微生物培養(yǎng)TY-課件

課題1微生物的實(shí)驗(yàn)室培養(yǎng)專題2:微生物的培養(yǎng)與應(yīng)用1課題1微生物的實(shí)驗(yàn)室培養(yǎng)專題2:微生物的培養(yǎng)與應(yīng)用1（2）按培養(yǎng)基的物理形態(tài)分：液體培養(yǎng)基半固體培養(yǎng)基固體培養(yǎng)基一基礎(chǔ)知識:（3）按培養(yǎng)基的功能分：基礎(chǔ)培養(yǎng)基選擇培養(yǎng)基鑒別培養(yǎng)基（1）按培養(yǎng)基的化學(xué)成分分：·天然培養(yǎng)基·合成培養(yǎng)基2（2）按培養(yǎng)基的物理形態(tài)分：一基礎(chǔ)知識:（3）按培養(yǎng)基的精品資料3精品資料3你怎么稱呼老師？如果老師最后沒有總結(jié)一節(jié)課的重點(diǎn)的難點(diǎn)，你是否會(huì)認(rèn)為老師的教學(xué)方法需要改進(jìn)？你所經(jīng)歷的課堂，是講座式還是討論式？教師的教鞭“不怕太陽曬，也不怕那風(fēng)雨狂，只怕先生罵我笨，沒有學(xué)問無顏見爹娘……”“太陽當(dāng)空照，花兒對我笑，小鳥說早早早……”44液體培養(yǎng)基：表面生長均勻混濁生長沉淀生長半固體培養(yǎng)基：(是否運(yùn)動(dòng))

無動(dòng)力有動(dòng)力(彌散)固體培養(yǎng)基：菌落5液體培養(yǎng)基：表面生長均勻混濁生長沉淀生長半固體培養(yǎng)基：(是否選擇培養(yǎng)基——在培養(yǎng)基中加入（缺少）某種化學(xué)物質(zhì),以抑制不需要的微生物的生長,促進(jìn)所需要的微生物的生長。用以菌種的分離加入青霉素的培養(yǎng)基:分離酵母菌、霉菌等真菌加入高濃度食鹽的培養(yǎng)基:

分離金黃色葡萄球菌不加氮源的無氮培養(yǎng)基:分離固氮菌不加含碳有機(jī)物的無碳培養(yǎng)基:分離自養(yǎng)型微生物鑒別培養(yǎng)基——在培養(yǎng)基中加入某種指示劑或化學(xué)藥品。用以菌種的鑒別。

6選擇培養(yǎng)基——在培養(yǎng)基中加入（缺少）某種化學(xué)物質(zhì),以抑制不需2.培養(yǎng)基的成分不管哪種培養(yǎng)基，一般都含有水、無機(jī)鹽、碳源和氮源等營養(yǎng)物質(zhì)。另外還需要滿足微生物生長對pH、特殊營養(yǎng)物質(zhì),

生長因子(如維生素、某些氨基酸、嘌呤、嘧啶)以及氧氣、二氧化碳、滲透壓等的要求。72.培養(yǎng)基的成分7練習(xí)1.不能作為異養(yǎng)微生物碳源的是（）A．牛肉膏B．含碳有機(jī)物C．石油D．含碳無機(jī)物2.自養(yǎng)型微生物與異養(yǎng)型微生物的培養(yǎng)基的主要差別是（）

A．碳源B．氮源

C．無機(jī)鹽D．生長因子8練習(xí)1.不能作為異養(yǎng)微生物碳源的是（）2.自養(yǎng)型微生物【典例解析】例:關(guān)于微生物營養(yǎng)物質(zhì)的敘述中，正確的是()A.是碳源的物質(zhì)不可能同時(shí)是氮源

B.凡碳源都提供能量

C.除水以外的無機(jī)物只提供無機(jī)鹽

D.無機(jī)氮源也能提供能量9【典例解析】例:關(guān)于微生物營養(yǎng)物質(zhì)的敘述中，正確的是(編號成分含量①粉狀硫10g②（NH4）2SO40.4g③K2HPO44.0g④MgSO49.25g⑤FeSO40.5g⑥CaCl20.5g⑦H2O100ml例．右表是某微生物培養(yǎng)基成分，請據(jù)此回答：（1）右表培養(yǎng)基可培養(yǎng)的微生物類型是

。（2）若不慎將過量NaCl加入培養(yǎng)基中。如不想浪費(fèi)此培養(yǎng)基，可再加入

，用于培養(yǎng)

