GB／T 4789.4-2003食品衛(wèi)生微生物學檢驗沙門氏菌檢驗

代替GB/T4789.4—1994食品衛(wèi)生微生物學檢驗沙門氏菌檢驗2003-08-11發(fā)布中國國家標準化管理委員會本標準與GB/T4789.4—1994相比主要修改如下： 食品衛(wèi)生微生物學檢驗沙門氏菌檢驗本標準適用于各類食品和食物中毒樣品中沙下列文件中的條款通過本標準的引用而成為本標準的條款。凡是注日期的引用文件，其隨后所有3.4均質器或滅菌乳缽。3.11滅菌毛細管。4.1緩沖蛋白胨水(BP):按GB/T4789.28-2003中4.12規(guī)定。4.2氯化鎂孔雀綠(MM)增菌液：按GB/T4789.28-2003中4.13規(guī)定。4.4亞硒酸鹽胱氨酸(SC)增菌液：按GB/T4789.28—2003中4.16規(guī)定。4.5亞硫酸鉍瓊脂(BS):按GB/T4789.28—2003中4.19規(guī)定。4.6DHL瓊脂：按GB/T4789.28-2003中4.20規(guī)定。4.7HE瓊脂：按GB/T4789.28—2003中4.21規(guī)定。4.8WS瓊脂：按GB/T4789.4.9SS瓊脂：按GB/T4789.28—2003中4.22規(guī)定。4.11蛋白胨水、靛基質試劑：按GB/T4784.12尿素瓊脂(pH7.2):按GB/T4789.28—2003中3.15規(guī)定。4.13氰化鉀(KCN)培養(yǎng)基：按GB/T4789.28—2003中3.16規(guī)定。4.14氨基酸脫羧酶試驗培養(yǎng)基：按GB/T4789.28—2003中3.12規(guī)定，4.18丙二酸鈉培養(yǎng)基：按GB/T沙門氏菌檢驗程序見圖1。凍肉、蛋品、乳品及其他加工食品25g+BP225mL36℃±1℃一般4h,于蛋品18h～24h加工的食品25g+滅菌生理鹽水25mL,做成檢樣勻液10mL+MM10mL+10mL+SC100mL檢樣勻液25mL+檢樣勻液25mL+mLTSI(斜面、底層、產氣、H?S),蛋白胨水(靛基質),尿素(pH7.2),KCN,賴氨酸尿素-KCN-賴氨酸+尿素-KCN-賴氨酸+尿素-KCN-賴氨酸+/-非如左述的各種反應結果沙門氏菌血清學試驗沙門氏菌血清學試驗非沙門氏菌報告沖蛋白胨水的500mL廣口瓶內。固體食品可先應用均質器以8000r/min～10000r/min打碎1min,或用乳缽加滅菌砂磨碎，粉狀食品用滅菌匙或玻棒研磨使乳化，于36℃±1℃培養(yǎng)4h(干蛋品培養(yǎng)18h～24h),移取10mL,轉種于100mL氯化鎂孔雀綠18h～24h。同時，另取10mL,轉種于100mL亞硒酸鹽胱氨酸增菌液內，于36℃士1℃培養(yǎng)18h~鮮肉、鮮蛋、鮮乳或其他未經加工的食品不必經過前增菌。各取25g(25mL)加入滅菌生理鹽水SS瓊脂平板)。兩種增菌液可同時劃線接種在同一個平板上。于36℃±1℃分別培養(yǎng)18h～24h氏菌Ⅲ在各個平板上的菌落特征見表1。