高考生物總復(fù)習(xí)專(zhuān)題1傳統(tǒng)發(fā)酵技術(shù)的應(yīng)用專(zhuān)題2微生物的培養(yǎng)與應(yīng)用全國(guó)公開(kāi)課一等獎(jiǎng)百校聯(lián)賽示范課賽課特等

選修1專(zhuān)題1、2

生物技術(shù)實(shí)踐傳統(tǒng)發(fā)酵技術(shù)應(yīng)用、微生物培養(yǎng)與應(yīng)用第1頁(yè)考綱內(nèi)容能力要求命題分析試驗(yàn)：(1)利用發(fā)酵加工食品基本方法(2)測(cè)定食品加工中可能產(chǎn)生有害物質(zhì)(3)微生物分離和培養(yǎng)(4)某種微生物數(shù)量測(cè)定(5)培養(yǎng)基對(duì)微生物選擇作用(6)利用微生物發(fā)酵來(lái)生產(chǎn)特定產(chǎn)物以及微生物在其它方面應(yīng)用試驗(yàn)與探究能力試驗(yàn)與探究能力試驗(yàn)與探究能力試驗(yàn)與探究能力試驗(yàn)與探究能力試驗(yàn)與探究能力1.近幾年新課標(biāo)卷以綜合題形式考查了傳統(tǒng)發(fā)酵技術(shù)(泡菜制作)、微生物分離、計(jì)數(shù)和篩選等。2.命題趨勢(shì)：以生活實(shí)踐為背景，以綜合題形式考查本專(zhuān)題相關(guān)知識(shí)。第2頁(yè)項(xiàng)目果酒果醋腐乳泡菜微生物酵母菌醋酸菌毛霉乳酸菌制作原理在無(wú)氧條件下，利用酵母菌將葡萄糖分解為酒精等物質(zhì)在有氧條件下，利用醋酸菌將葡萄汁中糖分解成醋酸；缺乏糖源時(shí)，可將乙醇(酒精)變?yōu)橐胰?，再變?yōu)榇姿崦沟任⑸锂a(chǎn)生蛋白酶和脂肪酶將豆腐中蛋白質(zhì)和脂肪分解為小分子物質(zhì)，使普通豆腐變?yōu)轱L(fēng)味獨(dú)特腐乳在無(wú)氧條件下，乳酸菌將葡萄糖分解成乳酸氣體條件①______有氧③________無(wú)氧溫度18℃～ 25℃②______________15℃～18℃④_____一、傳統(tǒng)發(fā)酵技術(shù)應(yīng)用1．果酒、果醋、腐乳和泡菜制作原理：無(wú)氧30℃～35℃有氧常溫第3頁(yè)2.酒精檢測(cè)：(1)方法：可用______________檢測(cè)酒精。(2)原理：在酸性條件下，重鉻酸鉀與酒精反應(yīng)展現(xiàn)_______色。重鉻酸鉀灰綠

3．亞硝酸鹽含量測(cè)定原理：在鹽酸酸化條件下，亞硝酸鹽與______________發(fā)生重氮化反應(yīng)后，與N－1－萘基乙二胺鹽酸鹽結(jié)合，形成________色染料。將顯色后樣品與________________進(jìn)行目測(cè)比較，可大致估算出泡菜中亞硝酸鹽含量。對(duì)氨基苯磺酸玫瑰紅標(biāo)準(zhǔn)顯色液第4頁(yè)二、微生物培養(yǎng)與應(yīng)用1．培養(yǎng)基：生長(zhǎng)繁殖固體選擇碳源

(1)培養(yǎng)基是人們按照微生物對(duì)營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)不一樣要求，配制出供其____________營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)。 (2)依據(jù)物理狀態(tài)不一樣分為半液體培養(yǎng)基、液體培養(yǎng)基和________培養(yǎng)基。 (3)依據(jù)培養(yǎng)基功效可分為基礎(chǔ)培養(yǎng)基、________培養(yǎng)基和判別培養(yǎng)基。氮源pH

(4)每種培養(yǎng)基普通都含有水、________、______、無(wú)機(jī)鹽。另外要滿足微生物對(duì)_______、特殊營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)及氧氣要求。第5頁(yè)2．無(wú)菌技術(shù)：70～7515

(1)巴氏消毒法在________℃煮30min或者在80℃煮________min，能夠殺死牛奶中微生物，而且使牛奶營(yíng)養(yǎng)成份不被破壞。灼燒干熱芽孢和孢子

(2)接種環(huán)慣用________滅菌；需要干燥且耐高溫物品可采取________滅菌，另外還能夠用高壓蒸汽滅菌。 (3)滅菌和消毒最主要區(qū)分是是否殺死____________。第6頁(yè)3．微生物培養(yǎng)基本技術(shù)：接種環(huán)涂布器

