抗寄生蟲免疫

第三十七章 抗寄生蟲免疫(ImmunitytoParasite)一、概述安康的重要疫病之一。這些寄生蟲，有的感染人(如惡性瘧原蟲)，有的感染動(dòng)物(如伊氏錐核酸組成及細(xì)胞器構(gòu)造都較細(xì)菌等原核生物簡(jiǎn)單的防治要更困難。護(hù)性免疫應(yīng)答。不管哪一種觀點(diǎn)都有其肯定的道理和成功的例證。在2080究，但多數(shù)人更傾向于藥物防治的重要性。事實(shí)上，在蟲苗沒有成功之前也確實(shí)起到了格外重要的作用。但近幾年來，人們漸漸覺察，原來經(jīng)典的抗寄生蟲藥(如氯喹、氯苯胍等)對(duì)一些寄生蟲病的治療作用不斷減弱，在有些地區(qū)(如在非洲)幾乎完全失去不斷被提醒，保護(hù)性抗原分別及分子克隆不斷取得突破，寄生蟲基因工程蟲苗已初露倪端，牛巴貝斯蟲基因工程苗在澳大利亞已開頭進(jìn)展田間試驗(yàn)寄生蟲免疫學(xué)的有關(guān)內(nèi)容作一介紹。二、抗寄生蟲感染的免疫特點(diǎn)宿主對(duì)寄生蟲的免疫表現(xiàn)為免疫系統(tǒng)對(duì)寄生蟲的識(shí)別與去除主對(duì)寄生蟲的免疫，常是非特異免疫和特異免疫二者協(xié)同作用的結(jié)果。(一)抗寄生蟲感染的免疫類型消退性免疫(sterilizingimmunity) 即免疫機(jī)體能夠完全消退侵入體內(nèi)的蟲體。這種免疫在臨床上很少見如感染皮膚型利什曼病的人或犬病愈后對(duì)再次感染可產(chǎn)生完全的免疫力接種泰勒蟲苗的牛在肯定時(shí)間內(nèi)也可產(chǎn)生消退性的免疫力提高人和動(dòng)物產(chǎn)生抗寄生蟲消退性免疫力是寄生蟲工作者的主要目標(biāo)。非消退性免疫(nonsterilizingimmunity) 這是寄生蟲感染中常見的一種免疫狀態(tài)宿主不能完全消退侵入體內(nèi)的蟲體那些在體內(nèi)寄生的少數(shù)蟲體對(duì)宿主也不會(huì)產(chǎn)生嚴(yán)峻損害，而起到免疫作用，不斷刺激機(jī)體產(chǎn)生對(duì)再感染的免疫力，即所謂的帶蟲免疫(premunition)，早期的牛巴貝斯蟲苗就是依據(jù)這一理論制備的。將體內(nèi)有巴貝斯蟲寄生而臨床上又不表現(xiàn)任何病癥的牛的血液接種其他的牛使后者也處于帶蟲免疫狀態(tài)或是用藥物殺死發(fā)病牛體內(nèi)的絕大局部蟲體而保存一局部蟲體使宿主處于帶蟲免疫狀態(tài)但后來覺察這兩種方法均不行靠前者有大面積傳播疾病的可能性而后者易造成耐藥性蟲株產(chǎn)生。缺少有效的獲得性免疫這一點(diǎn)在蠕蟲感染中比較常見，一般宿主對(duì)消化道內(nèi)的蠕蟲的免疫反響都很有限，很難有效地去除蟲體。另外，一些寄生在免疫細(xì)胞內(nèi)的蟲體(如利什曼原蟲、弓形蟲等)也能有效地躲避宿主的免疫去除。(二)抗寄生蟲感染的免疫機(jī)制免疫效應(yīng)相互協(xié)同作用，并有其他細(xì)胞(如巨噬細(xì)胞、肥大細(xì)胞等)的參與。不同的蟲體所誘導(dǎo)的免疫反響不同。一般單細(xì)胞原蟲，尤其是血液內(nèi)寄生原蟲(如巴貝斯蟲、瘧原蟲、錐蟲)主要激發(fā)宿主的體液免疫應(yīng)答，即由特異抗體(主要為IgG)介導(dǎo)抗寄生而在補(bǔ)體或其他吞噬細(xì)胞的作用下，將蟲體去除。抗體也可以與感染有蟲體的細(xì)胞結(jié)合，通過特異性的ADCC宿主對(duì)消化道內(nèi)寄生的蟲體的免疫反響則比較簡(jiǎn)單IgE和IgA作為變應(yīng)原可刺激宿主產(chǎn)生大量IgEIgEFcIgE敏反響是導(dǎo)致蟲體排出的緣由之一。蠕蟲感染過程中嗜酸性粒細(xì)胞增多也是一種免疫相關(guān)現(xiàn)象胞趨化因子(eosinophilchemotacticfactor，ECF)，嗜酸性粒細(xì)胞受ECF蟲的寄生部位，與蟲體上的抗體Fc片段結(jié)合，釋放O2傷過程。