血液及其成分的保存運(yùn)輸和領(lǐng)發(fā)

關(guān)于血液及其成分的保存運(yùn)輸和領(lǐng)發(fā)全血在保存時會發(fā)生什么樣的變化？全血保存主要需要解決哪些問題？第2頁,共98頁，2024年2月25日，星期天第一節(jié)全血的保存血液在貯存中的變化(一)血漿的變化項(xiàng)目保存液保存天數(shù)07142135血漿pHACD7.006.796.736.71

CPD7.207.006.896.84

第3頁,共98頁，2024年2月25日，星期天第一節(jié)全血的保存三、血液在貯存中的變化(一)全血的變化項(xiàng)目保存液保存天數(shù)07142135血漿鈉離子(mmol)ACD172158150146CPD175163155152血漿鉀離子(mmol)ACD10202935CPD3.911.917.221CPDA-127.3血漿Hb(mg/L)ACD100220350530CPD1778125191CPDA-182

461第4頁,共98頁，2024年2月25日，星期天第一節(jié)全血的保存血液在貯存中的變化血小板白細(xì)胞5天之后逐漸死亡24h之后功能逐漸喪失第5頁,共98頁，2024年2月25日，星期天第一節(jié)全血的保存血液在貯存中的變化不穩(wěn)定的凝血因子活性逐漸下降第6頁,共98頁，2024年2月25日，星期天第一節(jié)全血的保存血液在貯存中的變化紅細(xì)胞膜蛋白、脂質(zhì)發(fā)生變化，鉀離子降低，鈉、鈣離子升高。雙凹形變成球形或桑椹形，脆性增加，易發(fā)性溶血。第7頁,共98頁，2024年2月25日，星期天第一節(jié)全血的保存三、血液在貯存中的變化紅細(xì)胞的變化項(xiàng)目保存液保存天數(shù)07142135ATP(%)CPD1009683CPDA-1100968370572,3-DPGACD100602310CPD100998044CPDA-11009980445紅細(xì)胞存活率(%)ACD100988570CPD100988580CPDA-110098908579第8頁,共98頁，2024年2月25日，星期天成熟紅細(xì)胞不僅無細(xì)胞核，而且也無線粒體、核蛋白體等細(xì)胞器，不能進(jìn)行核酸和蛋白質(zhì)的生物合成，也不能進(jìn)行有氧氧化，不能利用脂肪酸。血糖是其唯一的能源。紅細(xì)胞攜帶O2,自身不消耗O2,其內(nèi)電解質(zhì)以鉀最多、鈉含量較少,與血漿的鉀鈉含量相反。紅細(xì)胞內(nèi)Ca離子濃度低于血漿。紅細(xì)胞的特點(diǎn)第9頁,共98頁，2024年2月25日，星期天主要途徑磷酸戊糖旁路葡萄糖酵解合成ATP：合成2,3-DPG（2,3-二磷酸甘油酸）控制靜脈側(cè)氧氣的釋放和維持Hb二價鐵，進(jìn)行氧氣的傳遞通過磷酸戊糖通路代謝，為紅細(xì)胞提供另一種還原力，在紅細(xì)胞氧化還原系統(tǒng)中發(fā)揮重要作用，具有保護(hù)膜蛋白、血紅蛋白及酶蛋白的琉基不被氧化，還原高鐵血紅蛋白等多種功能。葡萄糖磷酸化、變構(gòu)、裂解2分子乳酸＋2ATP紅細(xì)胞能量代謝

第10頁,共98頁，2024年2月25日，星期天第11頁,共98頁，2024年2月25日，星期天成熟紅細(xì)胞的糖酵解特點(diǎn)：紅細(xì)胞糖酵解的特點(diǎn)是在酵解過程中有相當(dāng)數(shù)量的1.3-DPG轉(zhuǎn)變成2.3-DPG，后者再脫磷酸變成3-PG，并進(jìn)一步酵解產(chǎn)生乳酸。此2.3-DPG側(cè)支循環(huán)稱2.3-DPG支路，產(chǎn)生支路的原因是紅細(xì)胞中存在DPG變位酶和2.3-DPG磷酸酶，前者活性大于后者，故可使2.3-DPG堆積起來。2.3-DPG生成的主要生理意義在于降低Hb對氧的親和力，在組織氧分壓較低的情況下，HbO2放出氧適應(yīng)組織需要。第12頁,共98頁，2024年2月25日，星期天血紅蛋白與氧親和性增加2,3-DPG含量減少氧解離曲線向左移組織氧供給不足P50是指血紅蛋白氧飽和度為50%時的血氧分壓，可以反映Hb與O2的親和力。P50增大，氧離曲線右移，表示Hb與O2的親和力小，P50減小，氧離曲線左移，說明親和力大。