(1)配制培養(yǎng)基：計(jì)算→稱量→溶化→調(diào)pH→分裝→包扎。 (2)滅菌：高壓滅菌鍋加水→將培養(yǎng)基放入鍋內(nèi)→密封→排冷氣→維持壓力→取出倒平板(或擱置斜面)。(3)接種：平板劃線法稀釋涂布平板法①接種過(guò)程：洗凈雙手→點(diǎn)燃酒精燈→接種→貼標(biāo)簽。②接種工具：包含____________、____________。③接種方法：______________、____________________。(4)培養(yǎng)：接種后培養(yǎng)皿放入恒溫箱內(nèi)培養(yǎng)。第7頁(yè)4．土壤中分解尿素細(xì)菌分離與計(jì)數(shù)：(1)種菌篩選：尿素稀釋涂布平板法①培養(yǎng)基：選擇培養(yǎng)基。顯微鏡直接計(jì)數(shù)法②特點(diǎn)：________是唯一氮源。(2)統(tǒng)計(jì)菌落數(shù)目標(biāo)方法：______________________；__________________________。非測(cè)試原因

(3)設(shè)置對(duì)照主要目標(biāo)：排除試驗(yàn)組中______________對(duì)試驗(yàn)結(jié)果影響。第8頁(yè)5．分解纖維素微生物分離——纖維素分解菌篩選：(1)試驗(yàn)原理：透明圈①纖維素酶催化原理：②篩選纖維素分解菌原理：即：可依據(jù)是否產(chǎn)生____________來(lái)篩選纖維素分解菌。第9頁(yè)

(2)過(guò)程： 土壤取樣：選擇富含纖維素環(huán)境中土壤。 ↓選擇培養(yǎng)：用選擇培養(yǎng)基培養(yǎng),以增加纖維素分解菌數(shù)量。 ↓ 梯度稀釋 ↓，再加入剛果將樣品涂布到鑒方法一：先培養(yǎng)__________別纖維素分解菌紅進(jìn)行顏色反應(yīng)。方法二：在____________時(shí)加入剛果紅。培養(yǎng)基上↓微生物倒平板第10頁(yè)深入判定挑選產(chǎn)生透明圈菌落↓ 試驗(yàn)：進(jìn)行發(fā)酵產(chǎn)纖維素酶試驗(yàn)。測(cè)定方法：普通是對(duì)纖維素酶分解濾紙等纖維素后所產(chǎn)生_________進(jìn)行定量測(cè)定。葡萄糖第11頁(yè)[判斷正誤]1．在家庭中用鮮葡萄制作果酒時(shí)，應(yīng)向發(fā)酵罐中連續(xù)通入空氣。()2．腐乳制作利用了毛霉等微生物蛋白酶和脂肪酶。(

)3．用稀釋涂布平板法純化大腸桿菌時(shí)，只要稀釋度足夠高，普通就能在培養(yǎng)基表面形成單個(gè)菌落。()答案：1.×2.√3.√第12頁(yè)菌種酵母菌醋酸菌毛霉乳酸菌生物分類(lèi)真核生物原核生物真核生物原核生物代謝類(lèi)型異養(yǎng)兼性厭氧異養(yǎng)需氧異養(yǎng)需氧異養(yǎng)厭氧繁殖方式適宜條件下 出芽生殖二分裂孢子生殖二分裂生產(chǎn)應(yīng)用釀酒、發(fā)面釀醋制作腐乳制作泡菜、酸奶發(fā)酵條件前期需氧、后期不需氧一直需氧一直需氧一直無(wú)氧考點(diǎn)一微生物與發(fā)酵原理1．與傳統(tǒng)發(fā)酵相關(guān)幾個(gè)微生物比較：第13頁(yè)發(fā)酵食品制作過(guò)程注意事項(xiàng)果酒挑選葡萄→沖洗→榨汁→酒精發(fā)酵→果酒(1)材料選擇與處理：選擇新鮮葡萄，榨汁前，先將葡萄洗潔凈再去除枝梗(2)預(yù)防發(fā)酵液被污染：①榨汁機(jī)要清洗潔凈并晾干；②發(fā)酵瓶要清洗潔凈，并用體積分?jǐn)?shù)為70%酒精消毒，或用洗滌劑洗滌；③裝入葡萄汁后，封閉充氣口2.果酒、果醋、腐乳、泡菜制作過(guò)程及注意事項(xiàng)：第14頁(yè)發(fā)酵食品制作過(guò)程注意事項(xiàng)果醋挑選葡萄→沖洗→榨汁→酒精發(fā)酵→醋酸發(fā)酵→果醋(3)控制好發(fā)酵條件：①葡萄汁裝入發(fā)酵瓶時(shí)，要留有1/3空間，其目是先讓酵母菌進(jìn)行有氧呼吸快速繁殖，增加菌種，耗盡氧氣再進(jìn)行酒精發(fā)酵；②控制好溫度：果酒制作時(shí)，溫度控制在18℃～25℃；果醋制作時(shí)，溫度嚴(yán)格控制在30℃～35℃；③注意是否需要通氣：果醋發(fā)酵時(shí)，需要適時(shí)經(jīng)過(guò)充氣口充氣(續(xù)表)第15頁(yè)發(fā)酵食品制作過(guò)程注意事項(xiàng)腐乳讓豆腐上長(zhǎng)出毛霉→加鹽腌制→加鹵湯裝瓶→密封腌制(1)控制好材料中鹽、酒用量：鹽和酒精過(guò)少，不足以抑制微生物生長(zhǎng)；酒精含量過(guò)多，則會(huì)延長(zhǎng)腐乳成熟時(shí)間(2)預(yù)防雜菌污染：①用來(lái)腌制腐乳玻璃瓶要洗涮潔凈并用沸水消毒；②裝瓶時(shí)，操作要快速小心，封瓶時(shí)，最好將瓶口經(jīng)過(guò)酒精燈火焰，預(yù)防瓶口被污染(3)注意發(fā)酵時(shí)溫度(續(xù)表)第16頁(yè)發(fā)酵食品制作過(guò)程注意事項(xiàng)泡菜選擇原料→修整、洗滌、晾曬、切分成條狀或片狀→配制泡菜鹽水→把處理后原料、鹽水等其他調(diào)味料裝入瓶中→發(fā)酵→成品(1)泡菜壇選擇：選取無(wú)裂紋、無(wú)砂眼、壇沿深、蓋子吻合好泡菜壇(2)材料選擇及用量：①蔬菜應(yīng)新鮮，若放置時(shí)間過(guò)長(zhǎng)，蔬菜中硝酸鹽易被還原成亞硝酸鹽；②清水與鹽質(zhì)量比是4∶1，鹽水要煮沸后冷卻待用，煮沸鹽水可抵達(dá)殺菌和去除氧氣作用(3)氧氣控制：壇蓋邊緣水槽中要注滿水，發(fā)酵過(guò)程中，要及時(shí)補(bǔ)充蒸發(fā)掉水分，以確保乳酸菌發(fā)酵無(wú)氧環(huán)境(續(xù)表)第17頁(yè)◎高考探究◎考向微生物與發(fā)酵原理