表1沙門氏菌屬各群在各種選擇性瓊脂平板上的菌落特征選擇性瓊脂平板沙門氏菌I、Ⅱ、IV、V、VI沙門氏菌Ⅲ(即亞利桑那菌)亞硫酸鉍瓊脂產硫化氫菌落為黑色有金屬光澤、棕褐色或灰色，菌落周圍培養(yǎng)基可呈黑色或棕色；有些菌株不產生硫化氫，形成灰綠色的菌落，周圍培養(yǎng)基不變黑色有金屬光澤無色半透明，產硫化氫菌落中心帶黑色或幾乎全黑色乳糖遲緩陽性或陰性的菌株與沙門氏菌I、Ⅱ、IV、V、VI相同；乳糖陽性的菌株為粉紅色，中心帶黑色HE瓊脂WS瓊脂藍綠色或藍色，多數(shù)菌株產硫化氫，菌落中心黑色或幾乎全黑色乳糖陽性的菌株為黃色，中心黑色或幾乎全黑色；乳糖遲緩陽性或陰性的菌株為藍綠色或藍色，中心黑色或幾乎全黑色SS瓊脂無色半透明，產硫化氫菌株有的菌落中心帶黑色，但不如以上培養(yǎng)基明顯乳糖遲緩陽性或陰性的菌株，與沙門氏菌I、Ⅱ、IN、V、VI相同；乳糖陽性的菌株為粉紅色，中心黑色，但中心無黑色形成時與大腸艾希氏菌不能區(qū)別科常見屬種的反應結果見表2。斜面底層產氣硫化氫可能的菌屬和種++沙門氏菌屬、弗勞地氏檸檬酸桿菌、變形桿菌屬、緩慢愛德華氏菌十++沙門氏菌Ⅲ、弗勞地氏檸檬酸桿菌、普通變形桿菌++沙門氏菌屬、大腸埃希氏菌、蜂窩哈夫尼亞菌、摩根氏菌、普羅菲登斯菌屬表2(續(xù))斜面底層產氣硫化氫可能的菌屬和種一+一傷寒沙門氏菌、雞沙門氏菌、志賀氏菌屬、大腸埃希氏菌、蜂窩哈夫尼亞菌、摩根氏菌、普羅菲登斯菌屬十十十/一一大腸埃希氏菌、腸桿菌屬、克雷伯氏菌屬、沙雷氏菌屬、弗勞地氏檸檬酸桿菌表2說明在三糖鐵瓊脂內只有斜面產酸并同時硫化氫(H?S)陰性的菌株可以排除，其他的反應結6.3.2在接種三糖鐵瓊脂的同時，再接種蛋白胨水(供做靛基質試驗)、尿素瓊脂(pH7.2)、氰化鉀(KCN)培養(yǎng)基和賴氨酸脫羧酶試驗培養(yǎng)基及對照培養(yǎng)基各一管，于36℃士1℃培養(yǎng)18h～24h,必要時可延長至48h,按表3判定結果。按反應序號分類，沙門氏菌屬的結果應屬于A1、A2和B1,其他5種反應序號硫化氫靛基質pH7.2尿素氰化鉀賴氨酸脫羧酶A1++沙門氏菌屬A2十+十沙門氏菌屬(少見)緩慢愛德氏菌A3+十十—弗勞地氏檸樓酸桿菌、奇異變形桿菌A4十+++普通變形桿菌1一1—一十一沙門氏菌屬、大腸埃希氏菌、甲型副傷寒沙門氏菌、大腸埃希氏菌、志賀氏菌屬十十.一+大腸埃希氏菌、大腸埃希氏菌、志賀氏菌屬—一+十一克雷伯氏菌族各屬陰溝腸桿菌、弗勞地氏檸檬酸桿菌—十十/一十摩根氏摩根氏菌、普羅菲登斯菌屬注1:三糖鐵瓊脂底層均產酸；不產酸者可排除；斜面產酸與產氣與否均不限。注2:KCN和賴氨酸可選用其中一項，但不能判定結果時，仍需補做另一項。表4可判定為沙門氏菌。如有兩項異常，則按A3判定為弗勞地氏檸檬酸桿菌。表4pH7.2尿素氰化鉀(KCN)賴氨酸—甲型副傷寒沙門氏菌(要求血清學鑒定結果)一十十沙門氏菌IN或V(要求符合本群生化特性)+—十沙門氏菌個別變體(要求血清學鑒定結果)甘露醇山梨醇++沙門氏菌靛基質陽性變體(要求血清學鑒定結果)—緩慢愛德華氏菌6.3.2.3反應序號B1:補做ONPG。