臨床檢驗方法確認與性能驗證

關(guān)于臨床檢驗方法確認與性能驗證臨床檢驗方法確認與性能驗證概念目的具體操作其他第2頁,共102頁，2024年2月25日，星期天一.概念確認（validation）驗證（verification）第3頁,共102頁，2024年2月25日，星期天確認（validation）在實驗室當前條件下，證實所得檢驗結(jié)果是否可以滿足臨床需要，能為患者提供可靠的的臨床結(jié)果過程。本質(zhì)上實際就是誤差評價（errorassessment），如果誤差太大將會造成結(jié)果不正確的解釋！確認的手段應(yīng)是是實際的或是模擬的！第4頁,共102頁，2024年2月25日，星期天驗證（verification）實驗室按廠商說明的方法能否得到預(yù)期結(jié)果驗證的手段可以是下述活動，如：變換方法進行計算；將新設(shè)計規(guī)范與已證實的類似設(shè)計規(guī)范進行比較；進行試驗和演示；發(fā)布文件前的評審。第5頁,共102頁，2024年2月25日，星期天確認（validation）通過提供客觀證據(jù)對特定的預(yù)期用途或應(yīng)用要求已得到滿足的認定。注：①“已確認”一詞用于表示相應(yīng)的狀態(tài)。②確認所使用的條件可以是實際的或是模擬的。驗證（verification）通過提供客觀證據(jù)對規(guī)定要求已得到滿足的認定注：①“已驗證”一詞用于表示相應(yīng)的狀態(tài)。②認定可包括下述活動，如：變換方法進行計算；將新設(shè)計規(guī)范與已證實的類似設(shè)計規(guī)范進行比較；進行試驗和演示；發(fā)布文件前的評審。第6頁,共102頁，2024年2月25日，星期天ISO15189的概念確認（validation）通過提供客觀證據(jù)對特定的預(yù)期用途或應(yīng)用要求已得到滿足的認定。注：①“已確認”一詞用于表示相應(yīng)的狀態(tài)。②確認所使用的條件可以是實際的或是模擬的。驗證（verification）通過提供客觀證據(jù)對規(guī)定要求已得到滿足的認定注：①“已驗證”一詞用于表示相應(yīng)的狀態(tài)。②認定可包括下述活動，如：變換方法進行計算；將新設(shè)計規(guī)范與已證實的類似設(shè)計規(guī)范進行比較；進行試驗和演示；發(fā)布文件前的評審。第7頁,共102頁，2024年2月25日，星期天二.目的結(jié)果互認醫(yī)院實驗室管理辦法CLIA’88CNAS-CL02第8頁,共102頁，2024年2月25日，星期天第9頁,共102頁，2024年2月25日，星期天第10頁,共102頁，2024年2月25日，星期天第11頁,共102頁，2024年2月25日，星期天第12頁,共102頁，2024年2月25日，星期天第13頁,共102頁，2024年2月25日，星期天三.具體操作（一）統(tǒng)計學基礎(chǔ)知識（二）檢驗方法分類（三）方法的選擇（四）常用物質(zhì)（五）一些基本術(shù)語（六）質(zhì)量規(guī)范（七）具體操作第14頁,共102頁，2024年2月25日，星期天（一）統(tǒng)計學基礎(chǔ)知識概述臨床檢驗結(jié)果質(zhì)量檢驗數(shù)據(jù)的分類統(tǒng)計方法的分類隨機變量及其分布正態(tài)分布抽樣分布大數(shù)定律和中心極限定律平均數(shù)與標準差均數(shù)的抽樣誤差與t分布兩均數(shù)差別的統(tǒng)計學意義檢驗方差分析直線回歸與相關(guān)觀察值一致性第15頁,共102頁，2024年2月25日，星期天

（二）檢驗方法分類

決定性方法（definitivemethod）：經(jīng)詳盡研究尚未發(fā)現(xiàn)不準確度或不確定性原因的方法；參考方法（referencemethod）：經(jīng)詳盡研究證實其不準確度與不精密度可以忽略的方法；常規(guī)方法（routinemethod）：可滿足臨床或其他目的需要的日常使用的方法。第16頁,共102頁，2024年2月25日，星期天（三）方法的選擇

足夠特異、靈敏、精密度好校準可溯源有實驗證據(jù)（雜志、自）與其他檢驗項目相比有點何在第17頁,共102頁，2024年2月25日，星期天（四）常用物質(zhì)