[典例](年新課標(biāo)卷Ⅰ)回答以下相關(guān)泡菜制作習(xí)題： (1)制作泡菜時(shí)，所用鹽水需煮沸，其目標(biāo)是____________________。為了縮短制作時(shí)間，有些人還會(huì)在冷卻后鹽水中加入少許陳泡菜液，加入陳泡菜液目標(biāo)是________________。 (2)泡菜制作過(guò)程中，乳酸發(fā)酵過(guò)程即為乳酸菌進(jìn)行____________過(guò)程。該過(guò)程發(fā)生在乳酸菌________中。 (3)泡菜制作過(guò)程中影響亞硝酸鹽含量原因有_______________、______________和____________等。第18頁(yè)

(4)從開(kāi)始制作到泡菜質(zhì)量最正確這段時(shí)間內(nèi)，泡菜液逐步變酸，這段時(shí)間內(nèi)泡菜壇中乳酸菌和其它雜菌消長(zhǎng)規(guī)律是____________________________，原因是__________________。

[解析](1)鹽水中可能含有雜菌，制作泡菜時(shí)，所用鹽水需要煮沸，方便殺死鹽水中雜菌。陳泡菜液中含有大量現(xiàn)成乳酸菌，加入后，能夠縮短制作時(shí)間。(2)乳酸發(fā)酵過(guò)程即為乳酸菌進(jìn)行無(wú)氧呼吸過(guò)程。該過(guò)程發(fā)生在乳酸菌細(xì)胞細(xì)胞質(zhì)基質(zhì)中。(3)泡菜制作過(guò)程中，造成亞硝酸鹽含量增加原因有溫度過(guò)高、食鹽用量過(guò)低、腌制時(shí)間過(guò)短等。第19頁(yè)

(4)從開(kāi)始制作到泡菜品質(zhì)最正確這段時(shí)間內(nèi)，泡菜液逐步發(fā)酸，這段時(shí)間內(nèi)泡菜壇中乳酸菌數(shù)量增加，其它雜菌較少，原因是酸性條件下，不利于雜菌生存，而乳酸菌耐酸，數(shù)量增加。[答案](1)殺滅雜菌增加乳酸菌數(shù)量(2)無(wú)氧呼吸細(xì)胞質(zhì)(3)溫度腌制時(shí)間食鹽用量(4)乳酸菌數(shù)量增多，雜菌數(shù)量降低乳酸菌比雜菌更為耐酸第20頁(yè)【考點(diǎn)練透】

1．(年寶雞一模)下面是果酒和果醋制作試驗(yàn)流程和發(fā)酵裝置。依據(jù)圖示回答以下問(wèn)題：圖1果酒、果醋制作流程圖2果酒、果醋制作裝置

(1)完成圖1中試驗(yàn)流程______________________________________________。第21頁(yè)

(2)圖2裝置中充氣口在________過(guò)程中要關(guān)閉，不然可能發(fā)生使發(fā)酵液變酸反應(yīng)________________________________________________________________(寫(xiě)出該反應(yīng)式)，而排氣口在該過(guò)程中應(yīng)開(kāi)放，排氣口要經(jīng)過(guò)一個(gè)長(zhǎng)而彎曲膠管與瓶身連接，目標(biāo)是___________________________________。 (3)葡萄酒展現(xiàn)紅色原因是________________________，重鉻酸鉀在酸性條件下與酒精反應(yīng)呈______色。

(4)果酒和果醋制作分別利用了酵母菌和__________兩種微生物發(fā)酵原理，后者在結(jié)構(gòu)上主要特點(diǎn)是________________________________________。第22頁(yè)

解析：在酒精發(fā)酵階段，充氣口應(yīng)關(guān)閉，不然醋酸菌會(huì)將乙醇氧化為醋酸，從而使發(fā)酵液變酸。酵母菌為真菌，屬于真核生物，醋酸菌為細(xì)菌，屬于原核生物，二者在結(jié)構(gòu)上主要區(qū)分是有沒(méi)有以核膜為界限細(xì)胞核。