（4）表中營養(yǎng)成分共有

類。（5）不論何種培養(yǎng)基，在各種成分都溶化后分裝前，要進(jìn)行的是

。

自養(yǎng)型微生物

含碳有機(jī)物

金黃色葡萄球菌

10編號成分含量①粉狀硫10g②（NH4）2SO40.4g③K2芽孢有些細(xì)菌在一定的條件下，細(xì)胞里面形成一個(gè)橢圓形的休眠體，叫做芽孢。特點(diǎn)：1、對惡劣的環(huán)境，如干旱、高溫等，有很強(qiáng)的抵抗力

2、小而輕，可隨風(fēng)飄散

3、當(dāng)環(huán)境適宜（如溫度、水分適宜）的條件下，芽孢又可以萌發(fā)，形成一個(gè)細(xì)菌.

在生物體的一定部位產(chǎn)生一種特殊的生殖細(xì)胞叫孢子。孢子的特點(diǎn)是能直接長成新個(gè)體孢子11芽孢有些細(xì)菌在一定的條件下，細(xì)胞里面形成一個(gè)橢圓形的思考：1.獲得純凈培養(yǎng)物的關(guān)鍵？2.無菌技術(shù)除了用來防止實(shí)驗(yàn)室的培養(yǎng)物被其他外來微生物污染外，還有什么目的？（P15旁欄思考）3.消毒和滅菌有何不同？4.常用的消毒和滅菌方法有哪些？無菌技術(shù)還能有效避免操作者自身被微生物感染。㈣.無菌技術(shù)防止外來雜菌的入侵12思考：無菌技術(shù)還能有效避免操作者自身被微生物感染。㈣.無菌技

（1）消毒：用溫和的化學(xué)或物理方法，殺死物體表面或內(nèi)部的部份微生物的過程。

2.消毒與滅菌的概念及兩者的區(qū)別

（2）滅菌：以強(qiáng)烈的理化因素殺死物體內(nèi)外所有微生物，達(dá)到完全無菌的過程。

滅菌與消毒技術(shù)是微生物有關(guān)工作中最普通也是最重要的技術(shù)。13（1）消毒：用溫和的化學(xué)或物理方法，殺死物體表面或內(nèi)部的1、煮沸消毒法:100℃煮沸5-6min2、巴氏消毒法：70-75℃下煮30min或80℃下煮15min3、化學(xué)藥劑消毒法:用75%酒精、新潔爾滅等進(jìn)行皮膚消毒;氯氣消毒水源4、紫外線消毒：對實(shí)驗(yàn)室空氣消毒……(1)消毒的方法：3.常用的消毒與滅菌的方法141、煮沸消毒法:100℃煮沸5-6min(1)消毒的方法：3①灼燒滅菌②干熱滅菌：160-170℃下加熱1-2h。③高壓蒸氣滅菌：100kPa、121℃下維持15-30min.⑵.滅菌的方法：15①灼燒滅菌⑵.滅菌的方法：15比較項(xiàng)目理化因素作用強(qiáng)度消滅微生物的數(shù)量芽孢和孢子能否被消滅消毒滅菌列表比較消毒與滅菌較為溫和強(qiáng)烈能不能部分生活狀態(tài)的微生物全部微生物16列表比較消毒與滅菌較為溫和強(qiáng)烈能不能部分生活狀態(tài)的微生物1.無菌技術(shù)除了用來防止實(shí)驗(yàn)室的培養(yǎng)物被其他外來微生物污染外，還有什么目的？2.請你判斷以下材料或用具是否需要消毒或滅菌。如果需要，請選擇合適的方法。（1）培養(yǎng)細(xì)菌用的培養(yǎng)基與培養(yǎng)皿（2）玻棒、試管、燒瓶和吸管（3）實(shí)驗(yàn)操作者的雙手答：無菌技術(shù)還能有效避免操作者自身被微生物感染。答：（1）、（2）需要滅菌；（3）需要消毒。旁欄思考171.無菌技術(shù)除了用來防止實(shí)驗(yàn)室的培養(yǎng)物被其他外來微生物污染外常

識1．無菌技術(shù)包括：（1）對實(shí)驗(yàn)操作空間、操作者的衣著和手進(jìn)行清潔和消毒；（2）將培養(yǎng)器皿、接種用具和培養(yǎng)基等器具進(jìn)行