1.標準物質(zhì)/參考物質(zhì)（referencematerial）2.校準品（calibrator）3.質(zhì)控物/控制品（controlmaterial）第18頁,共102頁，2024年2月25日，星期天1.標準物質(zhì)

概念：又稱參考物質(zhì)（referencematerial），是一類充分均勻，并具有一個（或多個）確定的特性值的材料或物質(zhì)，標準物質(zhì)的定值結(jié)果一般表示為：標準值±總不確定度?！皹藴饰镔|(zhì)證書“是介紹標準物質(zhì)的技術(shù)文件，是研制單位向用戶提出的質(zhì)量保證書和使用說明。附有證書的標準物質(zhì)稱為有證標準物質(zhì)（certifiedreferencematerial,CRM），其特性值由建立了溯源性的程序確定，可溯源至準確復(fù)現(xiàn)該特性值的計量單位，且每個標準值都附有給定置信水平的不確定度。作用：校準儀器設(shè)備、評價測量方法，或給其它物質(zhì)賦值分類：一級標準物質(zhì)（primaryreferencematerial）：穩(wěn)定、均一，采用高度準確、可靠的若干方法定值，可用于校準決定性方法及為二級標準物質(zhì)定值。在我國，一級標準物質(zhì)是測量準確度達到國內(nèi)最高水平的有證標準物質(zhì)，由國家技術(shù)監(jiān)督局批準、頒布并授權(quán)生產(chǎn)。如：人血清無機成分分析標準物質(zhì)（GBW09135）和血清膽固醇標準物質(zhì)（GBW09138）。二級標準物質(zhì)（secondaryreferencematerial）：用一級標準物質(zhì)校準，參考方法定值。如：紅細胞微粒標準物質(zhì)—GBW（E）090001、膽紅素標準物質(zhì)—GBW（E）090002、氰化高鐵血紅蛋白溶液標準物質(zhì)—GBW（E）090004和純化血紅蛋白標準物質(zhì)—GBW（E）090011。第19頁,共102頁，2024年2月25日，星期天2.校準品第20頁,共102頁，2024年2月25日，星期天第21頁,共102頁，2024年2月25日，星期天

3.質(zhì)控品

概念：分類：定值質(zhì)控品非定值質(zhì)控品檢測系統(tǒng)配套的控制品正確度控制品第22頁,共102頁，2024年2月25日，星期天質(zhì)控品概念具有與檢測過程相適應(yīng)的特性，其成份與檢測樣本的基質(zhì)相同或相似。應(yīng)使用充分均一和穩(wěn)定的質(zhì)控物，其瓶間變異必須小于監(jiān)測系統(tǒng)預(yù)期的變異，其常規(guī)檢測應(yīng)有助于確認報告范圍。第23頁,共102頁，2024年2月25日，星期天定值質(zhì)控品第24頁,共102頁，2024年2月25日，星期天定值質(zhì)控品第25頁,共102頁，2024年2月25日，星期天但是公司的定值是從保護自己利益出發(fā)的。它標示的預(yù)期范圍只是想告訴用戶，只要你的測定值在范圍，說明它的控制品是好的。因此不要將預(yù)期范圍認為是控制的允許范圍?。?！不定值控制品質(zhì)量和定值的一樣，只是廠商沒有邀請實驗室為控制品定值，在說明書上除定值內(nèi)容外，其余都有，還告訴了用戶高值或低值，當然更便宜?。〉珶o論定值或不定值，用戶在使用時，須使用自己的檢測系統(tǒng)建立自己的均值和標準差！！只是定值控制品有一個預(yù)期的范圍便于用戶對照?。〉珒H為對照，若兩者相似不能說明用戶結(jié)果準確，不相似也不說明結(jié)果有問題。國內(nèi)限于條件國產(chǎn)控制品很少，由經(jīng)銷商推出的國外控制品真正屬于定值的也不多，定值控制品因為價格貴，用戶不接受，但用戶又要求是定值的控制品，因此不少經(jīng)銷商要求生產(chǎn)廠商提供一個公司自己檢測的值，附在不定值控制品上，變成用戶可接受的“定值”控制品?。。。≈劣诙ㄖ邓玫臋z測系統(tǒng)，方法學原理、儀器、試劑盒來源、操作程序都無可奉告?。?！此時如果用戶的靶值和“所為定值”相差甚遠，我們應(yīng)該可以理解，并不是控制品質(zhì)量有問題造成的！?。〉?6頁,共102頁，2024年2月25日，星期天檢測系統(tǒng)配套的控制品為了使用戶及時了解檢測系統(tǒng)的質(zhì)量狀況，大的診斷產(chǎn)品廠商（國際上六大），除提供儀器、試劑、校準品外，還提供檢測系統(tǒng)專用的控制品，必要時還為使用相同檢測系統(tǒng)的用戶提供相同批號的控制品，同時組織質(zhì)量服務(wù)?。〈祟惪刂破穼Ｓ眯詮?。如羅氏的正常與病理控制品Precinorm/Precipath，它的控制品定值完全按照校準品定值程序獲得?。?！而且定值一旦發(fā)現(xiàn)中間環(huán)節(jié)出錯，還在網(wǎng)上為用戶提供更新?。≌_度控制品為了隨時保證檢測系統(tǒng)對病人樣本的檢測結(jié)果具有溯源性，此時引入了正確度控制品，ISO17511標準定義正確度控制品為：用于評估檢測系統(tǒng)檢測偏倚的參考物質(zhì)。而且有專門的定值過程，該定制過程比校準品定值還要嚴格，與定值控制品的定值屬于相同檢測系統(tǒng)測定值的簡單統(tǒng)計處理一定要分開?。〉?7頁,共102頁，2024年2月25日，星期天（五）一些基本術(shù)語

