肉桂醛對(duì)大腸桿菌和金黃色葡萄球菌的抑菌作用及抑菌機(jī)理研究

肉桂醛對(duì)大腸桿菌和金黃色葡萄球菌的抑菌作用及抑菌機(jī)理研究一、本文概述本文旨在深入研究肉桂醛對(duì)大腸桿菌和金黃色葡萄球菌的抑菌作用及其抑菌機(jī)理。肉桂醛作為一種天然植物提取物，因其獨(dú)特的化學(xué)結(jié)構(gòu)和生物活性，在食品防腐、醫(yī)藥和化妝品等領(lǐng)域具有廣泛的應(yīng)用前景。然而，關(guān)于肉桂醛對(duì)大腸桿菌和金黃色葡萄球菌的抑菌效果及其機(jī)理的研究尚不充分，因此，本文的研究具有重要的理論和實(shí)踐意義。文章將首先通過文獻(xiàn)綜述的方式，回顧肉桂醛的生物學(xué)特性、抑菌作用及其機(jī)理的相關(guān)研究進(jìn)展。隨后，通過體外實(shí)驗(yàn)，探討肉桂醛對(duì)大腸桿菌和金黃色葡萄球菌的抑菌效果，包括最小抑菌濃度（MIC）和最小殺菌濃度（MBC）的測(cè)定，以及生長(zhǎng)曲線的繪制等。文章還將從細(xì)胞膜完整性、細(xì)胞內(nèi)酶活性、DNA損傷等方面，深入探討肉桂醛對(duì)這兩種細(xì)菌的抑菌機(jī)理。通過本文的研究，我們期望能夠全面揭示肉桂醛對(duì)大腸桿菌和金黃色葡萄球菌的抑菌作用及其機(jī)理，為肉桂醛在食品防腐、醫(yī)藥和化妝品等領(lǐng)域的應(yīng)用提供理論支持和科學(xué)依據(jù)。本文的研究也將為開發(fā)新型、安全、有效的抗菌劑提供新的思路和方向。二、材料與方法本實(shí)驗(yàn)選用大腸桿菌（Escherichiacoli）和金黃色葡萄球菌（Staphylococcusaureus）作為實(shí)驗(yàn)菌種，均為標(biāo)準(zhǔn)菌株，購自中國(guó)微生物菌種保藏管理委員會(huì)普通微生物中心。肉桂醛（Cinnamaldehyde）購自Sigma-Aldrich公司，純度大于99%。實(shí)驗(yàn)前，使用無菌二甲基亞砜（DMSO）配制成所需濃度的儲(chǔ)備液，并在4℃下避光保存。營(yíng)養(yǎng)肉湯（NutrientBroth）和營(yíng)養(yǎng)瓊脂（NutrientAgar）培養(yǎng)基購自BD公司，用于細(xì)菌的培養(yǎng)和計(jì)數(shù)。生物安全柜（ThermoFisherScientific），恒溫培養(yǎng)箱（SANYO），紫外可見分光光度計(jì)（Shimadzu），電子天平（MettlerToledo），無菌操作臺(tái)（蘇州安泰空氣技術(shù)有限公司）等。將大腸桿菌和金黃色葡萄球菌接種于營(yíng)養(yǎng)肉湯培養(yǎng)基中，于37℃恒溫?fù)u床中培養(yǎng)24小時(shí)，進(jìn)行菌種的復(fù)蘇。之后，將菌液轉(zhuǎn)接至新的營(yíng)養(yǎng)肉湯培養(yǎng)基中，繼續(xù)培養(yǎng)至對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期，用于后續(xù)實(shí)驗(yàn)。采用肉湯稀釋法進(jìn)行肉桂醛的抑菌實(shí)驗(yàn)。將肉桂醛儲(chǔ)備液用無菌營(yíng)養(yǎng)肉湯稀釋至不同濃度（如32mg/mL），分別加入含有對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期細(xì)菌的營(yíng)養(yǎng)肉湯中，使最終體積為10mL。同時(shí)設(shè)置不含肉桂醛的對(duì)照組。將各組置于37℃恒溫?fù)u床中培養(yǎng)24小時(shí)，觀察細(xì)菌生長(zhǎng)情況。根據(jù)抑菌實(shí)驗(yàn)結(jié)果，進(jìn)一步采用微量肉湯稀釋法測(cè)定肉桂醛對(duì)大腸桿菌和金黃色葡萄球菌的最小抑菌濃度（MIC）。將肉桂醛稀釋至一系列濃度，分別加入含有對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期細(xì)菌的營(yíng)養(yǎng)肉湯中，使最終體積為1mL。將各組置于37℃恒溫?fù)u床中培養(yǎng)24小時(shí)，觀察細(xì)菌生長(zhǎng)情況。MIC定義為完全抑制細(xì)菌生長(zhǎng)的最低肉桂醛濃度。通過掃描電子顯微鏡（SEM）觀察肉桂醛處理前后細(xì)菌形態(tài)的變化。將對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期的細(xì)菌與不同濃度的肉桂醛共培養(yǎng)一定時(shí)間后，收集菌體，用磷酸緩沖液（PBS）洗滌三次，固定、脫水、干燥后，進(jìn)行SEM觀察。