新生化顆粒中的阿魏酸含量測(cè)定

目錄摘要 IAbstract II前言 1第一章局部原料藥材研究概況 21.1 當(dāng)歸 21.2.1 化學(xué)成分 21.2.2 藥理作用 21.2 川芎 31.2.1 化學(xué)成分 31.2.2 藥理作用 41.3 紅花 51.3.1 化學(xué)成分 51.3.2 藥理作用 51.4 益母草 6第二章阿魏酸含量測(cè)定方法 72.1 儀器及材料 72.2 供試液制備的提取條件 72.3 系統(tǒng)適應(yīng)性 82.3.1 儀器與試藥 82.3.2 波長(zhǎng)確定 82.3.3 選擇色譜柱 82.3.4 選擇流動(dòng)相及比例 82.4 空白試驗(yàn) 82.5 線性關(guān)系考查 102.6 精密度試驗(yàn) 102.7 重復(fù)性試驗(yàn) 112.8 穩(wěn)定性試驗(yàn) 112.9 回收率試驗(yàn) 122.10 含量測(cè)定計(jì)算方法 13第三章結(jié)果與討論 143.1 波長(zhǎng)確定 143.2 色譜柱的選擇 143.3 流動(dòng)相的選擇 14參考文獻(xiàn) 15致謝 16新生化顆粒中阿魏酸的含量測(cè)定摘要目的：建立高效液相色譜法測(cè)定新生化顆粒中阿魏酸的含量。方法：采用DiamonsilHPLCC18(5um,4.0×250mm,迪馬公司)色譜柱，經(jīng)對(duì)本品在190nm-400nm波長(zhǎng)范圍內(nèi)檢測(cè)，316nm波長(zhǎng)處阿魏酸吸收峰靈敏度較高，其他雜質(zhì)峰無干擾，別離最理想，應(yīng)選316nm，乙腈-0.1%磷酸溶液〔11：89〕為流動(dòng)相，流速1.0mL/min，理論塔板數(shù)3000以上，進(jìn)樣量10。結(jié)果：阿魏酸進(jìn)樣量在0.009176~0.165168范圍內(nèi)，濃度與峰面積的線性關(guān)系良好,r=0.9999，阿魏酸平均回收率為99.20%，RSD=1.15%。結(jié)論：該方法準(zhǔn)確、專屬性強(qiáng)、重現(xiàn)性好，可用作為新生化顆粒質(zhì)量控制的有效方法?！娟P(guān)鍵詞】：新生化顆粒，阿魏酸，含量測(cè)定,高效液相色譜法。DeterminationofferulicacidinXinshenghuaparticlesAbstractObjective:ToestablishaHPLCmethodforthedeterminationantitussiveexpectorantferulicacidgranulescontent.Methods:DiamonsilHPLCC18(5um,4.0×250mm,DimaCorporation)column,asforthegoodsat190nm-400nmwavelengthrangedetection,316nmwavelengthabsorptionpeakofephedrinehydrochloridehighersensitivity,andotherimpuritiespeakswithoutinterference,thebestseparationwaschosen210nm±1nm,acetonitrile-KH2PO4(0.02mol/L)(containing0.2%triethylamine,adjustedwithphosphoricacidPHto2.7)(5:100)asthemobilephase,flowrate1ml/min,theoreticalplatenumbermorethan5000.Results:EphedrineHydrochloride0.009176ug-0.165168ugatagoodrelationshipbetweenthelinear,r=0.9999,averagerecoveryofferulicacid,99.20%,RSD=1.15%.Conclusion:Thismethodisaccurate,specific,reproducibleandcanbeusedasmaterialsinthedeterminationofferulicacid.