廢用狀態(tài)下達(dá)烏爾黃鼠比目魚肌calpain和底物desmin的變化及其機(jī)制的研究

廢用狀態(tài)下達(dá)烏爾黃鼠比目魚肌calpain和底物desmin的變化及其機(jī)制的研究研究目的：1.研究骨骼肌廢用及廢用后再負(fù)荷對(duì)大鼠比目魚肌鈣蛋白酶(calpain)和骨架蛋白desmin表達(dá)的影響及藥物川芎嗪的防護(hù)作用。2.研究骨骼肌廢用及廢用后再負(fù)荷對(duì)達(dá)烏爾黃鼠比目魚肌calpain和骨架蛋白desmin表達(dá)的影響。3.觀察廢用及廢用后再負(fù)荷大鼠和黃鼠比目魚肌Z線的變化。4.研究骨骼肌廢用及廢用再負(fù)荷后對(duì)大鼠比目魚肌肌細(xì)胞膜通透性的影響。研究方法：1.酪蛋白酶普法(CaseinZymography)檢測(cè)calpain的活性；2.蛋白免疫印跡法(Westernblotting)測(cè)定比目魚肌calpain及其抑制酶calpastatin的表達(dá)；3.實(shí)時(shí)定量RT-PCR測(cè)量desminmRNA的表達(dá)；4.透射電子顯微鏡觀察骨骼肌Z線的變化；5.伊文斯蘭(Evansblue)熒光染料檢測(cè)肌細(xì)胞膜通透性改變。研究結(jié)果：1.與正常大鼠相比,吊尾組大鼠比目魚肌calpains的活性明顯升高；川芎嗪灌藥組與單純吊尾組相比,calpain1活性下降了52%,具有極顯著意義(P<0.01),calpain2無(wú)顯著意義；吊尾再負(fù)荷組與吊尾組相比,calpain1有顯著性升高(P<0.05),calpain2無(wú)顯著性差異；冬眠不同時(shí)期中,黃鼠比目魚肌calpain1和2活性相對(duì)穩(wěn)定,變化無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。秋季吊尾組與冬眠前組相比,calpain1的活性顯著升高(P<0.05),calpain2的變化無(wú)顯著意義；其它各組與冬眠前相比,calpain1和2的變化均無(wú)顯著性意義。2.與對(duì)照組相比白鼠吊尾組calpain1的表達(dá)變化不明顯,calpain2的表達(dá)有顯著性升高(P<0.01)；強(qiáng)迫運(yùn)動(dòng)組與單純吊尾組相比,calpain1和2的表達(dá)變化不明顯；川芎嗪灌藥組與吊尾組相比,calpain1的表達(dá)變化不明顯,calpain2有有顯著性降低(P<0.05)。各組calpastatin表達(dá)量沒有顯著性差異；黃鼠吊尾組與冬眠前組相比,calpain1和2都有明顯的升高,其中,calpain1的升高具有顯著性意義,calpain2的具有極顯著性意義；冬眠中、出面組與冬眠前組相比,calpains的變化均無(wú)明顯變化；出眠運(yùn)動(dòng)組與冬眠前相比calpain1的升高有極顯著性意義,Calpain2無(wú)顯著性變化；與冬眠前相比,冬眠中和出眠組calpastatin的升高具有極顯著性意義,其他各組無(wú)明顯變化。3.與正常對(duì)照組相比,吊尾組大鼠比目魚肌desminmRNA的表達(dá)顯著下降,川芎嗪灌胃組與正常對(duì)照組相比無(wú)顯著性差異,與單純吊尾組相比,desminmRNA的表達(dá)明顯升高(P<0.05)。吊尾后強(qiáng)迫運(yùn)動(dòng)組與同步對(duì)照組相比desminmRNA的表達(dá)顯著降低(P<0.01),與單純吊尾組相比,有下降趨勢(shì),但沒顯著性變化。與冬眠前相比,冬眠中黃鼠比目魚肌desminmRNA的表達(dá)顯著性升高,出眠組無(wú)明顯變化,出眠后強(qiáng)迫運(yùn)動(dòng)組desminmRNA表達(dá)略有升高,但無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。4.經(jīng)伊文思藍(lán)染料染色后,正常組和同步對(duì)照組細(xì)胞間隙內(nèi)充盈熒光,但基本無(wú)染料進(jìn)入細(xì)胞內(nèi)部；吊尾組有部分染料進(jìn)入細(xì)胞；吊尾后再負(fù)荷組充盈染料的細(xì)胞數(shù)目明顯增多,有較多細(xì)胞內(nèi)部出現(xiàn)EB。5.電鏡觀察發(fā)現(xiàn)：對(duì)照組大鼠肌原纖維直徑均一,Z線寬度正常完整。吊尾組大鼠比目魚肌Z線排列扭曲,呈波浪鋸齒狀。川芎嗪灌藥組Z線排列扭曲,呈波浪狀,但基本一致。冬眠前黃鼠比目魚肌肌原纖維直徑均一,Z線寬度正常完整；冬眠中黃鼠比目魚肌肌原纖維與冬眠前黃鼠Z線排列相似,肌原纖維直徑均一整齊,Z線寬度正常；出眠黃鼠肌原纖維Z線縱向排列略有偏差,肌節(jié)寬度均一,明暗帶清晰。研究結(jié)論：1.由Calpian介導(dǎo)的細(xì)胞骨架蛋白的降解速率增強(qiáng)可能是導(dǎo)致大鼠廢用及廢用后再負(fù)荷骨骼肌損傷的重要機(jī)制,川芎嗪對(duì)蛋白降解途徑有抑制作用；黃鼠在非冬眠期也會(huì)出現(xiàn)蛋白降解能力加強(qiáng),但是在冬眠期蛋白保存機(jī)制較優(yōu)。2.吊尾及吊尾后強(qiáng)迫運(yùn)動(dòng)使大鼠比目魚肌desminmRNA下調(diào),川芎嗪對(duì)其有抑制作用；黃鼠在冬眠不同時(shí)期desminmRNA保持穩(wěn)定,并在冬