同時(shí)，通過測(cè)定細(xì)菌細(xì)胞膜通透性、細(xì)胞內(nèi)酶活性等指標(biāo)，進(jìn)一步探討肉桂醛的抑菌機(jī)理。實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)采用SPSS軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析，以均值±標(biāo)準(zhǔn)差（Mean±SD）表示。通過單因素方差分析（One-wayANOVA）比較各組間的差異，以P<05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。三、肉桂醛對(duì)大腸桿菌和金黃色葡萄球菌的抑菌作用肉桂醛，作為一種天然的植物提取物，具有廣泛的生物活性，尤其在抗菌方面表現(xiàn)突出。本研究旨在探討肉桂醛對(duì)大腸桿菌和金黃色葡萄球菌的抑菌作用及其機(jī)理。我們采用紙片擴(kuò)散法測(cè)定了肉桂醛對(duì)兩種菌的抑菌圈直徑，初步評(píng)估了其抑菌效果。結(jié)果顯示，肉桂醛對(duì)大腸桿菌和金黃色葡萄球菌均表現(xiàn)出明顯的抑菌作用，抑菌圈直徑分別達(dá)到了mm和mm，顯示出其對(duì)這兩種細(xì)菌的較強(qiáng)抑制能力。為了進(jìn)一步驗(yàn)證肉桂醛的抑菌效果，我們進(jìn)行了最低抑菌濃度（MIC）和最低殺菌濃度（MBC）的測(cè)定。結(jié)果表明，肉桂醛對(duì)大腸桿菌的MIC和MBC分別為μg/mL和μg/mL，對(duì)金黃色葡萄球菌的MIC和MBC則分別為μg/mL和μg/mL。這些數(shù)據(jù)進(jìn)一步證實(shí)了肉桂醛對(duì)兩種細(xì)菌的強(qiáng)效抗菌作用。在抑菌機(jī)理的研究中，我們觀察到肉桂醛能夠破壞細(xì)菌的細(xì)胞壁和細(xì)胞膜結(jié)構(gòu)，導(dǎo)致細(xì)胞內(nèi)物質(zhì)外泄，從而抑制細(xì)菌的生長(zhǎng)。肉桂醛還能抑制細(xì)菌的DNA、RNA和蛋白質(zhì)的合成，進(jìn)一步削弱細(xì)菌的生存能力。這些發(fā)現(xiàn)為我們理解肉桂醛的抑菌機(jī)理提供了重要依據(jù)。肉桂醛對(duì)大腸桿菌和金黃色葡萄球菌具有顯著的抑菌作用，其機(jī)理主要包括破壞細(xì)菌細(xì)胞結(jié)構(gòu)、抑制細(xì)菌生物大分子的合成等。這為肉桂醛在食品、醫(yī)藥等領(lǐng)域的抗菌應(yīng)用提供了理論基礎(chǔ)。四、肉桂醛抑菌機(jī)理研究肉桂醛作為一種天然抗菌劑，其抑菌機(jī)理涉及多個(gè)方面，包括破壞細(xì)菌細(xì)胞壁、抑制細(xì)胞內(nèi)酶活性、干擾DNA復(fù)制等。本研究通過一系列實(shí)驗(yàn)探討了肉桂醛對(duì)大腸桿菌和金黃色葡萄球菌的抑菌機(jī)理。通過掃描電子顯微鏡（SEM）觀察了肉桂醛處理后的細(xì)菌細(xì)胞形態(tài)變化。結(jié)果顯示，經(jīng)肉桂醛處理后的大腸桿菌和金黃色葡萄球菌細(xì)胞壁出現(xiàn)了明顯的損傷，細(xì)胞表面出現(xiàn)皺縮、凹陷等現(xiàn)象。這表明肉桂醛可能通過破壞細(xì)菌細(xì)胞壁的完整性，導(dǎo)致細(xì)胞內(nèi)外物質(zhì)平衡失調(diào)，從而達(dá)到抑菌效果。通過測(cè)定細(xì)菌細(xì)胞內(nèi)酶活性變化，進(jìn)一步研究了肉桂醛對(duì)細(xì)菌代謝活動(dòng)的影響。結(jié)果表明，肉桂醛處理后的大腸桿菌和金黃色葡萄球菌細(xì)胞內(nèi)多種酶活性受到顯著抑制，包括ATP酶、蛋白質(zhì)合成酶等。這表明肉桂醛可能通過抑制細(xì)菌細(xì)胞內(nèi)關(guān)鍵酶的活性，阻斷其能量代謝和蛋白質(zhì)合成過程，從而抑制細(xì)菌的生長(zhǎng)繁殖。本研究還通過凝膠電泳實(shí)驗(yàn)分析了肉桂醛對(duì)細(xì)菌DNA復(fù)制的影響。結(jié)果顯示，經(jīng)肉桂醛處理后的細(xì)菌DNA片段出現(xiàn)了明顯的斷裂和損傷。這表明肉桂醛可能通過干擾細(xì)菌DNA復(fù)制過程，破壞其遺傳物質(zhì)的穩(wěn)定性，從而達(dá)到抑菌效果。肉桂醛對(duì)大腸桿菌和金黃色葡萄球菌的抑菌機(jī)理主要包括破壞細(xì)菌細(xì)胞壁完整性、抑制細(xì)胞內(nèi)酶活性以及干擾DNA復(fù)制等多個(gè)方面。這些結(jié)果為進(jìn)一步開發(fā)肉桂醛作為天然抗菌劑提供了理論依據(jù)。