)準(zhǔn)貯備溶液（5.5.1）用甲醇稀釋至1.0mg/L，現(xiàn)用現(xiàn)配。

13

5.5.3磺胺甲基嘧啶-C6標(biāo)準(zhǔn)貯備液：ρ=100.0mg/L。

13

準(zhǔn)確稱取適量的磺胺甲基嘧啶-C6標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)（5.4.2），用甲醇（5.1）配成100.0mg/L的標(biāo)準(zhǔn)貯備

液，或直接購買有證標(biāo)準(zhǔn)溶液，貯備液在0~4℃冷藏避光保存或參照制造商的產(chǎn)品說明保存使用。

13

5.5.4磺胺甲基嘧啶-C6標(biāo)準(zhǔn)使用液：ρ=1.0mg/L。

13

將磺胺甲基嘧啶-C6標(biāo)準(zhǔn)貯備溶液（5.5.3）用甲醇（5.1）稀釋至1.0mg/L，現(xiàn)用現(xiàn)配。

5.6氮氣：純度≥99.9%。

6儀器和設(shè)備

6.1高效液相色譜/三重四極桿質(zhì)譜儀：高效液相色譜儀具備梯度洗脫功能；三重四極桿質(zhì)譜儀配有電

噴霧離子化源（ESI）。

6.2色譜柱：填料為硅膠基質(zhì)C18，粒徑1.8μm，柱長100mm，內(nèi)徑2.1mm，或其他等效色譜柱。

6.3固相萃取裝置。

6.4濃縮裝置：K-D濃縮器、氮吹儀等性能相當(dāng)?shù)脑O(shè)備。

6.5濾膜：針式有機相過濾器，孔徑0.22μm，直徑13mm，玻璃纖維、親水性聚丙烯、親水性聚四氟

乙烯（PTFE）或其它等效材質(zhì)。

6.6固相萃取柱：填料為二乙烯苯和N-乙烯基吡咯烷酮共聚物或同等柱效的萃取柱，規(guī)格為6ml/500

mg。

6.7棕色樣品瓶：2.0ml。

6.8采樣瓶：500ml棕色玻璃瓶，螺旋蓋（具聚四氟乙烯涂層的密封墊）。

6.9微量注射器：10μl、50μl、100μl、1ml。

7樣品

7.1樣品采集與保存

2

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按照GB/T14581、HJ91.1、HJ/T91、HJ/T164、HJ442和HJ493的相關(guān)規(guī)定進(jìn)行樣品的采集和保

存。

采集樣品時，向采樣瓶（6.8）中加入甲酸（5.2）500μl，然后采集樣品至滿瓶，擰緊螺旋蓋密

封，搖勻。水樣0~4℃冷藏避光保存，48h內(nèi)完成分析。

7.2試樣制備

活化：用10ml甲醇（5.1）活化固相萃取柱，保證固相萃取柱柱頭浸潤。再用10ml實驗用水活化

固相萃取柱，保證固相萃取柱柱頭浸潤。

上樣：水樣上樣前放置至室溫，準(zhǔn)確量取100ml水樣，水樣以3~5ml/min的流速通過固相萃取柱。

淋洗：用10ml實驗用水淋洗固相萃取柱，將在固相萃取柱上保留較弱的雜質(zhì)淋洗下來，棄去淋洗

液。

洗脫：用10ml甲醇（5.1）洗脫富集后的固相萃取柱，并用接收管接收甲醇洗脫液。

濃縮：將上述提取溶液濃縮至低于1.0ml近干，加甲酸溶液（5.3）定容到1.0ml，最后加入內(nèi)標(biāo)

使用液10.0μl，經(jīng)0.22μm濾膜（6.5）過濾，置于棕色樣品瓶（6.7）中，待測定。

7.3空白試樣的制備

用實驗用水代替樣品按照試樣制備（7.2）相同操作步驟，制備空白試樣。

8分析步驟

8.1儀器參考條件

8.1.1液相色譜儀參考條件

流動相：流動相A為甲醇（5.1），流動相B為甲酸溶液（5.3），線性梯度洗脫程序見表1。

柱溫：40℃；

進(jìn)樣體積：10μl；

流速：0.2ml/min；

表1液相色譜流動相線性梯度洗脫程序

時間（min）流動相A（%）流動相B（%）

0595

0.5595

5.03070

7.03070

7.59010

8.59010

9.0595

10.0595

8.1.2質(zhì)譜儀參考條件

3

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正離子模式（ESI+）；

離子化電壓：3000V；

離子源溫度：120℃；

檢測方式：MRM，多反應(yīng)監(jiān)測條件見表2。

表2目標(biāo)化合物的多反應(yīng)監(jiān)測條件

目標(biāo)化合物檢測離子對（m/z）駐留時間（ms）錐孔電壓（V）碰撞電壓（V）

251.0→92.0*30

磺胺嘧啶2030

251.0→156.015

265.1→156.128

磺胺甲基嘧啶2035

265.1→108.1*16

279.1→92.2*28

磺胺二甲嘧啶2030

279.1→186.115

281.1→92.1*28

磺胺間甲氧嘧啶2030

281.1→156.115

254.0→92.2*30

磺胺甲惡唑2030

254.0→156.220

13

磺胺甲基嘧啶-C6271.0→162.0*203528

注：帶*的為定量離子對

8.2校準(zhǔn)