2,3-DPG的生理意義第13頁,共98頁，2024年2月25日，星期天維持Na+-K-ATP酶(鈉泵)功能。通過ATP提供能量,維持K+的濃度在紅細(xì)胞內(nèi)比血漿高5倍。所以,紅細(xì)胞產(chǎn)生的ATP主要用于維持紅細(xì)胞膜Na+-K-ATP酶酶的正常功能,以保證紅細(xì)胞的離子平衡。在保存過程中,紅細(xì)胞膜和膜蛋白的損傷以及葡萄糖的持續(xù)消耗引起的ATP供能減少都會影響Na+-K-ATP酶功能的正常發(fā)揮,導(dǎo)致細(xì)胞內(nèi)K+的逸出,從而使血漿K+濃度不斷升高。紅細(xì)胞ATP的功能（紅細(xì)胞內(nèi)糖代謝的意義）第14頁,共98頁，2024年2月25日，星期天2、維持紅細(xì)胞膜上鈣泵一的正常運(yùn)轉(zhuǎn)，將紅細(xì)胞內(nèi)的Ca2+泵入血漿以維持紅細(xì)胞內(nèi)的低鈣狀態(tài)。正常情況下，紅細(xì)胞內(nèi)的Ca2+濃度很低（20umol/L)。，而血漿Ca2+的濃度為2-3mmol/L。血漿內(nèi)鈣離子會被動擴(kuò)散進(jìn)入紅細(xì)胞。缺乏ATP時，鈣泵不能正常運(yùn)行，鈣將聚集并沉積于紅細(xì)胞膜上，使膜失去柔韌性而趨于僵硬，使紅細(xì)胞易被破壞紅細(xì)胞ATP的功能（紅細(xì)胞內(nèi)糖代謝的意義）第15頁,共98頁，2024年2月25日，星期天維持紅細(xì)胞膜上脂質(zhì)與血漿脂蛋白中的脂質(zhì)進(jìn)行交換。紅細(xì)胞膜的脂質(zhì)處于不斷更新中，此過程需消耗ATP。缺乏ATP時，脂質(zhì)更新受阻，紅細(xì)胞可塑性降低，易于破壞少量用于谷胱甘肽的生物合成。用于葡萄糖的活化，啟動糖酵解過程。紅細(xì)胞ATP的功能（紅細(xì)胞內(nèi)糖代謝的意義）第16頁,共98頁，2024年2月25日，星期天紅細(xì)胞內(nèi)的谷胱甘肽代謝紅細(xì)胞內(nèi)谷胱甘肽含量很高(2mmol/L)，而且?guī)缀跞沁€原型的，主要生理功能是對抗氧化劑對巰基的氧化。第17頁,共98頁，2024年2月25日，星期天第一節(jié)全血的保存第18頁,共98頁，2024年2月25日，星期天第一節(jié)全血的保存對于需要短時間內(nèi)糾正載氧能力的患者和特別經(jīng)受不住組織缺氧的患者輸入2,3-DPG水平低的血是無益的，應(yīng)該給這些患者輸注保存期不超過7~10天的血液。第19頁,共98頁，2024年2月25日，星期天第一節(jié)全血的保存二、血液保存需要解決的問題需解決的問題

血液凝固

紅細(xì)胞溶血放氧能力下降抗凝劑紅細(xì)胞營養(yǎng)代謝抗溶血劑改善放氧保存容器第20頁,共98頁，2024年2月25日，星期天紅細(xì)胞保存液考慮的幾個方面保護(hù)細(xì)胞的能量產(chǎn)生機(jī)構(gòu)，使其維持正常結(jié)構(gòu)和功能盡量減慢細(xì)胞代謝速度，減少能量消耗并供應(yīng)能量物質(zhì)。其他：抗氧化劑的作用？改善保存容器？第21頁,共98頁，2024年2月25日，星期天第一節(jié)全血的保存常用血液保存液的成分：1、抗凝劑血液抗凝劑是防止血液凝固和紅細(xì)胞被破壞的化學(xué)物質(zhì)

常用的抗凝劑有哪些？第22頁,共98頁，2024年2月25日，星期天第一節(jié)全血的保存血液保存液的成分

(一)血液抗凝劑

枸櫞酸鈉

肝素EDTA·2Na原理CaThrombinCa應(yīng)用實(shí)驗(yàn)室檢測血液標(biāo)本的抗凝及外科體外循環(huán)手術(shù)的抗凝實(shí)驗(yàn)室檢測血液標(biāo)本的抗凝全血及血液成分保存的抗凝劑第23頁,共98頁，2024年2月25日，星期天第一節(jié)全血的保存葡萄糖的在血液中濃度應(yīng)為0.5%~l%，以0.5%為宜