三、寄生蟲的抗原組成在寄生蟲與宿主的相互關(guān)系中，寄生蟲抗原誘導(dǎo)宿主產(chǎn)生免疫應(yīng)答，尤其是那些存在于寄生蟲體表及其分泌物/排泄物內(nèi)的抗原，與宿主的免疫細(xì)胞直接接觸，具有重要的免疫原性，是制備蟲苗的主要抗原。寄生蟲抗原的化學(xué)構(gòu)成包括多肽、蛋白質(zhì)、糖蛋白、脂同蟲種之間甚至在同種不同株之間，以及在寄生蟲與宿主之間也可存在共同抗原和特異抗同蟲種之間甚至在同種不同株之間，以及在寄生蟲與宿主之間也可存在共同抗原和特異抗原。近年來，隨著生物化學(xué)、分子生物學(xué)、免疫學(xué)和雜交瘤等技術(shù)用于寄生蟲抗原的爭(zhēng)論，寄生蟲分泌(escretion)/排泄(secretion)抗原(ES抗原)，一般認(rèn)為，這局部抗原的免疫原寄生蟲分泌(escretion)/排泄(secretion)抗原(ES抗原)，一般認(rèn)為，這局部抗原的免疫原抗原也被認(rèn)為是寄生蟲的主要抗原物質(zhì)；③其他抗原，包括死蟲、蠕蟲體腔液、包囊等，這些抗原的免疫原性較差，一般不作為制備蟲苗的主要成分。疫反響，對(duì)宿主保護(hù)性抗原的篩選與大量制備是研制蟲苗的關(guān)鍵；②免疫診斷性抗原，宿原去掉；③免疫病理性抗原，這局部蟲體抗原可誘發(fā)宿主產(chǎn)生免疫病理反響，如超敏反響、保護(hù)性抗原的打算簇又分為B淋巴細(xì)胞打算簇和TBT其是刺激宿主大量產(chǎn)生CD4+T細(xì)胞和CD8+T重要的。這一點(diǎn)已在瘧原蟲蟲苗研制過程中得到了證明。四、寄生蟲的免疫躲避機(jī)制今日所生疏的寄生蟲是生物長(zhǎng)期進(jìn)化過程中的成功者謂的寄生蟲免疫躲避機(jī)制。有關(guān)寄生蟲的免疫躲避機(jī)制始終是各國(guó)寄生蟲學(xué)工作者爭(zhēng)論的重點(diǎn)之一避機(jī)理包括：①避開或抵抗免疫攻擊的部位；②不斷轉(zhuǎn)變蟲體本身的抗原性；③降低宿主的免疫應(yīng)答。免疫應(yīng)答。(一)解剖或組織位置的隔離有些寄生蟲在長(zhǎng)期衍化過程中形成了自己獨(dú)特的親組織性或親細(xì)胞性部位保護(hù)自己。有些原蟲(如弓形蟲、泰勒蟲、利什曼原蟲、巴貝斯蟲等)寄生在宿主的免疫是依靠其頂復(fù)合體對(duì)紅細(xì)胞受體的識(shí)別才侵入細(xì)胞內(nèi)的。宿主組織內(nèi)的寄生蟲所形成的包囊，也是對(duì)免疫反響的有效屏障。肌肉期旋毛蟲所形成的包囊、棘球蚴囊腸道內(nèi)寄生蟲的保護(hù)性免疫是格外有限的。(二)蟲體抗原性的轉(zhuǎn)變1.寄生蟲抗原的階段性變化1.寄生蟲抗原的階段性變化寄生蟲發(fā)育過程中的一個(gè)重要特征是存在階段性(發(fā)育時(shí)期)甚至宿主的轉(zhuǎn)變。例如，瘧原蟲、巴貝斯蟲在發(fā)育過程中有裂殖子期、孢子期等，其2.抗原變異所謂抗原變異是指特定發(fā)育階段的寄生蟲轉(zhuǎn)變其外表抗原血清型的能力，它是寄生蟲最有效的免疫躲避機(jī)制。多種致病性原蟲和非致病性原生動(dòng)物(如草履蟲)間經(jīng)受哺乳動(dòng)物宿主和昆蟲宿主兩個(gè)發(fā)育生殖階段2.抗原變異所謂抗原變異是指特定發(fā)育階段的寄生蟲轉(zhuǎn)變其外表抗原血清型的能力，它是寄生蟲最有效的免疫躲避機(jī)制。多種致病性原蟲和非致病性原生動(dòng)物(如草履蟲)最具特征。在布氏錐蟲(Trypanosomabrucei12～15nm55kD～65kD的糖蛋白組成。由于該種糖蛋白的抗原性不斷發(fā)生轉(zhuǎn)變，人們將其稱為外表變異糖蛋白(variablesurfaceglycoprotein，VSG)。