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文檔簡介

原代培養(yǎng)的細胞在瓶壁相互匯合后，需要將其分開至多個新的培養(yǎng)瓶，叫傳代。否則因為接觸抑制和密度抑制現(xiàn)象，引起細胞衰老，停止生長甚至死亡。LOGO傳代細胞培養(yǎng)1.生長良好的原代細胞，一般經(jīng)過3-5天左右可形成致密單層。實驗步驟2.倒去原瓶內(nèi)培養(yǎng)液。3.消化。向培養(yǎng)瓶內(nèi)加入0.25%的2ml胰蛋白酶消化液浸泡細胞，在37℃下消化1~3min。在倒置顯微鏡下觀察細胞消化變化，當觀察到大部分細胞出現(xiàn)胞質(zhì)回縮、細胞變成圓球形、細胞間隙增大現(xiàn)象時需終止消化。4.終止消化：加培養(yǎng)液3-4ml，即可終止消化作用。用吸管有序地吹打瓶壁細胞（從瓶底到瓶口，從瓶的一側(cè)到另一側(cè)，注意吹打邊角細胞）。打勻后分裝。5.分瓶擴大培養(yǎng)。每瓶再補加2.0毫升培養(yǎng)液，混勻細胞，37℃、5%CO2培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。6．觀察。細胞培養(yǎng)24小時后，即可進行觀察，觀察的重點如下：首先要觀察培養(yǎng)細胞是否污染。主要觀察培養(yǎng)液顏色的變化及渾濁度。觀察培養(yǎng)液顏色變化及細胞是否生長。如細胞已生長，則要觀察細胞的形態(tài)特征并判斷其所處的生長階段。觀察完畢，可用臺盤藍染液對細胞進行染色。以確定死、活細胞的比例。

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