答案：(1)醋酸發(fā)酵(2)酒精發(fā)酵C2H5OH＋O2―→CH3COOH＋H2O防止空氣中其它微生物進(jìn)入發(fā)酵裝置(預(yù)防空氣中微生物污染)(3)紅色葡萄皮中色素溶解在發(fā)酵液中灰綠(4)醋酸菌無(wú)以核膜為界限細(xì)胞核第23頁(yè)營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)定義作用主要起源碳源能提供所需碳元素物質(zhì)組成生物體細(xì)胞物質(zhì)和一些代謝產(chǎn)物，有些是異養(yǎng)生物能源物質(zhì)無(wú)機(jī)化合物(CO2

、NaHCO3)，有機(jī)化合物(糖類(lèi)、脂肪酸、花生粉餅、石油等)氮源能提供所需氮元素物質(zhì)合成蛋白質(zhì)、核酸以及含氮代謝產(chǎn)物無(wú)機(jī)化合物(N2、NH3、銨鹽、硝酸鹽)，有機(jī)化合物(尿素、牛肉膏、蛋白胨等)考點(diǎn)二微生物試驗(yàn)室培養(yǎng)

1．微生物營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)及功效：微生物營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)主要有碳源、氮源、無(wú)機(jī)鹽和水這四大類(lèi)。另外還要滿足不一樣微生物生長(zhǎng)對(duì)pH、特殊營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)以及氧氣需求。第24頁(yè)(1)微生物最常利用碳源是糖類(lèi)，尤其是葡萄糖；最常利用氮源是銨鹽、硝酸鹽。(2)對(duì)異養(yǎng)微生物來(lái)說(shuō)，含C、H、O、N化合物既是碳源又是氮源、能源。

(3)有些培養(yǎng)基不需要添加特殊營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)，生物自己能合成，如大腸桿菌能合成一些維生素，作為特殊營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)。第25頁(yè)劃分標(biāo)準(zhǔn)培養(yǎng)基 種類(lèi)特點(diǎn)和用途化學(xué)成份天然培 養(yǎng)基利用動(dòng)、植物或微生物體包含用其提取物制成培養(yǎng)基。優(yōu)點(diǎn)是營(yíng)養(yǎng)豐富、種類(lèi)多樣、配制方便、價(jià)格低廉；缺點(diǎn)是化學(xué)成份不清楚、不穩(wěn)定。主要用 于微生物學(xué)試驗(yàn)培養(yǎng)或發(fā)酵工業(yè)合成培 養(yǎng)基是按微生物營(yíng)養(yǎng)要求準(zhǔn)確設(shè)計(jì)后，用各種高純化 學(xué)試劑配制成培養(yǎng)基。優(yōu)點(diǎn)是成份及量確切可知；缺點(diǎn)是價(jià)格較貴，配制復(fù)雜，且微生物生長(zhǎng)比 較普通。主要用于微生物分類(lèi)和判定半合成培養(yǎng)基主要以化學(xué)試劑配制，同時(shí)還加有某種或一些天然成份培養(yǎng)基。特點(diǎn)是配制方便，成本低，微生物 生長(zhǎng)良好。主要用于工業(yè)生產(chǎn)2．培養(yǎng)基種類(lèi)：第26頁(yè)劃分標(biāo)準(zhǔn)培養(yǎng)基 種類(lèi)特點(diǎn)和用途物理狀態(tài)液體培 養(yǎng)基呈液體狀態(tài)培養(yǎng)基，用于微生物學(xué)試驗(yàn)和生產(chǎn)固體培 養(yǎng)基呈固體狀態(tài)培養(yǎng)基，用于菌種分離、判定、菌落 計(jì)數(shù)、檢測(cè)雜菌、育種、菌種保藏等半固體培養(yǎng)基在液體培養(yǎng)基中加入少許凝固劑(如0.2%～0.5% 瓊脂)而制成半固體狀態(tài)培養(yǎng)基?？捎糜谟^察細(xì)菌運(yùn)動(dòng)能力，進(jìn)行厭氧菌培養(yǎng)及菌種保藏等（續(xù)表）第27頁(yè)劃分標(biāo)準(zhǔn)培養(yǎng)基 種類(lèi)特點(diǎn)和用途功效選擇性培養(yǎng)基依據(jù)某微生物特殊營(yíng)養(yǎng)要求或其對(duì)一些物理、化學(xué)原因抗性而設(shè)計(jì)培養(yǎng)基，含有使混合菌樣中劣勢(shì)菌變成優(yōu)勢(shì)菌功效?？捎糜诰N篩選判別培 養(yǎng)基一類(lèi)在成份中加有能與目標(biāo)菌無(wú)色代謝產(chǎn)物發(fā)生顯色反應(yīng)指示劑，從而抵達(dá)只需用肉眼區(qū)分顏色就能方便地從近似菌落中找到目標(biāo)菌菌落培養(yǎng)基?？捎糜诰N判別、計(jì)數(shù)（續(xù)表）第28頁(yè)(1)加入培養(yǎng)基中凝固劑(如瓊脂)，普通不能被微生物利用，只起到凝固作用。

