還原糖蛋白質(zhì)脂肪的鑒定

關(guān)于還原糖蛋白質(zhì)脂肪的鑒定檢測(cè)生物組織中的糖類(lèi)、脂肪和蛋白質(zhì)

1.實(shí)驗(yàn)原理第2頁(yè),共26頁(yè)，2024年2月25日，星期天

斐林試劑蘇丹Ⅲ橘黃色紅色磚紅色沉淀紫色蘇丹Ⅳ

雙縮脲試劑鑒定物質(zhì)試劑實(shí)驗(yàn)現(xiàn)象還原性糖脂肪蛋白質(zhì)生物組織中可溶性還原糖、脂肪、蛋白質(zhì)的鑒定實(shí)驗(yàn)原理第3頁(yè),共26頁(yè)，2024年2月25日，星期天方法步驟：

1．實(shí)驗(yàn)材料、儀器和試劑的選擇

2．設(shè)計(jì)記錄表格，記錄預(yù)測(cè)結(jié)果

3．檢測(cè)的方法步驟

(1)還原糖的檢測(cè)和觀察;(2)脂肪的檢測(cè)和觀察;(3)蛋白質(zhì)的檢測(cè)和觀察;第4頁(yè),共26頁(yè)，2024年2月25日，星期天第5頁(yè),共26頁(yè)，2024年2月25日，星期天第6頁(yè),共26頁(yè)，2024年2月25日，星期天第7頁(yè),共26頁(yè)，2024年2月25日，星期天選材：含糖量較高的白色或近于白色的植物組織(排除色素對(duì)顯色的干擾)，蘋(píng)果、梨最好

。

實(shí)驗(yàn)流程(步驟)1.可溶性還原糖

制備組織樣液：制漿：去皮、切塊、研磨，過(guò)濾：（用單層紗布）取液：（２mL）顯色反應(yīng)

２mL組織樣液剛配制的斐林試劑２mL現(xiàn)象：

呈現(xiàn)藍(lán)色變成磚紅色(用前混勻)50～65.C水浴加熱2min第8頁(yè),共26頁(yè)，2024年2月25日，星期天還原糖的檢測(cè)和觀察：第9頁(yè),共26頁(yè)，2024年2月25日，星期天還原糖的檢測(cè)結(jié)果第10頁(yè),共26頁(yè)，2024年2月25日，星期天第11頁(yè),共26頁(yè)，2024年2月25日，星期天第12頁(yè),共26頁(yè)，2024年2月25日，星期天2.脂肪的鑒定

取材：花生種子（浸泡３－４h），去皮，將子葉削成薄片

制片：①選取最薄的薄片移至載玻片中央②在薄片上滴加蘇丹Ⅲ(或蘇丹Ⅳ)

染液2－3滴，染色２－３min③滴加體積分?jǐn)?shù)為50%的酒精溶液1—2滴，洗去浮色(多余的蘇丹Ⅲ

)④吸去余液，滴1-2滴蒸餾水，蓋上蓋玻片，制成臨時(shí)裝片顯微觀察：先在低倍鏡下找到已著色的薄片，后用高倍鏡觀察現(xiàn)象：有被染成橘黃色(或紅色)的脂肪微粒脂肪微粒第13頁(yè),共26頁(yè)，2024年2月25日，星期天脂肪的檢測(cè)結(jié)果第14頁(yè),共26頁(yè)，2024年2月25日，星期天第15頁(yè),共26頁(yè)，2024年2月25日，星期天3.蛋白質(zhì)的鑒定選材與制備組織樣液：黃豆組織樣液（或雞蛋蛋清稀釋液）［黃豆浸泡→去皮→切片→研磨→過(guò)濾→濾液］

顯色反應(yīng)２mL組織樣液雙縮脲試劑Ａ２mL現(xiàn)象：無(wú)色雙縮脲試劑Ｂ３－４滴紫色或紫紅色(創(chuàng)設(shè)堿性條件)(提供Cu2+)第16頁(yè),共26頁(yè)，2024年2月25日，星期天蛋白質(zhì)的檢測(cè)結(jié)果第17頁(yè),共26頁(yè)，2024年2月25日，星期天蛋白質(zhì)的鑒定----雙縮脲試劑雞蛋清溶液