準確度正確度精密度溯源性第28頁,共102頁，2024年2月25日，星期天a.準確度與誤差準確度（accuracy）的完整表達應(yīng)是檢測準確度（accuracyofmeasurement）：檢測結(jié)果與被測量真值或約定真值（可接受參照值）之間的一致程度（GB/T3358.1、GB/T6379）.可接受參照值：用來做比較的經(jīng)協(xié)商同意的值，它可以是理論值（真值），賦值，公認值或由程序確定的值。準確度不能直接得出，只能用偏離（deviation）也就是誤差從反面衡量誤差：測量值與真值之間的偏離，包括RE和SE。誤差是用來度量不準確度的。這樣對于檢測結(jié)果只做一次時，結(jié)果的偏離即不準確度=分析過程的不正確度+分析過程的不精密度也即不準確度=總誤差=分析過程的隨機誤差+分析過程的系統(tǒng)誤差b.正確度與偏倚正確度（trunees）即真實度，完整表達檢測真實度：大量檢測結(jié)果得到的均值與可接受參考值之間的一致程度（GB/T6379），用偏倚（bias）來表示,即測試結(jié)果的期望與真值（可接受參考值）之差。（GB/T6379）系統(tǒng)誤差：在可重復(fù)的條件下，大量檢測結(jié)果的均值與真值之差偏倚表示的是一種系統(tǒng)誤差。c.精密度和標準差精密度（precision），完整表達檢測精密度：在規(guī)定條件下獨立測試結(jié)果之間一致程度（GB/T6379）。用標準差或變異系數(shù)來表示。分為兩種，“重復(fù)性（repeatability）”相同條件下執(zhí)行連續(xù)測量結(jié)果之間的一致性程度，又稱為序列內(nèi)精密度和批內(nèi)精密度?！霸佻F(xiàn)性（reproducibility）”在改變測量條件下執(zhí)行測量結(jié)果之間的一致性程度。隨機誤差（randomerror）：在可重復(fù)的條件下，對相同的被測量無數(shù)次檢測結(jié)果的均值，與檢測結(jié)果的差異。用標準差和變異系數(shù)度量。d.總誤差總誤差（totalerror,TE）:能影響分析準確度的確定誤差的組合【CLSIEP15-A2】,即偏倚和不精密度的和?；诳茖W原理的理論或確定值基于一些國家或組織的實驗工作的指定值或認證值基于科學或工程組織贊助下合作實驗工作中的同意值或認證值。以上三點不能獲得時，則用可獲得的期望，即規(guī)定測量總體的均值。第29頁,共102頁，2024年2月25日，星期天溯源性

通過一條連續(xù)的比較連，使FPS檢測結(jié)果與國際或國家的參考系統(tǒng)（在參考實驗室，使用參考方法，參考品得到的結(jié)果）聯(lián)系起來的特性第30頁,共102頁，2024年2月25日，星期天（六）質(zhì)量規(guī)范

質(zhì)量規(guī)范簡史

1963年加拿大臨床化學家DavidTonks建議用參考區(qū)間的寬度1/4表示允許誤差。

1968年臨床化學家RoyBarnett博士提出標準差表示允許誤差。

1976年CAP舉辦的分析目標討論會議，Westgard提出了以“允許總誤差”作為規(guī)定質(zhì)量的最佳形式，一直沿用至今。第31頁,共102頁，2024年2月25日，星期天