VSG每隔一VSGVSGVSGVSG主對(duì)這兩種蟲體的免疫去除。其主要表現(xiàn)在轉(zhuǎn)變蟲體表膜或其所寄生的紅細(xì)胞膜上的抗原原也屬于變異抗原。VSGVSG基因只有位移(translocating)到端粒表達(dá)位置才能被表達(dá)。據(jù)認(rèn)為，錐蟲本身具有一種核酸剪切VSG(rearranginglocus)，由這些位點(diǎn)所轉(zhuǎn)錄的mRNA分子各不一樣，因而所翻譯的蛋白質(zhì)的抗原性各異。但這些變異抗原對(duì)整個(gè)蟲體的抗原性有時(shí)并不起打算性作用。殖的巴貝斯蟲、瘧原蟲，還是無性生殖的錐蟲，其在宿主體內(nèi)都可以進(jìn)展遺傳物質(zhì)的交換。蟲，其抗原變異均有肯定的規(guī)律性。3.抗原摹擬和偽裝有些寄生蟲(如血吸蟲)能夠?qū)⑺拗鞣肿咏Y(jié)合在其體表去除。關(guān)于摹擬宿主抗原的現(xiàn)象，首先在血吸蟲得到證明。早在3.抗原摹擬和偽裝有些寄生蟲(如血吸蟲)能夠?qū)⑺拗鞣肿咏Y(jié)合在其體表去除。關(guān)于摹擬宿主抗原的現(xiàn)象，首先在血吸蟲得到證明。早在60年月就有試驗(yàn)證明，用

末端也有肯定的同源4.外表抗原的脫落與更多數(shù)原蟲和蠕蟲都有脫落和更外表抗原的力量它們躲避宿主的特異性免疫反響的有效方式。實(shí)際上，抗原脫落與抗原變異是相互結(jié)合的。(mask)DNA4.外表抗原的脫落與更多數(shù)原蟲和蠕蟲都有脫落和更外表抗原的力量它們躲避宿主的特異性免疫反響的有效方式。實(shí)際上，抗原脫落與抗原變異是相互結(jié)合的。錐蟲的VSG就是始終處在一種不斷產(chǎn)生和脫落的過程中有局部抗原的脫落。血吸蟲成蟲在受到特異抗體作用時(shí)能脫去局部表皮，然后又可修復(fù)。物，皮膚中的童蟲也能脫去外表抗原而保持形態(tài)完整。另外，有些線蟲(如豬蛔蟲)的幼蟲，性均有所轉(zhuǎn)變，這也可能是其躲避宿主免疫攻擊的一種方式。(三)降低宿主的免疫應(yīng)答用，是寄生蟲與宿主之間相互對(duì)抗的表現(xiàn)。抑制溶酶體融合與抗溶酶體酶1. 吞噬細(xì)胞或其他吞噬細(xì)胞殺傷或消化微生物的機(jī)抑制溶酶體融合與抗溶酶體酶2.免疫抑制寄生蟲感染過程中發(fā)生的免疫抑制是一種普遍現(xiàn)象，原蟲、線蟲甚至消化。吞噬體與溶酶體的融合是病原體被消化并最終被消滅的先決條件。有些原蟲(如弓形2.免疫抑制寄生蟲感染過程中發(fā)生的免疫抑制是一種普遍現(xiàn)象，原蟲、線蟲甚至此外，寄生蟲保護(hù)性抗原也參與了對(duì)宿主的免疫抑制，在蟲體的分泌物/排泄物中，有一些抗原中和了宿主的抗體，而寄生蟲本身則躲避了免疫去除。原，這種物質(zhì)可刺激宿主產(chǎn)生大量的非特異性IgM，在降低特異性IgG產(chǎn)生的同時(shí)，使宿主Leslie(1986)覺察感染剛果錐蟲的小鼠蟲血癥的進(jìn)展與血液中白細(xì)胞T淋巴細(xì)胞的結(jié)果、腎、脾)以及骨髓都有很強(qiáng)的毒害作用，在嚴(yán)峻蟲血癥的宿主，其免疫系統(tǒng)幾乎呈現(xiàn)衰竭狀態(tài)。此外，寄生蟲保護(hù)性抗原也參與了對(duì)宿主的免疫抑制，在蟲體的分泌物/排泄物中，有一些抗原中和了宿主的抗體，而寄生蟲本身則躲避了免疫去除。T人認(rèn)為這是傳統(tǒng)寄生蟲蟲苗免疫效果不佳的一個(gè)主要緣由。一個(gè)抱負(fù)的寄生蟲蟲苗應(yīng)當(dāng)是不含這種因子的蟲苗。補(bǔ)體的滅活與消耗試驗(yàn)證明，曼氏血吸蟲的肺期童蟲和培育中的童蟲具有抗補(bǔ)體成分具有結(jié)合補(bǔ)體活性，從而保護(hù)了原頭節(jié)免受補(bǔ)體介導(dǎo)的溶解作用。