SN-T1605-2017進出口植物性產(chǎn)品中氰草津、氟草隆、莠去津、敵稗、利谷隆殘留量檢驗方法液相色譜-質譜質譜法

中華人民共和國出入境檢驗檢疫行業(yè)標準代替SN/T1605—2005進出口植物性產(chǎn)品中氰草津、氟草隆、莠去津、敵稗、利谷隆殘留量檢驗方法液相色譜-質譜/質譜法inproductsofplantoriginforimportandexport—LC-MS/MSmethodI本標準按照GB/T1.1—2009給出的規(guī)則起草。本標準代替SN/T1605-2005《進出口植物性產(chǎn)品中氰草津、氟草隆、莠去津、敵稗、利谷隆殘留量檢驗方法高效液相色譜法》。本標準與SN/T1605—2005相比主要技術變化如下：—一適用基質增加了菠菜、橙子、大白菜等不同類型植物性產(chǎn)品；--樣品前處理由原先的中性氧化鋁過濾后C固相萃取柱凈化改為復合強陽離子交換固相萃取柱富集凈化；——優(yōu)化了色譜及質譜條件。請注意本文件的某些內容可能涉及專利。本文件的發(fā)布機構不承擔識別這些專利的責任。本標準由國家認證認可監(jiān)督管理委員會提出并歸口。本標準起草單位：中華人民共和國上海出入境檢驗檢疫局、中華人民共和國北京出入境檢驗檢疫局。本標準所代替標準的歷次版本發(fā)布情況為：進出口植物性產(chǎn)品中氰草津、氟草隆、莠去津、敵稗、利谷隆殘留量檢驗方法液相色譜-質譜/質譜法本標準規(guī)定了食用植物性產(chǎn)品中氰草津、氟草隆、莠去津、敵稗、利谷隆殘留的液相色譜-質譜/質譜檢測方法。的測定和確證。2規(guī)范性引用文件下列文件對于本文件的應用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，僅注日期的版本適用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本(包括所有的修改單)適用于本文件。GB/T6682分析實驗室用水規(guī)格和試驗方法3方法提要后，經(jīng)復合強陽離子交換柱凈化富集后，提取液經(jīng)氮吹至近干后用乙腈-水溶解，液相色譜-質譜/質譜檢4試劑材料除非另有說明，所用試劑均為分析純，水采用GB/T6682規(guī)定的一級水。4.5氯化鈉。4.6無水硫酸鈉：用前在650℃灼燒4h,冷卻后貯存于干燥器中。4.75mmol/L乙酸銨溶液(含0.1%甲酸):準確稱取0.3854g乙酸銨(4.4),用水溶解并轉移至1000mL4.8乙腈(含0.1%甲酸):取1.0mL甲酸用水定容至1L。4.92%甲酸溶液：量取2mL甲酸用水定容至100mL,混勻。4.10甲醇溶液(10+90,體積比):量取10mL甲醇和90mL水，混勻。4.11甲醇溶液(40+60,體積比):量取40mL甲醇和60mL水，混勻。4.12氨水-甲醇溶液(5+95,體積比):量取5mL氨水和95mL甲醇，混勻。24.13乙腈溶液(50+50,體積比):量取50mL乙腈和50mL水，混勻。濃度為1.00mg/mL的標準儲備液，4℃以下避光保存，可使用1年。4.16標準中間溶液：移取適量的標準儲備液，用乙腈配制濃度為100mg/L的標準溶液，4℃以下避光保存，可使用1個月。4.17標準工作溶液：移取適量的標準儲備液，用乙腈溶液(50+50,體積比)配制濃度為10.0ng/mL、4.18聚合物陽離子交換柱(OasisMCX):60mg,3mL。使用前用3mL甲醇和3mL水活化固相萃取柱。5儀器和設備5.5旋轉蒸發(fā)儀。5.6固相萃取裝置和真空泵。5.8渦旋混合器。5.10氮吹濃縮儀。6測定步驟準確稱取均質樣品4g(精確至0.001g),置于50mL塑料離心管中，加入2g氯化鈉，加入10.0mL乙腈混勻，以3000r/min高速均質1min～2min后，再以4000r/min離心5min,取5.00mL上清液轉移至旋轉蒸發(fā)瓶中，于40℃水浴減壓濃縮至近干，殘渣用5.00mL甲酸溶液(2+98,體積比)渦旋混合1min溶解。準確稱取均質樣品4g(精確至0.001g),置于50mL塑料離心管中，加入6mL水，10.0mL乙腈混勻，以3000r/min高速均質1min～2min后，再加入2g氯化鈉和2g無水硫酸鈉，以渦旋混合器混合1min后，再以4000r/min離心5min,取5.00mL上清液轉移至旋轉蒸發(fā)瓶中，于40℃水浴減壓濃縮至近干，殘渣用5.00mL甲酸溶液(2+98,體積比)渦旋混合1min溶解。將6.1提取液全部轉移至活化后的MCX固相萃取柱上；隨后分別用3mL2%甲酸溶液和3mL甲3醇溶液(40+60,體積比)洗滌旋轉蒸發(fā)瓶，待洗液全部通過固相萃取柱后，用真空泵抽干柱中殘留液體；隨后，用3mL5%氨化甲醇溶液洗脫并收集該洗脫液于10mL的刻度試管中，用真空泵抽干柱中殘留液體。收集的洗脫液于40℃下用氮氣吹至近干后，用乙腈溶液(50+50,體積比)振蕩溶解并定容至6.3基質標準工作溶液的制備取空白樣品，按上述操作步驟到收集液經(jīng)氮氣吹至近干，按照標準曲線最終定容濃度分別加入標準工作溶液(4.17),并以乙腈溶液(50+50,體積比)振蕩溶解并定容，制備基質標準工作曲線。6.4測定6.4.1液相色譜條件液相色譜條件如下：a)色譜柱：整體化硅膠柱Chromlith@HighResolutionRP-18e50mm×4.6mm,孔徑2μm,空隙大小15nm(150?)或相當者；d)流動相：A:5mmol/L乙酸銨水溶液(含0.1%甲酸),B:乙腈(含0.1%甲酸);f)梯度洗脫條件見表1。時間/min02786.4.2.1離子化模式：電噴霧離子源(ESI),正離子模式。6.4.2.3其他參考質譜條件參見附錄A。6.4.3液相色譜-質譜/質譜測定在相同實驗條件下，樣品中待測物質的保留時間，與基質標準溶液的保留時間偏差在±2.5%之內；4每種化合物的質譜定性離子至少應包括一個母離子和兩個子離子，且樣品中各組分定性離子的相對豐度與濃度接近的基質混合標準工作溶液中對應的定性離子的相對豐度進行比較，偏差不超過表2規(guī)定的范圍，則可判定為樣品中存在對應的待測物。