1999年斯德哥爾摩協(xié)商大會匯集了臨床檢驗領(lǐng)域的許多專家協(xié)商一致的“建立全球分析質(zhì)量規(guī)范”，其結(jié)果提出了“質(zhì)量規(guī)范（qualityspecifications）”的層次結(jié)構(gòu)：

1.評價在特定情況下分析性能對臨床結(jié)果的影響2.評價在一般情況下分析性能對臨床決策的影響3.基于生物學變異的規(guī)范4.基于臨床醫(yī)生觀點的分析5.已發(fā)表專業(yè)推薦來自國家和國際的專家組來自地方組織或某個國家6.基于法規(guī)和EQA的質(zhì)量規(guī)范法規(guī)機構(gòu)能力驗證（PT）和（或）室間質(zhì)評計劃（EQAS）組織者7.基于當前分析技術(shù)的目標有時間質(zhì)量質(zhì)量評價或能力驗證計劃數(shù)據(jù)證實由當前發(fā)表方法學性能文章第32頁,共102頁，2024年2月25日，星期天3.基于生物學變異的規(guī)范。第33頁,共102頁，2024年2月25日，星期天用法CVA<1/2CVIBA<1/4（CVI2+CVG2）1/2CV儀器之間<1/3CVITE<1.65CVA+BA(α<0.05)TE<2.33CVA+BA(α<0.01)不精密度CV：用于室內(nèi)質(zhì)控精密度分析用于方法學性能驗證：1.與客觀比較

2.與廠家比較偏差Bias：用于方法學比較，即考核真實度。允許總誤差Tea：用于EQA第34頁,共102頁，2024年2月25日，星期天第35頁,共102頁，2024年2月25日，星期天5.已發(fā)表專業(yè)推薦

第36頁,共102頁，2024年2月25日，星期天6.基于法規(guī)和EQA的質(zhì)量規(guī)范

第37頁,共102頁，2024年2月25日，星期天第38頁,共102頁，2024年2月25日，星期天（七）具體操作

內(nèi)容常用的方案具體方案第39頁,共102頁，2024年2月25日，星期天

方法確認

內(nèi)容：總是包括可報告范圍、精密度、準確度和參考區(qū)間。某些研究還應(yīng)包括檢出限（或靈敏度）、特異度、干擾和回收以及校準品確認。CLIA規(guī)則規(guī)定對不同復(fù)雜程度分類的方法需要確認不同的特征。對不太復(fù)雜的方法，要求很少的研究。對于自建檢測系統(tǒng)或?qū)嶒炇倚薷牡姆椒ㄐ枰嗟膶嶒?。?0頁,共102頁，2024年2月25日，星期天方法驗證除應(yīng)驗證儀器的安裝和檢驗程序的操作外對于定量方法應(yīng)驗證：測量精密度：包括重復(fù)性和再現(xiàn)性、患者結(jié)果與以前方法或參考程序之間的一致性、在整個分析測量范圍內(nèi)被測量的回收、高濃度的攜帶污染、干擾或非特異性（溶血、脂血、黃疸、容器添加劑、藥物）、參考區(qū)間。對于定性方法應(yīng)驗證陽性和陰性及臨界值上和下標本的再現(xiàn)性和重復(fù)性、患者結(jié)果的一致性、攜帶污染、干擾或非特異性。第41頁,共102頁，2024年2月25日，星期天常用的方案1.相關(guān)機構(gòu)：NCCLA/CLSI、CLIA2.具體方案定量實驗室方法的初步評價:

CLSIEP10定性測試性能評估：CLSIEP12基質(zhì)效應(yīng)的評價：CLSIEP14精密度和正確度性能的用戶驗證：CLSIEP15-A使用ROC曲線實驗室試驗臨床準確度評價：CLSIGP10總誤差估計

:CLSIEP21-A：臨床實驗方法總分析誤差的估計精密度評價:

EP5-A，臨床化學設(shè)備精密性能的評價準確度評價：方法比較試驗EP9-A，使用病人樣本進行方法比較和偏倚估計回收實驗干擾試驗EP7-P，臨床化學干擾試驗總誤差估計