血液寄生原蟲產(chǎn)生大量的分泌/排泄抗原與抗體形成免疫復(fù)合物后，消耗大量的補(bǔ)體，從而保護(hù)了蟲體免受補(bǔ)體的損傷。另外，蟲體的某些毒素也有直接的抗補(bǔ)體作用。裂解抗體 一些克氏錐蟲株的錐鞭毛體能抵抗抗體依靠的補(bǔ)體介導(dǎo)的溶解作用。在與特異抗體反響后，原蟲外表的免疫球蛋白的Fc片段被切除，只剩下Fab片段。用抗Fab抗體處理蟲體后，錐鞭毛體很快被補(bǔ)體所溶解，可見克氏錐蟲能分解附著的抗體，留下的Fab片段不能激活補(bǔ)體，卻封閉了蟲體與特異性完整抗體的反響。曼氏血吸蟲也有這種狀況，它以抗體的Fc片段與補(bǔ)體結(jié)合，而使抗體的Fab其外表。Fab專性寄生蟲與宿主的長(zhǎng)期共存，實(shí)際上是宿主免疫防范系統(tǒng)對(duì)病原的反響與后者抵抗、干擾生蟲高度興旺的存活機(jī)理及制備高效寄生蟲蟲苗供給理論依據(jù)。淋巴細(xì)胞激活與白細(xì)胞功能的轉(zhuǎn)變有些原蟲感染可通過肯定途徑引起多克隆B征之一是高丙種球蛋白血癥，尤其是IgM。感染早期，由于含膜成分及錐蟲產(chǎn)物的作用，導(dǎo)B細(xì)胞和T體力量的耗竭和B細(xì)胞與T性瘧原蟲培育物的提取物或上清液則刺激人四周淋巴細(xì)胞和小鼠脾臟細(xì)胞的轉(zhuǎn)化曼病最顯著的征象之一是循環(huán)免疫球蛋白水平的明顯上升，主要是IgG，其次為IgM。免疫復(fù)合物的作用多種寄生蟲感染中均能測(cè)出循環(huán)免疫復(fù)合物，這在理論上能轉(zhuǎn)變細(xì)胞介導(dǎo)的對(duì)童蟲的殺傷，抑制淋巴細(xì)胞轉(zhuǎn)化等。分泌物、排泄物對(duì)宿主的干擾有證據(jù)說明，在囊尾蚴病和包蟲病中的寄生蟲產(chǎn)物〔包括粒細(xì)胞〔如肝片吸蟲產(chǎn)生的物質(zhì)可能防止免疫效應(yīng)細(xì)胞發(fā)揮作用，或防止特異抗體的附著。吸蟲的分泌物/排泄物能在體外殺〔ADCC〕是機(jī)體抗寄生蟲感染的一種免疫防范反響，無論在蠕蟲、原蟲，還是在體內(nèi)或體外均得到證明，而且認(rèn)為是殺傷蠕蟲的重要ADCCADCC殺傷的靶子，主要是幼蟲，如血吸蟲童蟲、IL2是激活T免疫中必有可少。IFNγ在免疫應(yīng)答中除了促進(jìn)MΦ加工抗原外，在瘧疾免疫方面，它可起佐20世紀(jì)80年月后，TNF在寄生蟲感染中的重要性受到留意；在瘧疾感染中人們首先生疏IFN參與簡(jiǎn)單的殺死瘧原蟲過程?，F(xiàn)已清楚，瘧原蟲刺激淋巴細(xì)胞，所產(chǎn)生的IFNγ作用于MФ使之產(chǎn)生TNF，后者作用于MФ和中性粒細(xì)胞，促使它們產(chǎn)生氧自由基，直接參與殺滅瘧原蟲。這一過程對(duì)宿主是有利的。在有或無抗體存在的條件下，均可使嗜酸性粒細(xì)胞、中性粒細(xì)胞和MФ結(jié)合于童蟲引起特異的損傷。五、寄生蟲蟲苗寄生蟲免疫學(xué)爭(zhēng)論的重要目的之一是制備最有效的寄生蟲蟲苗，進(jìn)展特異性免疫預(yù)防，無論爭(zhēng)論工作如何困難，人們信任，人類肯定會(huì)最終戰(zhàn)勝寄生蟲的危害。從科學(xué)的角度講，奮的進(jìn)展。(一)寄生蟲蟲苗的種類(1)致弱蟲苗致弱苗是最早期也可以說是第一代寄生蟲蟲苗態(tài)的人或動(dòng)物對(duì)同種寄生蟲的再感染均表現(xiàn)不同程度的抵抗力(1)(2)錐蟲)在易感動(dòng)物或培育基上反復(fù)傳代后，其致病力會(huì)不斷下降，但仍保持抗原性。故可以通過傳代致弱法獲得弱毒蟲株制備蟲苗。(2)錐蟲)在易感動(dòng)物或培育基上反復(fù)傳代后，其致病力會(huì)不斷下降，但仍保持抗原性。故可以通過傳代致弱法獲得弱毒蟲株制備蟲苗。2050Callow(1979)就以體內(nèi)傳代方式成功地制備了至今在一些地區(qū)還在使用的牛巴貝斯蟲弱毒蟲苗15代以上，使蟲體的毒力下降到不能使被接種牛發(fā)病的程度。