枸櫞酸鈉+

葡萄糖葡萄糖用于維持紅細(xì)胞代謝，延長紅細(xì)胞的保存時間血液保存液的成分：2、提供紅細(xì)胞的能量代謝葡萄糖第24頁,共98頁，2024年2月25日，星期天第一節(jié)全血的保存腺嘌呤提高ATP水平和活性的另一辦法就是在保存液中加入少量腺嘌呤腺嘌呤磷酸腺苷（AMP）磷酸化ATP血液保存液的成分：2、提供紅細(xì)胞的能量代謝第25頁,共98頁，2024年2月25日，星期天第一節(jié)全血的保存血液保存液的成分：3、抗溶血劑目前國際上使用較多的是甘露醇，它的用量很小，一般在1％以下。

蔗糖山梨醇甘露醇具有緩解紅細(xì)胞溶血的功能和加固細(xì)胞膜的作用，而不影響紅細(xì)胞代謝第26頁,共98頁，2024年2月25日，星期天第一節(jié)全血的保存血液保存液的成分：4、改善紅細(xì)胞的放氧能力ACD或CPD血液保存到l周和2周后，其紅細(xì)胞放氧能力均降到50%，對于即刻需要糾正缺氧的患者，輸注保存時間長的血液是不適宜的。第27頁,共98頁，2024年2月25日，星期天第一節(jié)全血的保存血液保存液的成分：4、改善紅細(xì)胞的放氧能力血紅蛋白的解離度紅細(xì)胞的放氧能力影響因素：CO2分壓、O2分壓、pH和2,3-DPG含量及其生成有關(guān)酶系有關(guān)第28頁,共98頁，2024年2月25日，星期天第一節(jié)全血的保存一、全血在(4±2)℃時的保存

4、改善紅細(xì)胞的放氧能力解決的方法：1、保存液中加NaHCO3，所產(chǎn)生的C02，可由內(nèi)在的Ca(OH)2來消除，避免pH降低，有利于2,3-DPG的合成2、加磷酸二羥丙酮，可以增加2,3-DPG含量。3、加丙酮酸鹽、通過輔酶Ⅰ系統(tǒng)增加1,3-二磷酸甘油酸（1,3-DPG），然后變成2,3-DPG。4、加維生素C，增加還原力，進(jìn)而維持有關(guān)酶的活性。第29頁,共98頁，2024年2月25日，星期天第一節(jié)全血的保存全血在(4±2)℃時的保存

保存溫度低溫保存排放整齊紅細(xì)胞代謝緩慢，乳酸生成速度下降，pH下降速度也變緩慢。維持紅細(xì)胞正常代謝，血袋要排放整齊，避免重疊堆積。第30頁,共98頁，2024年2月25日，星期天溫度對紅細(xì)胞保存的影響6℃以上時,無法保證血液成分的活性和有效性。高于10℃紅細(xì)胞破壞增加,10℃以上超過30min游離血紅蛋白的含量逐漸增加,pH下降,血鉀濃度也逐漸上升。保存溫度低于下限2℃時,紅細(xì)胞可能溶解破裂,輸給患者可能造成輸血不良反應(yīng)。儲存溫度≦6℃可最大限度地抑制血液中的細(xì)菌生長。在不正確的條件下儲存30min以上的血液有發(fā)生細(xì)菌污染和(或)細(xì)胞功能喪失的可能第31頁,共98頁，2024年2月25日，星期天第一節(jié)全血的保存一、全血在(4±2)℃時的保存

保存容器聚乙烯烴袋聚氯乙烯（PVC)袋全血、紅細(xì)胞等的保存血小板的保存第32頁,共98頁，2024年2月25日，星期天第一節(jié)全血的保存血液保存液

ACD保養(yǎng)液（枸櫞酸鹽-葡萄糖-枸櫞酸）pH5.0321天CPD保養(yǎng)液（枸櫞酸鹽-葡萄糖-枸櫞酸-磷酸鹽）pH5.6321天CPDA保養(yǎng)液(枸櫞酸鹽-葡萄糖-枸櫞酸-磷酸鹽-腺嘌呤)pH5.6335天加入磷酸鹽加入腺嘌呤第33頁,共98頁，2024年2月25日，星期天第一節(jié)全血的保存二、血液保存液

第34頁,共98頁，2024年2月25日，星期天第一節(jié)全血的保存三、血液在貯存中的變化(二)貯存期（shelflife）全血，聚氯乙烯塑料袋，4℃條件下貯存：ACD或CPD保存液：貯存期為21天CPDA-1保存液：貯存期為35天第35頁,共98頁，2024年2月25日，星期天

