尾葉香茶菜化學(xué)及生物活性成分研究

尾葉香茶菜化學(xué)及生物活性成分研究唇形科香茶菜屬植物全世界約150種,我國(guó)產(chǎn)111種。尾葉香茶菜Isodonexcisa（maxim.）hara,分布于我國(guó)東北、日本、朝鮮以及俄羅斯的遠(yuǎn)東地區(qū)。尾葉香茶菜的全草都可入藥,具有清熱解毒、健胃活血的功效。尾葉香茶菜的主要化學(xué)成分為貝殼杉烯型二萜類(lèi)化合物。自1981年以來(lái),已從中分離出11種貝殼杉烯型二萜類(lèi)化合物。藥理研究表明,尾葉香茶菜中的二萜類(lèi)成分對(duì)人體鼻咽癌細(xì)胞（KB）、人體宮頸癌（Hela）細(xì)胞有明顯的抑制作用,對(duì)體內(nèi)移植性腫瘤艾氏腹水癌（ECA）、肉瘤-180（S—180）、小鼠白血?。≒388）均有顯著的生長(zhǎng)抑制作用。為了進(jìn)一步研究尾葉香茶菜的化學(xué)成分和生物活性,本論文對(duì)遼寧省五個(gè)產(chǎn)地的尾葉香茶菜的化學(xué)成分進(jìn)行了提取、分離及結(jié)構(gòu)鑒定,并通過(guò)體內(nèi)、體外試驗(yàn)研究了其藥理活性。本論文共分六章。第一章簡(jiǎn)要綜述了唇形科香茶菜屬植物、尾葉香茶菜的化學(xué)成分和藥理學(xué)研究以及化學(xué)分析技術(shù)在中草藥研究中的應(yīng)用。自1954年日本學(xué)者發(fā)現(xiàn)延命草的提取物及其主要成分延命素的抗菌活性以來(lái),隨著從該屬植物中大量發(fā)現(xiàn)對(duì)映—貝殼杉烯類(lèi)化合物,發(fā)現(xiàn)了除抗腫瘤作用、抗菌抗病毒作用、抗氧化作用及其他系列活性,如細(xì)胞毒、抑制線粒體的氧化磷酸化作用、昆蟲(chóng)拒食活性、植物生長(zhǎng)調(diào)節(jié)劑活性、抗炎及心血管系統(tǒng)方面的活性;臨床應(yīng)用主要為民間使用,作為健胃藥、驅(qū)蟲(chóng)藥;用于治療跌打損傷、蛇咬傷、瘡毒及消炎退熱;內(nèi)服治療腸炎、痢疾、瘧疾、黃膽型肝炎、咽喉腫痛、扁桃體炎等,外敷治療紅腫瘡毒;特別是河南等省產(chǎn)的冬凌草除用于抗菌消炎外,還廣泛用于食道癌、賁門(mén)癌等癌癥的治療。該屬植物資源隨著人們對(duì)其生物活性的不斷深入認(rèn)識(shí),相關(guān)的研究已有了很大進(jìn)展,主要集中在化學(xué)成分的分離、結(jié)構(gòu)鑒定等研究方面,但對(duì)其藥理活性的相關(guān)研究較少。第二章從尾葉香茶菜地上部分中提取揮發(fā)油以及其他化學(xué)成分,并采用小鼠扭體法和二甲苯致小鼠耳腫脹法對(duì)揮發(fā)油鎮(zhèn)痛、抗炎等藥理作用進(jìn)行研究。采用水蒸汽蒸餾法對(duì)不同生長(zhǎng)期尾葉香茶菜揮發(fā)油進(jìn)行提取;采用氣相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用（GC—MS）法對(duì)揮發(fā)油化學(xué)成分進(jìn)行鑒定,通過(guò)Xcalibur質(zhì)譜工作站,對(duì)得到的各化合物質(zhì)譜圖通過(guò)NIST02版質(zhì)譜數(shù)據(jù)庫(kù)圖庫(kù)進(jìn)行對(duì)照鑒定,再結(jié)合相關(guān)文獻(xiàn)分析,確定出所提取的尾葉香茶菜揮發(fā)油的化學(xué)成分。按照峰面積歸一化法計(jì)算出各個(gè)化學(xué)成分的百分含量,結(jié)果從尾葉香茶菜揮發(fā)油中分離出68個(gè)峰,鑒定出27個(gè)化合物,鑒定出的化合物占揮發(fā)油總量的43.30%,主要以含氧衍生物為主,也含有少量的直鏈烷、烯和炔烴。藥理學(xué)實(shí)驗(yàn)結(jié)果（一）經(jīng)t檢驗(yàn),與空白組比較,阿司匹林組,揮發(fā)油組劑量為0.028mL·kg^-1,0.055mL·kg^-1和0.100mL·kg^-1組均有非常顯著意義,抑制率分別為35.31%、40.83%和52.66%,揮發(fā)油藥理作用隨劑量的增大而增強(qiáng);（二）經(jīng)過(guò)t檢驗(yàn),與空白組,氫化可的松組,揮發(fā)油劑量為0.028mL·kg^-1和0.055mL·kg^-1組對(duì)二甲苯致小鼠耳腫脹有明顯的抑制作用,抑制率分別為44.36%和26.72%;這表明尾葉香茶菜揮發(fā)油具有顯著的抗炎和鎮(zhèn)痛作用。