以這種蟲體蟲體處于臨時(shí)致弱狀態(tài)，一旦回到自然狀態(tài)，經(jīng)媒介蜱的反復(fù)傳代以后，有的可恢復(fù)毒力；其二是有傳播?？谔阋吆桶籽〉奈＜保黄淙遣灰左w外保存和運(yùn)輸。目的。當(dāng)前，很多寄生蟲的體外培育方法均已建立并制成商品苗，而廣泛推廣使用。例如，艾美爾球蟲的雞胚傳代致弱苗(如英國(guó)的Paracox和Livacox弱毒苗)和牛泰勒蟲的淋巴細(xì)胞傳代致弱苗都是很成功的體外傳代致弱苗。射線致弱蟲株：早在1914年Halbertdter就指出用鐳γ射線照耀可致弱錐蟲的感染力。此后，人們幾乎以不同的放射尤其以6C、γ射線用的最)和劑量對(duì)全部的寄生蟲進(jìn)展過照耀減毒試驗(yàn)，其結(jié)果也不統(tǒng)一。其中最成功的要屬對(duì)牛網(wǎng)尾線蟲的試驗(yàn)。Jarrett(1957)首先以X 射線照耀法制備了牛網(wǎng)尾線蟲苗。據(jù)報(bào)道，胎生網(wǎng)尾線蟲和絲狀網(wǎng)尾線蟲的致弱苗可以誘導(dǎo)90%以上的保護(hù)率，而犬鉤口線蟲的致弱童蟲苗已經(jīng)商品化。和牛巴貝斯蟲進(jìn)展過化藥致弱試驗(yàn)，但實(shí)踐說明，這種方法有導(dǎo)致產(chǎn)生耐藥性蟲株的危急，目前也不被人們所使用。抗原苗 由于致弱苗存在諸多的缺陷，包括用于制備蟲苗用的蟲體來源緊急、保存和運(yùn)輸有肯定困難限制了其在生產(chǎn)中的應(yīng)用使得這些致弱蟲苗的爭(zhēng)論大多數(shù)只停留在試驗(yàn)室階段目前人們已將重點(diǎn)轉(zhuǎn)移到寄生蟲抗原苗制備寄生蟲抗原苗是將寄生蟲的有效抗原成分提取出來，加以相應(yīng)的佐劑再免疫動(dòng)物。實(shí)踐證明這種類型的蟲苗是最有前途的蟲苗制備這類蟲苗的關(guān)鍵是確定和大量提取寄生蟲有效的保護(hù)性抗原制備對(duì)宿主的保護(hù)抗原苗有兩種，即傳統(tǒng)寄生蟲蟲苗和分子水平寄生蟲苗。ES蟲體浸出物，經(jīng)過濃縮等處理后免疫動(dòng)物。這種方法遇到的一個(gè)重要問題是蟲體來源有限。在體外大量生殖，從而為提取大量的蟲體ES抗原奠定了根底，其中最成功的要屬巴貝斯蟲培育的保護(hù)效果。分子水平寄生蟲抗原苗：制備有效寄生蟲蟲苗的關(guān)鍵是獲得大量的宿主保護(hù)性抗原。一般常規(guī)方法，包括層析技術(shù)所提取的抗原也只能進(jìn)展小型試驗(yàn)室試驗(yàn)。隨著重組DNA學(xué)方法是解決一代寄生蟲蟲苗制備方法的最有效途徑之一。獲得同時(shí)表達(dá)的多價(jià)載體。蟲細(xì)胞系統(tǒng)。具體是：因的載體主要有質(zhì)粒載體和λλ文庫(kù)是格外有利的，另外，還可以用抗寄生蟲特異抗體對(duì)表達(dá)子直接進(jìn)展原位篩選，目前，20含有內(nèi)含子基因，不具有分泌功能，重組抗原易形成包含體；有些寄生蟲抗原為糖蛋白，大腸桿菌內(nèi)缺少使重組蛋白質(zhì)糖基化的功能因的細(xì)菌，我們知道BCG是世界上應(yīng)用最廣泛也是最有效的疫苗之一，因此有人設(shè)想利用BCG的高免疫特點(diǎn)，將寄生蟲等抗原基因在分枝桿菌內(nèi)表達(dá)，制成復(fù)合型卡介苗，然后免疫動(dòng)物母菌中得到了表達(dá)，Loison(1989)將曼氏血吸蟲谷胱甘肽S轉(zhuǎn)移酶(GST)基因在酵母菌中高效GST具有蟲源性GSTGST的主要對(duì)于表達(dá)寄生蟲膜蛋白和對(duì)蛋白質(zhì)二級(jí)或三級(jí)構(gòu)造依靠性強(qiáng)的抗原最為有利COS7子外表抗原和環(huán)子孢子(CSP)抗原基因，以及弓形蟲P30基因，將表達(dá)產(chǎn)物連接上肯定的信號(hào)肽序列以后，就可以分泌到細(xì)胞外，并保持完整的抗原性。