第二節(jié)紅細(xì)胞的保存一、濃縮紅細(xì)胞保存4℃保存保存液是全血保存液從采血日起，與相應(yīng)的保存液的儲存期一致第36頁,共98頁，2024年2月25日，星期天

第二節(jié)紅細(xì)胞的保存二、添加劑紅細(xì)胞保存濃縮紅細(xì)胞剩余營養(yǎng)物質(zhì)少黏稠貯存中易發(fā)生溶血第37頁,共98頁，2024年2月25日，星期天

第二節(jié)紅細(xì)胞的保存二、添加劑紅細(xì)胞保存1、濃縮紅細(xì)胞加羥乙基淀粉（分子量3萬）溶液在(4±2)℃貯存可保存14天。2、濃縮紅細(xì)胞加磷酸腺嘌呤及慶大霉素的新維代漿血，在(4±2)℃可保存35天。(一)含膠體的紅細(xì)胞懸液（膠體代漿血）第38頁,共98頁，2024年2月25日，星期天

第二節(jié)紅細(xì)胞的保存二、添加劑紅細(xì)胞保存(二)晶體鹽紅細(xì)胞懸液（晶體鹽代漿血）添加劑成分保存期備注生理鹽水24dSAGNaCl、腺嘌呤、葡萄糖35dSAGMNaCl、腺嘌呤、葡萄糖、甘露醇35d甘露醇－抗溶血劑SAGSNaCl、腺嘌呤、葡萄糖、蔗糖35d更低溶血率MAPNaCl、腺嘌呤、葡萄糖、甘露醇、磷酸鹽35d補(bǔ)充抗凝低滲NH4ClNH4Cl、腺嘌呤、葡萄糖、甘露醇、枸櫞酸鹽120d輸注前需洗滌，臨床未使用SAGM－麥芽糖NaCl、腺嘌呤、葡萄糖、甘露醇、麥芽糖12w五聯(lián)袋，每4周更換保存液第39頁,共98頁，2024年2月25日，星期天目前還不能斷定高水平的ATP是否為氯化氨的作用,有關(guān)理論也有待于進(jìn)一步研究。但作者深信新溶液的保存作用,且有可能是氨的存在是基于這種溶液的非滲透性低滲的原因并得以維持ATP的含量和延長紅細(xì)胞的貯存期。第40頁,共98頁，2024年2月25日，星期天