滅菌

；（3）為避免周圍微生物污染，實(shí)驗(yàn)操作應(yīng)在酒精燈火焰附近

旁進(jìn)行；（4）避免已滅菌處理的材料用具與

周圍物品

相接觸。2．消毒方法：（1）日常生活經(jīng)常用到的是

煮沸消毒法；（2）對一些不耐高溫的液體，則使用

巴氏

消毒法（作簡要介紹）；（3）對接種室、接種箱或超凈工作臺首先噴灑石炭酸或煤酚皂等溶液以增強(qiáng)消毒效果，然后使用

紫外線進(jìn)行物理消毒。（4）實(shí)驗(yàn)操作者的雙手使用酒精進(jìn)行消毒；（5）飲水水源用氯氣進(jìn)行消毒。3．滅菌方法：（1）接種環(huán)、接種針、試管口等使用

灼燒

滅菌法；（2）玻璃器皿、金屬用具等使用干熱滅菌法，所用器械是

干熱滅菌箱；（3）培養(yǎng)基、無菌水等使用高壓蒸汽

滅菌法，所用器械是

高壓蒸汽滅菌鍋。（4）表面滅菌和空氣滅菌等使用

紫外線滅菌法，所用器械是紫外燈。18常

識1．無菌技術(shù)包括：18二.實(shí)驗(yàn)操作(以培養(yǎng)大腸桿菌為例)㈠.制備牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基1.計(jì)算2.稱量3.溶化4.滅菌:將錐形瓶放入高壓蒸氣滅菌鍋，在壓力為100kPa、溫度為121℃，滅菌15～30min。5.倒平板:待培養(yǎng)基冷卻到50℃左右時(shí)，在酒精燈附近倒平板。2d后觀察平板，無雜菌污染才可用來接種。19二.實(shí)驗(yàn)操作(以培養(yǎng)大腸桿菌為例)㈠.制備牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基倒平板操作20倒平板操作20答：可以用手觸摸盛有培養(yǎng)基的錐形瓶，感覺錐形瓶的溫度下降到剛剛不燙手時(shí)，就可以進(jìn)行倒平板了。2.為什么需要使錐形瓶的瓶口通過火焰？答：通過灼燒滅菌，防止瓶口的微生物污染培養(yǎng)基。問題討論1.培養(yǎng)基滅菌后，需要冷卻到50℃左右時(shí)，才能用來倒平板。你用什么辦法來估計(jì)培養(yǎng)基的溫度？21答：可以用手觸摸盛有培養(yǎng)基的錐形瓶，感覺錐形瓶的溫度下降到剛3.平板冷凝后，為什么要將平板倒置？4.在倒平板的過程中，如果不小心將培養(yǎng)基濺在皿蓋與皿底之間的部位，這個(gè)平板還能用來培養(yǎng)微生物嗎？為什么？答：平板冷凝后，皿蓋上會(huì)凝結(jié)水珠，凝固后的培養(yǎng)基表面的濕度也比較高，將平板倒置，既可以使培養(yǎng)基表面的水分更好地?fù)]發(fā)，又可以防止皿蓋上的水珠落入培養(yǎng)基，造成污染。答：空氣中的微生物可能在皿蓋與皿底之間的培養(yǎng)基上滋生，因此最好不要用這個(gè)平板培養(yǎng)微生物。223.平板冷凝后，為什么要將平板倒置？4.在倒平板的過程中，如