另以尾葉香茶菜地上部分為原料,通過(guò)溶劑提取及薄層層析（TLC）、反復(fù)硅膠柱層析和高效液相色譜（HPLC）分離,得到化合物Ⅰ～Ⅴ,用紅外（IR）、質(zhì)譜（MS）和核磁（NMR）分析儀器鑒定出從尾葉香茶菜中分得的3個(gè)貝殼杉烯型二萜類(lèi)化合物,分別為化合物1（Ursolicacid）、化合物2（Kamebanin）、化合物3（Kamebakaurin）。第三章利用電感耦合等離子體質(zhì)譜（ICP—MS）對(duì)尾葉香茶菜中無(wú)機(jī)微量元素進(jìn)行了測(cè)定,通過(guò)ICP—MS法測(cè)得尾葉香茶菜中9種微量元素的含量,結(jié)果顯示尾葉香茶菜中各種有益微量元素分別是Al、K、Ca、Mg、V、⁵⁶Fe、⁵⁷Fe、Zn,其含量分別為0.318、0.264、0.129、0.072、0.025、0.0102、0.0187、0.0744(μg·g^-1)等（本溪產(chǎn)）;利用化學(xué)方法對(duì)尾葉香茶菜的多糖進(jìn)行了提取并采用小鼠耳腫脹法和醋酸致小鼠腹膜炎法進(jìn)行有關(guān)的藥理學(xué)研究,同時(shí)與尾葉香茶菜總二萜、水煎液和醇提液的藥理作用進(jìn)行了對(duì)比。結(jié)果發(fā)現(xiàn)尾葉香茶菜水煎液,尾葉香茶菜醇提液、尾葉香茶菜總二萜溶液、尾葉香茶菜多糖溶液均有較顯著的抗炎作用,尤其尾葉香茶菜水煎液效果更好,能非常顯著的抑制炎癥早期的表現(xiàn)。而尾葉香茶菜醇提液、尾葉香茶菜總二萜溶液、尾葉香茶菜多糖溶液的抗炎作用無(wú)顯著性差異。第四章通過(guò)小鼠體內(nèi)移植性腫瘤模型,對(duì)尾葉香茶菜葉總二萜的抗腫瘤作用進(jìn)行了實(shí)驗(yàn)研究。尾葉香茶菜葉總二萜100、200mg·kg^-1（相當(dāng)于小鼠急性毒性LD50的1/25、1/12.5）對(duì)小鼠Lewis肺癌以及黑色素瘤B16具有較強(qiáng)的生長(zhǎng)抑制作用,進(jìn)一部探討尾葉香茶菜作為抗腫瘤藥物的開(kāi)發(fā)前景。第五章對(duì)不同產(chǎn)地的尾葉香茶菜進(jìn)行藥理學(xué)研究比較,同時(shí)選用尾葉香茶菜甲醇提取部分作為考察對(duì)象,建立了尾葉香茶菜HPLC指紋圖譜,同時(shí)用相關(guān)系數(shù)法計(jì)算特征指紋峰的相似度。中藥指紋圖譜是近年迅速發(fā)展起來(lái)的一種中藥質(zhì)量控制模式,相對(duì)于以前用單個(gè)或少數(shù)主要成分作為指標(biāo)來(lái)控制中藥質(zhì)量的方法,中藥指紋圖譜能較為全面的反映藥用植物的內(nèi)在質(zhì)量,具有系統(tǒng)性、整體性和穩(wěn)定性等特點(diǎn)。尾葉香茶菜的植物資源分布較廣,造成了藥用植物質(zhì)量的不規(guī)范,品質(zhì)各異。為了避免尾葉香茶菜藥用植物質(zhì)量差異影響到其進(jìn)一步的開(kāi)發(fā)利用,需要建立起一套能?chē)?yán)格控制藥用植物內(nèi)在質(zhì)量的技術(shù)手段。相似度表示的是樣品指紋圖譜與對(duì)照指紋圖譜間的相似程度,綜合了樣品的定性信息和定量數(shù)據(jù)。由實(shí)驗(yàn)結(jié)果可見(jiàn),本文所選不同生長(zhǎng)期及不同產(chǎn)地的各批次尾葉香茶菜藥用植物指紋圖譜與對(duì)照品指紋圖譜之間相似性良好,反映了藥用植物的同源性,可以用來(lái)作定性研究。各批次尾葉香茶菜藥用植物樣品指紋圖譜與對(duì)照指紋圖譜的相似度高低順序?yàn)槲妪埳?月（0.9908）＞新賓9月（0.9888）＞湯溝8月（0.9822）＞湯溝9月（0.9798）＞新賓8月（0.9728）＞湯溝7月（0.9681）＞千山8月（0.9629）＞鳳凰山8月（0.9435）,與其活性成分含量的高低具有相關(guān)性,能夠反映各產(chǎn)地（或生長(zhǎng)期）尾葉香茶菜藥用植物的內(nèi)在質(zhì)量差異。第六章在傳統(tǒng)應(yīng)用理論和內(nèi)服療效確切的前提下,我們?cè)谂R床初試的基礎(chǔ)上結(jié)合現(xiàn)代藥理研究成果及制劑工藝,研制出純中藥制劑——炎必消膠囊,具有清熱解毒,泄火通瀉及很好的抗炎、抗病毒作用。經(jīng)解放軍第二○二醫(yī)院臨床應(yīng)用多年,對(duì)治療牙周炎、牙齦炎、咽喉腫痛、口腔炎癥及上呼吸道炎癥等均獲得滿意的臨床