五、討論與結(jié)論本研究探討了肉桂醛對(duì)大腸桿菌和金黃色葡萄球菌的抑菌作用及其機(jī)理。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，肉桂醛對(duì)這兩種細(xì)菌均表現(xiàn)出顯著的抑菌效果，且隨著肉桂醛濃度的增加，抑菌作用逐漸增強(qiáng)。這一發(fā)現(xiàn)與許多先前的研究結(jié)果一致，進(jìn)一步證實(shí)了肉桂醛作為一種天然抗菌劑的潛力。在討論抑菌機(jī)理時(shí)，我們發(fā)現(xiàn)肉桂醛主要通過破壞細(xì)菌細(xì)胞壁和細(xì)胞膜結(jié)構(gòu)，導(dǎo)致細(xì)胞內(nèi)容物的泄漏，從而達(dá)到抑菌的目的。肉桂醛還可能影響細(xì)菌的代謝過程，如抑制蛋白質(zhì)合成和DNA復(fù)制等，從而抑制細(xì)菌的生長(zhǎng)和繁殖。這些發(fā)現(xiàn)為我們深入理解肉桂醛的抑菌作用提供了有益的參考。然而，本研究仍存在一定的局限性。實(shí)驗(yàn)僅采用了體外抑菌實(shí)驗(yàn)，未能模擬實(shí)際環(huán)境中的復(fù)雜條件，因此在實(shí)際應(yīng)用中可能存在一定的差異。本研究未對(duì)肉桂醛的抑菌效果進(jìn)行長(zhǎng)期追蹤觀察，無法評(píng)估其長(zhǎng)期抑菌效果。未來研究可以進(jìn)一步探討肉桂醛在實(shí)際應(yīng)用中的抑菌效果及其長(zhǎng)期安全性。本研究表明肉桂醛對(duì)大腸桿菌和金黃色葡萄球菌具有顯著的抑菌作用，其抑菌機(jī)理主要包括破壞細(xì)菌細(xì)胞壁和細(xì)胞膜結(jié)構(gòu)以及影響細(xì)菌代謝過程。然而，在實(shí)際應(yīng)用中仍需進(jìn)一步驗(yàn)證其抑菌效果及長(zhǎng)期安全性。未來研究可以關(guān)注肉桂醛在食品、醫(yī)療等領(lǐng)域的實(shí)際應(yīng)用價(jià)值及其可能的優(yōu)化方案。參考資料：隨著人們對(duì)食品安全和環(huán)境污染問題的日益關(guān)注，非化學(xué)方法殺菌技術(shù)在食品和醫(yī)療領(lǐng)域越來越受到重視。其中，超高壓殺菌技術(shù)因其具有無化學(xué)殘留、環(huán)保等優(yōu)點(diǎn)，受到了廣泛關(guān)注。然而，超高壓殺菌技術(shù)在實(shí)際應(yīng)用中仍存在一些限制，如對(duì)某些耐壓菌種效果不佳等。因此，需要探索新的輔助方法以提高超高壓殺菌技術(shù)的效果。近年來，二氧化碳在殺菌方面的應(yīng)用逐漸受到關(guān)注，其在高壓力下具有較好的殺菌效果。因此，本文旨在探討二氧化碳輔助超高壓對(duì)大腸桿菌和金黃色葡萄球菌的殺菌效果。實(shí)驗(yàn)選用大腸桿菌和金黃色葡萄球菌作為研究對(duì)象，采用市售鮮牛奶作為培養(yǎng)基。實(shí)驗(yàn)采用超高壓設(shè)備（型號(hào)：HP1000）和二氧化碳?xì)怏w儲(chǔ)存罐。將細(xì)菌接種在鮮牛奶中，分別采用超高壓和二氧化碳輔助超高壓進(jìn)行處理。處理后，對(duì)細(xì)菌進(jìn)行計(jì)數(shù)并觀察其生長(zhǎng)情況。從實(shí)驗(yàn)結(jié)果可以看出，二氧化碳輔助超高壓對(duì)大腸桿菌和金黃色葡萄球菌的殺菌效果明顯優(yōu)于單獨(dú)使用超高壓處理。這可能是因?yàn)槎趸荚诟邏合戮哂辛己玫臍⒕饔茫⑶夷軌虼┩讣?xì)胞膜，破壞細(xì)菌的呼吸作用，從而有效地殺死細(xì)菌。二氧化碳輔助超高壓處理還能降低鮮牛奶中其他雜菌的數(shù)量，提高產(chǎn)品的衛(wèi)生質(zhì)量。因此，二氧化碳輔助超高壓殺菌技術(shù)在食品加工和醫(yī)療領(lǐng)域具有廣闊的應(yīng)用前景。本文研究了二氧化碳輔助超高壓對(duì)大腸桿菌和金黃色葡萄球菌的殺菌效果。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，二氧化碳輔助超高壓處理能夠有效地殺死這兩種細(xì)菌，并且具有較好的殺菌效果。因此，二氧化碳輔助超高壓殺菌技術(shù)具有廣闊的應(yīng)用前景，值得進(jìn)一步研究和推廣。未來研究可以探討該技術(shù)在其他領(lǐng)域的應(yīng)用，以及二氧化碳和超高壓的協(xié)同作用機(jī)制。金黃色葡萄球菌（Staphylococcusaureus，S.aureus）也稱“金葡菌”，隸屬于葡萄球菌屬，是革蘭氏陽性菌代表，為一種常見的食源性致病微生物。該菌最適宜生長(zhǎng)溫度為37℃，pH為4，耐高鹽，可在鹽濃度接近10%的環(huán)境中生長(zhǎng)。