8.2.1校準(zhǔn)曲線的建立

取一定量磺胺類抗生素標(biāo)準(zhǔn)使用液（5.5.2）于甲酸（5.3）水溶液中，制備至少5個濃度點的標(biāo)準(zhǔn)

系列，磺胺類抗生素的質(zhì)量濃度分別為4.0μg/L、10.0μg/L、20.0μg/L、50.0μg/L和100μg/L，

每毫升標(biāo)準(zhǔn)系列溶液中加入10.0μl內(nèi)標(biāo)使用液（5.5.4），貯存在棕色樣品瓶（6.7）中。

將標(biāo)準(zhǔn)系列溶液按濃度由低到高的順序依次進(jìn)樣，以標(biāo)準(zhǔn)系列溶液中磺胺類抗生素的質(zhì)量濃度為橫

坐標(biāo)，磺胺類抗生素的峰面積（或峰高）與內(nèi)標(biāo)物的峰面積（或峰高）比值和內(nèi)標(biāo)物濃度的乘積為縱坐

標(biāo)，繪制校準(zhǔn)曲線。

8.2.2標(biāo)準(zhǔn)樣品譜圖

磺胺類抗生素和內(nèi)標(biāo)物的總離子流圖，見圖1。

4

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圖1磺胺類抗生素和內(nèi)標(biāo)物的總離子流圖