候選抗原基因的篩選工作主要是用慢性感染動(dòng)物的抗血清或用特定抗原提取物制備的抗血清進(jìn)展Balloul(1987)用重組的Sm28GST(曼氏血吸蟲28kD谷胱甘肽S轉(zhuǎn)移酶)免疫大鼠獲得成功，隨后，Johnson等于1989年也克隆到具有保護(hù)作用的羊帶絳蟲的45W(分子量為47~52kD)抗原基因。羊帶絳蟲45WGST融合蛋白是第一例成功的抗寄生蟲重組蟲苗，45WGST也可以誘導(dǎo)較高水平的IgG１，IgG１的水平與保護(hù)率呈正相關(guān)，該重組抗原馬上商品化。此外，還有16kD和18kD的抗原分子也已被克隆，而且被證明有保護(hù)力，這些抗原可以交替使用，避開羊羔體內(nèi)母源抗體對(duì)相應(yīng)抗原初次免疫的干擾。Lightowlers(1995)還報(bào)道了用細(xì)粒棘球蚴重組抗原Eg95 EST融合蛋白可以在綿羊誘導(dǎo)高達(dá)95%以上的保護(hù)率。Aronon(1971)提出用化學(xué)了人工模擬病原(細(xì)菌、病毒、寄生蟲)組分的合成肽爭(zhēng)論時(shí)代。1983(CSP)的基因，序列分析表明，CSP1212化學(xué)合成的該氨基酸序列免疫猴，誘導(dǎo)產(chǎn)生了子孢子中和抗體。Good等(1987)將惡性瘧原CSPT淋巴細(xì)胞和B結(jié)果說明，可激發(fā)宿主產(chǎn)生高滴度的抗體應(yīng)答。制備合成肽蟲苗的關(guān)鍵是對(duì)保護(hù)性抗原的DNA或氨基酸序列分析。目前還不能將整個(gè)抗原多肽都合成出來，因此對(duì)抗原打算簇的分析至關(guān)重要。另外，載體和免疫增加劑的選擇也是不行少的，由于合成肽一般均為寡肽作為抗原免疫的效果不抱負(fù)。基因工程抗體苗20世紀(jì)80(hybridhybrdoma)技術(shù)生產(chǎn)雙特異性McAb據(jù)抗體也是抗原及在多種免疫細(xì)胞上都有Fc受體的理論，抗體是向免疫細(xì)胞遞呈抗原的最體，也稱為抗原性抗體(antigenizedantibody)。通過抗體本身的抗原性和抗原遞呈作用，增加抗原的免疫原性。目前，這一大膽設(shè)想已在寄生蟲蟲苗研制過程中進(jìn)展了初步嘗試。Sollazzo(1990)將惡性瘧原蟲CSPB淋巴細(xì)胞打算簇(一個(gè)富含脯氨酸四肽重復(fù)排列基因)移殖到鼠抗體H的抗體；②可在寄生蟲外表打洞的抗體—穿孔素(perforin)雜交分子；③可突破寄生蟲表膜宿實(shí)施，必將開創(chuàng)寄生蟲蟲苗爭(zhēng)論的時(shí)代。抗獨(dú)特型抗體苗(antiidiotypicvaccine)1974年，Jerne提出的著名免疫調(diào)整網(wǎng)絡(luò)學(xué)說，為抗獨(dú)特型抗體疫(蟲)苗的爭(zhēng)論供給Nisonaff(1981)首次提出具有內(nèi)影像作用的抗Id的旋毛蟲幼蟲等，可用抗Id代替；②非肽類抗原無法用基因工程等方法大量合成，這類蟲體抗原可用抗IdMcAbMcAb能誘導(dǎo)抗Id抗體產(chǎn)生。最早進(jìn)展寄生蟲抗Id應(yīng)用爭(zhēng)論的是Neukenzweigs(1980)，他IdId原免疫動(dòng)物，獲得了抗瘧原蟲抗體。但后來，有人對(duì)該抗Id抗體提出了疑問。Sack(1982)以抗羅德西亞錐蟲的McAb成功地在SJL小鼠體內(nèi)誘導(dǎo)產(chǎn)生了抗Id是第一個(gè)寄生蟲抗Id抗體)，以此抗體為抗原免疫的BALB/C小鼠能產(chǎn)生可抵抗該錐蟲感染Sacks(1985)又研制出了枯氏錐蟲外表糖蛋白(72kD)的抗Id72kDGrzych(198538kD烈的免疫原性，在嗜酸性白細(xì)胞的協(xié)同下，抗該抗原的McAb對(duì)蟲體具有明顯的殺傷作用。