T-SPPHN 003-2023 單核苷酸多態(tài)性和侵染性克隆法鑒定蔬菜抗病毒病抗性技術(shù)規(guī)程

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B15/19湖南省植物保護(hù)學(xué)會(huì)團(tuán)體標(biāo)準(zhǔn)T/SPPHN

單核苷酸多態(tài)性和侵染性克隆法鑒定蔬菜抗病毒病抗性技術(shù)規(guī)程Rule

for

evaluation

of

vegetables

resistance

against

viral

diseases-single

polymorphism

and

viral

infectious

clone

method11-20

發(fā)布 11-20

實(shí)施湖南省植物保護(hù)學(xué)會(huì)

發(fā)布學(xué)兔兔ｗｗｗ．ｂｚｆｘｗ．ｃｏｍ標(biāo)準(zhǔn)下載T/SPPHN

003-2023學(xué)兔兔ｗｗｗ．ｂｚｆｘｗ．ｃｏｍ標(biāo)準(zhǔn)下載本文件是根據(jù)GB/T

《標(biāo)準(zhǔn)化工作導(dǎo)則

第一部分：標(biāo)準(zhǔn)的結(jié)構(gòu)和起草規(guī)則》的要求編制本文件由湖南省植物保護(hù)學(xué)會(huì)歸口。物保護(hù)研究所、寧波大學(xué)。學(xué)兔兔ｗｗｗ．ｂｚｆｘｗ．ｃｏｍ標(biāo)準(zhǔn)下載T/SPPHN

003-2023學(xué)兔兔ｗｗｗ．ｂｚｆｘｗ．ｃｏｍ標(biāo)準(zhǔn)下載

Solanum

）和辣椒（Capsicum

3.1

黃瓜花葉病毒（Cucumber

mosaic

virus,

Cucumovirus性降低。3.2

煙草花葉病毒（Tobacco

mosaic

virus，TMV）Tobamovirus），病毒粒子為桿狀結(jié)構(gòu)?？赏ㄟ^(guò)蚜蟲(chóng)、種子、水、土壤、機(jī)械和嫁接傳播，寄主范圍廣，侵染葫蘆3.3

黃瓜花葉病毒病（Cucumber

mosaic

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003-2023學(xué)兔兔ｗｗｗ．ｂｚｆｘｗ．ｃｏｍ標(biāo)準(zhǔn)下載畸形，植株矮化，花和果實(shí)易脫落，導(dǎo)致減產(chǎn)；果實(shí)畸形，從而失去商品性。3.4

煙草花葉病毒病（Tobacco

mosaic

畸形，果實(shí)著色不均勻或畸形，商品性嚴(yán)重下降。3.5

分子標(biāo)記(Molecular

3.6

CMV、TMV

infectious

cDNA

clones

of

CMV

orTMV

cDNA

3.7

disease

nursery的抗病水平。

4.1

CTAB

70

ddH

20

8.0)0.5

200

30

4.2

1.5%

1.5

100

504.3

50×TAE

242

57.1

37.2

ddH

4.4

SYBR

99

ddH

4.5

pH8.0

800

ddH

121

8.050

8.050

50%4.6

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003-2023學(xué)兔兔ｗｗｗ．ｂｚｆｘｗ．ｃｏｍ標(biāo)準(zhǔn)下載4.7

MS

4.43

30

5.8121

30

4.2

YEP

10

10

950

pH7.0

121

30

固體培養(yǎng)基添加瓊脂粉

4.3

100

500

的一次性注射器中，經(jīng)孔徑0.22

100

℃長(zhǎng)期保存。

50

250

利福平先用少量無(wú)水乙醇渦旋振蕩以溶解，再用無(wú)離子水定容至

，然后在超凈臺(tái)內(nèi)用一次性注射器和一次性0.22

濾膜過(guò)濾除菌，即配成50

利福平母液。分裝到個(gè)滅菌的

4.4

100

mmol/L

98.1

00

mmol/L

4.5

CMV、TMV

侵染性克隆農(nóng)桿菌菌株，采用該病毒的特異性引物和方法，擴(kuò)增出病毒基因組的全序列后，將擴(kuò)增產(chǎn)物克隆中，克隆進(jìn)行選和測(cè)定再利用限酶切法把基因全長(zhǎng)