(2)選擇培養(yǎng)基普通只生長(zhǎng)含有特定目標(biāo)微生物，判別培養(yǎng)基能夠存在其它微生物，而且能判別特定微生物。第29頁(yè)項(xiàng)目概念慣用方法應(yīng)用范圍消毒使用較為溫和物理或化學(xué)方法僅殺死物體表面或內(nèi)部一部分對(duì)人體有害微生物(不包含芽孢或孢子)煮沸消毒法：在100℃煮沸5～6min普通物品巴氏消毒法：70℃～75℃煮30min或在80℃煮15min一些不耐高溫液體，如牛奶化學(xué)藥劑消毒法如用酒精擦拭雙手、用氯氣消毒水源等紫外線消毒法：30W紫外燈照射30min接種室3．消毒與滅菌：第30頁(yè)項(xiàng)目概念慣用方法應(yīng)用范圍滅菌使用強(qiáng)烈理化原因殺死物體內(nèi)外全部微生物(包含芽孢和孢子)灼燒滅菌，用酒精燈火焰充分燃燒層灼燒接種工具滅菌干熱滅菌：160℃～170℃下滅菌1～2h玻璃器皿、金屬工具滅菌高壓蒸汽滅菌：121℃條件下，滅菌15～30min培養(yǎng)基及容器滅菌（續(xù)表）注：消毒與滅菌最大區(qū)分是芽孢和孢子是否存活。第31頁(yè)接種方法操作過(guò)程注意事項(xiàng)平板劃 線法接種環(huán)滅菌→取菌液→在培養(yǎng)液上劃線→培養(yǎng)皿倒置培養(yǎng)(1)接種環(huán)灼燒：①第一次灼燒：防止接種環(huán)上可能存在微生物污染培養(yǎng)物；②每次劃線之前灼燒：殺死上次劃線結(jié)束后殘留在接種環(huán)上菌種，使每次劃線菌種均來(lái)自上次劃線末端；③劃線結(jié)束灼燒：殺死接種環(huán)上殘留菌種，防止細(xì)菌污染環(huán)境和感染操作者(2)灼燒接種環(huán)之后，要冷卻后才能伸入菌液，以免溫度太高而殺死菌種(3)劃線時(shí)最終一區(qū)域不要與第一區(qū)域相連(4)劃線用力大小要適當(dāng)，預(yù)防用力過(guò)大將培養(yǎng)基劃破(1)接種方法比較：4．慣用微生物接種方法：第32頁(yè)接種方法操作過(guò)程注意事項(xiàng)稀釋涂布平板法稀釋菌液→取菌液于培養(yǎng)基表面→涂布器滅菌→均勻涂布菌液→培養(yǎng)皿倒置培養(yǎng)稀釋操作：每支試管及其中9mL水、移液管均需滅菌；操作時(shí)，試管口和移液管應(yīng)在離火焰1～2cm處涂布器滅菌：①涂布器用體積分?jǐn)?shù)為70%酒精消毒，取出時(shí)多余酒精在燒杯中滴盡，沾有少許酒精涂布器在火焰上引燃后冷卻；②不要將過(guò)熱涂布器放在盛放酒精燒杯中，以免引燃其中酒精(續(xù)表)第33頁(yè)(2)倒平板注意事項(xiàng)：①培養(yǎng)基滅菌后，需冷卻至50℃左右，才能用來(lái)倒平板。②整個(gè)操作過(guò)程需在酒精燈火焰旁進(jìn)行，防止雜菌污染。③平板冷凝后要倒置原因：預(yù)防皿蓋上冷凝水珠落入培養(yǎng)基，造成污染。第34頁(yè)◎高考探究◎考向微生物培養(yǎng)

[典例](年四川卷)有機(jī)農(nóng)藥苯磺隆是一個(gè)除草劑，長(zhǎng)久使用會(huì)污染環(huán)境。研究發(fā)覺(jué)，苯磺隆能被土壤中一些微生物降解。分離降解苯磺隆菌株和探索其降解機(jī)制試驗(yàn)過(guò)程以下圖甲、乙所表示。(導(dǎo)學(xué)號(hào)57130088)甲乙第35頁(yè)

(1)微生物生長(zhǎng)繁殖所需主要營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)有碳源、水、________________四類(lèi)，該試驗(yàn)所用選擇培養(yǎng)基只能以苯磺隆作為唯一碳源，其原因是_____________________________。 (2)與微生物培養(yǎng)基相比，植物組織培養(yǎng)培養(yǎng)基常需添加生長(zhǎng)素和______________，這些植物激素普通需要事先單獨(dú)配置成________保留備用。

(3)純化菌株時(shí)，通常使用劃線工具是________。劃線某個(gè)平板培養(yǎng)后，第一劃線區(qū)域劃線上都不間斷地長(zhǎng)滿了菌，第二劃線區(qū)域第一條線上無(wú)菌落，其它劃線上有菌落。造成劃線無(wú)菌落可能操作失誤有_____________________________________________________。第36頁(yè)

(4)為探究苯磺隆降解機(jī)制，將該菌種培養(yǎng)液過(guò)濾離心，取上清液做圖乙所表示試驗(yàn)。該試驗(yàn)假設(shè)是_______________________________________________，該試驗(yàn)設(shè)計(jì)是否合理？為何？______________________。

