電泳問題解決方案

電泳問題解決方案電泳問題解決方案20231/36電泳問題解決方案Example1“Smearing”，是難免了。Example2樣品量過大而消滅了樣品“穿插”污染，正常的當(dāng)載樣在20to40micrograms/well將會很秀麗。Example3有的窄些。Example4“Smearing”〔留意泳道4〕，這可能和樣品中的含有大量脂類的膜相關(guān)蛋白引起的：由于不連續(xù)4WESTERNExample5電泳問題解決方案電泳問題解決方案202322/36這張還不是太糟糕。泳道45Example6泳的進展，樣品不斷的融解，以至形成托尾而不是一條條清洗的條帶。另外，這個樣品可能含有雜質(zhì)比較多〔不溶性雜質(zhì)或基因組DNA〕，可見上樣前的充分別心也是必要的!Example7〔雜質(zhì)在電泳過程中不斷的進入膠中〕，或同時也污染了其他的相臨樣品。Example8完全是染液重復(fù)利用惹的禍，對于這張〔只有下面著色〕，只要重再染，效果還是可以的。Example9天染色結(jié)果變成這個樣子了，呵呵~~緣由：固定在膠中的蛋白都溶到水里了。Example10集中。Example11電泳問題解決方案電泳問題解決方案202333/36難以很好推測。Example12〔聚合不夠均勻，載樣過大，消滅上面的狀況自然是必定的了！Example13SDS〔可能有析出〕，樣品根本無法進入膠中。只有讓分別的蛋白入膠，才能進展良好的分別。Example14〔假設(shè)重復(fù)結(jié)果全都的話〕。Example15做的好圖。電泳問題解決方案電泳問題解決方案20234/36SDS-SDS-Rice“:///~bioslabs/studies/sds-/sdsgoofs.html“如有錯誤望各位戰(zhàn)友不吝指出，感謝！我也格外期望能夠借此帖引起大家對SDS-中的問題進展反思，共同爭論您在SDS-中遇SDS-OK，let”sgo....SDS-“hallofshame”〔westernblot成熟起來的，這中間我就學(xué)到了很多，相對于PCR，我第一次就成功的做出了RT-PCR和重疊延長PCR，PCR〕膠是最簡潔犯的多種錯誤〔固然這些錯誤仍在更之中。看你自己的膠缺陷或許并不能很好的解決問題，至少不是最完善的解決方式，本文用圖例指出你可能在哪一些方面改進你的技術(shù)。之相對的解釋及建議。從這本“失誤大全”中你應(yīng)當(dāng)能夠找到解決你的問題的正確的方法。電泳問題解決方案電泳問題解決方案202366/36病癥1——涂抹痕跡〔smears〕涂抹痕跡——例1大。是明顯這種連接不是格外結(jié)實〔我推舉重倒膠，制膠很關(guān)鍵，假設(shè)你后續(xù)還要做blot，膠沒有〕涂抹痕跡——例234這些泳道的樣品主要含有一種蛋白〔血紅蛋白的亞基91034于樣品需要稀釋后才能進展蛋白含量測定。但是這名學(xué)生卻遺忘了這個樣品已經(jīng)稀釋過了，〔〕電泳問題解決方案電泳問題解決方案20237/3620-40一團糟！涂抹痕跡——例32道的不全都性。電泳問題解決方案電泳問題解決方案202388/36涂抹痕跡——例4一個高約半厘米左右的樣品被壓縮成為一個僅為數(shù)微米厚的薄層條帶，局部蛋白濃度急劇增加。景。很多膜相關(guān)蛋白的凝膠圖像都顯示同樣的特征。4凝膠的區(qū)分力量，造成了很深的涂抹痕跡。病癥2——條紋拖尾電泳問題解決方案電泳問題解決方案202399/36條紋拖尾——例1這個不是格外嚴(yán)峻，有條紋拖尾的泳道〔圖中左邊第5〕也是可以用的。條紋的消滅是由由于分別膠外表存在輕度的缺陷〔可能是在倒積層膠之前分別膠干了一些，造成整個泳道的蛋白濃度的不全都，使得消滅這種條紋拖尾病癥，而不是全都的很深的背景。