:CLSIEP21-A：臨床實驗方法總分析誤差的估計患者結(jié)果可報告范圍（即線性范圍）的驗證：EP6-A：定量分析方法線性的評價

臨床可報告范圍的確立參考范圍

：NCCLS/CLSIC28-A

：臨床實驗室如何定義和確定參照區(qū)間交叉污染:NCCLS/CLSIEP10-A

分析靈敏度:CLSIEP17-A：檢出限和定量下限確定方案分析特異性:NCCLA/CLSIEP7-A:臨床化學干擾試驗

第42頁,共102頁，2024年2月25日，星期天評價檢驗結(jié)果的準確度除按ISO/IECl7025對實驗室質(zhì)量體系評價外，在實際工作中我們常用以下幾種方法來核驗、評價檢驗結(jié)果的準確度。用標準物質(zhì)評價檢驗結(jié)果的準確度（t檢驗）用標準方法評價分析結(jié)果的準確度回收率試驗第43頁,共102頁，2024年2月25日，星期天Westgard確定不精密度的方法考慮因素1.實驗周期：20天以內(nèi)2.樣本基質(zhì)3.檢測材料數(shù)量和濃度水平：MDL4.檢測樣本個數(shù)：20次5.數(shù)據(jù)計算：CV/S6.可接受性能準則

Sw-run/Sw-day<1/4TEaSI-run<1/3TEa7.廠家聲明的驗證8.推薦的最低程度研究9.基于未來的考慮第44頁,共102頁，2024年2月25日，星期天廠家聲明的驗證

CLIA并沒有嚴格地要求實驗室確定性能的可接受性。更確切地，CLIA主張實驗室應(yīng)驗證廠家精密度的聲明。這可由F檢驗完成，如下：1.從廠家聲明材料（通常包括在儀器的文件中）中獲得用于重復(fù)性實驗的預(yù)期標準差和測量個數(shù)，如基于31次測量的標準差（s）為3mg/dl。2.從你的重復(fù)實驗獲得的標準差和測量結(jié)果個數(shù)，如基于21個測量的標準差為4mg/dl。3.計算F值，較大s平方除較小s平方，即=16/9=1.78。4.查F值表，查分子自由度為20，分母自由度為30的臨界F值，其值為1.93。5.在這一實例中，計算的F值小于臨界F值，其表示實驗室觀測的s與廠家聲明的s之間沒有真正的差異。6.結(jié)論——已驗證廠家的聲明。第45頁,共102頁，2024年2月25日，星期天推薦的最低程度研究

選擇至少2個不同濃度控制物代表了研究項目的低和高的醫(yī)學決定性濃度。每一個濃度在一批內(nèi)或一天內(nèi)對每一控制物檢測20個樣本獲得短期的不精密度估計值。計算每一控制物的均值、標準差和變異系數(shù)。在進行更進一步實驗之前確定短期不精密度是否可接受。在20個不同天對兩個控制物的每一種分析1個樣本，確定長期的不精密度。計算每一材料的均值、標準差和變異系數(shù)。確定長期不精密度是否可接受。第46頁,共102頁，2024年2月25日，星期天基于未來的考慮

采用更為詳細的實驗設(shè)計提供關(guān)于短期和長期變異量的信息。這些設(shè)計通常使用方差分析（analysisofvariance,ANOVA)，如CLSI精密度方案所闡述EP5方案預(yù)期用于廠家的精密度評價，而EP15方案預(yù)期用于臨床實驗室用戶進行的評價。EP15明確指出在5天的時間內(nèi)每天最少是采用3個重復(fù)測量，給出總的15個測量值。為了估計總的不精密度，計算提供確定批內(nèi)和批間分量的方式，然后將其結(jié)合來提供總的不精密度。在EP15附錄中描述了所需要的計算，以及一組數(shù)據(jù)實例顯示如何驗證廠家的聲明。給出的EP15允許僅只有5天的數(shù)據(jù)就可進行精密度驗證，很有可能它將成為許多實驗室采用的方案。第47頁,共102頁，2024年2月25日，星期天CLSIEP5-A2

定量方法精密度性能評價EvaluationofPrecisionPerformanceofQuantitativeMethods;ApprovedGuideline—SecondEdition第48頁,共102頁，2024年2月25日，星期天精密度的內(nèi)容批內(nèi)精密度（重復(fù)性：repeatability）批間精密度日內(nèi)精密度日間精密度實驗室內(nèi)精密度（within-laboratoryprecision）第49頁,共102頁，2024年2月25日，星期天實驗方法試劑和校準物：同一批號樣本：基質(zhì)與臨床樣本相似，2個以上濃度（參考醫(yī)學決定水平）。實驗天數(shù)：20天以上實驗次數(shù)：每天2批，每批2個樣本，每個樣本重復(fù)2次第50頁,共102頁，2024年2月25日，星期天Westgard確定偏倚的方法概述