表2定性確證時相對離子豐度的最大允許偏差相對離子豐度>20%～50%>10%～20%允許的最大偏差士25%6.4.3.2定量測定根據(jù)試樣中被測物的含量，選取適宜的標準工作溶液進行分析。以峰面積為縱坐標，工作溶液質量濃度為橫坐標繪制標準工作曲線，用標準工作曲線對樣品進行定量，樣品溶液中待測物的響應值均應在儀器測定的線性范圍內。在上述儀器條件下的保留時間參見附錄A表A.1,標準溶液的多反應監(jiān)測色譜圖參見附錄B中圖B.1。6.4.4空白試驗除不加試樣外，按上述測定步驟進行。7結果計算和表述按式(1)計算樣品中目標物殘留量，計算結果需扣除空白值： (1)式中：X;——試樣中化合物殘留量，單位為微克每千克(μg/kg);c——由回歸曲線得到的試樣溶液中化合物含量，單位為微克每升(μg/L);V——樣品溶液最終定容體積，單位為毫升(mL);m——最終樣品溶液所代表的試樣質量，單位為克(g)。8方法的測定低限和回收率本方法測定低限為10μg/kg。不同基質中不同添加水平下的回收率實驗數(shù)據(jù)見表3。表3不同基質中氰草津、氟草隆、莠去津、敵稗和利谷隆殘留量在不同添加水平下的回收率試驗數(shù)據(jù)表樣品名稱化合物名稱添加水平/(mg/kg)回收率范圍/%(n=6)大米氰草津0.0185.0～94.02.0088.2～97.291.0～97.5氟草隆0.0187.5～90.52.0083.2～91.597.0～1095樣品名稱化合物名稱添加水平/(mg/kg)回收率范圍/%(n=6)大米莠去津83.0～89.590.5～94.590.0～95.5敵稗85.5～98.592.5～110利谷降80.5～94.594.8～11092.5～103橙子氰草津86.7～91.188.0～89.7氟草隆93.0～10782.5～91.684.8～99.3莠去津91.5～98.084.3～91.385.9～94.7敵稗87.0～10083.7～94.786.3～100利谷隆79.5～92.581.5～91.1玉米氰草津87.0～96.584.3～91.695.7～110氟草隆82.6～97.584.5～10389.8～96.8莠去津89.0～99.089.0～11292.0～1086表3(續(xù))樣品名稱化合物名稱添加水平/(mg/kg)回收率范圍/%(n=6)玉米敵稗89.0～98.095.1～10利谷隆81.0～92.583.9～92.092.4～103菠菜氰草津89.9～11596.7～100氟草隆89.9～11592.4～104莠去津98.0～11094.5～111敵稗89.5～10188.7～98.295.5～102利谷隆88.5～98.083.6～89.691.4～109大白菜氰草津93.0～10992.1～99.392.0～103氟草降93.0～10992.1～99.392.0～103莠去津98.0～10096.1～108敵稗89.0～99.592.7～10894.1～1037表3(續(xù))樣品名稱化合物名稱添加水平/(mg/kg)回收率范圍/%(n=6)大白菜利谷隆大豆氰草津氟草隆莠去津敵稗利谷隆8(資料性附錄)質譜參考條件!質譜參考條件如下：a)電噴霧電壓(IS):正模式5500V;b)碰撞氣壓力(CAD):68.9kPa(10psi);c)氣簾氣壓力(CUR):207kPa(30psi);d)霧化氣壓力1(GS1):414kPa(60psi);e)輔助氣壓力2(GS2):414kPa(60psi);f)離子源溫度(TEM):550℃;g)定性離子對、定量離子對、去簇電壓、碰撞能量及其他相關參數(shù)見表A.1。表A.15種除草劑ESI-MS/MS監(jiān)測離子對及對應碰撞氣能量化合物名稱保留時間監(jiān)測離子對去簇電壓DP/V碰撞能量CE/V碰撞室入口電壓EP/V碰撞室出口電壓CXP/V氰草津9氟草隆莠去津6利谷隆敵稗9注：*為定量離子對，對于不同質譜儀器，儀器參數(shù)可能存在差異，測定前應將質譜參數(shù)優(yōu)化到最佳1)非商業(yè)性聲明：本標準列出的儀器型號僅為提供參考，并不涉及商業(yè)目的，鼓勵標準使用者嘗試不同廠家或型號的儀器。9(資料性附錄)多反應監(jiān)測色譜圖ThestandardisdraftedaccordancewiththerulesgivenintheGB/T1.1—2009.ThestandardisareplacementofSN1605—2005Inspectionofcyanazine,fluometuron,atrazine,pro-panilandlinuronresiduesinproductsofplantoriginforimportandexport—HPLC.ThemainimprovementfromSN1605—2005:—Thesamplepretreatmentischangedtosolidphaseextraction(SPE),comparedtotheformeredi-tion,whichadoptedmanuallyloadedchromatographiccolumn;一Thechapterof“Samplingprocedure”isdeleted;—Thematrixscopewasenlargedtospinach,orange,cabbage,andetc;一Thechromatographyconditionisoptimizd.Somepartsofthestandardmayhaverelationshipwithsomepatents.Thereleasedepartmenthavenoresponsibilitytorecognizethesepatents.ThisstandardwasproposedbyandisunderthechargeoftheCertificationandAccreditationAdmin-istrationofthePeople'sRepublicofChina.ThisstandardwasdraftedbytheShanghaiEntry-ExitInspectionandQuarantineBureauofthePeople'sRepublicofChina.ThemaindraftersofthisstandardareZhouYao,ShengYonggang,ShiYiyin,ZhangRunhe,FanYanli,Thepreviousversionsofthisstandardareasfollows:—SN/T1605—2005.Determinationofcyanazine,fluometuron,atrazine,ThestandardspecifiestheHPLC-MS/MSmethodofdeterminationofcyanazine,fluometuron,atrazine,propanilandlinuronresiduesinproductsofplantoriginforimportandexport.Thisstandardisapplicabletodeterminationofcyanazine,fluometuron,atrazine,propanilandlinuronresiduesinrice,orange,corn,spinach,cabbageandsoybean.Thefollowingreferenceddocumentsareindispensablefortheapplicationofthisdocument.Fordatedreferences,onlytheeditioncitedapplies.Forundatedreferences,thelatesteditionofthereferenceddocument(includinganyamendments)applies.GB/T6682Waterforanalyticallaboratoryuse—SpecificationandtestmethodsThecyanazine,fluometuron,atrazine,propanilandlinuronresiduesinsamplesisextractedbyacetoni-tril,theextractisconcentratedundervacuumandreconsititutedin2%fomicacidwater,thencleaned-upbypolymerstrongcationexchangeSPEcolumn(MCXcolumn).TheextractisdeterminedbyHPLC-MS/MSaftercondensationandreconstitution,andquantifiedbyexternalmatrixmixedstandardmethod.Unlessotherwisespecified,allreagentusedshouldbeanalyticalgrade,waterisdeionizedwater.4.1Methanol:HPLCgrade.4.2FormicAcid:HPLCgrade4.4Ammoniumacetate:HPLCgrade.4.6Anhydroussodiumsulfate:Driedat650℃for4handkeepinatightlyclosedcontainer.4.75mmol/Lammoniumacetatesolution(containing0.1%formicacid):dissolve0.3854gammo-niumacetatein1000mLwater,add1.00mLforthoroughly.4.10Methanolsolution(10+90,V/V):mix10mLmethanoland90mLwaterthoroughly.4.12Ammoniumhydroxide-methanol(5+95,V/V):mix5mLammoniumhydroxideand95mLmethanolthoroughly.4.13Actonitrilesolution(50+50.V/V):mix50mLacetonitriland50mLwaterthoroughly.4.14Standards:cyanzaine(CASNo.21725-46-2),flumometruon(CASNo.2164-17-2),atrazine(CASNo.1912-24-9),propanil(CASNo.709-98-8).linuron(CAS330-55-2),purity≥98%.4.15Stockstandardsolutions:accuratelyweigheachstandard,anddissolveitinacetonitrileto4.16Intermediatesolution:takeappropriatestocksolutionsanddissolvethemtogatherinactonitril4.17Workingsolution:takeappropriateintermediatesolution,anddissolveitinacetonitrilto10.0ng/mL,20.0ng/mL,50.0ng/mL,100ng/mL,500ng/mL.4.18Polymercationexchangecomethanoland3mLwaterbeforeuse.5.1Liquidchromatograhycombinedwithelectrosprayionizationmassspectrometry.5.2Balances:0.01mg,0.01g.5.3Homogenizer:3000r/min.5.5Rotaryevaporator.5.6SPEdeviceswithvacuumairpump.5.7Centrifuger:5000r/min.5.10Nitrogenconcentr5.11Syringeand0.22μmmembranefilter.5.1250mLcentrifugetube.tril,homogenizethemixtureat3000r/minfor1min～2min.Themixturewas4000r/minfor5min.Take5.00mLsupernatantintoarotarytube,andconcentratedundervacat40℃.Theremainsisdissolvedthoroughlyforfurthercleanup.6.1.2Soybean,riceandcornWeigh4g(0.001g)sampleina50mLcentrTake5.00mLsupernatantintoarotarytube,andconcentratedundervaccutrateisdissolvedin5.00mLformicacid-water(2+98,V/V),andmixthemixturethoroughlyforfurthercleanup.Loadtheextractaboveonthecolumn.Washthecolumnwith3mLformicacidsolution(2+98,V/V),and3mLmethanol-water(40+60,V/V)andthenuse3mLammoniumhydroxide-methanol(5+95,V/V)toelutetheanalytes.DrytheeluatebyN,in40Cwaterbathandreconstitutethean-alytein2.00mLacetonitrilesolution(50+50,V/V).Mixthemthoroughlyandfilterthemby0.22μmmembraneforfurtherHPLC-MS/MSanalysis.Processtheblanksampleasabsolutiontomakematrixmatchedworkingstandard.TheHPLCoperatingconditionsisasfollows:a)Column:ChromlithHighResolutionRP-18e50mm×4.6mm,ortheequivalent;b)Columntemperature:roomtemperature;c)Injectionvolume:20μL;d)Mobilephase:A:5mmol/LAmmoniumAcetate(containing0.1%formicacid),B:Acetonitrile(containing0.1%formicacid);Time/minA/%B/%0278Table1(continued)Time/minA/%B/%6.4.2.3OtherMS/MSparametersseetheAnnexA.DeterminethesampleundertheestablishedLC/MS-MSconditions,andcalculatetheintensityratiooftimeofsamplechromatogrampeakareconsistentwiththatofworkingsolution,andtherelativeabundanceratiotolerancemeetstherequirementslistedintheTable2,itcanbeconcludedthatthiscompounddoesexistinthesample.Table2—MaximumpermittedtolerancesforrelativeionintensitieswhileconformationRelativeionintensities土25%AccordingtotheaboveHPLC-MS/MSoperatingcondition,determinethesamplesolutionandthestandardworkingsolutionsimultaneously.Theresponsesoftheanalytesinthestandardworkingso-lutionandthesamplesolutionshouldbewithinthelinearrangeoftheinstrumentdetection.Theoperationoftheblanktestisthesameasthatdescribedinthemethodofdeterminationbutwiththeomissionofsampleaddition.7CalculationandexpressionofresultCalculatethecontentofresiduesinthetestsamplebyHPLC-MS/MSdataprocessororaccordingtotheformula(1).Theblankvalueshouldbesubtractedfromtheaboveresultofcalculation.…………Where:X,—theresiduecontentinthetestsample,μg/kg;c—theconcentrationinstandardworkingsolution,ug/L;V—thefinalvolumeofthesamplesolution,mL;m—massoftestsampleoffinalsamplesolution,g.8LimitofquantitationandrecoveryThelimitofquantificationis10μg/kg.Accordingtotheexperimentaldata,thecorrespondingrecoveryofeachfortifyinglevelindifferentTable3—Recoveryresultsofeachfortifyinglevelindifferentmatrixforcyanazine,flum