[解析](1)微生物生長(zhǎng)所需要主要營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)包含碳源、氮源、水和無(wú)機(jī)鹽。使用選擇培養(yǎng)基是因?yàn)槠湓试S特定微生物生長(zhǎng)，同時(shí)又能抑制或阻止其它微生物生長(zhǎng)。(2)植物組織培養(yǎng)常需要添加植物激素有生長(zhǎng)素和細(xì)胞分裂素。MS培養(yǎng)基成份普通先分別配制成母液備用。(3)平板劃線法接種時(shí)常通用接種環(huán)劃線。第二區(qū)域只有第一條線無(wú)菌落，而其它劃線第37頁(yè)都有菌落，很可能是因?yàn)榻臃N環(huán)在灼燒后未冷卻，第一次劃線時(shí)將菌種燙死，而后接種環(huán)冷卻，能正常劃線，也可能是第一次劃線時(shí)劃線未從第一區(qū)域末端開(kāi)始，使接種環(huán)上無(wú)菌種。(4)題中試驗(yàn)為取得菌種培養(yǎng)液過(guò)濾離心后取上清液，加入蛋白酶處理后，測(cè)得其對(duì)苯磺隆降解率。由此可判定試驗(yàn)假設(shè)是目菌株經(jīng)過(guò)分泌某種蛋白質(zhì)來(lái)降解苯磺隆。但因?yàn)槿狈瞻讓?duì)照，不能比較蛋白酶處理是否降低苯磺隆降解率，該試驗(yàn)不能得出對(duì)應(yīng)結(jié)論。第38頁(yè)確保只有能利用苯磺隆微生物

[答案](1)氮源和無(wú)機(jī)鹽能正常生長(zhǎng)和繁殖(2)細(xì)胞分裂素母液①接種環(huán)灼燒后未冷卻；②劃線未從第一區(qū)域

(3)接種環(huán)末端開(kāi)始不合理，缺乏空

(4)目標(biāo)菌株能分泌降解苯磺隆蛋白質(zhì)白對(duì)照第39頁(yè)

(1)每次劃線前和劃線后都要進(jìn)行接種環(huán)灼燒滅菌，所以需要灼燒接種環(huán)6次。其中第一次灼燒是為了預(yù)防雜菌污染；每次劃線前灼燒是為了殺死殘留菌種，確保每次劃線菌種來(lái)自上次劃線末端；最終一次灼燒是為了預(yù)防接種微生物擴(kuò)散，造成新污染。

(2)下一次劃線菌種起源是上一次劃線最末端，所以前幾次劃線都是上一次尾和下一次首相連，不過(guò)第五次劃線不與第一次劃線相連。(3)在第五次劃線上菌落往往是由一個(gè)細(xì)菌繁殖形成。(4)實(shí)際上菌落數(shù)都要小于細(xì)菌數(shù)，因?yàn)橛芯涫?個(gè)或多個(gè)細(xì)菌形成。第40頁(yè)【考點(diǎn)練透】

2．某小組同學(xué)為了調(diào)查湖水中細(xì)菌污染情況而進(jìn)行了實(shí)驗(yàn)，試驗(yàn)包含制備培養(yǎng)基、滅菌、接種、培養(yǎng)及菌落觀察與計(jì)數(shù)，請(qǐng)回答與此試驗(yàn)相關(guān)問(wèn)題。(導(dǎo)學(xué)號(hào)57130089) (1)培養(yǎng)基中含有蛋白胨、淀粉分別為細(xì)菌培養(yǎng)提供了________和________。除此之外，培養(yǎng)基還必須含有基本成分是________和________。(2)對(duì)培養(yǎng)基進(jìn)行滅菌，應(yīng)該采取方法是_____________。第41頁(yè)

(3)為了盡快觀察到細(xì)菌培養(yǎng)試驗(yàn)結(jié)果，應(yīng)將接種了湖水樣品平板置于________中培養(yǎng)，培養(yǎng)溫度設(shè)定在37℃，要使該試驗(yàn)所得結(jié)果可靠，還應(yīng)該同時(shí)在另一平板上接種________作為對(duì)照進(jìn)行試驗(yàn)。

(4)培養(yǎng)20小時(shí)后，觀察到平板上有各種形態(tài)和顏色不一樣菌落，這說(shuō)明湖水樣品中有________種細(xì)菌，普通說(shuō)來(lái)，菌落總數(shù)越多，湖水遭受細(xì)菌污染程度越________。 (5)假如提升培養(yǎng)基中NaCl濃度，能夠用于篩選耐________細(xì)菌，這種培養(yǎng)基被稱為_(kāi)____________________________________________________________。第42頁(yè)

