藥物的含量測定的方法與驗證

關于藥物的含量測定的方法與驗證基本要求

一、掌握測定藥物含量的容量、光譜和色譜分析法，滴定度與含量計算，色譜系統(tǒng)適用性試驗的內(nèi)容、要求及相關計算。藥物分析方法驗證與內(nèi)容。二、熟悉定量分析樣品的前處理方法。

第2頁,共30頁，2024年2月25日，星期天第一節(jié)定量分析方法的分類和特點測定藥物的含量是評價藥品質(zhì)量優(yōu)劣的重要手段，其測定方法多種多樣，而容量分析法、光譜法和色譜法是中國藥典收載最多的方法。一般而言：化學原料藥的含量測定，首選容量分析法

藥物制劑的含量測定，多采用色譜分析法藥物制劑的定量檢查，選用光譜分析法第3頁,共30頁，2024年2月25日，星期天1.1特點：根據(jù)滴定液的濃度和等當點（滴定誤差）時消耗的滴定液體積，計算被測藥物的含量。容量分析通常用于測定高含量或中含量組分，即被測組分的含量在1％以上，容量分析法比較準確，一般情況下相對誤差可達0.2％以下。容量分析法操作簡便、快速、比較準確，所用儀器普通易得，在藥品檢驗工作中具有很大的實用價值。

第一節(jié)定量分析方法的分類和特點一、

容量分析法第4頁,共30頁，2024年2月25日，星期天

1.2計算1.滴定度：指每1ml藥典規(guī)定摩爾濃度的滴定液所相當?shù)谋粶y藥物的質(zhì)量。2.滴定度（T）的計算：在容量分析中，被測藥物（B）與滴定液（T1）之間都按一定的摩爾比進行反應的，反應可表示為：aT1+bB→產(chǎn)物

ab

T(mg/mL)=m×b/a×M

實際滴定度T’＝T×FF=實際摩爾濃度/藥典規(guī)定的摩爾濃度第5頁,共30頁，2024年2月25日，星期天3.含量的計算：在測定藥物含量時，常用直接滴定法和回滴定法（剩余滴定法）。（1）直接滴定法：W——供試品的稱取量；mg；V——消耗的滴定液體積，ml；T——藥典規(guī)定的滴定度，

mg/ml；F——校正因數(shù)

含量(％)＝V×T’/W

×100%

＝V×T×F/W×100%第6頁,共30頁，2024年2月25日，星期天（2）間接滴定法：包括生成物滴定法和剩余量滴定法。1）生成物滴定法：

指被測藥物D與化合物A作用，定量生成化合物B，再用滴定液T滴定化合物B。計算公式同直接法。滴定度計算時考慮D/B,B/T之間的關系P146示例4-3第7頁,共30頁，2024年2月25日，星期天2）剩余量滴定法（回滴定法）加入定量過量的滴定液T1，使其與被測藥物定量反應，待反應完全后，再用滴定液T2回滴反應中剩余的滴定液T1。

t11T1+bD→產(chǎn)物1+剩余T1（D與T1反應）

t2T2+t12T1→產(chǎn)物2

（T2回滴T1）①

不做空白試驗時百分含量計算方法計算公式1：含量(％)＝（VT1×FT1–VT2×FT2)×T1/W

×100%

注意：T1與T2的濃度是相當?shù)牡?頁,共30頁，2024年2月25日，星期天②做空白試驗時百分含量計算方法含量(％)＝（VT20–VT2S)×FT2×T1/W

×100%

W——供試品的稱取量mgVT20

——空白實驗時消耗滴定液T2的體積mL

VT2S——樣品測定時消耗滴定液T2的體積mL

FT2——滴定液T2的濃度校正因數(shù)

T1——藥典規(guī)定的滴定液T1滴定度，mg/mL第9頁,共30頁，2024年2月25日，星期天

二、光譜分析法

（一）紫外-可見分光光度法（200nm～760nm)

①靈敏度高，可達10-4g/ml～10-7g/ml

1.特點②準確度高，RSD（%）為2%～5%

③儀器價格低廉，操作簡單，易普及

④應用廣泛。許多化合物都可采用

2.朗伯-比耳定律

A=ECL吸收系數(shù)(E)用摩爾吸收系數(shù)(ε)或百分吸收系數(shù)(E1%1cm)兩種方式表示。兩者關系為：E1%1cm＝ε×100/ME1%1cm：指在一定波長下，溶液濃度(C)為1％(W/V)，L＝1cm時的吸收度。第10頁,共30頁，2024年2月25日，星期天3.儀器校正和檢定（1）波長：