條紋拖尾——例24窄。留意凝膠前端染料的缺失，是由于電泳時間過長所致。電泳問題解決方案電泳問題解決方案20231010/36條紋拖尾——例3濃縮就析出來了。然后再跑膠過程中漸漸溶解造成了條紋拖尾病癥。1這個問題可能是由于加樣孔成形不佳和/或凝膠加樣不認(rèn)真所致。背景較深而且不均一說明隔持續(xù)進入凝膠。加樣孔。電泳問題解決方案電泳問題解決方案202311/36至加樣孔外而不是進入積層膠。在幾分鐘之內(nèi)覺察問題可能挽救一局部損失，但是由于PH效應(yīng)導(dǎo)致有效的樣品濃縮失敗，樣品損失以及蛋白污染電泳緩沖液。條帶過淺——例2染色劑可解決。電泳問題解決方案電泳問題解決方案20231212/36條帶過淺——例3第五道旁邊用“X”標(biāo)記的泳道的樣品蛋白含量被低估了，或者電泳樣品預(yù)備時弄錯了樣品濃度，的主要的條帶，說明這個孔的問題就是上樣量過低。條帶過淺——例4果就是上面的樣子了。電泳問題解決方案電泳問題解決方案202313/36脫色液中的酸化甲醇是格外必要的，它可以固定蛋白阻擋其從聚丙烯酰胺基質(zhì)上彌散。病癥4——前端指示劑缺失局部前端指示劑——例1凝膠的話就不能確定各個條帶相對應(yīng)的遷移率了。這塊膠有一個內(nèi)部的刻度——也就是跑膠時帶上了分子量標(biāo)準(zhǔn)〔Marker條帶都可以作為參考來確定跑膠的遷移率。電泳問題解決方案電泳問題解決方案20231414/36前端指示劑缺失——例2于組成均一的凝膠來說都是全都的。前端指示劑缺失——例3從這塊膠曲率來看應(yīng)當(dāng)是屬于由于兩側(cè)薄板之間結(jié)合略微松弛形成的邊緣效應(yīng)“皺眉”電泳問題解決方案電泳問題解決方案202315/36前端指示劑作為參考線，即使存在“皺眉效應(yīng)”也可以進展比較。5——條帶僅在凝膠頂部1很明顯這塊膠的指示劑前端位于什么位置。仍有連續(xù)電泳的空間可以把條帶分得更開以增加區(qū)分增高直到彌散限制了區(qū)分率的連續(xù)提高。2這兩塊膠一個是7%的一個是14%的，看起來都還不錯。有些人做試驗室很不耐煩過早就終止了可能發(fā)生在你很晚跑電泳的時候，你的教師都餓了，而你卻不能讓他等你一步一步地做完。扭曲的條帶樣品濃縮之后全部的條帶都變扭曲的外形。扭曲的條帶也可以見于電場的不均一，但是這種條帶的扭曲應(yīng)當(dāng)是對稱的。加樣孔不成形〔箭頭所示。事實上，這種狀況通常發(fā)生在加樣孔深度不夠或者樣品不慎漏至加樣孔外。的好處就是它可以削減泳動特別。電泳問題解決方案電泳問題解決方案20231919/36高密度膠這塊膠明顯是非正確聚合的。聚丙烯酰胺的密度相當(dāng)高以至于只有少數(shù)小分子蛋白可以進入分別的聚合。裂開膠住假設(shè)你收集了足夠多的碎片這塊膠仍舊是可以用的。電泳問題解決方案電泳問題解決方案20232020/36電場效應(yīng)假設(shè)把你浸在藍(lán)色染料中然后拉著你在電場中跑，你也肯定會皺眉的7——包含多種病癥的失敗凝膠1么導(dǎo)致這些意料之外的效應(yīng)格外重要。接下來你就可以著手改進你的跑膠質(zhì)量。這塊膠：缺乏前端指示劑——電泳時間過長；右側(cè)泳道上樣量偏大。電泳問題解決方案電泳問題解決方案202321/362上樣量太大。分別膠上沿不平，條帶扭曲。電泳問題解決方案電泳問題解決方案20232222/363這塊膠：上樣量不均一〔相鄰加樣孔上樣不同全脫色。這說明可能是由于沒有正確取放凝膠——用手直接接觸凝膠導(dǎo)致膠外表留下蛋白而被考馬斯亮藍(lán)染色。有時候你可以得到格外秀麗的指紋！7——千奇百怪的膠1電泳問題解決方案電泳問題解決方案202323/3623E.Mora