解析：(1)培養(yǎng)基基本成份：水、無(wú)機(jī)鹽、碳源、氮源。(2)對(duì)培養(yǎng)基滅菌常采取方法是高壓蒸汽滅菌。(3)應(yīng)將接種了湖水樣品平板置于37℃恒溫培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。要使該試驗(yàn)所得結(jié)果可靠，還應(yīng)該同時(shí)在另一平板上接種無(wú)菌水作為對(duì)照進(jìn)行試驗(yàn)。(4)菌落總數(shù)越多，說(shuō)明湖水樣品中有各種細(xì)菌，污染程度越重。(5)提升培養(yǎng)基中NaCl濃度，可用于篩選耐鹽細(xì)菌，這種培養(yǎng)基被稱為選擇培養(yǎng)基。答案：(1)氮源碳源無(wú)機(jī)鹽水(2)高壓蒸汽滅菌(3)恒溫培養(yǎng)箱無(wú)菌水(4)多高(5)鹽(或NaCl)選擇培養(yǎng)基第43頁(yè)項(xiàng)目分離分解尿素細(xì)菌分離分解纖維素微生物原理提供有利于目標(biāo)菌株生長(zhǎng)條件(如營(yíng)養(yǎng)、溫度、pH等)，同時(shí)抑制其它微生物生長(zhǎng)，常用選擇培養(yǎng)基篩選剛果紅能夠與纖維素形成紅色復(fù)合物，當(dāng)纖維素被纖維素酶分解后，紅色復(fù)合物無(wú)法形成，出現(xiàn)以纖維素分解菌為中心透明圈，能夠經(jīng)過(guò)是否產(chǎn)生透明圈來(lái)篩選纖維素分解菌考點(diǎn)三微生物分離與計(jì)數(shù)

1．分離土壤中分解尿素細(xì)菌與分離分解纖維素微生物比較：第44頁(yè)項(xiàng)目分離分解尿素細(xì)菌分離分解纖維素微生物過(guò)程土壤取樣→樣品稀釋→培養(yǎng)與觀察土壤取樣→選擇培養(yǎng)→梯度稀釋→將樣品涂布于含剛果紅(CR)判別纖維素分解菌培養(yǎng)基上→挑選產(chǎn)生透明圈菌落→發(fā)酵培養(yǎng)判定酚紅指示劑(變紅)剛果紅(產(chǎn)生透明圈)

選擇培養(yǎng)基固體培養(yǎng)基，尿素為唯一氮源液體培養(yǎng)基，纖維素為唯一碳源 判別培養(yǎng)基液體固體（續(xù)表）第45頁(yè)2.統(tǒng)計(jì)菌落數(shù)目標(biāo)方法：(1)稀釋涂布平板法：

①原理：當(dāng)樣品稀釋濃度足夠高時(shí)，培養(yǎng)基表面生長(zhǎng)一個(gè)菌落，起源于樣品稀釋液中一個(gè)活菌。經(jīng)過(guò)統(tǒng)計(jì)平板上菌落數(shù)，就能推測(cè)出樣品中大約含有多少活菌。②操作：a．設(shè)置重復(fù)組，增強(qiáng)試驗(yàn)說(shuō)服力與準(zhǔn)確性。b．為了確保結(jié)果準(zhǔn)確，普通選擇菌落數(shù)在30～300平板進(jìn)行計(jì)數(shù)。第46頁(yè)

③計(jì)算公式：每克樣品中菌株數(shù)＝(C/V)×M，其中C代表某一稀釋度下平板上生長(zhǎng)平均菌落數(shù)，V代表涂布平板時(shí)所用稀釋液體積(mL)，M代表稀釋倍數(shù)。(2)顯微鏡直接計(jì)數(shù)法：①原理：利用特定細(xì)菌計(jì)數(shù)板或血細(xì)胞計(jì)數(shù)板，在顯微鏡下計(jì)算一定容積樣品中微生物數(shù)量。②方法：用計(jì)數(shù)板計(jì)數(shù)。③缺點(diǎn)：不能區(qū)分死菌與活菌。第47頁(yè)◎高考探究◎考向微生物分離與純化

[典例](年新課標(biāo)卷Ⅲ)某同學(xué)用新鮮泡菜濾液為實(shí)驗(yàn)材料純化乳酸菌。分離純化所用固體培養(yǎng)基中因含有碳酸鈣而不透明，乳酸菌產(chǎn)生乳酸能溶解培養(yǎng)基中碳酸鈣。回答以下問(wèn)題： (1)分離純化乳酸菌時(shí)，首先需要用________________對(duì)泡菜濾液進(jìn)行梯度稀釋?zhuān)M(jìn)行梯度稀釋理由是____________________________________________________________________。 (2)推測(cè)在分離純化所用培養(yǎng)基中加入碳酸鈣作用有________________和________________。分離純化時(shí)應(yīng)挑選出________________菌落作為候選菌。第48頁(yè)

(3)乳酸菌在－20℃長(zhǎng)久保留時(shí)，菌液中常需要加入一定量________________(填“蒸餾水”“甘油”或“碳酸鈣”)。

[解析](1)分離純化乳酸菌時(shí)，首先需要用無(wú)菌水對(duì)泡菜濾液進(jìn)行梯度稀釋?zhuān)贿M(jìn)行梯度稀釋理由是在稀釋度足夠高菌液里，聚集在一起乳酸菌將被分散成單個(gè)細(xì)胞，從而能在培養(yǎng)基表面形成單個(gè)菌落。

(2)在分離純化所用培養(yǎng)基中加入碳酸鈣作用有中和乳酸菌代謝過(guò)程中產(chǎn)生乳酸和利于乳酸菌識(shí)別和分離；分離純化時(shí)應(yīng)挑選出在平板上有溶鈣圈菌落作為候選菌。

