(高清版)GBT 43778-2024 細(xì)胞培養(yǎng)液中苯乙烯、2-氯乙醇的測定 氣相色譜-質(zhì)譜（GC-MS）法

細(xì)胞培養(yǎng)液中苯乙烯、2-氯乙醇的測定氣相色譜-質(zhì)譜(GC-MS)法2024-03-15發(fā)布2024-03-15實(shí)施I本文件按照GB/T1.1—2020《標(biāo)準(zhǔn)化工作導(dǎo)則第1部分：標(biāo)準(zhǔn)化文件的結(jié)構(gòu)和起草規(guī)則》的規(guī)定起草。請注意本文件的某些內(nèi)容可能涉及專利。本文件的發(fā)布機(jī)構(gòu)不承擔(dān)識別專利的責(zé)任。本文件由全國生化檢測標(biāo)準(zhǔn)化技術(shù)委員會(SAC/TC387)提出并歸口。本文件起草單位：中國計(jì)量大學(xué)、煙臺開發(fā)區(qū)嘉量標(biāo)準(zhǔn)技術(shù)咨詢與研究中心、廣州潔特生物過濾股份有限公司、浙江經(jīng)貿(mào)職業(yè)技術(shù)學(xué)院、中國測試技術(shù)研究院生物所、中國計(jì)量科學(xué)研究院、上海市質(zhì)量監(jiān)督檢驗(yàn)技術(shù)研究院、甘肅省食品檢驗(yàn)研究院、杭州榮澤生物科技集團(tuán)有限公司、安徽中盛溯源生物科技有限公司。1細(xì)胞培養(yǎng)液中苯乙烯、2-氯乙醇的測定氣相色譜-質(zhì)譜(GC-MS)法本文件描述了氣相色譜-質(zhì)譜(GC-MS)法測定細(xì)胞培養(yǎng)液中游離的苯乙烯、2-氯乙醇的方法。本文件適用于細(xì)胞培養(yǎng)液中游離的苯乙烯、2-氯乙醇的檢測。2規(guī)范性引用文件下列文件中的內(nèi)容通過文中的規(guī)范性引用而構(gòu)成本文件必不可少的條款。其中，注日期的引用文件，僅該日期對應(yīng)的版本適用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本(包括所有的修改單)適用于本文件。GB/T6682分析實(shí)驗(yàn)室用水規(guī)格和試驗(yàn)方法3術(shù)語和定義本文件沒有需要界定的術(shù)語和定義。4原理在細(xì)胞培養(yǎng)液中加入內(nèi)標(biāo)物的同時(shí)加入無機(jī)鹽，促進(jìn)揮發(fā)性物質(zhì)從被測細(xì)胞培養(yǎng)液中揮發(fā)后進(jìn)入氣相，通過自動頂空進(jìn)樣器采集后進(jìn)行GC-MS法聯(lián)用分析和確證苯乙烯和2-氯乙醇，用內(nèi)標(biāo)工作曲線法定量。5試劑和材料除非另有說明，本文件所用試劑均為色譜純。水為符合GB/T6682規(guī)定的一級水。5.1氯化鈉(NaCl)。5.2甲醇(CH?OH)。5.3標(biāo)準(zhǔn)品：苯乙烯、Dg-苯乙烯、2-氯乙醇、2-氟乙醇，純度≥99.5%,基本信息見附錄A?；蚪?jīng)國家認(rèn)證并授予標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)/標(biāo)準(zhǔn)樣品證書的一定濃度的標(biāo)準(zhǔn)溶液。5.4標(biāo)準(zhǔn)儲備液：配制好后于2℃~8℃下密封保存，有效期為6個月。5.4.1苯乙烯(1mg/mL):準(zhǔn)確稱量50.0mg苯乙烯標(biāo)準(zhǔn)品，用甲醇溶解后，定容于50mL容量瓶中，配制成終濃度為1mg/mL的對照儲備液。取2.5mL于50mL容量瓶中，用甲醇定容至刻度，混5.4.2D?-苯乙烯(1mg/mL):準(zhǔn)確稱量50.0mgDg-苯乙烯內(nèi)標(biāo)標(biāo)準(zhǔn)品，用甲醇溶解后，定容于50mL容量瓶中，配制成終濃度為1mg/mL的對照儲備液。