NaOH溶液滴加CuSO2

溶液,每次滴加均需搖勻結(jié)果顯示:紫色第18頁(yè),共26頁(yè)，2024年2月25日，星期天實(shí)驗(yàn)成功的關(guān)鍵與注意事項(xiàng)1.實(shí)驗(yàn)成功的關(guān)鍵在于實(shí)驗(yàn)材料的選擇：⑴．在做可溶性還原糖的鑒定實(shí)驗(yàn)中，最理想的實(shí)驗(yàn)材料是含糖量較高的生物組織(或器官)，而且組織的顏色較淺，最好是白色或近于白色的植物組織，這樣可以避免材料自身顏色對(duì)實(shí)驗(yàn)變化顏色的掩蓋。經(jīng)實(shí)驗(yàn)比較，顏色反應(yīng)的明顯程度依次為蘋(píng)果、梨、白色甘藍(lán)葉、白蘿卜。⑵．在做脂肪的鑒定實(shí)驗(yàn)中，實(shí)驗(yàn)材料最好選用富含脂肪的種子，且徒手切片要成功，要求實(shí)驗(yàn)技能較高，不妨改成刮取花生子葉泥制作臨時(shí)裝片，易做，效果又好。⑶．在做糖和蛋白質(zhì)的實(shí)驗(yàn)時(shí)，最好選用富含蛋白質(zhì)的生物組織，植物材料常用的是大豆，動(dòng)物材料常用的是雞蛋，鑒定之前需要留出一部分樣液，以便與鑒定后的樣液的顏色做比較，這樣可增強(qiáng)說(shuō)服力。第19頁(yè),共26頁(yè)，2024年2月25日，星期天問(wèn)題探討:1、在做還原糖、蛋白質(zhì)鑒定的實(shí)驗(yàn)時(shí)，為什么要留出一部分樣液？作對(duì)照2、使用雙縮脲試劑時(shí)為什么B液只能加3～4滴而不能過(guò)量？

過(guò)量的雙縮脲試劑B會(huì)與試劑A反應(yīng)，使溶液呈藍(lán)色，而掩蓋生成的紫色。3、為什么斐林試劑要現(xiàn)配現(xiàn)用，不能放置太久？

時(shí)間太長(zhǎng)，Cu(OH)2懸濁液就沉淀在試管底部而無(wú)法參與反應(yīng)。深化第20頁(yè),共26頁(yè)，2024年2月25日，星期天2.注意事項(xiàng)：A.可溶性還原糖

(1)斐林試劑很不穩(wěn)定，故應(yīng)將組成斐林試劑的甲液(0.1g/mL的NaOH溶液)和乙液(0.05g/mL的CuSO４溶液)分別配制、儲(chǔ)存，使用時(shí)，再臨時(shí)配制，將4～5滴乙液滴入2mL甲液中，配完后立即使用。切勿將甲液和乙液分別加入組織樣液中。

(2)鑒定可溶性還原糖，加熱試管時(shí)，應(yīng)該用試管夾夾住試管上部，放入盛開(kāi)水的大燒杯加熱；注意試管底部不接觸燒杯底部，同時(shí)試管口不要朝向?qū)嶒?yàn)者，以免試管內(nèi)溶液沸騰時(shí)沖出試管，造成燙傷。如果試管內(nèi)溶液過(guò)于沸騰，可以提起試管夾，使試管與沸水接觸面減少，以免溶液溢出。

第21頁(yè),共26頁(yè)，2024年2月25日，星期天B.脂肪的鑒定

(1)在鑒定脂肪的實(shí)驗(yàn)中，若用花生種子作實(shí)驗(yàn)材料，必須提前浸泡3～4小時(shí)，浸泡時(shí)間短了，不容易切片，浸泡時(shí)間過(guò)長(zhǎng)，則組織太軟，切下的薄片不易成形，切片要盡可能的薄。

(2)染色后一定要用50%的酒精溶液洗去浮色，染色和洗浮色時(shí)間不宜過(guò)長(zhǎng)（否則酒精將脂肪溶解影響實(shí)驗(yàn)效果），觀察時(shí)找最薄處最好只有1—2層細(xì)胞。第22頁(yè),共26頁(yè)，2024年2月25日，星期天C.蛋白質(zhì)的鑒定

(1)在蛋白質(zhì)的鑒定實(shí)驗(yàn)中，若用蛋白質(zhì)作實(shí)驗(yàn)材料，必須稀釋?zhuān)绻♂尣粔?，與雙縮脲試劑發(fā)生反應(yīng)后會(huì)粘固在試管內(nèi)壁上，使反應(yīng)不徹底，且試管不易洗刷干凈。

(2)雙縮脲試劑的使用，應(yīng)先雙縮脲加試劑A(0.1g/mL的NaOH溶液)，造成堿性的反應(yīng)環(huán)境，再加試劑B(0.01g/mL的CuSO４溶液)。第23頁(yè),共26頁(yè)，2024年2月25日，星期天4、斐林試劑與雙縮脲試劑兩者有何不同？新配制的Cu(OH)2溶液在堿性環(huán)境下的Cu2+NaOH濃度為0.1g/mLCuS04濃度為0.05g/mLNaOH濃度為0.1g/mLCuS04濃度為0.01g/mL先把NaOH溶液和CuSO4溶液混合，而后立即使用。先加入Na0H1mL，然后再加CuS044滴，搖勻。(不能過(guò)量)水浴加熱不需要第24頁(yè),共26頁(yè)，2024年2月25日，星期天5、實(shí)驗(yàn)的材料的選擇和處理有什么要求？材料的選擇材料的處理還原性糖的鑒定脂肪