(3)乳酸菌在－20℃長(zhǎng)久保留時(shí)，菌液中常需要加入一定量甘油。第49頁(yè)[答案](1)無(wú)菌水在稀釋度足夠高菌液里，聚集在一起乳酸菌將被分散成單個(gè)細(xì)胞，從而能在培養(yǎng)基表面形成單個(gè)菌落(2)中和乳酸菌代謝過(guò)程中產(chǎn)生乳酸利于乳酸菌識(shí)別和分離在平板上有溶鈣圈(3)甘油第50頁(yè)【考點(diǎn)練透】3．(年新課標(biāo)卷Ⅰ)植物秸稈中纖維素可被一些微生物分解。回答以下問(wèn)題：

(1)分解秸稈中纖維素微生物能分泌纖維素酶，該酶是由3種組分組成復(fù)合酶，其中葡萄糖苷酶可將______________分解成____________。

(2)在含纖維素培養(yǎng)基中加入剛果紅(CR)時(shí)，CR可與纖維素形成________色復(fù)合物。用含有CR該種培養(yǎng)基培養(yǎng)纖維素分解菌時(shí)，培養(yǎng)基上會(huì)出現(xiàn)以該菌菌落為中心____________。第51頁(yè)培養(yǎng)基酵母膏無(wú)機(jī)鹽淀粉纖維素粉瓊脂CR溶液水甲＋＋＋＋－＋＋乙＋＋＋－＋＋＋

(3)為從富含纖維素土壤中分離取得纖維素分解菌單菌落，某同學(xué)設(shè)計(jì)了甲、乙兩種培養(yǎng)基(成份見(jiàn)下表)：注：“＋”表示有，“－”表示無(wú)。

據(jù)表判斷，培養(yǎng)基甲________(填“能”或“不能”)用于分離和判別纖維素分解菌，原因是_____________________________________________________；培養(yǎng)基乙________(填“能”或“不能”)用于分離和判別纖維素分解菌，原因是_____________________。第52頁(yè)纖維素――――纖維二糖―――――葡萄糖→→

解析：(1)纖維素是一個(gè)以葡萄糖為單體形成高分子化合物。纖維素能被土壤中一些微生物分解利用，以下列圖：纖維素酶葡萄糖苷酶

(2)剛果紅與纖維素形成紅色復(fù)合物，當(dāng)纖維素被纖維素酶分解后，紅色復(fù)合物無(wú)法形成，出現(xiàn)以纖維素分解菌為中心透明圈，我們能夠經(jīng)過(guò)是否產(chǎn)生透明圈來(lái)篩選纖維素分解菌。(3)生物適應(yīng)一定環(huán)境，環(huán)境對(duì)生物含有選擇作用，只有在纖維素含量豐富環(huán)境中纖維素分解菌才會(huì)發(fā)揮作用。纖維素分解菌選擇培養(yǎng)基屬于液體培養(yǎng)基，纖維素分解菌判別培養(yǎng)基屬于固體培養(yǎng)基，要分離和判別纖維素分解菌，需要以纖維素為唯一碳源培養(yǎng)基，培養(yǎng)基乙不含有選擇作用。第53頁(yè)答案：(1)纖維二糖葡萄糖(2)紅透明圈(3)不能纖維素分解菌選擇培養(yǎng)基屬于液體培養(yǎng)基，纖維不能培養(yǎng)基中沒(méi)有纖素分解菌判別培養(yǎng)基屬于固體培養(yǎng)基維素粉第54頁(yè)1．乙醇等“綠色能源”開(kāi)發(fā)備受世界關(guān)注，利用玉米秸稈生產(chǎn)燃料酒精大致流程為：(導(dǎo)學(xué)號(hào)57130090)

(1)玉米秸稈預(yù)處理后，應(yīng)該選取________酶和________酶形成纖維二糖，再使用________酶使之轉(zhuǎn)化為發(fā)酵所需葡萄糖。第55頁(yè)(2)從以下哪些微生物中能夠提取上述酶？()(多項(xiàng)選擇)

A．釀制果醋醋酸菌 B．生長(zhǎng)在腐木上霉菌 C．制作酸奶乳酸菌 D．反芻動(dòng)物瘤胃中生存一些微生物 (3)若從土壤中分離產(chǎn)生這種酶微生物，所需要培養(yǎng)基為_(kāi)_______(按功效分)，培養(yǎng)基中碳源為_(kāi)_______，微生物在純化培養(yǎng)時(shí)慣用方法是________和________。 (4)發(fā)酵階段需要菌種是________，生產(chǎn)酒精時(shí)要控制必要條件是________。第56頁(yè)CX葡萄糖苷答案：(1)C1(2)BD(3)選擇培養(yǎng)基纖維素平板劃線法稀釋涂布平板法(4)酵母菌無(wú)氧(密封、密閉)第57頁(yè)2．下列圖是泡菜制作及測(cè)定亞硝酸鹽含量試驗(yàn)流程示意圖，請(qǐng)據(jù)圖分析回答以下問(wèn)題。

(1)制作泡菜宜選取新鮮蔬菜或其它原料，原因是___________________________________________________________。 (2)制備泡菜鹽水中，清水與鹽質(zhì)量比為_(kāi)_______，鹽水煮沸目標(biāo)是為了殺滅雜菌，冷卻后再使用目標(biāo)是為了保證________等微生物生命活動(dòng)不受影響。第58頁(yè)

(3)泡菜制作方法不妥，很輕易造成泡菜變質(zhì)，甚至發(fā)霉變味，發(fā)霉主要與________相關(guān)。 (4)測(cè)定亞硝酸鹽含量方法是______