取0.5mL于50mL容量瓶中，用甲醇定容至刻度，混勻，配制成10μg/mL溶液作為中間儲備液。5.4.32-氯乙醇(10mg/mL):準(zhǔn)確稱量100.0mg2-氯乙醇標(biāo)準(zhǔn)品，用甲醇溶解后，定容于10mL容量2瓶中，配制成終濃度為10mg/mL的對照儲備液。5.4.42-氟乙醇(10mg/mL):準(zhǔn)確稱量100.0mg2-氟乙醇內(nèi)標(biāo)標(biāo)準(zhǔn)品，用甲醇溶解后，定容于10mL容量瓶中，配制成終濃度為10mg/mL的對照儲備液。5.5混合標(biāo)準(zhǔn)儲備液：分別用移液器準(zhǔn)確吸取5.0mL苯乙烯(50μg/mL)、5.0mL2-氯乙醇(10mg/mL)于同一50mL容量瓶中，用甲醇定容至刻度，混勻，配制成濃度為苯乙烯5μg/mL、2-氯乙醇1mg/mL的混合標(biāo)準(zhǔn)儲備液。配制好后于2℃~8℃下密封保存，有效期為6個月。5.6內(nèi)標(biāo)工作溶液：用移液器準(zhǔn)確吸取1.0mLD?-苯乙烯(10μg/mL)、0.5mL2-氟乙醇(10mg/mL)于100mL容量瓶中，用甲醇定容至刻度，混勻，配制成濃度為D?-苯乙烯100ng/mL、2-氟乙醇50μg/mL的混合內(nèi)標(biāo)工作溶液。5.7標(biāo)準(zhǔn)工作溶液：用移液器將混合標(biāo)準(zhǔn)儲備液(5.5)準(zhǔn)確用水稀釋50倍，制備成工作母液(苯乙烯100.0μg/L、2-氯乙醇20.0mg/L),再依次分別稀釋制備成苯乙烯25.0μg/L、10.0μg/L、5.0μg/L、2.5μg/L、1.0μg/L、0.5μg/L,2-氯0.1mg/L的各濃度混合標(biāo)準(zhǔn)工作溶液，各配制50mL,現(xiàn)配現(xiàn)用。6儀器設(shè)備6.1氣相色譜-質(zhì)譜(GC-MS)儀：配電子轟擊源(EI源)。6.2自動頂空進(jìn)樣器。6.3電子天平：分度值為0.001g和0.1mg。7試驗(yàn)步驟7.1樣品制備取測定樣品7mL,經(jīng)7000×g離心10min,用移液器準(zhǔn)確吸取5.0mL上清液，置于20mL頂空瓶中，再用移液器準(zhǔn)確加入100μL混合內(nèi)標(biāo)工作溶液(5.6),同時(shí)加入2g氯化鈉，密封并標(biāo)識，現(xiàn)配現(xiàn)用。同時(shí)以超純水為空白樣，加入相同混合內(nèi)標(biāo)工作溶液和氯化鈉用于空白值的測定。7.2內(nèi)標(biāo)工作曲線制作用移液器準(zhǔn)確吸取5.0mL各稀釋度混合標(biāo)準(zhǔn)工作溶液(5.7),置于20mL頂空瓶中，再分別用移液器準(zhǔn)確加入100.0μL混合內(nèi)標(biāo)工作溶液(5.6),同時(shí)加入2g氯化鈉，密封并標(biāo)識，現(xiàn)配現(xiàn)用。7.3樣品處理供試品瓶置于自動頂空進(jìn)樣器中90℃加熱孵育30min。取2mL氣體頂空進(jìn)樣，注入GC-MS系7.4儀器參考條件7.4.1氣相色譜參考條件如下：a)色譜柱：聚乙二醇(PEG)極性色譜柱(60m×250μm×0.25μm),或相當(dāng)者；b)柱溫：70℃,保持4min;10℃/min升溫至200℃,保持3min;c)進(jìn)樣口溫度：200℃;d)載氣流速(He):1.2mL/min;3GB/T43778—2024e)分流比：10:1。