【Thekeyword】:KEYWORDS:Xinshenghuaparticl;Ferulicacid;Contentdetermination;HPLC前言新生化顆粒是由當(dāng)歸、川芎、桃仁、甘草〔炙〕、干姜〔炭〕、益母草、紅花等幾位藥所組成。經(jīng)多年的臨床實(shí)踐證明，對(duì)治療產(chǎn)后血虛，正氣缺乏，寒凝血瘀，留阻胞宮，致惡露不行，小腹疼痛。產(chǎn)后血虛，本當(dāng)培補(bǔ)，然瘀血不去，新血不生，治宜養(yǎng)血化瘀，使新血生，瘀血化，故名“生化”。本文主要對(duì)其所含成份中的阿魏酸進(jìn)行含量測(cè)定，為制訂該制劑的質(zhì)量控制指標(biāo)提供有力依據(jù)。阿魏酸(ferulicacid)，化學(xué)名為4-羥基-3一甲氧基苯丙烯酸，是來自于多種植物的一種酚酸，在細(xì)胞壁中與多糖和蛋白質(zhì)結(jié)合成為細(xì)胞壁的骨架。研究說明阿魏酸是阿魏、川I芎、當(dāng)歸、升麻、木賊等多種中藥的有效成分之～?，F(xiàn)已發(fā)現(xiàn)，阿魏酸至少具有以下功能：抗血小板凝集和血栓；去除亞硝酸鹽、氧自由基、過氧化亞硝基；抗菌消炎；抗腫瘤；抗突變；增加免疫功能；增強(qiáng)人體精子活力和運(yùn)動(dòng)性等。阿魏酸的抗菌消炎、抗血小板凝集和血栓等，與本制劑治療產(chǎn)后血虛，正氣缺乏，寒凝血瘀，留阻胞宮，致惡露不行，小腹疼痛有密切關(guān)系。該實(shí)驗(yàn)方法、思路等均較為普遍，但也是目前中藥廠中最為常用的，由于時(shí)間以及自身知識(shí)水平有限，本課題也僅僅是對(duì)該研究方法進(jìn)行了表皮上的探討，其深層的科學(xué)意義還需要更深入的研究。局部原料藥材研究概況當(dāng)歸當(dāng)歸［Angelicasinensis(Oliv.)Diels］為傘形科植物當(dāng)歸的枯燥根；主產(chǎn)于甘肅岷縣、武都、漳縣、成縣、文縣等地；味甘平，性溫；功能補(bǔ)血和血，調(diào)經(jīng)止痛、潤(rùn)腸通便[1]?；瘜W(xué)成分當(dāng)歸的化學(xué)成分主要有多糖類、苯酞類、香豆素類、黃酮類、揮發(fā)油類化合物及其他成分[2]。1〕苯酞類化合物苯酞類化合物在傘形科植物揮發(fā)油中分布廣泛，目前當(dāng)歸屬中檢測(cè)有25種苯酞類化合物，主要有藁本內(nèi)酯(ligustilide)、正丁烯基苯肽(Z-butylidenephthalide)、丁基苯酞(butylphthalide)以及1998年通過HPLC-EPS-MS技術(shù)分析到的新蛇床內(nèi)酯(neocnidilide)等，其中藁本內(nèi)酯占此類化合物總量的60%以上[3]。2〕香豆素類香豆素類的主要成分為簡(jiǎn)單香豆素、呋喃香豆素、吡喃香豆素和雙香豆素類。3〕有機(jī)酸類化合物當(dāng)歸中主要的有機(jī)酸類化合物是，阿魏酸鈉(sodiumferulate，SF，當(dāng)歸素)。阿魏酸鈉有去除自由基、減輕膜脂質(zhì)過氧化、提高抗氧化酶活性的作用。4〕黃酮類化合物從當(dāng)歸中別離出3個(gè)查爾酮衍生物；別離出的黃酮苷有木犀草素-7-O-β-D葡萄糖苷(luteolin-7-O-β-D-gluco-side)以及木犀草素-7-O-蘆丁糖苷(luteolin-7-O-rutinoside)。5〕揮發(fā)油成分當(dāng)歸中揮發(fā)油成分非常豐富[4].6〕多糖類當(dāng)歸多糖的各種不同多糖成分的根本糖單位有D-葡萄糖(D-glucose)、D-半乳糖(D-galactose)、D-木糖(D-xy-lose)、L-阿拉伯糖(L-arabinose)、甘露糖(mannose)、鼠李糖(rhamnose)、巖藻糖(fucose)以及葡萄糖醛酸(glucuronicacid)和半乳糖醛酸(galacturonicacid)[5]。