13

（注：1：磺胺嘧啶、2：磺胺甲基嘧啶、3：磺胺甲基嘧啶-C6、4：磺胺二甲嘧啶、5：磺胺間甲氧嘧

啶、6：磺胺甲惡唑）

8.3測定

8.3.1試樣測定

按照與校準(zhǔn)曲線的建立（8.1）相同的參考條件，進(jìn)樣10μl，進(jìn)行試樣（7.2）的測定。

注：若樣品中磺胺類抗生素濃度過高，超出校準(zhǔn)曲線范圍，應(yīng)稀釋后測定，采用甲酸（5.3）水溶液進(jìn)行稀釋。

8.3.2空白試驗

按照與校準(zhǔn)曲線的建立（8.1）相同的參考條件，進(jìn)樣10μl，進(jìn)行空白試樣（7.3）的測定。

9結(jié)果計算與表示

9.1定性分析

按照表2中確定的母離子和子離子進(jìn)行檢測，在相同實驗條件下，試樣中磺胺類抗生素的保留時間

與標(biāo)準(zhǔn)樣品中磺胺類抗生素的保留時間相對偏差的絕對值應(yīng)小于2.5%；且待測樣品中定性離子的相對豐

度（Ksam）與濃度接近的標(biāo)準(zhǔn)溶液中對應(yīng)的定性離子相對豐度（Kstd）進(jìn)行比較，所得偏差在表3規(guī)定的

最大允許偏差范圍內(nèi)，則可判定為樣品中存在磺胺類抗生素。

A2

Ksam=×100%...........................................（1）

A1

式中：

Ksam——樣品中磺胺類抗生素定性離子的相對豐度，%；

A2——樣品中磺胺類抗生素定性離子的峰面積（或峰高）；

5

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A1——樣品中磺胺類抗生素定量離子的峰面積（或峰高）。

Astd2

Kstd=×100%..........................................（2）

Astd1

式中：

Kstd——標(biāo)準(zhǔn)樣品中磺胺類抗生素定性離子的相對豐度，%；

Astd2——標(biāo)準(zhǔn)樣品中磺胺類抗生素定性離子的峰面積（或峰高）；

Astd1——標(biāo)準(zhǔn)樣品中磺胺類抗生素酸定量離子的峰面積（或峰高）。

表3定性確證時相對離子豐度的最大允許偏差

KstdKsam相對于Kstd的最大允許偏差

Kstd＞5020%

20＜Kstd≤5025%

10＜Kstd≤2030%

Kstd≤1050%

9.2定量分析

當(dāng)磺胺類抗生素采用標(biāo)準(zhǔn)曲線法進(jìn)行定量時，樣品中磺胺類抗生素的質(zhì)量濃度ρx按公式（3）計算：

V

1iD..........................................（3）

xV

式中：

ρx——樣品中磺胺類抗生素的質(zhì)量濃度，μg/L；

ρ1——計算磺胺類抗生素的峰面積（或峰高）與內(nèi)標(biāo)物的峰面積（或峰高）比值和內(nèi)標(biāo)物濃度的

乘積后，由標(biāo)準(zhǔn)曲線（8.2.1）所得試樣中磺胺類抗生素的質(zhì)量濃度，μg/L；

Vi——萃取液濃縮后的體積，ml；

V——水樣體積，ml；

D——樣品稀釋倍數(shù)。

9.3結(jié)果表示

當(dāng)測定結(jié)果小于1mg/L時，保留至小數(shù)點后三位；當(dāng)測定結(jié)果大于或等于1mg/L時，保留三位有

效數(shù)字。

10精密度和準(zhǔn)確度

10.1精密度

3家實驗室分別對磺胺類抗生素的加標(biāo)濃度為0.050μg/L和0.500μg/L的地表水、廢水和海水進(jìn)

行了6次重復(fù)測定。

6

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地表水實驗室內(nèi)相對標(biāo)準(zhǔn)偏差分別在5.9%~10%、4.3%~12%之間，實驗室間相對標(biāo)準(zhǔn)偏差分別在

1.5%~4.2%、0.6%~1.6%之間，重復(fù)性限分別在0.009μg/L~0.011μg/L、0.065μg/L~0.078μg/L

之間，再現(xiàn)性限分別在0.009μg/L~0.012μg/L、0.065μg/L~0.078μg/L之間。

廢水實驗室內(nèi)相對標(biāo)準(zhǔn)偏差分別在5.0%~10%、3.4%~8.4%之間，實驗室間相對標(biāo)準(zhǔn)偏差分別在

1.3%~4.5%、0.7%~2.9%之間，重復(fù)性限分別在0.009μg/L~0.011μg/L、0.066μg/L~0.077μg/L

之間，再現(xiàn)性限分別在0.010μg/L~0.011μg/L、0.066μg/L~0.077μg/L之間。

海水實驗室內(nèi)相對標(biāo)準(zhǔn)偏差分別在5.1%~10%、4.3%~7.4%之間，實驗室間相對標(biāo)準(zhǔn)偏差分別在

0.6%~4.1%、0.3%~1.3%之間，重復(fù)性限分別在0.008μg/L~0.0010μg/L、0.070μg/L~0.079μg/L

之間，再現(xiàn)性限分別在0.008μg/L~0.010μg/L、0.071μg/L~0.079μg/L之間，具體見附錄A中表

A.1。

10.2準(zhǔn)確度

3家實驗室分別對磺胺類抗生素的加標(biāo)濃度為0.050μg/L和0.500μg/L的地表水、廢水和海水進(jìn)

行了6次重復(fù)測定，其中地表水加標(biāo)回收率范圍在80.2%~87.3%、86.8%-90.7%之間；廢水加標(biāo)回收率范

圍在79.1%~87.9%、84.1%-93.8%之間；海水加標(biāo)回收率范圍在81.8%~87.9%、88.2%-92.1%之間，具體見

附錄A中表A.2。

11質(zhì)量保證和質(zhì)量控制

11.1空白試驗

每批樣品（≤20個/批）至少做一個空白實驗，空白試樣值低于方法檢出限。

11.2校準(zhǔn)

校準(zhǔn)曲線的相關(guān)系數(shù)r≥0.995，否則應(yīng)重新繪制校準(zhǔn)曲線；每批樣品（≤20個）應(yīng)測定一個曲線中