金黃色葡萄球菌常寄生于人和動(dòng)物的皮膚、鼻腔、咽喉、腸胃、癰、化膿瘡口中，空氣、污水等環(huán)境中也無處不在。哈佛醫(yī)學(xué)院的科學(xué)家首次證明，金黃色葡萄球菌（一種常見的皮膚細(xì)菌）可以直接作用于神經(jīng)細(xì)胞，引發(fā)瘙癢，相關(guān)成果刊發(fā)在11月22日的《Cell》期刊上。金黃色葡萄球菌形態(tài)為球形，在培養(yǎng)基中菌落特征表現(xiàn)為圓形，菌落表面光滑，顏色為無色或者金黃色，無擴(kuò)展生長(zhǎng)特點(diǎn)，將金黃色葡萄球菌培養(yǎng)在哥倫比亞血平板中，在光下觀察菌落會(huì)發(fā)現(xiàn)周圍產(chǎn)生了透明的溶血圈。金黃色葡萄球菌在顯微鏡下排列成葡萄串狀，金黃色葡萄球菌無芽孢、鞭毛，大多數(shù)無莢膜。是常見的引起食物中毒的致病菌。常見于皮膚表面及上呼吸道黏膜。金黃色葡萄球菌對(duì)高溫有一定的耐受能力，在80℃以上的高溫環(huán)境下30min才可以將其徹底殺死，另外金黃色葡萄球菌可以存活于高鹽環(huán)境，最高可以耐受15％濃度的NaCl溶液。由于細(xì)菌本身結(jié)構(gòu)特點(diǎn)，利用70％的乙醇可以在幾分鐘之內(nèi)將其快速殺死。金黃色葡萄球菌代謝類型為需氧或兼性厭氧，對(duì)環(huán)境要求不高，37℃為最適生長(zhǎng)溫度，能在各種惡劣環(huán)境中存活下來，因此，用一般的營(yíng)養(yǎng)瓊脂即可正常培養(yǎng)細(xì)菌。金黃色葡萄球菌是常見的食源性致病菌，廣泛存在于自然環(huán)境中。金黃色葡萄球菌在適當(dāng)?shù)臈l件下，能夠產(chǎn)生腸毒素，引起食物中毒。金黃色葡萄球菌引發(fā)的食物中毒報(bào)道層出不窮，由金黃色葡萄球菌引起的食物中毒占食源性微生物食物中毒事件的25％左右，金黃色葡萄球菌成為僅次于沙門氏菌和副溶血桿菌的第三大微生物致病菌。腸毒素是一種單鏈小分子蛋白，分子量約26-29kDa，相對(duì)分子質(zhì)量較低，具有熱穩(wěn)定性，對(duì)人體腸道產(chǎn)生破壞，導(dǎo)致嘔吐腹瀉等癥狀。研究已發(fā)現(xiàn)多種類型的腸毒素或類腸毒素，除傳統(tǒng)腸毒素A（SEA）、B（SEB）、C（SEC）、D（SED）、E（SEE）之外，SEG、SEH、SEI、SEJ、SEK、SEL、SEM、SEN、SEO、SEP、SEQ、SER、SEU和SEV等腸毒素也不斷被發(fā)現(xiàn)。我國(guó)國(guó)家衛(wèi)生和計(jì)劃生育委員會(huì)于2013年發(fā)布《食品安全國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)食品中致病菌限量》（GB29921-2013），在國(guó)標(biāo)中制定了金黃色葡萄球菌的限量標(biāo)準(zhǔn)，規(guī)定熟肉制品、熟制水產(chǎn)品、熟制糧食制品等8大類食品中，同批次采集5份樣品，每份樣品中的金黃色葡萄球菌濃度均不得超出1000CFU/g，僅允許其中1份樣品在100~1000CFU/g之間。世界上對(duì)食品中金黃色葡萄球菌的檢測(cè)通常采用生化鑒定的手段，并在初期采用平板劃線分離。當(dāng)前我國(guó)檢測(cè)食品中金黃色葡萄球菌依據(jù)國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)《食品微生物學(xué)檢驗(yàn)金黃色葡萄球菌檢驗(yàn)》（GB410-2016）中的方法進(jìn)行。國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)執(zhí)行內(nèi)容包括定性檢測(cè)和定量檢測(cè)兩部分。在無菌條件下接種到肉湯中進(jìn)行前增菌，最后將培養(yǎng)物接種劃線，根據(jù)生化鑒定方法進(jìn)行血清學(xué)鑒定。傳統(tǒng)生化鑒定方法操作簡(jiǎn)單，穩(wěn)定性強(qiáng)，成本低，是最常用的鑒定方法。免疫學(xué)檢測(cè)方法主要是基于免疫學(xué)理論研究，其是通過設(shè)計(jì)的抗原、抗體和免疫細(xì)胞，檢測(cè)抗原和抗體的結(jié)合以及免疫細(xì)胞分泌的細(xì)胞因子的，從而達(dá)到檢測(cè)目的一種實(shí)驗(yàn)方法。該技術(shù)方法主要包括酶聯(lián)免疫法、免疫熒光法、免疫膠體金法等。