ONPG+為大腸埃希氏6.3.2.4必要時按表6進行沙門氏菌生化群的鑒別。IⅡⅢNVVI衛(wèi)矛醇十十—+一山梨醇+十+++水楊苷+一ONPG十十一丙二酸鹽++—一氰化鉀+十—一般采用1.5%瓊脂斜面培養(yǎng)物作為玻片凝集試驗用的抗原。O血清不凝集時，將菌株接種在瓊脂量較高的(如2.5%～3%)培養(yǎng)基上再檢查；如果是由于Vi抗H抗原發(fā)育不良時，將菌株接種在0.7%～0.8%半固體瓊脂平板的中央，俟菌落蔓延生長時，在其邊緣部分取菌檢查；或將菌株通過裝有0.3%～0.4%半固體瓊脂的小玻管1次～2次，自遠端取菌6.4.20抗原的鑒定被A～F多價O血清凝集者，依次用O4;O3、10;07;08;09;O2和O11因子血清做凝集試驗。根有O單因子血清的要用兩個O復合因子血清進行核對。不被A～F多價O血清凝集者，先用57種或163種沙門氏菌因子血清中的9種多價O血清檢查，O多價1A,B,C,D,E,F群(并包括6,14群)O多價428,30,35,38,3940,41,42,43群群群O多價544,45,47,48群O多價650,51,52,53群O多價755,56,57,58群O多價859,60,61,62群()多價963,65,66,67群不常見的菌型，先用163種沙門氏菌因子血清中的8種多價H血清檢查，如有其中一種或兩種血清凝集，則再用這一種或兩種血清所包括的各種H因子血清逐一檢查，以確定第1相和第2相的H抗原。8種多價H血清所包括的H因子如下：H多價1a,b,c,d,iH多價2eh,enx,enzjs,fg,gms,gpu,gp,gq,mt,gzH多價3k,r,y,z,z?o,lv,lw,lzi?,lzzg,lz?oH多價41,2;1,5;1,6;1,7;zsH多價5Z?Zz?,Z?Zz?,Z?Z?2,Zzg,Z?5,Z3e,Z38H多價6Z?g+Z?1+Z42+Z?4H多價7Zse,Zsa,Zs?+Zss檢出第1相H抗原而未檢出第2相H抗原的或檢出第2相H抗原而未檢出第1相H抗原的，可在瓊脂斜面上移種1代～2代后再檢查。如仍只檢出一個相的H抗原，要用位相變異的方法檢查其另小玻管法：將半固體管(每管約1ml.～2mL)在酒精燈上溶化并冷至50℃,取已知相的H因子血按原血清1:200～1:800的量加入。端應高出于培養(yǎng)基的表面，滅菌后備用。臨用時在酒精燈上加熱溶化，冷至50℃,挑取因子血清1環(huán)，于37℃培養(yǎng)后再做凝集試驗。簡易平板法：將0.7%～0.8%半固體瓊脂平板烘干表面水分，挑取因子血清1環(huán)，滴在半固體平板6.4.4Vi抗原的鑒定結果。