由新方法（試驗方法）和可比較方法同時分析患者樣本的實驗，基于兩方法觀測的差值估計系統(tǒng)誤差?？紤]因素1.可比較方法2.患者標本數(shù)量3.單次或雙份測量4.時間周期5.標本穩(wěn)定性6.數(shù)據(jù)分析7.圖形顯示數(shù)據(jù)8.計算適當?shù)慕y(tǒng)計量9.可接受性能標準10.廠家聲明的驗證11.推薦的最低程度的研究12.未來的發(fā)展方向第51頁,共102頁，2024年2月25日，星期天1.可比較方法

“可比較方法”并不意味方法已證明其正確性。大多數(shù)常規(guī)實驗方法歸為此類。必須仔細解釋試驗方法和常規(guī)方法之間的任何差異。如果差別很小，則兩方法具有相同的相對的準確度。如果差別很大并醫(yī)學上不可接受，則需要識別哪一方法是不準確的。可采用回收和干擾實驗提供這一額外的信息。第52頁,共102頁，2024年2月25日，星期天2.患者標本數(shù)量

兩個方法檢測最少40份不同的患者標本。選擇的這些標本覆蓋整個方法的可報告范圍及代表方法在常規(guī)應(yīng)用預(yù)期疾病的濃度范圍。檢測標本的實際個數(shù)沒有標本的質(zhì)量重要。第53頁,共102頁，2024年2月25日，星期天3.單次或雙份測量

雙份測定不同的批、或至少不同的順序（而不是在同一樣本杯中來回重復(fù)）不同的樣本（或杯）第54頁,共102頁，2024年2月25日，星期天4.時間周期

一般建議最少5天每天檢測2至5個患者標本第55頁,共102頁，2024年2月25日，星期天5.標本穩(wěn)定性

一般由試驗和可比較方法在兩個小時內(nèi)對標本進行檢測，除非標本有很短的穩(wěn)定性第56頁,共102頁，2024年2月25日，星期天6.數(shù)據(jù)分析

方式存在爭論和討論第57頁,共102頁，2024年2月25日，星期天7.圖形顯示數(shù)據(jù)

差值圖（differenceplot）比對圖”（comparisonplot）第58頁,共102頁，2024年2月25日，星期天8.計算適當?shù)慕y(tǒng)計量

1.以比較方法測定值Xc為橫坐標，試驗方法測定值Yc為縱坐標，采用直線回歸或最小二乘法擬合直線，建立回歸方Y(jié)c=a+bXc，并由此計算在MDL時的SE，SE=Yc-Xc2.另一常計算的指標是相關(guān)系數(shù)r，主要用于評價數(shù)據(jù)范圍是否足夠?qū)捯员闾峁┬甭屎徒鼐喔玫墓烙?。而不是判斷方法的可接受性。當r為0.99或更大時，簡單的線性回歸計算可提供斜率和截距可靠的估計。如果r小于0.99，最好是收集額外的數(shù)據(jù)擴大濃度范圍?？紤]到使用t-檢驗計算估計數(shù)據(jù)均值的系統(tǒng)誤差，或使用更復(fù)雜的回歸計算適合于數(shù)據(jù)更窄的范圍。3.對于比對結(jié)果覆蓋較窄的分析范圍，如：鈉或鈣等，計算兩方法平均值之間的差，也通常稱為偏倚。這種計算的偏倚從統(tǒng)計程序可獲得提供配對t-檢驗計算。例如，如果鈉試驗方法40個分析的均值是141.0mmol/L，相同樣本比較方法的均值為138.5，則平均系統(tǒng)誤差或偏倚是2.5mmol/L（141.0～138.5）。第59頁,共102頁，2024年2月25日，星期天9.可接受性能標準