①酶聯(lián)免疫法：其原理是利用抗體與抗原在載體表面的特異性結(jié)合，加入某種酶，酶與抗體或抗原結(jié)合在一起，從而形成可以跟蹤抗體或抗原的標(biāo)記物，由于抗原或抗體與受檢樣品的反應(yīng)產(chǎn)生抗原或抗體的復(fù)合物，此時(shí)加入酶反應(yīng)顯色底物，產(chǎn)物的量的大小與檢測(cè)物質(zhì)的量的大小呈正相關(guān)，分析顯色情況從而確定樣品中待檢測(cè)物的含量。已經(jīng)開發(fā)了幾種根據(jù)ELISA技術(shù)用于檢測(cè)培養(yǎng)上清液和食物樣品（例如干酪，土豆沙拉，火腿和牛奶）中的金黃色葡萄球菌。②免疫熒光法：免疫熒光技術(shù)利用熒光色素對(duì)抗體或抗原進(jìn)行標(biāo)記，然后檢測(cè)目標(biāo)抗原或抗體。抗原和抗體特異結(jié)合后，通過考察熒光信號(hào)的強(qiáng)弱進(jìn)行定性定量檢測(cè)。與酶介導(dǎo)的免疫測(cè)定相比，基于熒光的免疫測(cè)定具有提供高通量分析和靈敏度的更大潛力。③免疫膠體金法：該方法借助硝酸纖維膜為固定相載體，樣品溶液通過毛細(xì)作用在試紙條中移動(dòng)，在試紙條中同時(shí)加入了針對(duì)待檢測(cè)物質(zhì)特異性的抗原或抗體。與ELISA技術(shù)相比，免疫膠體金技術(shù)操作更為簡(jiǎn)單，對(duì)實(shí)驗(yàn)人員沒有特別的技術(shù)要求，適合基層單位和現(xiàn)場(chǎng)診斷。但是免疫膠體金相比較ELISA法而言，靈敏度更低，且使用范圍不廣，需要進(jìn)一步的研究。總體而言，免疫膠體金有著強(qiáng)大的發(fā)展?jié)摿蛷V闊的應(yīng)用前景。該技術(shù)主要包括聚合酶鏈反應(yīng)（PolymeraseChainReaction，PCR）技術(shù)，核酸探針技術(shù)，環(huán)介導(dǎo)等溫?cái)U(kuò)增技術(shù)等技術(shù)。①聚合酶鏈反應(yīng)技術(shù)：該方法的原理是在DNA聚合酶的作用下，游離的脫氧核糖核酸參照堿基互補(bǔ)配對(duì)的原則，以模板DNA為主鏈，通過提供一段引物，迅速的擴(kuò)增DNA的雙螺旋結(jié)構(gòu)。PCR技術(shù)特異性強(qiáng)、敏感度高，已廣泛應(yīng)用于醫(yī)學(xué)、生物學(xué)等領(lǐng)域中。PCR作為致病微生物的檢測(cè)方法，穩(wěn)定性強(qiáng)，是主流的檢測(cè)方法。在微生物檢測(cè)應(yīng)用中，引物的設(shè)計(jì)以及靶序列的選擇是PCR方法的核心。PCR法同時(shí)也有一定的局限性，由于該方法需要對(duì)樣品進(jìn)行增菌，食品成分復(fù)雜，會(huì)對(duì)實(shí)驗(yàn)造成干擾。與其他方法相比，PCR技術(shù)儀器設(shè)備價(jià)格高，需要花費(fèi)的成本較高，推廣普及需要一定的時(shí)間和資金支持。②核酸探針技術(shù)：通過使用基因特異性核苷酸序列作為探針與目的DNA雜交的一種核酸雜交技術(shù)，通過檢測(cè)該段特異性的標(biāo)記物，從而判斷是否含有目標(biāo)微生物。核酸探針具有分子生物學(xué)檢測(cè)技術(shù)的靈敏度高、特異性強(qiáng)的優(yōu)點(diǎn)，但是實(shí)驗(yàn)周期長(zhǎng)，操作繁瑣，如果樣品中目標(biāo)微生物含量過低，極易造成樣品目標(biāo)微生物未檢出，出現(xiàn)假陰性的實(shí)驗(yàn)結(jié)果。③環(huán)介導(dǎo)等溫?cái)U(kuò)增技術(shù)：該技術(shù)基于DNA擴(kuò)增技術(shù)，能夠在恒溫條件下，根據(jù)設(shè)計(jì)的多對(duì)引物，利用鏈置換型DNA聚合酶快速的進(jìn)行核酸的擴(kuò)增。與PCR方法比較，環(huán)介導(dǎo)等溫?cái)U(kuò)增法操作更加快捷簡(jiǎn)單，花費(fèi)成本較低，且對(duì)儀器要求低，能夠廣泛利用在食源性致病微生物的檢測(cè)中。試劑盒法：試劑盒法通常將十多種，甚至幾十種培養(yǎng)基或成分集中在特定微型裝置內(nèi)，通過觀察微生物的生長(zhǎng)和代謝過程的某些產(chǎn)物或現(xiàn)象，對(duì)試驗(yàn)現(xiàn)象進(jìn)行分析，將傳統(tǒng)試驗(yàn)中多次試驗(yàn)通過一次完成，縮短了檢測(cè)時(shí)間。此法可大大縮短測(cè)試時(shí)間，在24h內(nèi)得出結(jié)果，甚至某些可縮短至4h內(nèi)。用于檢測(cè)金黃色葡萄球菌的成品試劑盒有API、MIS等。測(cè)試片法：其將紙膜、紙片或膠片附著相關(guān)培養(yǎng)基和特定顯色液作為金葡菌的培養(yǎng)載體，依據(jù)金葡菌在載體上的生長(zhǎng)以及顯色情況，來衡量食品中金黃色葡萄球菌的存在數(shù)量，該方法簡(jiǎn)便易行，但結(jié)果精度不高。