7〕氨基酸當(dāng)歸含有豐富的氨基酸。文獻(xiàn)報(bào)道，甘肅岷縣當(dāng)歸中檢出19種氨基酸，其中精氨酸的含量最大，谷氨酸次之，其中有賴氨酸、吉氨酸、色氨酸、蛋氨酸等8種為人體所必需但又不能自行合成的氨基酸[6]。8〕微量元素、維生素及其他成分有文獻(xiàn)報(bào)道，當(dāng)歸含鉀、鈉、鈣、鎂、鋁、硅、磷、鐵、錳、鎳、銅、鋅、砷、鉬、錫、硼、錸、鋇、硒、鐳、鈦、釩、鉻等23種微量元素，其中16種是人體所必需的[7]。藥理作用1〕苯酞類研究發(fā)現(xiàn)［8］，蒿本內(nèi)酯可以通過減輕氧化應(yīng)激和抗細(xì)胞凋亡，從而保護(hù)缺血再灌注的腦損傷。2〕香豆素類當(dāng)歸的提取物進(jìn)行NO去除力篩選，發(fā)現(xiàn)6種香豆素類化合物具有潛在的抑制NO生成作用。3〕阿魏酸鈉胡小玲等［9］通過實(shí)驗(yàn)研究顯示SF對(duì)CCl4肝損傷有保護(hù)作用。另外劉保新等［10］通過實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)當(dāng)歸、阿魏酸鈉對(duì)大鼠骨性關(guān)節(jié)炎(OA)軟骨退變有明顯的修復(fù)作用。楊艷秋等［11］發(fā)現(xiàn)阿魏酸鈉能干預(yù)老年冠狀動(dòng)脈粥樣硬化性心臟病心絞痛患者血液抗氧化能力和保護(hù)血內(nèi)皮細(xì)胞功能。4〕黃酮類黃酮類化合物可以通過抗氧自由基，保護(hù)缺血再灌注損傷。5〕揮發(fā)油劉紹光等［12］發(fā)現(xiàn)揮發(fā)油可以降低狗、貓、家兔的血壓，隨著劑量的增加降壓作用愈加明顯。周遠(yuǎn)鵬等［13］研究顯示當(dāng)歸揮發(fā)油可明顯降低高血壓犬的血壓(177/130mmHg降至155/110mmHg)，對(duì)心率未見明顯影響。6〕多糖卿軼等［14］研究發(fā)現(xiàn)當(dāng)歸多糖對(duì)大鼠肝性腦病有預(yù)防作用。徐露等［15］通過實(shí)驗(yàn)研究顯示當(dāng)歸多糖有很好的抗衰老作用。另外當(dāng)歸多糖能提高造血功能，且能緩解結(jié)腸免疫損傷［16-17］。當(dāng)歸多糖還可以對(duì)輻射損傷的染色體畸變、卵巢損傷、胸腺繼發(fā)性萎縮和造血功能障礙有恢復(fù)作用［18-19］。川芎川芎[LigusticumchuanxiongHort.]為傘形科藁本屬植物川芎的根莖；主產(chǎn)于四川、江西、湖北、陜西等省區(qū)；其性溫，味辛，微苦，具有活血行氣祛風(fēng)止痛之成效[1]。化學(xué)成分川芎含有揮發(fā)油、生物堿、酚性物質(zhì)、有機(jī)酸、苯酞內(nèi)酯及其他等成分?！?〕揮發(fā)油對(duì)不同產(chǎn)地和品種的川芎水蒸氣蒸餾所得到的揮發(fā)油進(jìn)行了分析，其中主要成分為藁本內(nèi)酯(1igustilide)、蛇床內(nèi)酯(cnidilide)、新蛇床內(nèi)酯(neocnidilide)、洋川芎內(nèi)酯(senkyunolide)、3-丁基苯酞、3-亞丁基苯酞[20]?！?〕生物堿從川芎中別離得到川芎嗪(chuanxiongzine)、黑麥草堿(pelolyfine)、L-異亮氨酸-L-纈氨酸酐、1-β-丙烯酸乙酯-7-醛基-β-咔啉、1-乙?；?β-咔啉、L-纈氨酰-L-纈氨酸酐、三甲胺、膽堿、尿嘧啶、腺嘌呤和腺苷?！?〕酚類及有機(jī)酸類北京制藥工業(yè)研究所的研究人員等[21]從川芎酚性部位分得阿魏酸(ferulicacid)、瑟丹酸、大黃酚。(4)苯酞內(nèi)酯類從川芎中分得藁本內(nèi)酯、新川芎內(nèi)酯、洋川芎內(nèi)酯、3-丁基苯酞、3-亞丁基苯酞、4-羥基-3-丁基苯酞、丁基-3-羥基4，5-二氫苯酞、4，7-二羥基-3-丁基苯酞。