關(guān)于制備牛肉膏蛋白胨固體培養(yǎng)基的敘述中，錯(cuò)誤的是（）

A.操作順序?yàn)橛?jì)算、稱量、溶化、倒平板、滅菌

B.牛肉膏溶化并與稱量紙分離后，用玻棒取出稱量紙

C.待培養(yǎng)基冷卻至50℃左右時(shí)，進(jìn)行倒平板

D.待平板冷卻凝固約5min～10min后，將平板倒過來放置

23關(guān)于制備牛肉膏蛋白胨固體培養(yǎng)基的敘述中，錯(cuò)誤的是（㈡.純化大腸桿菌平板劃線法和稀釋涂布平板法。微生物的接種的常用接種方法有：1.平板劃線的操作方法24㈡.純化大腸桿菌平板劃線法和稀釋涂布平板法。微生物的接種的常2525答：操作的第一步灼燒接種環(huán)是為了避免接種環(huán)上可能存在的微生物污染培養(yǎng)物；每次劃線前灼燒接種環(huán)是為了殺死上次劃線結(jié)束后，接種環(huán)上殘留的菌種，使下一次劃線時(shí)，接種環(huán)上的菌種直接來源于上次劃線的末端，從而通過劃線次數(shù)的增加，使每次劃線時(shí)菌種的數(shù)目逐漸減少，以便得到菌落。劃線結(jié)束后灼燒接種環(huán)，能及時(shí)殺死接種環(huán)上殘留的菌種，避免細(xì)菌污染環(huán)境和感染操作者。問題討論1.為什么在操作的第一步以及每次劃線之前都要灼燒接種環(huán)？在劃線操作結(jié)束時(shí)，仍然需要灼燒接種環(huán)嗎？為什么？26答：操作的第一步灼燒接種環(huán)是為了避免接種環(huán)上可能存在的微生物2.在灼燒接種環(huán)之后，為什么要等其冷卻后再進(jìn)行劃線？答：以免接種環(huán)溫度太高，殺死菌種。3.在作第二次以及其后的劃線操作時(shí)，為什么總是從上一次劃線的末端開始劃線？答：劃線后，線條末端細(xì)菌的數(shù)目比線條起始處要少，每次從上一次劃線的末端開始，能使細(xì)菌的數(shù)目隨著劃線次數(shù)的增加而逐步減少，最終能得到由單個(gè)細(xì)菌繁殖而來的菌落。272.在灼燒接種環(huán)之后，為什么要等其冷卻后再進(jìn)行劃線？答：以免答：應(yīng)從操作的各個(gè)細(xì)節(jié)保證“無菌”。例如，酒精燈與培養(yǎng)皿的距離要合適、吸管頭不要接觸任何其他物體、吸管要在酒精燈火焰周圍等等。問題討論涂布平板的所有操作都應(yīng)在火焰附近進(jìn)行。結(jié)合平板劃線與系列稀釋的無菌操作要求，想一想，第2步應(yīng)如何進(jìn)行無菌操作？2.稀釋涂布平板的操作方法28答：應(yīng)從操作的各個(gè)細(xì)節(jié)保證“無菌”。例如，酒精燈與培養(yǎng)皿的距三.結(jié)果分析與評價(jià)㈠.培養(yǎng)基的制作是否合格如果未接種的培養(yǎng)基在恒溫箱中保溫1～2d后無菌落生長，說明培養(yǎng)基的制備是成功的，否則需要重新制備。㈡.接種操作是否符合無菌要求如果培養(yǎng)基上生長的菌落的顏色、形狀、大小基本一致，并符合大腸桿菌菌落的特點(diǎn)，則說明接種操作是符合要求的；如果培養(yǎng)基上出現(xiàn)了其他菌落，則說明接種過程中，無菌操作還未達(dá)到要求，需要分析原因，再次練習(xí)。㈢.是否進(jìn)行了及時(shí)細(xì)致的觀察與記錄培養(yǎng)12h與24h后的大腸桿菌菌落的大小會(huì)有明顯不同，及時(shí)觀察記錄的同學(xué)會(huì)發(fā)現(xiàn)這一點(diǎn)，并能觀察到其他一些細(xì)微的變化。29三.結(jié)果分析與評價(jià)㈠.培養(yǎng)基的制作是否合格294.菌種的保存固體斜面培養(yǎng)基上4℃保存，菌種易被污染或產(chǎn)生變異3.微生物的恒溫培養(yǎng)⑵.長期保存：－20℃甘油管在冷凍箱中保藏⑴.臨時(shí)保藏：304.菌種的保存固體斜面培養(yǎng)基上4℃保存，菌種易被污染或產(chǎn)生變

例1某小組同學(xué)為了調(diào)查湖水中細(xì)菌的污染情況而進(jìn)行了實(shí)驗(yàn)。實(shí)驗(yàn)包括制備培養(yǎng)基、滅菌、接種及培養(yǎng)、菌落觀察計(jì)數(shù)。請回答與此實(shí)驗(yàn)相關(guān)的問題。（1）培養(yǎng)基中含有蛋白胨、淀粉分別為細(xì)菌培養(yǎng)提供了

和

。除此之外，培養(yǎng)基還必須含有的基本成分是

和

。（2）對培養(yǎng)基進(jìn)行滅菌，應(yīng)該采用的方法是

。（3）為了盡快觀察到細(xì)菌培養(yǎng)的實(shí)驗(yàn)結(jié)果，應(yīng)將接種了湖水樣品的平板置于

中培養(yǎng)，培養(yǎng)的溫度設(shè)定氮源碳源無機(jī)鹽水高壓蒸汽滅菌恒溫箱31例1某小組同學(xué)為了調(diào)查湖水中細(xì)菌的污染情況而進(jìn)行了實(shí)驗(yàn)在37℃。要使該實(shí)驗(yàn)所得結(jié)果可靠，還應(yīng)該同時(shí)在另一平板上接種