判斷可接受性依賴于允許分析誤差的大小，任何單個試驗的總誤差（TE）包括系統(tǒng)誤差（SE）加隨機誤差（RE）?！翱傉`差”計算公式如下：TEcalc=SE+RETEcalc=Biasmeas+3SmeasSmeas是重復(fù)性試驗估計的方法標準差，Biasmeas是從回歸方程Yc=a+bXc計算的Yc-Xc或從配對t-檢驗計算的平均差，當TEcalc<TEa方法性能是可接受的方法決定圖第60頁,共102頁，2024年2月25日，星期天10.廠家聲明的驗證CLIA并沒有嚴格地要求實驗室參照任何質(zhì)量標準，甚至是其能力驗證可接受性能準則判斷任何觀測的偏倚或系統(tǒng)誤差的可接受性。代之，CLIA強調(diào)驗證廠家的準確度（或不準確度、偏倚，系統(tǒng)誤差）聲明。如果廠家的聲明沒有偏倚，t-檢驗統(tǒng)計量將揭示出實驗室數(shù)據(jù)證實其聲明是否符合。如果從配對t檢驗統(tǒng)計計算的t值小于臨界t值，則沒有顯著性差異，或觀測到?jīng)]有真實的偏倚。如果廠家聲明有限的偏倚，則有用的是確定你估計偏倚的置信區(qū)間，并將其與廠家的聲明的偏倚進行比較。如果廠家的聲明偏倚落在觀測偏倚的上下置信限之內(nèi)，則證實了聲明；如果不在此區(qū)間內(nèi)，則沒有驗證聲明。第61頁,共102頁，2024年2月25日，星期天第62頁,共102頁，2024年2月25日，星期天11.推薦的最低程度的研究

選擇40份患者標本覆蓋方法的整個可報告范圍。由試驗和比較方法在2小時內(nèi)一天分析8份標本。很快地將結(jié)果繪制差值圖并檢查差異；重新分析給出差異結(jié)果的標本消除離群值，識別潛在的干擾。如果沒有觀測到差異的結(jié)果，繼續(xù)實驗5天。如果在頭5天觀測到差異，繼續(xù)另外的5天。繪制所有數(shù)據(jù)的比對圖評價范圍，離群值和線性。計算相關(guān)系數(shù)，如果r為0.99或更大，計算簡單直線回歸統(tǒng)計量及在醫(yī)學決定濃度水平上估計系統(tǒng)誤差。如果r<0.975，從t-檢驗統(tǒng)計量估計數(shù)據(jù)均值的偏倚或另外從更為復(fù)雜的回歸技術(shù)進行估計。使用方法決定圖結(jié)合估計的系統(tǒng)誤差和隨機誤差，并對方法觀測的總誤差作出判斷。第63頁,共102頁，2024年2月25日，星期天12.未來的發(fā)展方向

CLIA當前指南給出20為方法確認實驗的“經(jīng)驗法則”。CLSI’sEP15指南“真實度”或偏倚的用戶驗證也建議最少為20個患者樣本。另外，EP15包括備選方法使用最少2個具有制定值參考物質(zhì)，以在3到5批中以雙份測定方式進行測量.在此參考物質(zhì)可包括有證參考物質(zhì)，如從國家標準和技術(shù)研究院獲得，但也可來自能力驗證樣本，質(zhì)量控制材料，或具有指定值的相同方法比對材料第64頁,共102頁，2024年2月25日，星期天CLSIEP9-A2使用病人樣本進行方法比較和偏倚估計第65頁,共102頁，2024年2月25日，星期天目的及用途引進新方法前或用一種方法替代另一種方法時進行偏倚分析；評價同一分析項目的兩種分析方法間的偏倚。第66頁,共102頁，2024年2月25日，星期天評價操作要求熟悉儀器操作熟悉評價方案質(zhì)量控制足夠的數(shù)據(jù)第67頁,共102頁，2024年2月25日，星期天實驗樣本要求來源于健康人或患者，無干擾，盡量避免儲存；測定物濃度范圍應(yīng)在醫(yī)學決定水平范圍內(nèi)均勻分布；樣本數(shù)至少40例，增加數(shù)量能提高可信性第68頁,共102頁，2024年2月25日，星期天對比方法

廠家要求的實驗室常規(guī)方法或公認的參考方法。具有好的精密度沒有已知的干擾物相同單位相對國家標準或參考方法的偏倚是已知的第69頁,共102頁，2024年2月25日，星期天測定方法每天分別用兩種方法進行測定，測定順序：

1、2、3、4、5、6、7、88、7、6、5、4、3、2、1測定次數(shù)：至少測定5天，共40個樣本第70頁,共102頁，2024年2月25日，星期天數(shù)據(jù)監(jiān)督常規(guī)質(zhì)控：系統(tǒng)誤差人為誤差第71頁,共102頁，2024年2月25日，星期天實驗步驟?熟悉儀器及方法?收集數(shù)據(jù)?檢查方法內(nèi)的離群點界限：（雙份測定）相對差值均值的4倍第72頁,共102頁，2024年2月25日，星期天繪圖散點圖：均值散點圖（X，Y）所有值散點圖（Yij，Xi）偏倚圖：散點圖（（Yij-Xij），Xi）第73頁,共102頁，2024年2月25日，星期天均值散點圖（X，Y）第74頁,共102頁，2024年2月25日，星期天偏差圖：每次測定的Y均值與X均值