藥理作用〔1〕對(duì)心肌的作用川芎嗪能使心肌收縮力增強(qiáng),對(duì)心肌缺血損傷具有較好的保護(hù)作用。濮哲銘等[22]發(fā)現(xiàn)川芎嗪能通過阻斷內(nèi)皮素受體而防止心肌缺血的發(fā)生?！?〕有抗氧化、去除自由基以及細(xì)胞保護(hù)作用阿魏酸具有很強(qiáng)的抗氧化活性，對(duì)過氧化氫、超氧自由基、羥自由基、過氧化亞硝基都有強(qiáng)烈的去除作用。阿魏酸不僅能去除自由基，而且能調(diào)節(jié)人體生理機(jī)能，抑制產(chǎn)生自由基的酶，促進(jìn)去除自由基的酶的產(chǎn)生。阿魏酸能大大增加谷胱甘肽轉(zhuǎn)硫酶和醌復(fù)原酶的活性，抑制酪氨酸酶活性。阿魏酸能保護(hù)體內(nèi)產(chǎn)生的過氧化物，特別是羥自由基、一氧化氮造成的細(xì)胞損傷?！?〕對(duì)血液及心血管系統(tǒng)作用阿魏酸鈉能明顯抑制血小板聚集、抑制羥色胺、血栓素(TXA2)樣物質(zhì)的釋放，選擇性抑制TXA2合成酶活性，使前列環(huán)素PGI2／TXA2比率升高[23]。其抑制血栓素的機(jī)制可能為：一足選擇性抑制血栓素合成酶；二是拮抗血栓索的作用；三是通過抑制磷脂酶A2(PLA2)阻止花生四烯酸游離，從而阻止TXA2，的牛成[23]。紅花紅花為菊科植物紅花CarthamustinctoriusL.的枯燥花，主產(chǎn)于河北、河南、浙江、四川等省區(qū)；其性溫，味辛；活血通經(jīng)，散瘀止痛[1]?；瘜W(xué)成分紅花的化學(xué)成分比擬復(fù)雜，其中富含黃色素、紅色素、黃酮類、聚乙炔類、吲哚類、甾族類、木質(zhì)素類、脂肪酸、揮發(fā)油、烷基二醇類、有機(jī)酸類和甾醇類等化合物及紅花中的主要色素成分二百五十多種[24]。藥理作用紅花具有擴(kuò)張冠脈、降血壓、耐缺氧、活血化淤和抗炎鎮(zhèn)痛等多種藥理學(xué)成效?！?〕與成效相關(guān)的藥理作用：1〕對(duì)實(shí)驗(yàn)性心肌缺血的作用紅花對(duì)實(shí)驗(yàn)性心肌缺血、心肌堵塞或心律失常等動(dòng)物模型均有不同程度的對(duì)抗作用。紅花可使心肌缺血程度減輕，范圍縮小，心率減慢，尤其對(duì)堵塞區(qū)的邊緣區(qū)有明顯的保護(hù)作用[25]。2〕對(duì)心臟的作用紅花有輕度興奮心臟，降低冠狀阻力，增加冠脈流量和心肌營(yíng)養(yǎng)性血流量的作用。3〕抗氧化作用紅花水提液可去除羥自由基，抑制小鼠肝勻漿脂質(zhì)過氧化；羥基紅花黃色素A〔HSYA〕可去除羥自由基、抑制脂質(zhì)過氧化反響，保護(hù)細(xì)胞膜；在多種血淤病癥中，自由基反響對(duì)加劇血液循環(huán)障礙起了重要的作用，而紅花有效成分HSYA的抗氧化效應(yīng)對(duì)其活血化淤的作用具一定的奉獻(xiàn)。4〕抗炎作用紅花黃色素對(duì)甲醛性大鼠足腫脹、對(duì)組胺引起的大鼠皮膚毛細(xì)血管的通透量增加及對(duì)大鼠棉球肉芽腫形成均有明顯的抑制作用。其抗炎的機(jī)理可能是通過降低毛細(xì)血管通透性，減少炎性滲出，抑制炎癥過程病理變化的肉芽增生[26]。阿魏酸含量測(cè)定方法當(dāng)歸、川芎為本方中參加的原料藥，其所含阿魏酸在本方中最為重要。儀器及材料高效液相色譜儀：SPD-10AVP,SH-IMADZU;CBM-20A(Z中央控制器)；SIL-20A；Lcsolution色譜數(shù)據(jù)工作站；250，超聲波清洗器〔北京醫(yī)療設(shè)備二廠〕，實(shí)驗(yàn)使用甲醇、乙腈均為色譜純，磷酸為分析純，水為重蒸餾水，其他試劑均為分析純。阿魏酸酸對(duì)照品購自中國(guó)藥品生物制品檢定所〔批號(hào)為110773-200611〕。新生化顆粒來自不同廠家的13批樣品。供試液制備的提取條件對(duì)照品溶液的制備:精密稱取阿魏酸酸對(duì)照品適量,加70%甲醇制成每1ml含9的溶液，即得。