McAbId76%。另?yè)?jù)報(bào)道，Percy(1988)用曼氏血吸蟲蟲卵及幼蟲的可溶性抗原制備McAb，用抗Id抗體免疫的動(dòng)物，對(duì)同種蟲體的攻擊可產(chǎn)生33%～100%的保護(hù)力。此外，Stevenson(1986Bhogal(1988)還分別報(bào)道了用抗獨(dú)特型抗體預(yù)防黑熱病和禽Id抗體的免疫效果均不穩(wěn)定，這可能與抗體的制備方法、免疫途徑和免疫劑量有關(guān)，其中最重要的是應(yīng)當(dāng)相對(duì)提高針對(duì)寄生蟲的宿主保護(hù)性抗原的抗獨(dú)特型抗體的含量。核酸疫苗 現(xiàn)有寄生蟲疫苗由于種種緣由其保護(hù)率還不能令人滿足核酸疫苗的消滅，給抗寄生蟲免疫帶來了期望。迄今為止，主要開展了對(duì)瘧原蟲、囊蟲、血吸蟲及利什曼原蟲等核酸疫苗的爭(zhēng)論。(二)當(dāng)前研制的幾種重要寄生蟲蟲苗瘧疾蟲苗目前，瘧疾是危害人類最重要的侵襲病之一。據(jù)WHO199220050年，最早是承受死蟲苗或射線致弱苗，盡管這些蟲苗都有肯定的保護(hù)作用，但效果還不盡人意。的主要有：①抗子孢子苗；②抗裂殖子苗；③多價(jià)雜合抗瘧蟲苗sp66。子孢子是瘧原蟲經(jīng)蚊蟲叮咬進(jìn)入哺乳動(dòng)物宿主的初級(jí)階段其外表有一種蛋白質(zhì)稱為環(huán)子孢子蛋白(circumsporozoiteprotein，CSP)，其分子量約為40～60kD，不同的成熟子孢子外表都有這種蛋白已經(jīng)證明，CSP是瘧原蟲抗原中最重要的宿主保護(hù)性抗原之一。在其多肽鏈的中心區(qū)含有B淋巴細(xì)胞、T淋巴細(xì)胞表位，其中尤以B淋巴細(xì)胞表位最重要。80年月中期，紐約大學(xué)科學(xué)家們成功地克隆了CSP基因，這一成就被認(rèn)為是瘧疾蟲苗的里程碑。此后，該基因的重組多肽或是與載體蛋白相連，或是以融合蛋白的形式，對(duì)其中的很多候選抗原進(jìn)展了臨床試驗(yàn)。Herrington(1992)在昆蟲細(xì)胞內(nèi)表達(dá)了幾乎整個(gè)CSP，并與佐劑Al(OH)3一起免疫了20個(gè)志愿者，結(jié)果用westernblot檢查，可在全部被免疫者體內(nèi)測(cè)試到特異抗體認(rèn)為該重組抗原對(duì)人體有免疫原性目前抗子孢子蟲苗的爭(zhēng)論重點(diǎn)主要集中在如何增加其T淋巴細(xì)胞表位的免疫原性方面。裂殖子(merozoite)是瘧原蟲的紅內(nèi)期蟲體，也是瘧原蟲的主要致病時(shí)期。在這期蟲體上的蟲苗候選抗原主要是裂殖子外表抗原(MSA1、MSA2)和RESA。MSA1是裂殖子主要外表抗原的前體，分子量在180～220kD之間，由1640個(gè)氨基酸組成。有人把MSA1的多個(gè)B淋巴細(xì)胞和T淋巴細(xì)胞表位與RESA雜合，可誘導(dǎo)動(dòng)物產(chǎn)生明顯的體液和細(xì)胞免疫應(yīng)答，并獲得抗感染免疫?，F(xiàn)已證明，MSA1的抗原打算簇在其多肽鏈的N 末端該部位的序列保守且同時(shí)含有B淋巴細(xì)胞和T淋巴細(xì)胞激活表位，是較抱負(fù)的蟲苗候選抗原MSA2是一種分子量為45kD的蛋白質(zhì)，其肽鏈的N末端均比較保守，但其中間區(qū)才是免疫原性區(qū)，可誘發(fā)高滴度的抗體應(yīng)答。鑒于MSA2具有很多可激活B淋巴細(xì)胞和T抗原之一。RESA155kD蛋白質(zhì)，其主要抗原打算簇編碼在該3′末端。它主要含有TIL4雜合抗瘧蟲苗sp66(35.1、55.1、83.1CSP的重復(fù)位點(diǎn)與ThPatarroyo(1988)用該蟲苗免疫人群獲得較好的保護(hù)苗的免疫力和保護(hù)力，且與年齡無關(guān)。