第二節(jié)紅細(xì)胞的保存二、添加劑紅細(xì)胞保存(三)紅細(xì)胞復(fù)蘇液復(fù)蘇液（丙酮酸鹽、肌苷、葡萄糖、磷酸鹽、腺嘌呤及NaCl）加入濃縮紅細(xì)胞37℃保溫1小時紅細(xì)胞復(fù)蘇：ATP和2,3-DPG恢復(fù)到正常水平輸注前要去除復(fù)蘇液第41頁,共98頁，2024年2月25日，星期天第三節(jié)保存血的肉眼觀察和臨床應(yīng)用鑒定血液應(yīng)在充分的自然光線或日光燈下進(jìn)行（必要時可用放大鏡檢查）第42頁,共98頁，2024年2月25日，星期天第三節(jié)保存血的肉眼觀察和臨床應(yīng)用一、正常血的肉眼觀察血液流入袋內(nèi)多呈暗紅色，有時呈鮮紅色血漿呈草黃色或淡黃色者為多見分層紅細(xì)胞層呈暗紅色白膜層分層界面清晰第43頁,共98頁，2024年2月25日，星期天第三節(jié)保存血的肉眼觀察和臨床應(yīng)用一、正常血的肉眼觀察血漿層內(nèi)不應(yīng)有肉眼可見的血塊、絮狀物或漂浮物。有時出現(xiàn)不同程度的均勻乳黃色或乳白色脂肪顆粒樣漂浮物，在37℃加溫時易溶解呈透明狀若細(xì)菌污染則加熱后不透明。第44頁,共98頁，2024年2月25日，星期天第三節(jié)保存血的肉眼觀察和臨床應(yīng)用一、正常血的肉眼觀察白膜層(buffycoat)，荷葉狀、放射波浪狀、雪花狀、龜裂狀等第45頁,共98頁，2024年2月25日，星期天第三節(jié)保存血的肉眼觀察和臨床應(yīng)用一、正常血的肉眼觀察紅細(xì)胞層暗紅色不含肉眼可見的血凝塊或其他異常物質(zhì)。如果有氣泡：1周后逐漸消失正常在保存中如氣泡日漸增多，則有污染產(chǎn)氣桿菌的可能。第46頁,共98頁，2024年2月25日，星期天第三節(jié)保存血的肉眼觀察和臨床應(yīng)用一、正常血的肉眼觀察血液發(fā)出前，要仔細(xì)檢查，觀察是否有紅細(xì)胞微小凝塊，即冷凝集現(xiàn)象。冷凝集的血輸用前加溫，一般37℃5~10分鐘經(jīng)保溫的血液若有溶血發(fā)生則應(yīng)放棄。第47頁,共98頁，2024年2月25日，星期天第三節(jié)保存血的肉眼觀察和臨床應(yīng)用二、異常血的肉眼觀察一般庫存血紅細(xì)胞為暗紅色，如果顏色變成暗紫色（高錳酸鉀溶液顏色），則常常是細(xì)菌污染造成紅細(xì)胞溶血的結(jié)果。這種血不能輸用，必須進(jìn)行細(xì)菌培養(yǎng)。(一)血液顏色變化第48頁,共98頁，2024年2月25日，星期天第三節(jié)保存血的肉眼觀察和臨床應(yīng)用二、異常血的肉眼觀察溶血：發(fā)生溶血的初期，血漿層底部首先變?yōu)榧t色或白細(xì)胞層出現(xiàn)玫瑰色的小環(huán)，這些現(xiàn)象是溶血初期的特征。溶血加重后，紅色血漿部分則越來越多，并向上部擴(kuò)展，最后全部血漿變?yōu)榧t色。(二)血漿層與紅細(xì)胞層分界不清第49頁,共98頁，2024年2月25日，星期天第三節(jié)保存血的肉眼觀察和臨床應(yīng)用二、異常血的肉眼觀察抗凝不佳：形成肉眼見到的小凝塊，嚴(yán)重時可形成整個大塊血凝塊往往沉降在血細(xì)胞層內(nèi)，可使整齊的表面變成凹凸不平。(三)大量血塊存在第50頁,共98頁，2024年2月25日，星期天第三節(jié)保存血的肉眼觀察和臨床應(yīng)用二、異常血的肉眼觀察庫存血亦可能發(fā)生大小不等的纖維蛋白絮狀凝塊，漂浮于血漿層表面或懸浮在血漿層中。多量、大塊的血凝塊或纖維蛋白塊的存在，均表明血液質(zhì)量不佳，不僅輸血困難，也可能發(fā)生輸血反應(yīng)。原來血液沒有凝塊，保存后產(chǎn)生了血凝塊，則應(yīng)懷疑可能是細(xì)菌污染所致。(三)大量血塊存在第51頁,共98頁，2024年2月25日，星期天第52頁,共98頁，2024年2月25日，星期天第三節(jié)保存血的肉眼觀察和臨床應(yīng)用二、異常血的肉眼觀察乳糜：血漿內(nèi)含過多脂肪。庫存血如發(fā)生血漿明膠化現(xiàn)象，可能細(xì)菌污染，不能發(fā)出使用。(四)血漿層呈乳糜或明膠化第53頁,共98頁，2024年2月25日，星期天第四節(jié)血液的冷凍保存