樣品溶液的制備：取本品研細(xì)，稱取3g,精密稱定，于具塞錐形瓶中，精密加甲醇20ml，稱定重量，超聲處理1小時(shí)，取出，放冷，用甲醇補(bǔ)足減失重量，搖勻，用〔0.45μm〕濾膜濾過，取續(xù)濾液，即得。系統(tǒng)適應(yīng)性儀器與試藥高效液相色譜儀：SPD-10AVP,SH-IMADZU;CBM-20A(Z中央控制器)；SIL-20A；Lcsolution色譜數(shù)據(jù)工作站；250，超聲波清洗器〔北京醫(yī)療設(shè)備二廠〕，實(shí)驗(yàn)使用甲醇、乙腈均為色譜純，磷酸為分析純，水為重蒸餾水，其他試劑均為分析純。阿魏酸酸對(duì)照品購自中國(guó)藥品生物制品檢定所〔批號(hào)為110773-200611〕。新生化顆粒來自全國(guó)5個(gè)廠家，13批樣品。波長(zhǎng)確定從PDA圖中可以看出對(duì)照品在324nm處有最大吸收。但紫外光譜掃描最大吸收為318nm，結(jié)合《中國(guó)藥典》2005版一部當(dāng)歸含量測(cè)定項(xiàng)下選用的測(cè)定316nm波長(zhǎng)，應(yīng)選取316nm作為測(cè)定波長(zhǎng)。選擇色譜柱1〕Hypersi1ODS(5um,4.0×250mm,Agilent)色譜柱2〕Hypersi1ODS2(5um,5×200mm,大連依利特)色譜柱3〕Diamonsi1HPLCC18(5um,4.0×250mm,迪馬公司)色譜選擇流動(dòng)相及比例1〕乙腈-0.085%磷酸溶液〔17：83〕2〕乙腈-0.085%磷酸溶液〔15：85〕3〕乙腈-0.1%磷酸溶液〔11：89〕結(jié)果說明在以下色譜條件下：用Diamonsi1HPLCC18(5um,4.0×250mm,迪馬公司)色譜柱，乙腈-0.1%磷酸溶液〔11：89〕為流動(dòng)相，流速1ml/min,柱溫35℃，檢測(cè)波長(zhǎng)316nm，別離好，理論板數(shù)不低于3000，進(jìn)樣量10。空白試驗(yàn)根據(jù)本品處方和工藝，制備缺阿魏酸的空白對(duì)照樣品，按質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)的提取條件制備空白對(duì)照液，注入液相色譜儀器，記錄色譜圖。測(cè)定結(jié)果說明空白試驗(yàn)對(duì)阿魏酸色譜分析無干擾。圖2.1阿魏酸對(duì)照品色圖2.2阿魏酸供試品色譜圖圖2.3陰性對(duì)照色譜圖線性關(guān)系考查精密稱取阿魏酸酸對(duì)照品〔110773-200611〕適量，加70%甲醇制成每1ml含0.009176mg/ml的溶液。精密吸取上述溶液1ul、5ul、10ul、14ul、18ul按順序進(jìn)樣，按上述色譜條件測(cè)定峰面積，以峰面積為縱坐標(biāo)，阿魏酸濃度為橫坐標(biāo)繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，計(jì)算回歸方程，見圖2.1。Y=3853638.636X-3047.485961r=0.9999結(jié)果說明阿魏酸進(jìn)樣量在0.009176～0.165168范圍內(nèi)，濃度與峰面積的線性關(guān)系良好。表2.3阿魏酸線性關(guān)系考察進(jìn)樣量含沒食子酸的量〔g〕峰面積1l0.009176323365l0.0458817568910l0.0917634816314l0.12846449043218l0.165168635470圖2.4線性圖峰面積〔mAu.s〕進(jìn)樣量〔ug〕精密度試驗(yàn)精密吸取同一對(duì)照品溶液10，重復(fù)進(jìn)樣6次，阿魏酸峰面積RSD為1.01%，精密度良好。表2.4阿魏酸精密度實(shí)驗(yàn)結(jié)果實(shí)驗(yàn)次數(shù)峰面積RSD〔%〕13685541.0123735623369065436590653749686374413重復(fù)性試驗(yàn)取漢方制藥新生化顆粒，按正文測(cè)定方法平行制備6份供試品溶液，進(jìn)行含量測(cè)定，分別進(jìn)樣，6份樣品中阿魏酸含量測(cè)定平均值為0.0486%；RSD為0.97%。