7.4.2質(zhì)譜參考條件如下：a)離子源：電子轟擊源(EI源),溫度230℃,四極桿溫度150℃;b)檢測方式：選擇性離子監(jiān)測(SIM);c)選擇監(jiān)測離子及質(zhì)譜參數(shù)，見附錄B;7.5氣相色譜-質(zhì)譜測定7.5.1定性測定根據(jù)樣品中被測物與標(biāo)準(zhǔn)工作溶液中被測物的保留時(shí)間進(jìn)行定性(用于定性的離子色譜圖見附錄C)。在相同的實(shí)驗(yàn)條件下，若被測物的色譜峰保留時(shí)間和標(biāo)準(zhǔn)工作溶液的一致(變化范圍在±2.5%以內(nèi)),所選擇的離子均出現(xiàn)，而且所選擇離子的相對豐度和對照品離子的相對豐度偏差不超過表1規(guī)定的范圍，則可判斷樣品中存在對應(yīng)的被測物。表1定性離子的相對豐度最大允許偏差士25士30士507.5.2定量測定在儀器最佳工作條件下，將含被測物溶液(7.1)制作內(nèi)標(biāo)工作曲線的溶液(7.2)依次進(jìn)樣分析。以被測物和內(nèi)標(biāo)物的定量離子對峰面積比為縱坐標(biāo)，以被測物的濃度為橫坐標(biāo)繪制標(biāo)準(zhǔn)工作曲線，用標(biāo)準(zhǔn)工作曲線對樣品進(jìn)行定量。應(yīng)使樣品溶液中各被測物的響應(yīng)值在儀器測定的線性范圍內(nèi)，如果含量超過標(biāo)準(zhǔn)工作曲線范圍，應(yīng)用水稀釋到合適濃度后再進(jìn)樣分析。7.6平行試驗(yàn)按照7.3對同一樣品進(jìn)行樣品處理后，進(jìn)行平行測定。8結(jié)果分析被測物的含量用質(zhì)量濃度表示。按公式(1)計(jì)算被測物的質(zhì)量濃度(p): (1)式中：p——被測物的質(zhì)量濃度，苯乙烯單位為微克每升(μg/L),2-氯乙醇單位為毫克每升(mg/L);A;——樣品中被測成分峰面積；A?！瞻讟又斜粶y成分峰面積；A、——內(nèi)標(biāo)物峰面積；a——內(nèi)標(biāo)工作曲線斜率；b——內(nèi)標(biāo)工作曲線截距；4n——樣品稀釋倍數(shù)。計(jì)算結(jié)果以重復(fù)性條件下獲得的兩次獨(dú)立測定結(jié)果的算術(shù)平均值表示，結(jié)果保留兩位小數(shù)。9精密度在重復(fù)性條件下獲得的兩次獨(dú)立測定結(jié)果的絕對差值不應(yīng)超過算術(shù)平均值的10%。細(xì)胞培養(yǎng)液中苯乙烯檢出限為0.2μg/L,2-氯乙醇檢出限為50μg/L。5GB/T43778—2024(資料性)標(biāo)準(zhǔn)品基本信息A.1被測物標(biāo)準(zhǔn)品的信息見表A.1。序號中文名稱英文名稱CAS號分子式相對分子質(zhì)量1苯乙烯styreneC?H?22-氯乙醇2-chloroethanolC?H?ClO80.52A.2內(nèi)標(biāo)物標(biāo)準(zhǔn)品的信息見表A.2。序號中文名稱英文名稱CAS號分子式相對分子質(zhì)量1D?-苯乙烯C?D?22-氟乙醇6(資料性)被測物及內(nèi)標(biāo)物的選擇監(jiān)測離子及質(zhì)譜參數(shù)B.1被測物的選擇監(jiān)測離子及質(zhì)譜參數(shù)見表B.1。表B.1被測物的選擇監(jiān)測離子及質(zhì)譜參數(shù)序號中文名稱保留時(shí)間/min定量離子定性離子1定性離子2駐留時(shí)間/ms1苯乙烯22-氯乙醇49.043.080.0B.2內(nèi)標(biāo)物的選擇監(jiān)測離子及質(zhì)譜參數(shù)見表B.2。表B.2內(nèi)標(biāo)物的選擇監(jiān)測離子及質(zhì)譜參數(shù)序號中文名稱保留時(shí)間/min定量離子定性離子1定性離子2駐留時(shí)間/ms1D?-苯乙烯84.122-氟乙醇64.07