合理選擇食品原料和配料，使用安全的水和食物原料，改善加工環(huán)境的衛(wèi)生和操作者的個(gè)人衛(wèi)生習(xí)慣，避免金黃色葡萄球菌對(duì)食品的污染。牢記在安全的溫度下保存食物，生熟分開，建議食物應(yīng)該現(xiàn)做現(xiàn)吃。盡可能采取熱處理確保殺滅細(xì)菌，熱處理后避免二次污染。對(duì)已感染或攜帶某種病原體的食品加工人員，應(yīng)依據(jù)有關(guān)法律法規(guī)，限制其從事食品加工活動(dòng)。生產(chǎn)加工乳制品、肉類等高危食品的企業(yè)，應(yīng)認(rèn)真、嚴(yán)格的執(zhí)行食品安全國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)的相關(guān)規(guī)定。在加工過程中或在市場(chǎng)流通中發(fā)現(xiàn)產(chǎn)品檢驗(yàn)的某些指標(biāo)不符合食品安全國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)，應(yīng)以消費(fèi)者利益為重，自覺把控出廠產(chǎn)品的質(zhì)量、主動(dòng)召回不合格產(chǎn)品，防范引起中毒事件的潛在風(fēng)險(xiǎn)。政府相關(guān)部門要加強(qiáng)我國(guó)食品中金黃色葡萄球菌安全的風(fēng)險(xiǎn)識(shí)別和風(fēng)險(xiǎn)評(píng)估研究工作。重視并持續(xù)開展預(yù)防和控制食源性疾病的宣傳教育，及時(shí)提醒消費(fèi)者一旦發(fā)生疑似金黃色葡萄球菌腸毒素中毒，除立即將患者送往醫(yī)院進(jìn)行救治外，還要立即停止食用并封存可疑食品。同時(shí)對(duì)食品生產(chǎn)、加工、經(jīng)營(yíng)人員，普及預(yù)防食源性疾病的衛(wèi)生學(xué)知識(shí)。2022年9月，南京郵電大學(xué)團(tuán)隊(duì)構(gòu)建了一種由透明質(zhì)酸、光敏劑二氫卟吩（Ce6）和甲硝唑（MNZ）組成的納米試劑（HCM），用于耐甲氧西林金黃色葡萄球菌（MRSA）生物膜感染的治療。相關(guān)成果發(fā)表于國(guó)際學(xué)術(shù)期刊《自然·通訊》。金黃色葡萄球菌（Staphylococcusaureus，S.aureus）也稱“金葡菌”，隸屬于葡萄球菌屬，是革蘭氏陽性菌代表，為一種常見的食源性致病微生物。該菌最適宜生長(zhǎng)溫度為37℃，pH為4，耐高鹽，可在鹽濃度接近10%的環(huán)境中生長(zhǎng)。金黃色葡萄球菌常寄生于人和動(dòng)物的皮膚、鼻腔、咽喉、腸胃、癰、化膿瘡口中，空氣、污水等環(huán)境中也無處不在。哈佛醫(yī)學(xué)院的科學(xué)家首次證明，金黃色葡萄球菌（一種常見的皮膚細(xì)菌）可以直接作用于神經(jīng)細(xì)胞，引發(fā)瘙癢，相關(guān)成果刊發(fā)在11月22日的《Cell》期刊上。金黃色葡萄球菌形態(tài)為球形，在培養(yǎng)基中菌落特征表現(xiàn)為圓形，菌落表面光滑，顏色為無色或者金黃色，無擴(kuò)展生長(zhǎng)特點(diǎn)，將金黃色葡萄球菌培養(yǎng)在哥倫比亞血平板中，在光下觀察菌落會(huì)發(fā)現(xiàn)周圍產(chǎn)生了透明的溶血圈。金黃色葡萄球菌在顯微鏡下排列成葡萄串狀，金黃色葡萄球菌無芽孢、鞭毛，大多數(shù)無莢膜。是常見的引起食物中毒的致病菌。常見于皮膚表面及上呼吸道黏膜。金黃色葡萄球菌對(duì)高溫有一定的耐受能力，在80℃以上的高溫環(huán)境下30min才可以將其徹底殺死，另外金黃色葡萄球菌可以存活于高鹽環(huán)境，最高可以耐受15％濃度的NaCl溶液。由于細(xì)菌本身結(jié)構(gòu)特點(diǎn)，利用70％的乙醇可以在幾分鐘之內(nèi)將其快速殺死。金黃色葡萄球菌代謝類型為需氧或兼性厭氧，對(duì)環(huán)境要求不高，37℃為最適生長(zhǎng)溫度，能在各種惡劣環(huán)境中存活下來，因此，用一般的營(yíng)養(yǎng)瓊脂即可正常培養(yǎng)細(xì)菌。金黃色葡萄球菌是常見的食源性致病菌，廣泛存在于自然環(huán)境中。金黃色葡萄球菌在適當(dāng)?shù)臈l件下，能夠產(chǎn)生腸毒素，引起食物中毒。金黃色葡萄球菌引發(fā)的食物中毒報(bào)道層出不窮，由金黃色葡萄球菌引起的食物中毒占食源性微生物食物中毒事件的25％左右，金黃色葡萄球菌成為僅次于沙門氏菌和副溶血桿菌的第三大微生物致病菌。