甲型副傷寒沙門氏菌a基桑加尼沙門氏菌a阿雷查瓦萊塔沙門氏菌4,〔5〕,12a馬流產沙門氏菌—乙型副傷寒沙門氏菌b利密特沙門氏菌b阿邦尼沙門氏菌b維也納沙門氏菌b伯里沙門氏菌C斯坦利沙門氏菌d圣保羅沙門氏菌里定沙門氏菌徹斯特沙門氏菌德爾卑沙門氏菌阿貢納沙門氏菌埃森沙門氏菌—加利福尼亞沙門氏菌金斯敦沙門氏菌布達佩斯沙門氏菌鼠傷寒沙門氏菌i拉古什沙門氏菌i布雷登尼沙門氏菌基爾瓦沙門氏菌Ⅱ海德爾堡沙門氏菌f印地安納沙門氏菌z斯坦利維爾沙門氏菌伊圖里沙門氏菌奧斯陸沙門氏菌a愛丁堡沙門氏菌b布隆方丹沙門氏菌Ⅱb丙型副傷寒沙門氏菌C表7(續(xù))豬霍亂沙門氏菌S.choleraesuis豬傷寒沙門氏菌S.typhi-suisc羅米他沙門氏菌S.lomita布倫登盧普沙門氏菌S.braenderufe,n,z?s里森沙門氏菌S.rissenf.g—蒙得維的亞沙門氏菌S.montevideog,m,[p],s里吉爾沙門氏菌S.riggil—奧雷寧堡沙門氏菌S,oranienburgm,t奧里塔蔓林沙門氏菌S.oritamerini湯卜遜沙門氏菌S.thompsonk康科德沙門氏菌S.concord伊魯木沙門氏菌S.irumu姆卡巴沙門氏菌S.mkamba波恩沙門氏菌S,bonn波茨坦沙門氏菌S.potsdame,n,Zis格但斯克沙門氏菌S.gdansk維爾肖沙門氏菌S.vrchowf嬰兒沙門氏菌S.infantisr巴布亞沙門氏菌S.papuanare,n,zis巴累利沙門氏菌S.bareillyy哈特福德沙門氏菌S.hartfordye,n,X三河島沙門氏菌S,mikawasimaye,n,Zis姆班達卡沙門氏菌S,mbandakae,n;Zis田納西沙門氏菌S.tennessee習志野沙門氏菌S.narashinoa名古屋沙門氏菌b加瓦尼沙門氏菌S.gatunib慕尼黑沙門氏菌S.muenchend蔓哈頓沙門氏菌S,manhattand紐波特沙門氏菌S.newport科特布斯沙門氏菌S.kottbus茨昂威沙門氏菌S.tshiongwee,n,Zis林登堡沙門氏菌S.lindenburgi表7(續(xù))塔科拉迪沙門氏菌S.takoradii波那雷恩沙門氏菌S.bonariensisi利齊菲爾德沙門氏菌S.litchfield病牛沙門氏菌S.bovismorbificansT查理沙門氏菌S.chailey巴爾多沙門氏菌S.bardo8依麥克沙門氏菌S.emek8,20肯塔基沙門氏菌S.kentucky8,20iZ?布倫登盧普沙門氏菌S.braenderup6,7,1414+變種var.14+耶路撒冷沙門氏菌S.jerusalemD群仙臺沙門氏菌S.?ndaia傷寒沙門氏菌S.typhi9,12,Vid塔西沙門氏菌S.tarshyne9,12d伊斯特本沙門氏菌S.exstbourne以色列沙門氏菌S.israel9,12腸炎沙門氏菌S.enteritidis布利丹沙門氏菌S.begdam9,12—沙門氏菌ⅡSalmonellaⅡg,m,[s].t都柏林沙門氏菌S.dublin芙蓉沙門氏菌S.eremban9,12i巴拿馬沙門氏菌S.panama戈丁根沙門氏菌S.goettingen9,12爪哇安納沙門氏菌S.javiana雞-雛沙門氏菌S.gallinarum-pullorum—奧凱?？粕抽T氏菌c瓦伊勒沙門氏菌S.wjle明斯特沙門氏菌S.muenster鴨沙門氏菌S.anatum紐蘭沙門氏菌S,newlands表7(續(xù))火雞沙門氏菌雷