SN-T4524-2016出口糧谷中6鐘麥角堿的測定液相色譜-質(zhì)譜質(zhì)譜法

中華人民共和國出入境檢驗檢疫行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)SN/T4524—2016出口糧谷中6種麥角堿的測定液相色譜-質(zhì)譜/質(zhì)譜法LC-MS/MSmethod2016-06-28發(fā)布I本標(biāo)準(zhǔn)按照GB/T1.1—2009給出的規(guī)則起草。本標(biāo)準(zhǔn)由國家認證認可監(jiān)督管理委員會提出并歸口。本標(biāo)準(zhǔn)起草單位：中國檢驗檢疫科學(xué)研究院、中華人民共和國廈門出入境檢驗檢疫局。1出口糧谷中6種麥角堿的測定液相色譜-質(zhì)譜/質(zhì)譜法2規(guī)范性引用文件下列文件對于本文件的應(yīng)用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，僅注日期的版本適用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本(包括所有的修改單)適用于本文件。GB/T6682分析實驗室用水規(guī)格和實驗方法3方法提要試樣用乙腈/碳酸銨混合溶液提取，提取液經(jīng)多功能凈化柱凈化后，液相色譜-質(zhì)譜/質(zhì)譜儀檢測和確證，外標(biāo)法定量。鑒于該方法涉及的麥角堿在室溫條件下，易消旋為差向異構(gòu)體，建議盡量縮短前處4試劑和材料4.3碳酸銨溶液(3mmol/L):稱取0.20g碳酸銨，用水溶解并定容至1L。4.4乙腈-碳酸銨混合溶液(84+16):量取160mL碳酸銨溶液(4.3),乙腈定容至1L。4.6麥角堿標(biāo)準(zhǔn)儲備溶液(100mg/L):分別稱取10.0mg的麥角堿標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)(4.5),用乙腈溶解并轉(zhuǎn)移4.7混合標(biāo)準(zhǔn)中間溶液(1mg/L):準(zhǔn)確移取各麥角堿標(biāo)準(zhǔn)儲備溶液(4.6)1mL于100mL容量瓶中，4.8混合標(biāo)準(zhǔn)工作溶液：根據(jù)需要，使用前吸取適量的混合標(biāo)準(zhǔn)中間溶液(4.7),用碳酸銨溶液(4.3)配制成濃度為2.0pg/kg、5.0pg/kg、10μg/kg、20μg/kg、50pg/kg的混合標(biāo)準(zhǔn)工作溶液。現(xiàn)用現(xiàn)配。1)非商業(yè)性聲明：本標(biāo)準(zhǔn)方法采用在MycoSep@150麥角堿多功能凈化柱完成樣品凈化和提取的，此處所列的固相凈化柱型號僅是為了提供參考，并不涉及商業(yè)目的，鼓勵標(biāo)準(zhǔn)使用者嘗試不同型號的固相凈化柱。25儀器與設(shè)備5.4渦旋混合器。6試樣制備與保存于清潔樣品容器中，密封，并做好標(biāo)記。將制備好的試樣于0℃~4℃冷藏保存。在制樣的操作過程中，應(yīng)防止樣品受到污染。7測定步驟試樣經(jīng)粉碎后，稱取4g(精確到0.01g)于50mL離心管中.加入20mL乙腈-碳酸銨混合溶液(4.4),振蕩提取30min,離心10min(10000r/min柱管內(nèi)洗脫液0.5mL于另一試管中，再加入0.5mL碳酸銨溶液(4.3),混合均勻，微孔濾膜(4.9)過濾液相色譜條件為：f)梯度洗脫條件見表1。3表1流動相及梯度洗脫條件時間/min01267.3.2質(zhì)譜條件質(zhì)譜條件為：a)電離方式：電噴霧電離(ESI)。b)掃描方式：正離子掃描。c)電噴霧電壓、離子源溫度、霧化氣、輔助氣、氣簾氣和碰撞氣均為高純氮氣，使用前應(yīng)調(diào)節(jié)各氣體流量以使質(zhì)譜靈敏度達到檢測要求，具體參數(shù)參見附錄A。d)監(jiān)測方式：多反應(yīng)監(jiān)測(MRM).具體參數(shù)參見附錄A中表A.1。7.3.3定性測定按照上述儀器條件測定樣品和標(biāo)準(zhǔn)工作溶液，如果檢出的質(zhì)量色譜峰保留時間與標(biāo)準(zhǔn)樣品一致，并且在扣除背景后的樣品譜圖中，各定性離子的相對豐度與濃度接近的同樣條件下得到的標(biāo)準(zhǔn)溶液譜圖相比，最大允許相對偏差不超過±30%則可判斷樣品中存在對應(yīng)的被測物。標(biāo)準(zhǔn)溶液的液相色譜-質(zhì)譜/質(zhì)譜多反應(yīng)監(jiān)測(MRM)色譜圖參見附錄B中圖B.1。7.3.4定量測定以混合標(biāo)準(zhǔn)工作液中麥角堿的濃度為橫坐標(biāo).以峰面積比為縱坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，按照外標(biāo)法進行定量計算，由標(biāo)準(zhǔn)曲線得到相應(yīng)目標(biāo)化合物的濃度。樣液平行測定次數(shù)不少于兩次。待測樣液中麥角堿的響應(yīng)值應(yīng)在標(biāo)準(zhǔn)曲線范圍內(nèi)，超過線性范圍則應(yīng)重新分析：7.4空白試驗除不稱取試樣外，均按上述步驟進行：7.5結(jié)果計算和表述按式(1)計算試樣中麥角堿的含量： (1)式中：X,——試樣中麥角堿含量，單位為微克每千克(μg/kg);c,——根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線上計算得出的試樣溶液中麥角堿的濃度，單位微克每升(μg/L);c?！鶕?jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線上計算得出的空白溶液中麥角堿的濃度，單位微克每升(μg/L);V,——試樣溶液體積，單位為毫升(mL);m——試樣溶液所代表的試樣質(zhì)量，單位為克(g)。計算結(jié)果保留3位有效數(shù)字。4本方法在20μg/kg～400pg/kg添加濃度下，回收率為72.5%～103.3%。5(資料性附錄)質(zhì)譜參考條件如下：a)毛細管電壓：5500V;i)監(jiān)測方式：多反應(yīng)監(jiān)測(MRM),各參數(shù)見表A.1。表A.1麥角堿MRM質(zhì)譜參中文名稱英文名稱CAS號母離子m/z子離子m/z去簇電壓V碰撞電壓V麥角新堿麥角