波長校正用汞燈中較強譜線237.38,253.65,275.28,296.73,313.16,334.15,365.02,404.66,425.83,546.07nm與576.96nm或用儀器中氘燈的486.02nm與656.10nm進行校正。（2）吸收度的檢定：用K2CrO7(60mg)+0.005mol/LH2SO4液定容至1000ml

波長(nm)235(最小)257(最大)313(最小)350(最大)

E1%1cm124.5144.048.62106.6

第11頁,共30頁，2024年2月25日，星期天（3）雜散光檢查：

試劑濃度(g/ml)測定波長透光率(%)

NaI1.00220nm＜0.8NaNO25.00340nm＜0.8（4)對溶劑的要求:220～240nm241～250nm251～300nm300nm以上溶劑+吸收池A＜0.41＜0.20＜0.10＜0.05第12頁,共30頁，2024年2月25日，星期天(5)測定法要求供試品溶液的A應在0.3～0.7【對照品比較法】用相同溶劑分別配制供試品溶液和對照品溶液，對照品溶液中所含被測物的量應為供試品液中被測物規(guī)定量的100％±10％，在規(guī)定波長下測定兩溶液吸收度后，按下式計算供試品溶液中被測物的濃度：

Cx=(Ax/Ar)Cr

原料藥百分含量%=Cx×D/W×100%W——供試品的稱取量；mg；Cx——供試品溶液的濃度，mg/ml；D——稀釋體積

第13頁,共30頁，2024年2月25日，星期天【對照品比較法】固體制劑含量相當于標示量的百分數(shù)：

標示量（%）=Cx×D/W×W平均/B×100%W——供試品的稱取量；mg；Cx——供試品溶液的濃度，mg/ml；D——稀釋體積

W平均——單位制劑的平均重量（或裝量）B——制劑的標示量第14頁,共30頁，2024年2月25日，星期天(5)測定法要求供試品溶液的A應在0.3～0.7【吸收系數(shù)法】配制供試品溶液，在規(guī)定波長處測定其吸收度（A），再將供試品在規(guī)定條件下的吸收系數(shù)計算含量

Cx=Ax/100E1%1cm

原料藥百分含量%=Cx×D/W×100%W——供試品的稱取量；mg；Cx——供試品溶液的濃度，mg/ml；D——稀釋體積

第15頁,共30頁，2024年2月25日，星期天【對照品比較法】固體制劑含量相當于標示量的百分數(shù)：

注射液標示量（%）=Cx×D/V×V平均/B×1000×100%Cx——供試品溶液的濃度，mg/mL；D——稀釋體積

V

——供試品取樣量；mLV平均——注射液規(guī)格（mL/支）B——標示量（mg/支）第16頁,共30頁，2024年2月25日，星期天

（二）熒光分光光度法特點靈敏度高，可達10-10g/ml～10-12g/ml在低濃度進行測定，防止F與C不成正比及自熄滅作用

用基準物溶液校正儀器靈敏度，防止樣品液熒光衰減靈敏度高，但干擾因素多。

制備熒光衍生物，可提高其靈敏度和選擇性。用樣品量少，操作簡單，方法快速，應用范圍較廣。

第17頁,共30頁，2024年2月25日，星期天2.熒光分析儀有二個單色光器—激發(fā)單色光器與發(fā)射單色光器；且激發(fā)光源、樣品池和檢測器成直角。含量測定常用的方法對照品比較法:Ci=(Ri-Rib)/(Rr-Rrb)×Cr

Ch.P收載地高辛片、利血平片、洋地黃毒苷片。

標示量（%）=Cx×D/W×W平均/B×100%第18頁,共30頁，2024年2月25日，星期天

三、色譜分析法

按分離原理分為：吸附；分配；離子交換；排阻色譜方法分類按分離方法分為：PC；TLC；柱色譜；GC；HPLC。（一）HPLC法1.對HPLC儀器一般要求色譜柱、流動相按品種項下要求。色譜柱的理論板數(shù)：n=5.54(tR/Wh/2)22.系統(tǒng)性試驗

