BAT1在小鼠晶狀體上皮細(xì)胞中對Hsf4b轉(zhuǎn)錄活性調(diào)控的機制研究的開題報告

BAT1在小鼠晶狀體上皮細(xì)胞中對Hsf4b轉(zhuǎn)錄活性調(diào)控的機制研究的開題報告一、研究背景和意義晶狀體是眼睛中的重要構(gòu)件，其主要功能是折射光線，使光線能夠在視網(wǎng)膜上聚焦。晶狀體由晶狀體纖維細(xì)胞和晶狀體上皮細(xì)胞構(gòu)成，晶狀體上皮細(xì)胞在晶狀體發(fā)育時起到關(guān)鍵的作用。高溫脅迫因素可導(dǎo)致晶狀體上皮細(xì)胞的凋亡，進(jìn)而導(dǎo)致晶狀體發(fā)育異常和白內(nèi)障等疾病的發(fā)生。因此，揭示晶狀體上皮細(xì)胞對高溫脅迫的應(yīng)激反應(yīng)機制和調(diào)控因素，對治療白內(nèi)障等疾病有重要的意義。BAT1是一種核糖核酸結(jié)合蛋白，參與細(xì)胞核糖體的成熟和RNA的轉(zhuǎn)錄、穩(wěn)定和降解等過程。近年來的研究表明，BAT1還可參與細(xì)胞內(nèi)的應(yīng)激反應(yīng)，并通過參與轉(zhuǎn)錄因子的翻譯后修飾等機制來調(diào)控基因表達(dá)。Hsf4b是一種熱休克轉(zhuǎn)錄因子，在高溫脅迫下可以激活多種應(yīng)激應(yīng)答基因的轉(zhuǎn)錄。先前的研究表明，BAT1可以調(diào)控Hsf4b在胚胎發(fā)育和細(xì)胞凋亡中的表達(dá)，并影響其在細(xì)胞凋亡中的功能。因此，本文旨在探討B(tài)AT1在小鼠晶狀體上皮細(xì)胞中對Hsf4b轉(zhuǎn)錄活性的調(diào)控機制，為深入研究晶狀體發(fā)育和白內(nèi)障等疾病的發(fā)生提供理論依據(jù)。二、研究內(nèi)容和方法1.研究內(nèi)容（1）分析小鼠晶狀體上皮細(xì)胞在高溫脅迫下的轉(zhuǎn)錄組變化。（2）研究BAT1對Hsf4b轉(zhuǎn)錄活性的調(diào)控作用，分析兩者之間相互作用的機制。（3）探討B(tài)AT1調(diào)控Hsf4b在晶狀體發(fā)育和應(yīng)激反應(yīng)中的作用。2.研究方法（1）小鼠晶狀體上皮細(xì)胞的培養(yǎng)從小鼠晶狀體中分離上皮細(xì)胞并培養(yǎng)于高溫（42℃）和常溫（37℃）條件下，采用RNA定量PCR和WesternBlot等技術(shù)檢測其應(yīng)激反應(yīng)。（2）轉(zhuǎn)錄組分析采用RNA-Seq技術(shù)對小鼠晶狀體上皮細(xì)胞在高溫脅迫下的轉(zhuǎn)錄組進(jìn)行分析，篩選出關(guān)鍵的調(diào)節(jié)基因并進(jìn)一步分析其功能與調(diào)控機制。（3）原核表達(dá)系統(tǒng)的構(gòu)建將BAT1和Hsf4b基因克隆至載體中，轉(zhuǎn)化至大腸桿菌中進(jìn)行擴增。提取獲得的重組蛋白，并采用蛋白-蛋白相互作用和Chromatinimmunoprecipitation（ChIP）技術(shù)分析兩者之間的關(guān)系。（4）功能實驗采用Luciferasereporter基因法檢測BAT1對Hsf4b轉(zhuǎn)錄活性的調(diào)控作用，通過小鼠晶狀體發(fā)育實驗和細(xì)胞凋亡實驗驗證BAT1調(diào)控Hsf4b在應(yīng)激反應(yīng)和晶狀體發(fā)育中的作用。三、預(yù)期成果本研究將探討B(tài)AT1在小鼠晶狀體上皮細(xì)胞中對Hsf4b的調(diào)控作用和調(diào)控機制，從而為揭示晶狀體發(fā)育及白內(nèi)障等疾病的發(fā)生提供理論依據(jù)。預(yù)計將獲得以下成果：（1）分析小鼠晶狀體上皮細(xì)胞在高溫脅迫下的轉(zhuǎn)錄組變化，篩選出關(guān)鍵的調(diào)節(jié)基因。（2）揭示BAT1和Hsf4b之間的相互作用機制，進(jìn)一步了解BAT1在細(xì)胞應(yīng)激反應(yīng)中的作用。（3）闡明BAT1調(diào)控Hsf4b在晶狀體發(fā)育和應(yīng)激反應(yīng)中的作用，為治療相關(guān)疾病提供理論依據(jù)。