血液的冷凍保存研究開始于20世紀(jì)40年代1949年P(guān)olge和Smith等人發(fā)現(xiàn)甘油對牛精子的冷凍保存有保護(hù)作用，從中得到啟示第二年，Smith應(yīng)用甘油作保護(hù)劑冷凍紅細(xì)胞獲得成功其后，血液冷凍保存的研究迅速發(fā)展，但是由于沒能解決去除防凍保護(hù)劑的問題，臨床尚未能得到廣泛應(yīng)用。第54頁,共98頁，2024年2月25日，星期天第四節(jié)血液的冷凍保存1956年，Tullis應(yīng)用Cohn分離器將防凍劑甘油去除，從而使冷凍紅細(xì)胞成功地應(yīng)用于臨床。1963年，Huggins發(fā)現(xiàn)紅細(xì)胞在糖溶液中有可逆性的聚集反應(yīng)，利用此反應(yīng)原理，可用糖液洗滌法去除防凍保護(hù)劑—甘油。Meryman等人利用不同濃度梯度的氯化鈉洗滌紅細(xì)胞去除防凍劑第55頁,共98頁，2024年2月25日，星期天第四節(jié)血液的冷凍保存一、血細(xì)胞的低溫?fù)p傷機(jī)制低溫?fù)p傷機(jī)制why？第56頁,共98頁，2024年2月25日，星期天第四節(jié)血液的冷凍保存一、血細(xì)胞的低溫?fù)p傷機(jī)制相變溫度區(qū)間：細(xì)胞在冷凍或復(fù)溶過程中，發(fā)生液相和固相轉(zhuǎn)變的溫度區(qū)間在相變過程中，通常伴隨吸熱或者放熱反應(yīng)，以及體積的改變第57頁,共98頁，2024年2月25日，星期天第四節(jié)血液的冷凍保存一、血細(xì)胞的低溫?fù)p傷機(jī)制降溫過程的低溫?fù)p傷：來自于降溫、復(fù)溫過程中必須經(jīng)過的一個溫度區(qū)間，即－15℃至－60℃之間。該溫度區(qū)間對細(xì)胞具有殺傷性。第58頁,共98頁，2024年2月25日，星期天第四節(jié)血液的冷凍保存一、血細(xì)胞的低溫?fù)p傷機(jī)制(一)鹽變性學(xué)說慢速冷凍細(xì)胞損傷的主要原因：Lovelock等人提出，細(xì)胞外水結(jié)冰時，細(xì)胞收縮、脫水使細(xì)胞內(nèi)外產(chǎn)生的高濃度電解質(zhì)，作用于細(xì)胞膜，引起脂蛋白復(fù)合物的變性和部分類脂質(zhì)的丟失，增加了細(xì)胞對陽離子的通透性，并使細(xì)胞膜上形成一些小孔，冰融化時水進(jìn)入細(xì)胞內(nèi)引起滲透休克第59頁,共98頁，2024年2月25日，星期天第四節(jié)血液的冷凍保存一、血細(xì)胞的低溫?fù)p傷機(jī)制(二)冰晶的機(jī)械作用快速冷凍時細(xì)胞損傷的主要原因：在快速冷凍時，細(xì)胞內(nèi)形成許多冰晶，冰晶作用于細(xì)胞膜，并使細(xì)胞膜上產(chǎn)生小孔，使得細(xì)胞膜不可逆地喪失其半透性第60頁,共98頁，2024年2月25日，星期天第四節(jié)血液的冷凍保存一、血細(xì)胞的低溫?fù)p傷機(jī)制(二)冰晶的機(jī)械作用降溫過快或過慢，都會殺死細(xì)胞在慢的降溫速率下，細(xì)胞的低溫?fù)p傷源于“鹽變性”在高降溫速率下，細(xì)胞的低溫?fù)p傷源于“胞內(nèi)冰”細(xì)胞冰凍保存的最佳降溫速率，應(yīng)該是慢到足以防止“胞內(nèi)冰”，同時又快到使“鹽變性”最小不同的細(xì)胞，由于細(xì)胞膜的生物特性不同，對最佳降溫速率的要求也不同。第61頁,共98頁，2024年2月25日，星期天第四節(jié)血液的冷凍保存一、血細(xì)胞的低溫?fù)p傷機(jī)制(三)化學(xué)損傷Levitt提出：冷凍時，在細(xì)胞脫水和溶質(zhì)濃縮過程中，蛋白質(zhì)組分異?？拷?，最終使蛋白質(zhì)分子中巰基(SH)和二硫鍵(SS)發(fā)生相互不可逆的反應(yīng)，形成新的化學(xué)鍵，導(dǎo)致蛋白質(zhì)變性而引起細(xì)胞死亡。第62頁,共98頁，2024年2月25日，星期天第四節(jié)血液的冷凍保存一、血細(xì)胞的低溫?fù)p傷機(jī)制(四)細(xì)胞的融化反應(yīng)細(xì)胞復(fù)融過程中的損傷：融化反應(yīng)尚不明確第63頁,共98頁，2024年2月25日，星期天第四節(jié)血液的冷凍保存一、血細(xì)胞的低溫?fù)p傷機(jī)制(四)細(xì)胞的融化反應(yīng)經(jīng)驗(yàn)總結(jié)：慢速冷凍的標(biāo)本應(yīng)慢速融化快速冷凍的標(biāo)本則應(yīng)采用快速融化的方法第64頁,共98頁，2024年2月25日，星期天第四節(jié)血液的冷凍保存二、冷凍保護(hù)劑冷凍保護(hù)劑可根據(jù)它們能否穿透細(xì)胞膜分為兩種細(xì)胞內(nèi)保護(hù)劑細(xì)胞外保護(hù)劑加入保護(hù)劑后，可降低溶液的冰點(diǎn)，并增加未凍水量小分子大分子能自由地通過細(xì)胞膜不能穿透細(xì)胞第65頁,共98頁，2024年2月25日，星期天第四節(jié)血液的冷凍保存二、冷凍保護(hù)劑胞內(nèi)外鹽數(shù)量一定未凍水量增加鹽的濃度降低使細(xì)胞處于鹽濃度較低的環(huán)境中第66頁,共98頁，2024年2月25日，星期天第四節(jié)血液的冷凍保存二、冷凍保護(hù)劑(二)冷凍保護(hù)劑的種類細(xì)胞內(nèi)保護(hù)劑：甘油、DMSO、葡萄糖、乙二醇、丙三醇、甲醇、乙醇、乙酸胺、甲酞胺等。細(xì)胞外保護(hù)劑：乳糖、麥芽糖、木糖、聚乙烯吡咯烷酮(PVP)、右旋糖酐、白蛋白、羥乙基淀粉（HES）、聚乙二醇（PEG）、甘露醇等。第67頁,共98頁，2024年2月25日，星期天第四節(jié)血液的冷凍保存三、低溫血液保存與玻璃化玻璃化就是生物材料在由液態(tài)向固態(tài)轉(zhuǎn)化過程中沒有相變熱產(chǎn)生，也就是沒有晶體生成。有人認(rèn)為冷卻速率達(dá)到10℃/秒，顆粒小于5~l0nm就不會使生物材料受到冷凍損傷，這就叫玻璃化。第68頁,共98頁，2024年2月25日，星期天第四節(jié)血液的冷凍保存三、低溫血液保存與玻璃化添加冷凍保護(hù)劑或快速冷凍生物材料的目的就是使生物材料中的水處于容易達(dá)到玻璃化的狀態(tài)。第69頁,共98頁，2024年2月25日，星期天第四節(jié)血液的冷凍保存四、紅細(xì)胞甘油化、冷凍、融化和去甘油的方法高濃度甘油慢速冷凍低濃度甘油快速冷凍解凍：慢速融化去除甘油試劑可用糖液聚集法或不同濃度梯度氯化鈉洗滌法解凍：快速融化去除甘油試劑可用不同濃度梯度氯化鈉溶液，由高滲逐漸過渡到等滲分次洗滌第70頁,共98頁，2024年2月25日，星期天第四節(jié)血液的冷凍保存五、冷凍紅細(xì)胞的制備方法在我國普遍使用高濃度甘油慢速冷凍第71頁,共98頁，2024年2月25日，星期天第四節(jié)血液的冷凍保存五、冷凍紅細(xì)胞的制備方法高濃度甘油慢速冷凍鹽液離心洗滌法糖液聚集洗滌法按解凍后洗脫甘油的方法：