作為對照進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。（4）培養(yǎng)20小時(shí)后，觀察到平板上有形態(tài)和顏色不同的菌落，這說明湖水樣品中有

種細(xì)菌。一般說來，菌落總數(shù)越多，湖水遭受細(xì)菌污染的程度越

。（5）如果提高培養(yǎng)基中NaCl的濃度，可以用于篩選耐

細(xì)菌，這種培養(yǎng)基被稱為

。無菌水多高選擇培養(yǎng)基鹽32在37℃。要使該實(shí)驗(yàn)所得結(jié)果可靠，還應(yīng)該同時(shí)在另一平板上接種練習(xí)①對買回來的菌進(jìn)行擴(kuò)大培養(yǎng),首先制備試管培養(yǎng)基,寫出制備固體牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基所需的原料：_________________________________其中提供氮源的主要是_______；提供能源的主要物質(zhì)是_______；瓊脂的作用是_______，它不提供營養(yǎng)。牛肉膏、蛋白胨、水、無機(jī)鹽、瓊脂蛋白胨牛肉膏凝固劑33練習(xí)①對買回來的菌進(jìn)行擴(kuò)大培養(yǎng),首先制備試牛肉膏、蛋白胨、水練習(xí)②微生物在生長過程中對各種成分所需量不同,故制備培養(yǎng)基時(shí)各成分要有合適的_____,在燒杯加入瓊脂后要不停地_____,防止_____________________.34練習(xí)②微生物在生長過程中對各種成分所需量34練習(xí)②微生物在生長過程中對各種成分所需量不同,故制備培養(yǎng)基時(shí)各成分要有合適的_____,在燒杯加入瓊脂后要不停地_____,防止_____________________.比例35練習(xí)②微生物在生長過程中對各種成分所需量比例35練習(xí)②微生物在生長過程中對各種成分所需量不同,故制備培養(yǎng)基時(shí)各成分要有合適的_____,在燒杯加入瓊脂后要不停地_____,防止_____________________.比例攪拌36練習(xí)②微生物在生長過程中對各種成分所需量比例攪拌36練習(xí)②微生物在生長過程中對各種成分所需量不同,故制備培養(yǎng)基時(shí)各成分要有合適的_____,在燒杯加入瓊脂后要不停地_____,防止_____________________.比例攪拌瓊脂糊底引起燒杯破裂37練習(xí)②微生物在生長過程中對各種成分所需量比例攪拌瓊脂糊底引起練習(xí)③將配制好的培養(yǎng)基轉(zhuǎn)移到錐形瓶中，加棉塞后包上牛皮紙并用皮筋勒緊放入___________中滅菌，壓力為________，溫度為______，時(shí)間__________，滅菌完畢拔掉電源，待鍋內(nèi)壓力____________，將試管取出。38練習(xí)③將配制好的培養(yǎng)基轉(zhuǎn)移到錐形瓶中，加38練習(xí)③將配制好的培養(yǎng)基轉(zhuǎn)移到錐形瓶中，加棉塞后包上牛皮紙并用皮筋勒緊放入___________中滅菌，壓力為________，溫度為______，時(shí)間__________，滅菌完畢拔掉電源，待鍋內(nèi)壓力____________，將試管取出。高壓滅菌鍋39練習(xí)③將配制好的培養(yǎng)基轉(zhuǎn)移到錐形瓶中，加高壓滅菌鍋39練習(xí)③將配制好的培養(yǎng)基轉(zhuǎn)移到錐形瓶中，加棉塞后包上牛皮紙并用皮筋勒緊放入___________中滅菌，壓力為________，溫度為______，時(shí)間__________，滅菌完畢拔掉電源，待鍋內(nèi)壓力____________，將試管取出。高壓滅菌鍋100KPa40練習(xí)③將配制好的培養(yǎng)基轉(zhuǎn)移到錐形瓶中，加高壓滅菌鍋100KP練習(xí)③將配制好的培養(yǎng)基轉(zhuǎn)移到錐形瓶中，加棉塞后包上牛皮紙并用皮筋勒緊放入___________中滅菌，壓力為________，溫度為______，時(shí)間__________，滅菌完畢拔掉電源，待鍋內(nèi)壓力____________，將試管取出。高壓滅菌鍋100KPa121℃41練習(xí)③將配制好的培養(yǎng)基轉(zhuǎn)移到錐形瓶中，加高壓滅菌鍋100KP練習(xí)③將配制好的培養(yǎng)基轉(zhuǎn)移