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003-2023學(xué)兔兔ｗｗｗ．ｂｚｆｘｗ．ｃｏｍ標(biāo)準(zhǔn)下載6.1

10

6.2

Solanum

lycopersicum

Solanum

lycopersicum

Zuanhong

號(hào)（

6.3

70%30

20%0.1%15

5~66.4

131

℃，30~50

28

30

18

20

苗的子葉或第

7.1

7.2

DNA

7.2.1

100

107.2.2

0.2

15

12

000

10

7.2.3

20

7.2.4

12

000

10

7.2.5

75%

次；12

000

10

7.2.6

3050

ddH2O

7.3

PCR

7.3.1

20

μL10

μL10

μL

μL

μLddH2O15

μL學(xué)兔兔ｗｗｗ．ｂｚｆｘｗ．ｃｏｍ標(biāo)準(zhǔn)下載T/SPPHN

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檢測(cè)反應(yīng)體系

94

35

94

30

30

72

72

10

7.5

7.5.1

擴(kuò)增產(chǎn)物10

μL

1.5%80

30

7.5.2

7.5.3

7.6

8.1

將凍存的

侵染性克隆農(nóng)桿菌菌株接種至含卡那霉素

100

mg/L

和利福平

50

28

24

48

50

100

50

28

200

ｘｗ學(xué)兔兔ｗｗｗ．ｂｚｆ．ｃｏｍ標(biāo)準(zhǔn)下載T/SPPHN

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000

10

，隨即用

100

1.0

8.2

“6.2

子葉完全伸展和長(zhǎng)至第

0.1

辣椒植株置于防蟲(chóng)溫室里，進(jìn)行正常的肥水管理。

9.1

周后觀察鑒定植株的發(fā)病癥狀，

30

9.2

引起花葉病毒病的病情級(jí)別劃分病情級(jí)別，并計(jì)算每份鑒定材料的病情指數(shù)（），取三次重復(fù)病情指數(shù)的平均值?！疲?/p>

100 ..………….………(1)

Highly

20

2040

40

Susceptibleｚｆｗｗｗ．ｂｘｗ兔學(xué)兔．ｃｏｍ標(biāo)準(zhǔn)下載T/SPPHN

003-2023ｚｆｗｗｗ．ｂｘｗ兔學(xué)兔．ｃｏｍ標(biāo)準(zhǔn)下載

10

10.1

茄科作物材料對(duì)黃瓜花葉病毒病和煙草花葉病毒病抗性的評(píng)價(jià)標(biāo)準(zhǔn)10.2

茄科作物材料對(duì)黃瓜花葉病毒病和煙草花葉病毒病抗性的評(píng)價(jià)標(biāo)準(zhǔn)10.2

10.3

茄科作物材料抗黃瓜花葉病毒?。ū?/p>

年茄科作物材料抗黃瓜花葉病毒病鑒定結(jié)果記載表

年茄科作物材料抗煙草花葉病毒病鑒定結(jié)果記載表學(xué)兔兔ｗｗｗ．ｂｚｆｘｗ．ｃｏｍ標(biāo)準(zhǔn)下載T/SPPHN

003-2023學(xué)兔兔ｗｗｗ．ｂｚｆｘｗ．ｃｏｍ標(biāo)準(zhǔn)下載10.4

5’-3’

556235723055

、

、

、

、

、

、

15651617657001819

CTTTCC

CTC

TCC55950

569

20

CTTTCC

CCT下準(zhǔn)ｏｍ標(biāo)ｘｗ．ｃｚｆ學(xué)兔兔ｗｗｗ．ｂ載T/SPPHN

003-2023下準(zhǔn)ｏｍ標(biāo)ｘｗ．ｃｚｆ學(xué)兔兔ｗｗｗ．ｂ載

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A.1.1

Cucumovirus），病毒粒子為二十面體球狀結(jié)構(gòu)，是一種正單鏈植物病毒。煙草花葉病毒病的病原為煙草花葉病毒，屬于帚狀病毒科（）煙草花葉