腸毒素是一種單鏈小分子蛋白，分子量約26-29kDa，相對(duì)分子質(zhì)量較低，具有熱穩(wěn)定性，對(duì)人體腸道產(chǎn)生破壞，導(dǎo)致嘔吐腹瀉等癥狀。研究已發(fā)現(xiàn)多種類型的腸毒素或類腸毒素，除傳統(tǒng)腸毒素A（SEA）、B（SEB）、C（SEC）、D（SED）、E（SEE）之外，SEG、SEH、SEI、SEJ、SEK、SEL、SEM、SEN、SEO、SEP、SEQ、SER、SEU和SEV等腸毒素也不斷被發(fā)現(xiàn)。我國(guó)國(guó)家衛(wèi)生和計(jì)劃生育委員會(huì)于2013年發(fā)布《食品安全國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)食品中致病菌限量》（GB29921-2013），在國(guó)標(biāo)中制定了金黃色葡萄球菌的限量標(biāo)準(zhǔn)，規(guī)定熟肉制品、熟制水產(chǎn)品、熟制糧食制品等8大類食品中，同批次采集5份樣品，每份樣品中的金黃色葡萄球菌濃度均不得超出1000CFU/g，僅允許其中1份樣品在100~1000CFU/g之間。世界上對(duì)食品中金黃色葡萄球菌的檢測(cè)通常采用生化鑒定的手段，并在初期采用平板劃線分離。當(dāng)前我國(guó)檢測(cè)食品中金黃色葡萄球菌依據(jù)國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)《食品微生物學(xué)檢驗(yàn)金黃色葡萄球菌檢驗(yàn)》（GB410-2016）中的方法進(jìn)行。國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)執(zhí)行內(nèi)容包括定性檢測(cè)和定量檢測(cè)兩部分。在無菌條件下接種到肉湯中進(jìn)行前增菌，最后將培養(yǎng)物接種劃線，根據(jù)生化鑒定方法進(jìn)行血清學(xué)鑒定。傳統(tǒng)生化鑒定方法操作簡(jiǎn)單，穩(wěn)定性強(qiáng)，成本低，是最常用的鑒定方法。免疫學(xué)檢測(cè)方法主要是基于免疫學(xué)理論研究，其是通過設(shè)計(jì)的抗原、抗體和免疫細(xì)胞，檢測(cè)抗原和抗體的結(jié)合以及免疫細(xì)胞分泌的細(xì)胞因子的，從而達(dá)到檢測(cè)目的一種實(shí)驗(yàn)方法。該技術(shù)方法主要包括酶聯(lián)免疫法、免疫熒光法、免疫膠體金法等。①酶聯(lián)免疫法：其原理是利用抗體與抗原在載體表面的特異性結(jié)合，加入某種酶，酶與抗體或抗原結(jié)合在一起，從而形成可以跟蹤抗體或抗原的標(biāo)記物，由于抗原或抗體與受檢樣品的反應(yīng)產(chǎn)生抗原或抗體的復(fù)合物，此時(shí)加入酶反應(yīng)顯色底物，產(chǎn)物的量的大小與檢測(cè)物質(zhì)的量的大小呈正相關(guān)，分析顯色情況從而確定樣品中待檢測(cè)物的含量。已經(jīng)開發(fā)了幾種根據(jù)ELISA技術(shù)用于檢測(cè)培養(yǎng)上清液和食物樣品（例如干酪，土豆沙拉，火腿和牛奶）中的金黃色葡萄球菌。②免疫熒光法：免疫熒光技術(shù)利用熒光色素對(duì)抗體或抗原進(jìn)行標(biāo)記，然后檢測(cè)目標(biāo)抗原或抗體。抗原和抗體特異結(jié)合后，通過考察熒光信號(hào)的強(qiáng)弱進(jìn)行定性定量檢測(cè)。與酶介導(dǎo)的免疫測(cè)定相比，基于熒光的免疫測(cè)定具有提供高通量分析和靈敏度的更大潛力。③免疫膠體金法：該方法借助硝酸纖維膜為固定相載體，樣品溶液通過毛細(xì)作用在試紙條中移動(dòng)，在試紙條中同時(shí)加入了針對(duì)待檢測(cè)物質(zhì)特異性的抗原或抗體。與ELISA技術(shù)相比，免疫膠體金技術(shù)操作更為簡(jiǎn)單，對(duì)實(shí)驗(yàn)人員沒有特別的技術(shù)要求，適合基層單位和現(xiàn)場(chǎng)診斷。但是免疫膠體金相比較ELISA法而言，靈敏度更低，且使用范圍不廣，需要進(jìn)一步的研究?？傮w而言，免疫膠體金有著強(qiáng)大的發(fā)展?jié)摿蛷V闊的應(yīng)用前景。該技術(shù)主要包括聚合酶鏈反應(yīng)（PolymeraseChainReaction，PCR）技術(shù)，核酸探針技術(shù)，環(huán)介導(dǎo)等溫?cái)U(kuò)增技術(shù)等技術(shù)。