山茱萸炮制過程監(jiān)測及質(zhì)量控制研究

山茱萸炮制過程監(jiān)測及質(zhì)量控制研究中藥山茱萸為山茱萸科植物山茱萸CornusofficinalsSieb.etZucc.的干燥成熟果肉。山茱萸是珍貴的中國草藥,也是現(xiàn)代化醫(yī)療、保健食品等領(lǐng)域的研究熱點(diǎn)。臨床上經(jīng)常以酒山茱萸入藥,它具有滋陰補(bǔ)腎的功效。研究顯示山茱萸炮制后藥效成分(氨基酸、環(huán)烯醚萜等)含量降低,有機(jī)酸、5-羥甲基糠醛等成分含量增高。本課題采用傳統(tǒng)鑒定方法及先進(jìn)的現(xiàn)代分析技術(shù)兩種檢測方式,研究山茱萸炮制過程中化學(xué)成分含量的變化,以闡明山茱萸炮制的機(jī)理,并為提高山茱萸飲片炮制規(guī)范提供依據(jù)。1.山茱萸炮制品質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)的傳統(tǒng)檢驗(yàn)方法山茱萸炮制品傳統(tǒng)的鑒定方法,包括鑒定其性狀,對(duì)水分、灰分、浸出物含量進(jìn)行測定,采用薄層色譜方法定性鑒別酒萸肉中的熊果酸和馬錢苷,液相色譜法檢測其中馬錢苷、莫諾苷的含量。選擇三批酒蒸山茱萸樣品對(duì)其進(jìn)行質(zhì)量評(píng)定,結(jié)果顯示其性狀合格,三批飲片均含有熊果酸和馬錢苷,水分、灰分和浸出物含量合格,馬錢苷、莫諾苷含量合格,說明三批酒萸肉樣品符合藥典標(biāo)準(zhǔn)。為了進(jìn)一步驗(yàn)證炮制后山茱萸的品質(zhì),實(shí)驗(yàn)中還測定了各批次酒山茱萸中沒食子酸、多糖、總黃酮、總有機(jī)酸、總皂苷的含量,結(jié)果表明三批次酒萸肉品質(zhì)較好,質(zhì)量均一穩(wěn)定。2.山茱萸炮制過程中的紅外光譜分析利用紅外光譜技術(shù),分析炮制過程中山茱萸紅外光譜的宏觀和指紋特征。以酒蒸法炮制山茱萸藥材,對(duì)炮制過程中不同時(shí)間的酒萸肉進(jìn)行紅外光譜信息采集并進(jìn)行分析。根據(jù)紅外光譜信息,.在3309cm-1,1713cm-1,1028cm-1處有特征吸收,可以推斷山茱萸中存在醇類、有機(jī)酸類、酯類等化合物。通過實(shí)驗(yàn)分析,發(fā)現(xiàn)氨基化合物在0～24h內(nèi)的含量變化呈現(xiàn)出下降的趨勢,而在24～48h之間含量下降趨勢變緩,結(jié)合實(shí)驗(yàn)前期對(duì)山茱萸炮制過程中理化參數(shù)研究結(jié)果,判斷18～24h為最適宜炮制時(shí)間。紅外光譜分析快速、方便,特征性強(qiáng),可以識(shí)別山茱萸炮制品中的主體成分,為炮制工藝的優(yōu)化提供科學(xué)的依據(jù)。3.GC-MS檢測山茱萸炮制過程中揮發(fā)性成分含量變化探討氣相色譜-質(zhì)譜(GC-MS)聯(lián)用對(duì)山茱萸炮制過程中化學(xué)成分含量變化的研究。先用酒蒸法炮制山茱萸,再用甲酯化的方法制備樣品溶液,對(duì)炮制過程中0～48h的酒萸肉進(jìn)行氣質(zhì)聯(lián)用信息的采集并進(jìn)行化學(xué)成分的含量檢測。采用氣相色譜-質(zhì)譜技術(shù)進(jìn)行分析,從不同炮制時(shí)間的山茱萸樣品中共分離出60多個(gè)組分,計(jì)算了各色譜峰的相對(duì)含量,并從中鑒定了35種成分。主要成分為對(duì)羥基苯甲酸甲酯、檸檬酸三甲酯、1-羥基均丙三羧酸三甲酯、壬二酸二甲酯、肉豆蔻酸甲酯、3-(4-羥苯基)-2-丙烯酸甲酯、4-甲基-1,6-庚二烯-4-醇、9-十六碳烯酸甲基酯、棕櫚酸甲酯、鄰苯二甲酸二丁酯等。氣質(zhì)聯(lián)用法應(yīng)用快速、方便,特征性強(qiáng),可以識(shí)別炮制前后山茱萸中的主要成分,闡明山茱萸的炮制機(jī)理,為炮制工藝的優(yōu)化提供科學(xué)的依據(jù)。4.山茱萸炮制過程中HPLC和UFLC-TOF-MS動(dòng)態(tài)分析建立HPLC和UFLC-TOF-MS方法,研究比較山茱萸炮制過程中化學(xué)成分的動(dòng)態(tài)過程。HPLC采用KromasilC18色譜柱(4.6mm×250mm,5μm),乙腈-水(7：93)等度洗脫測定5-羥甲基糠醛,乙腈-水(15：85)等度洗脫測定馬錢苷；JFLC-TOF-MS:乙腈-0.01%醋酸水溶液梯度洗脫分析山茱萸提取物；ShimadzuUFLC液相系統(tǒng),ABSCIEXTripleTOFTM5600質(zhì)譜儀；負(fù)離子檢測模式。通過高效液相色譜和液相質(zhì)譜聯(lián)用技術(shù),發(fā)現(xiàn)不同炮制時(shí)間下山茱萸中5-羥甲基糠醛、馬錢苷、槲皮素等物質(zhì)含量均有顯著變化。高效液相色譜法在檢測山茱萸中常見成分時(shí)作用較大,而在質(zhì)譜負(fù)離子檢出模式下,山茱萸中其