間校核點，其測定結(jié)果與校準(zhǔn)曲線相應(yīng)點濃度的相對誤差應(yīng)在±20%以內(nèi)。

11.3精密度控制

每批樣品應(yīng)至少測定10%的平行雙樣，樣品數(shù)量少于10個時，應(yīng)至少測定一個平行雙樣，平行雙樣

測定結(jié)果的相對偏差應(yīng)在±20%以內(nèi)。

11.4準(zhǔn)確度控制

每批樣品應(yīng)至少測定5%的基體加標(biāo)樣品，樣品數(shù)量少于20個時，應(yīng)至少測定一個基體加標(biāo)樣品，加

標(biāo)回收率應(yīng)在75%~110%之間。

12廢物處理

實驗過程中產(chǎn)生的廢液和廢物應(yīng)分類收集和保管，委托有資質(zhì)的單位進(jìn)行處理。

7

DB21/T3286—2020

附錄A

（資料性附錄）

方法的精密度和準(zhǔn)確度

三家實驗室分別對2種不同濃度的樣品進(jìn)行了測定。精密度和準(zhǔn)確度結(jié)果見表A.1和表A.2。

表A.1方法的精密度

精密度統(tǒng)計結(jié)果

實驗室內(nèi)實驗室間

加標(biāo)濃度重復(fù)性限r(nóng)再現(xiàn)性限

樣品類型化合物名稱相對標(biāo)準(zhǔn)偏差相對標(biāo)準(zhǔn)偏差

（μg/L）（μg/L）R（μg/L）

（%）（%）

0.0506.5~103.60.0090.009

磺胺嘧啶

0.5004.6~5.70.70.0650.065

0.0506.7~103.90.0100.010

磺胺甲基嘧啶

0.5005.7~7.20.80.0780.078

0.0507.8~124.20.0110.012

地表水磺胺二甲嘧啶

0.5005.2~6.31.30.0730.073

磺胺對甲氧嘧0.0505.9~9.61.50.0090.009

啶0.5004.3~5.80.60.0660.066

0.0506.2~9.84.00.0090.010

磺胺甲惡唑

0.5005.5~6.71.60.0740.074

0.0507.2~9.52.70.0100.010

磺胺嘧啶

0.5003.4~7.22.60.0760.077

0.0505.1~9.61.30.0100.010

磺胺甲基嘧啶

0.5003.5~8.42.90.0770.079

0.0505.8~103.00.0100.010

廢水磺胺二甲嘧啶

0.5004.2~7.21.70.0690.069

磺胺對甲氧嘧0.0505.7~8.44.50.0090.010

啶0.5005.0~6.70.70.0770.077

0.0505.0~9.61.80.0110.011

磺胺甲惡唑

0.5004.7~6.21.00.0660.066

0.0505.1~9.13.70.0090.009

磺胺嘧啶

0.5004.3~6.80.30.0730.073

0.0506.4~8.83.60.0090.009

磺胺甲基嘧啶

0.5004.7~7.41.10.0770.077

海水

0.0505.2~9.24.10.0080.008

磺胺二甲嘧啶

0.5004.7~6.40.60.0710.071

磺胺對甲氧嘧0.0506.7~8.51.60.0090.009

啶0.5006.0~6.70.60.0790.079

8

DB21/T3286—2020

0.0506.0~104.10.0100.010

磺胺甲惡唑

0.5004.9~6.61.30.0700.070

表A.2方法的準(zhǔn)確度

準(zhǔn)確度統(tǒng)計結(jié)果

加標(biāo)回收率最終

實際樣品濃度加標(biāo)濃度回收率范圍

樣品類型化合物名稱值（%）

（μg/L）（μg/L）（%）

P2S

P

ND0.05080.2~85.683.7±6.0

磺胺嘧啶

ND0.50087.7~88.888.4±1.2

ND0.05080.9~86.784.7±6.6

磺胺甲基嘧啶

ND0.50086.8~88.287.7±1.6

ND0.05080.1~87.283.5±7.2

地表水磺胺二甲嘧啶

ND0.50087.6~89.888.9±2.4

ND0.05084.2~86.685.6±2.6

磺胺對甲氧嘧啶

ND0.50088.5~89.688.9±1.2

ND0.05081.0~87.384.8±6.6

磺胺甲惡唑

ND0.50088.0~90.789.0±3.0

ND0.05084.2~87.985.3±4.4

磺胺嘧啶

ND0.50089.1~93.891.1±4.8

0.0120.05080.1~84.382.5±4.4

磺胺甲基嘧啶

0.0120.50084.1~89.287.0±5.2

ND0.05081.7~86.884.2±5.2

廢水磺胺二甲嘧啶

ND0.50086.0~88.887.6±2.8

ND0.05080.6~87.584.9±7.6

磺胺對甲氧嘧啶

ND0.50088.7~89.889.3±1.2

0.0120.05079.1~83.782.0±5.0

磺胺甲惡唑

0.0120.50086.3~87.487.3±2.0

ND0.05082.4~84.784.4±3.8

磺胺嘧啶

ND0.50088.2~91.589.3±3.8

ND0.05081.8~86.784.7±5.2

磺胺甲基嘧啶

ND0.50088.5~90.989.3±2.8

ND0.05083.3~86.885.2±3.6

海水磺胺二甲嘧啶

ND0.50089.4~92.190.7±2.8

ND0.05084.7~86.885.7±2.2

磺胺對甲氧嘧啶

ND0.50088.8~89.789.4±1.0

ND0.05083.2~87.985.6±4.8

磺胺甲惡唑

ND0.50089.3~90.390.0±1.2

9

DB21/T3286—2020

10

DB21/T3286—2020

目次

前言..............................................................................II

1適用范圍.............................................................................1

2規(guī)范性引用文件.......................................................................1

3方法原理.........................................................