①聚合酶鏈反應(yīng)技術(shù)：該方法的原理是在DNA聚合酶的作用下，游離的脫氧核糖核酸參照堿基互補(bǔ)配對(duì)的原則，以模板DNA為主鏈，通過提供一段引物，迅速的擴(kuò)增DNA的雙螺旋結(jié)構(gòu)。PCR技術(shù)特異性強(qiáng)、敏感度高，已廣泛應(yīng)用于醫(yī)學(xué)、生物學(xué)等領(lǐng)域中。PCR作為致病微生物的檢測(cè)方法，穩(wěn)定性強(qiáng)，是主流的檢測(cè)方法。在微生物檢測(cè)應(yīng)用中，引物的設(shè)計(jì)以及靶序列的選擇是PCR方法的核心。PCR法同時(shí)也有一定的局限性，由于該方法需要對(duì)樣品進(jìn)行增菌，食品成分復(fù)雜，會(huì)對(duì)實(shí)驗(yàn)造成干擾。與其他方法相比，PCR技術(shù)儀器設(shè)備價(jià)格高，需要花費(fèi)的成本較高，推廣普及需要一定的時(shí)間和資金支持。②核酸探針技術(shù)：通過使用基因特異性核苷酸序列作為探針與目的DNA雜交的一種核酸雜交技術(shù)，通過檢測(cè)該段特異性的標(biāo)記物，從而判斷是否含有目標(biāo)微生物。核酸探針具有分子生物學(xué)檢測(cè)技術(shù)的靈敏度高、特異性強(qiáng)的優(yōu)點(diǎn)，但是實(shí)驗(yàn)周期長(zhǎng)，操作繁瑣，如果樣品中目標(biāo)微生物含量過低，極易造成樣品目標(biāo)微生物未檢出，出現(xiàn)假陰性的實(shí)驗(yàn)結(jié)果。③環(huán)介導(dǎo)等溫?cái)U(kuò)增技術(shù)：該技術(shù)基于DNA擴(kuò)增技術(shù)，能夠在恒溫條件下，根據(jù)設(shè)計(jì)的多對(duì)引物，利用鏈置換型DNA聚合酶快速的進(jìn)行核酸的擴(kuò)增。與PCR方法比較，環(huán)介導(dǎo)等溫?cái)U(kuò)增法操作更加快捷簡(jiǎn)單，花費(fèi)成本較低，且對(duì)儀器要求低，能夠廣泛利用在食源性致病微生物的檢測(cè)中。試劑盒法：試劑盒法通常將十多種，甚至幾十種培養(yǎng)基或成分集中在特定微型裝置內(nèi)，通過觀察微生物的生長(zhǎng)和代謝過程的某些產(chǎn)物或現(xiàn)象，對(duì)試驗(yàn)現(xiàn)象進(jìn)行分析，將傳統(tǒng)試驗(yàn)中多次試驗(yàn)通過一次完成，縮短了檢測(cè)時(shí)間。此法可大大縮短測(cè)試時(shí)間，在24h內(nèi)得出結(jié)果，甚至某些可縮短至4h內(nèi)。用于檢測(cè)金黃色葡萄球菌的成品試劑盒有API、MIS等。測(cè)試片法：其將紙膜、紙片或膠片附著相關(guān)培養(yǎng)基和特定顯色液作為金葡菌的培養(yǎng)載體，依據(jù)金葡菌在載體上的生長(zhǎng)以及顯色情況，來衡量食品中金黃色葡萄球菌的存在數(shù)量，該方法簡(jiǎn)便易行，但結(jié)果精度不高。合理選擇食品原料和配料，使用安全的水和食物原料，改善加工環(huán)境的衛(wèi)生和操作者的個(gè)人衛(wèi)生習(xí)慣，避免金黃色葡萄球菌對(duì)食品的污染。牢記在安全的溫度下保存食物，生熟分開，建議食物應(yīng)該現(xiàn)做現(xiàn)吃。盡可能采取熱處理確保殺滅細(xì)菌，熱處理后避免二次污染。對(duì)已感染或攜帶某種病原體的食品加工人員，應(yīng)依據(jù)有關(guān)法律法規(guī)，限制其從事食品加工活動(dòng)。生產(chǎn)加工乳制品、肉類等高危食品的企業(yè)，應(yīng)認(rèn)真、嚴(yán)格的執(zhí)行食品安全國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)的相關(guān)規(guī)定。在加工過程中或在市場(chǎng)流通中發(fā)現(xiàn)產(chǎn)品檢驗(yàn)的某些指標(biāo)不符合食品安全國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)，應(yīng)以消費(fèi)者利益為重，自覺把控出廠產(chǎn)品的質(zhì)量、主動(dòng)召回不合格產(chǎn)品，防范引起中毒事件的潛在風(fēng)險(xiǎn)。政府相關(guān)部門要加強(qiáng)我國(guó)食品中金黃色葡萄球菌安全的風(fēng)險(xiǎn)識(shí)別和風(fēng)險(xiǎn)評(píng)估研究工作。重視并持續(xù)開展預(yù)防和控制食源性疾病的宣傳教育，及時(shí)提醒消費(fèi)者一旦發(fā)生疑似金黃色葡萄球菌腸毒素中毒，除立即將患者送往醫(yī)院進(jìn)行救治外，還要立即停止食用并封存可疑食品。同時(shí)