方法：先采用高張溶液使融化的高滲紅細(xì)胞滲透壓達(dá)到平衡，接著用逐漸減低的高張溶液進(jìn)行分次洗滌，最后用含有葡萄糖的等滲NaCl懸浮第72頁,共98頁，2024年2月25日，星期天第四節(jié)血液的冷凍保存五、冷凍紅細(xì)胞的制備方法等張溶液是指不引起紅細(xì)胞膜變形的溶液，這個概念是從生理角度考慮的。有些溶質(zhì)的等滲濃度與等張濃度相同或相近，如0.9%的氯化鈉溶液，既是等滲溶液又是等張溶液。第73頁,共98頁，2024年2月25日，星期天第四節(jié)血液的冷凍保存五、冷凍紅細(xì)胞的制備方法有些溶質(zhì)如鹽酸普魯卡因、甘油、尿素等，等滲溶液不等于等張溶液。例如2.6%的甘油溶液與0.9%的氯化鈉溶液具有相同的滲透壓，但是2.6%的甘油100%溶血，所以是不等張的。高張溶液會使紅細(xì)胞脫水皺縮，低張溶液會使紅細(xì)胞吸水膨脹。第74頁,共98頁，2024年2月25日，星期天第四節(jié)血液的冷凍保存五、冷凍紅細(xì)胞的制備方法先采用高張溶液使融化的高滲紅細(xì)胞滲透壓達(dá)到平衡，接著用逐漸減低的高張溶液進(jìn)行分次洗滌，最后用含有葡萄糖的等滲NaCl懸浮內(nèi)外高滲水高張水第75頁,共98頁，2024年2月25日，星期天第四節(jié)血液的冷凍保存五、冷凍紅細(xì)胞的制備方法(一)慢速冷凍糖液聚集洗滌制備法1、糖液聚集洗滌法去甘油原理在pH5.2~6.1的范圍內(nèi)，血漿中的丙種球蛋白與紅細(xì)胞膜的脂蛋白之間可形成一種可逆性的復(fù)合物第76頁,共98頁，2024年2月25日，星期天第四節(jié)血液的冷凍保存五、冷凍紅細(xì)胞的制備方法(一)慢速冷凍糖液聚集洗滌制備法1、糖液聚集洗滌法去甘油原理當(dāng)加入非電解質(zhì)溶液時，如果糖、葡萄糖、蔗糖等，由于離子強(qiáng)度減小，與脂蛋白結(jié)合的球蛋白之間又可結(jié)合，使紅細(xì)胞聚集成團(tuán)塊沉下來，除去甘油上清液第77頁,共98頁，2024年2月25日，星期天第四節(jié)血液的冷凍保存五、冷凍紅細(xì)胞的制備方法(一)慢速冷凍糖液聚集洗滌制備法1、糖液聚集洗滌法去甘油原理當(dāng)加入電解質(zhì)如生理鹽水或升高pH值，可使球蛋白之間的結(jié)合斷開，也可使丙種球蛋白與紅細(xì)胞膜脂蛋白之間的結(jié)合斷開，使紅細(xì)胞重新懸浮第78頁,共98頁，2024年2月25日，星期天加等體積甘油化試劑第四節(jié)血液的冷凍保存五、冷凍紅細(xì)胞的制備方法(一)慢速冷凍糖液聚集洗滌制備法2、制備方法（國內(nèi)改進(jìn)）