此方法重復(fù)性好，數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)如表2.5：表2.5重復(fù)性試驗(yàn)統(tǒng)計(jì)表次數(shù)稱樣量〔g〕峰面積含量〔mg/g〕RSD〔%〕13.00642790510.04880.9723.24532990160.048533.16772941380.048843048752.96712710460.048163.06212824340.0485平均0.0486穩(wěn)定性試驗(yàn)取本品，按正文測(cè)定方法制備成供試品溶液，精密吸取供試品溶液10，每隔數(shù)小時(shí)進(jìn)樣一次，阿魏酸峰面積RSD為2.66%，說明樣品在12小時(shí)內(nèi)較穩(wěn)定。數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)如表2.6：表2.6穩(wěn)定性試驗(yàn)結(jié)果時(shí)間〔小時(shí)〕峰面積RSD〔%〕03713202.6613655592364410437212583732481038088612393369回收率試驗(yàn)用加樣回收法，精密稱取含量〔含量為〔0.0486mg/g〕樣品，各6份，分別精密參加一定量的阿魏酸對(duì)照品溶液，按樣品溶液的制備方法處理，在同樣色譜條件下測(cè)定。此方法回收率好。數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)如表2.7：表2.7回收率試驗(yàn)結(jié)果取樣量〔g〕阿魏酸的阿魏峰面積阿魏酸回收率〔%〕平均回收率〔%〕RSD〔%〕1.53422802160.148099.9399.201.151.54262814030.1486100.231.50022762710.145999.341.56212830710.1495100.131.49862742690.144898.011.49272731380.144297.59通過以上含量測(cè)定方法學(xué)考察的試驗(yàn)結(jié)果，質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)草案中阿魏酸含量測(cè)定方法的線性考察、精密度試驗(yàn)、穩(wěn)定性、重復(fù)性、加樣回收率良好，此方法可行。含量測(cè)定計(jì)算方法本測(cè)定法采用外標(biāo)一點(diǎn)法計(jì)算含量，計(jì)算公式如下：供試品溶液濃度計(jì)算：Cx=Cr×(Ax/Ar)〔1〕式中：Cr為對(duì)照品的濃度〔mg/ml〕。Ax為供試品溶液峰面積值〔mAU*S〕Ar為對(duì)照品溶液峰面積值〔mAU*S〕Cx為供試品濃度制劑含量計(jì)算：制劑含量〔mg/袋〕=(Cx×Vx×P)/Wx〔2〕式中：Cx為供試品濃度Vx為供試品溶液制備的總體積〔ml〕Wx為樣品稱量〔g〕P為平均裝量〔g〕合并〔1〕、〔2〕式，其計(jì)算公式為：制劑含量〔mg/袋〕=(Cr×Vx×P×Ax)/(Wx×Ar)根據(jù)以上方法，測(cè)得三批樣品的含量數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)如表2.8：表2.8十三批樣品的含量統(tǒng)計(jì)表編號(hào)批號(hào)規(guī)格含量〔mg/袋〕1200909046mg/袋0.24392200909056mg/袋0.29903200909066mg/袋0.31184200909076mg/袋0.36655200909086mg/袋0.75506200909096mg/袋0.85737200909106mg/袋0.28688200909116mg/袋0.37429200910016mg/袋0.315610200910026mg/袋0.508711200910036mg/袋0.199312200910046mg/袋0.462113200910056mg/袋0.4706平均0.4523從上表可看出，經(jīng)對(duì)十三批樣品的測(cè)定，說明本含量測(cè)定方法可靠，操作簡(jiǎn)便，符合高效液相色譜法《中國(guó)藥典》2005年一部附錄VID的規(guī)定。