分離度：R=2（tR1–tR2)/(W1+W2);要大于1.5

拖尾因子：T=W0.05h/2d1

應在0.9～1.05

第19頁,共30頁，2024年2月25日，星期天內(nèi)標法加校正因子測定供試品中主成分含量3.測定方法

標準曲線法

外標法測定供試品中主成分含量外標一點法

應用示例：RP-HPLC法測定鹽酸黃酮哌酯片含量，用標準曲線法如頭孢拉丁；頭孢羥氨芐；頭孢唑啉鈉用外標一點法第20頁,共30頁，2024年2月25日，星期天（1）內(nèi)標法加校正因子測定供試品中主成分含量內(nèi)標法：將一個已知重量，樣品中不含有的純物質(zhì)，加至待測樣品溶液中，以此純物質(zhì)的量為標竿，對比測定待測i組分的含量的方法謂內(nèi)標法。優(yōu)點：定量結果與進樣量無關（不超載條件下）。對內(nèi)標物的要求：1、內(nèi)標物是原樣品中不含有的組分。2、內(nèi)標物的保留時間應與待測成分相近，分離度R≥1.5。3、內(nèi)標物必須是純度合乎要求的純物質(zhì)。第21頁,共30頁，2024年2月25日，星期天

精密稱（量）取藥物對照品和內(nèi)標物質(zhì)，分別配成溶液，精密量取各溶液，配成校正因子（f）測定用的含內(nèi)標的對照品溶液。取一定量注入儀器，記錄色譜圖。測量對照品和內(nèi)標物質(zhì)的峰面積（或峰高），按下式計算校正因子：校正因子（f）＝（As/Cs）內(nèi)標/（Ai/Ci）對照第22頁,共30頁，2024年2月25日，星期天

再精密稱取供試品，配成溶液，精密量取供試品溶液和上述內(nèi)標溶液，同法配成供含測的含內(nèi)標的供試品溶液，取一定量注入儀器，記錄色譜圖，測量供試品中待測成分和內(nèi)標物質(zhì)的峰面積或峰高（A或h），按下式計算含量：

f＝（A’s/C’s）內(nèi)標/（A’i/C’i）供含量（C’i）供＝f?（A’i）供/（A’s/C’s）內(nèi)標

第23頁,共30頁，2024年2月25日，星期天

（2）外標法測定供試品中主成分含量：外標法是以供試品的對照品或標準品作對照物質(zhì)，相比較以求得供試品的含量。外標法可分為標準曲線法和外標一點法。1）標準曲線法：配制一系列已知濃度的對照品或標準品溶液，在同一操作條件下，按同量注入色譜儀，測其峰面積（峰高），作出峰面積（或峰高）與濃度的標準曲線。然后在相同條件下，注入同量供試品溶液，獲得待測組分的峰面積（或峰高），根據(jù)標準曲線或其回歸方程，計算供試品中待測組分的濃度。第24頁,共30頁，2024年2月25日，星期天

A＝aC+br＝0.9999

線性范圍g?ml-1～g?ml-1

若待測組分的峰面積為Ax，則由上述線性方程可計算出對應的待測組分濃度Cx。應用示例自閱第25頁,共30頁，2024年2月25日，星期天2）外標一點法精密稱（量）取對照品和供試品，分別配制成對照品溶液（C對）和供試品溶液（C供），分別精密量取一定量，注入儀器，記錄色譜圖，測量對照品的峰面積（A對）和供試品待測成分的峰面積（A供）（或峰高），按下式計算含量：

C供＝（C對/A對）A供外標法簡便，但要求進樣量準確及操作條件穩(wěn)定。內(nèi)標法優(yōu)點：在進樣量不超限范圍內(nèi)，定量結果與進樣量無關，但樣品配制麻煩，內(nèi)標物有時不易尋找是其缺點。

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（二）GC法1.對GC儀器一般要求

載氣為氮氣；色譜柱為填充或毛細管柱色譜柱的理論板數(shù)：n=5.54(tR/Wh/2)22.系統(tǒng)性試驗

分離度：R=2（tR1–tR2)/(W1+W2);要大于1.5

拖尾因子：T=W0.05h/2d1

應在0.9～1.05

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