ACD或CPD全血(200ml)

濃縮紅細(xì)胞(90~120ml)

離心移出血漿

甘油化紅細(xì)胞(室溫平衡半小時)

甘油化：分漿后所得的濃縮紅細(xì)胞轉(zhuǎn)移到專用洗滌塑料袋中，袋內(nèi)裝有一由塑料管密封的電磁攪拌器。在電磁攪拌器的攪拌下緩緩加入等體積的甘油試劑。

第79頁,共98頁，2024年2月25日，星期天37~40℃水浴中融化第四節(jié)血液的冷凍保存冷凍紅細(xì)胞解凍紅細(xì)胞置-80℃冰箱或干冰中貯存去甘油紅細(xì)胞加入等體積50%的葡萄糖溶液后，分別再用10%蔗糖溶液500mL洗脫3次。分別去除上清第80頁,共98頁，2024年2月25日，星期天臨床輸用測上清血紅蛋白合格后第四節(jié)血液的冷凍保存懸浮紅細(xì)胞加100mL0.9%NaCl洗滌，離心去上清，再加100mL0.9%NaCl重新懸浮紅細(xì)胞第81頁,共98頁，2024年2月25日，星期天第四節(jié)血液的冷凍保存五、冷凍紅細(xì)胞的制備方法(一)慢速冷凍糖液聚集洗滌制備法洗脫甘油：國外均采用5%果糖進(jìn)行洗脫甘油，因果糖價格昂貴，我國用蔗糖代替果糖比較經(jīng)濟(jì)。第82頁,共98頁，2024年2月25日，星期天第四節(jié)血液的冷凍保存五、冷凍紅細(xì)胞的制備方法(二)慢速冷凍鹽液洗滌制備法使用不同濃度梯度的NaCl溶液先由高滲逐漸過度到等滲，可用大容量離心機(jī)反復(fù)離心或用連續(xù)離心機(jī)分離、洗脫掉冷凍紅細(xì)胞的防凍劑，達(dá)到去甘油的目的。此方法比糖液洗滌法經(jīng)濟(jì)，紅細(xì)胞回收率高，并且質(zhì)量好第83頁,共98頁，2024年2月25日，星期天第四節(jié)血液的冷凍保存五、冷凍紅細(xì)胞的制備方法(二)慢速冷凍鹽液洗滌制備法1、制備方法加入160mL57.1％甘油化試劑ACD或CPD全血(200ml)

濃縮紅細(xì)胞(90~120ml)

離心移出血漿

甘油化紅細(xì)胞第84頁,共98頁，2024年2月25日，星期天37~40℃水浴中解凍第四節(jié)血液的冷凍保存冷凍紅細(xì)胞解凍紅細(xì)胞室溫平衡半小時，置－80℃冰箱或干冰中貯存去甘油紅細(xì)胞加入40mL9%NaCl，再加0.9％NaCl250ml，離心去上清，再加0.9%NaCl400~500mL離心去上清，再用0.9%NaCl洗滌一次第85頁,共98頁，2024年2月25日，星期天臨床輸用測上清血紅蛋白合格后第四節(jié)血液的冷凍保存懸浮紅細(xì)胞加100mL0.9%NaCl第86頁,共98頁，2024年2月25日，星期天第四節(jié)血液的冷凍保存五、冷凍紅細(xì)胞的制備方法(三)快速冷凍紅細(xì)胞制備方法1、制備方法加入等體積甘油化試劑ACD或CPD全血(200ml)

濃縮紅細(xì)胞(90~120ml)

離心移出血漿

甘油化紅細(xì)胞第87頁,共98頁，2024年2月25日，星期天45℃水浴中3分鐘內(nèi)完全融化第四節(jié)血液的冷凍保存冷凍紅細(xì)胞解凍紅細(xì)胞－196℃冰凍，液