結(jié)果與討論本文主要探討采用高效液相色譜法測(cè)定新生化顆粒中阿魏酸的含量，從而摸索阿魏酸含量測(cè)定的方法，進(jìn)一步研究制訂其質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)。波長(zhǎng)確定高效液相色譜法在選擇檢測(cè)波長(zhǎng)時(shí)，經(jīng)高效液相色譜儀測(cè)定時(shí)，阿魏酸在324nm波長(zhǎng)處有最大的吸收。但紫外光譜掃描最大吸收為318nm，結(jié)合《中國(guó)藥典》2005版一部當(dāng)歸含量測(cè)定項(xiàng)下選用的測(cè)定316nm波長(zhǎng)，應(yīng)選取316nm作為測(cè)定波長(zhǎng)。色譜柱的選擇色譜柱的選擇上，〔1〕Hypersi1ODS(5um,4.0×250mm,Agilent)色譜柱；〔2〕Hypersi1ODS2(5um,5×200mm,大連依利特)色譜柱；〔3〕Diamonsi1HPLCC18(5um,4.0×250mm,迪馬公司)色譜柱；進(jìn)行了優(yōu)選，得出用〔3〕色譜柱。流動(dòng)相的選擇經(jīng)用中國(guó)藥典所記載流動(dòng)相進(jìn)行試驗(yàn)，得出用〔3〕流動(dòng)相。①乙腈-0.085%磷酸溶液〔17：83〕②乙腈-0.085%磷酸溶液〔15：85〕③乙腈-0.1%磷酸溶液〔11：89〕，流速1ml/min,柱溫35℃，檢測(cè)波長(zhǎng)316nm，別離好，理論板數(shù)3000以上。通過對(duì)十三批樣品進(jìn)行含量測(cè)定，因每袋鹽酸麻黃堿的標(biāo)示量為0.4523mg，13批樣品含量測(cè)定結(jié)果，參照《中國(guó)藥典》2005版一部當(dāng)歸藥材含量測(cè)定項(xiàng)下阿魏酸含量的限度，考慮到藥材來源的不同，提取、成型過程中的損失等，將含量限度以上述13批樣含量制定，其中13批樣品含量均在0.2430～0.8573mg/袋，含量最低為0.1993mg/袋，考慮13批樣品都列入合格范圍內(nèi)。故規(guī)定本品限度為：每袋含當(dāng)歸和川芎以阿魏酸計(jì)〔C10H10O4〕計(jì)，不得少于0.15mg。含量測(cè)定使用，且耐用性良好。實(shí)驗(yàn)結(jié)果說明，本設(shè)計(jì)方法合理可靠，可作為本品質(zhì)量控制的方法。參考文獻(xiàn)康廷國(guó)、閻玉凝、吳德康等.中藥鑒定學(xué)[M].北京.中國(guó)中醫(yī)藥出版社，2007.137-139.宋萍萍、孫明毅、徐增萊等.三種當(dāng)歸屬植物的化學(xué)成分研究［J］.中草藥，2007，38(6)：833-835.楊崇仁，陳江弢.當(dāng)歸屬植物的研究進(jìn)展［J］.天然產(chǎn)物研究與開發(fā)，2004，16(4)：359-365.宋立人.現(xiàn)代中藥學(xué)大辭典［M］.北京：人民衛(wèi)生出版社，2000：822.胡小平，李玉云，李先何.當(dāng)歸多糖的成分及藥理學(xué)研究新進(jìn)展［J］.中藥材，2004，27(1)：70-72.黃偉暉，宋純清.當(dāng)歸化學(xué)成分研究［J］.藥學(xué)學(xué)報(bào)，2003，38.王海燕，陳汝賢，許鴻章.當(dāng)歸化學(xué)成分研究［J］.中國(guó)中藥雜志，1998，23(3)：167-169.李明明，吳麗穎，趙彤，