之差-相應(yīng)X均值圖第75頁,共102頁，2024年2月25日，星期天相關(guān)指標計算適合范圍：計算r，r2>=0.95范圍適合

r2<0.95擴大數(shù)據(jù)范圍線性回歸：回歸方程計算：截距a=-9.05

斜率b=1.17Y=1.17X–9.05

均勻離散度的直觀檢查第76頁,共102頁，2024年2月25日，星期天結(jié)果判讀預(yù)期偏倚及可信范圍線性回歸方程計算偏倚（高、中、低3組）解釋實驗結(jié)果并與內(nèi)部標準比較第77頁,共102頁，2024年2月25日，星期天

CLSIEP15-A

精密度和正確度性能的用戶驗證：UserVerificationofPerformanceforPrecisionandTrueness）第78頁,共102頁，2024年2月25日，星期天主要的3種方案：1.精密度基于5天，每天分析3份重復(fù)控制樣本；2.真實度基于分析20份患者標本；3.真實度基于分析至少2份具有指定值的參考物質(zhì)。第79頁,共102頁，2024年2月25日，星期天EP15精密度方案

規(guī)定熟悉時期學習分析系統(tǒng)的適當操作，包括校準、維護程序和監(jiān)測程序（質(zhì)量控制）。使用廠家推薦的質(zhì)量控制程序監(jiān)測在EP15檢測方案期的性能。選擇的控制物應(yīng)具有的濃度水平接近醫(yī)學決定性點。用于聲明驗證的控制物應(yīng)選擇接近于醫(yī)學決定點的濃度及接近于廠家進行其精密度聲明試驗所具有的濃度。如果可能，它們應(yīng)該與建立廠家聲明使用相同的材料，或非常類似的材料（類似的基質(zhì)）。第80頁,共102頁，2024年2月25日，星期天實驗方案1．五天，每日一分析批，每日兩個濃度水平，每一水平上同一樣本三次重復(fù)測定。2．如果因為質(zhì)量控制程序或操作困難判斷一批為失控，剔除數(shù)據(jù)，并執(zhí)行額外的批。3．包括正常地使用每日質(zhì)量控制樣本。4．真實度試驗樣本可在同一批內(nèi)進行檢測。5．操作者按照廠家說明書規(guī)定進行校準。如果廠家指出在其聲明它的精密度數(shù)據(jù)是在多個校準周期下產(chǎn)生的，則操作者在實驗期間選擇重新校準。第81頁,共102頁，2024年2月25日，星期天統(tǒng)計量的計算第82頁,共102頁，2024年2月25日，星期天建立EXCEL表格第83頁,共102頁，2024年2月25日，星期天用EXCEL表格計算T值第84頁,共102頁，2024年2月25日，星期天精密度聲明的驗證第85頁,共102頁，2024年2月25日，星期天EP15使用患者樣本的真實度方案

推薦采用如下的實驗方案：1．檢測20份患者樣本，其濃度水平覆蓋方法的可報告范圍。2．在實驗室以常規(guī)操作方式檢測新鮮患者樣本。3．在3到4天時間內(nèi)，每天由試驗和可比較方法在4小時內(nèi)測量5至7份樣本。4．評價質(zhì)量控制確保穩(wěn)定的操作條件和有效的試驗結(jié)果。5．檢查比較數(shù)據(jù)識別任何差異的結(jié)果。6．計算配對結(jié)果之間的差值，并繪制差值與比較值之間的差值圖提供數(shù)據(jù)的圖形顯示。7．將數(shù)據(jù)進行配對t-檢驗計算確定方法之間的平均差值（偏倚），以及差值的標準差；8．計算置信區(qū)間和（或）驗證限，將觀測的偏倚與廠家的聲明進行比較。第86頁,共102頁，2024年2月25日，星期天建立EXCEL表格第87頁,共102頁，2024年2月25日，星期天計算偏倚的置信區(qū)間第88頁,共102頁，2024年2月25日，星期天EP15使用參考物質(zhì)的真實度方案

推薦的物質(zhì)包括：1．從美國國家標準和技術(shù)研究院（NIST）可獲得某些分析物的有證參考物質(zhì)（CRM）。2．能力驗證計劃中具有指定值的參考物質(zhì)。3．廠家具有