用該抗原免疫小鼠，其血清可抑制細(xì)胞；②裂殖子入侵紅細(xì)胞；③蚊體中卵囊的發(fā)育。由此提示，該蟲苗對(duì)惡性瘧原蟲各期都可能有效。進(jìn)一步試驗(yàn)證明sp66蟲苗對(duì)人群的有效保護(hù)率可達(dá)66.6%～82.3%。經(jīng)三次免疫的651：1600Sedegah等(1994)用含約氏瘧原蟲環(huán)子孢子蛋白(CSP)基因的真核表達(dá)載體，肌肉注射CTL孢子免疫的小鼠。核酸疫苗接種后，用5×105子孢子攻擊感染后的肝期原蟲負(fù)荷下降86%；2~310268%的小鼠具有保護(hù)基因主要有：CSP、MSA1、MSA2、SSP2、HEP17、EXP1RESA1997NatureQS217個(gè)志愿者經(jīng)感染有瘧原蟲的蚊子反復(fù)叮咬后有6人獲得了保護(hù)。弓形蟲蟲苗近幾年來，隨著AIDS病人伴發(fā)弓形蟲病的漸漸覺察，各國(guó)加緊了對(duì)弓形蟲病免疫學(xué)爭(zhēng)論。爭(zhēng)論覺察，弓形蟲約有1000種蛋白質(zhì)，其中有三類蛋白質(zhì)被認(rèn)為是蟲苗的候選蛋白：①外表蛋白類，包括SAG1(P30)、SAG2(P22SAG3(P43)；②致密顆粒(densegranule)內(nèi)的分子，包括GRA1、GRA2、GRA3、GRA4和GRA5；③頂器內(nèi)的細(xì)胞穿透因子(penetrationenhancingfactor，PEF)，包括ROP1和ROP2(P54)。SAG1(P30)是弓形蟲中含量最多的一種蛋白質(zhì)，由磷酸酯酰肌醇(GPI)錨定(anchored)在速殖子外表，占整個(gè)速殖子蛋白的5%，其分子量為30～35kD。SAG1只在速殖子表達(dá)，但在全局部別株中保守。在全部急慢性的動(dòng)物和人以及生兒的血清中都可以檢測(cè)到特異性抗P30P30擊具有很強(qiáng)的抵抗力。進(jìn)一步測(cè)試覺察，鼠血清中IgG、IgM、IgE、IgA(包括分泌型IgA)IFNγP30可誘導(dǎo)Th1Th2Boothroyd(1991)以P30saponin、quilAliposomes100%的保護(hù)，6P30GRA1(P23)和GRA2性McAb可明顯抑制蟲體的感染性。以蟲源性GRA1和GRA2做成蟲苗，可使小鼠抵抗強(qiáng)毒蟲株的攻擊。有報(bào)道認(rèn)為，GRA1和GRA2主要是通過誘導(dǎo)CD8 +細(xì)胞毒性T細(xì)胞(CTL)的功能來實(shí)現(xiàn)增加免疫的。值得留意的是，紐約大學(xué)的科學(xué)家首先開頭了對(duì)弓形蟲轉(zhuǎn)基因的爭(zhēng)論，他們通過弓形蟲的一系列基因轉(zhuǎn)移或轉(zhuǎn)化獲得熱敏型突變株(therm sensitivemutants，Ts)Ts型蟲體是人工制造的弱毒株免疫試驗(yàn)說明，Ts 4可使動(dòng)物抵抗強(qiáng)毒蟲體的攻擊。CTLIFN西蘭都有用這種減毒蟲制備的商品蟲苗。

γ巴貝斯蟲蟲苗巴貝斯蟲病是一種重要的血液原蟲病，尤其對(duì)養(yǎng)牛業(yè)的危害更為嚴(yán)峻。據(jù)統(tǒng)計(jì)，世界上有1.2×109頭牛，其中大多數(shù)位于巴貝斯蟲病的流行區(qū)。我國(guó)也是巴貝斯蟲病的重要疫區(qū)，每年都有大批動(dòng)物(牛、馬、犬等)感染巴貝斯蟲病。對(duì)巴貝斯蟲蟲苗的爭(zhēng)論始于本世紀(jì)50年月。可以這樣講，巴貝斯蟲蟲苗的爭(zhēng)論歷史代的爭(zhēng)論中都進(jìn)展過成功的嘗試。最初的巴貝斯蟲蟲苗是由Callow等人研制的傳代弱毒苗，他們將牛巴貝斯蟲在犢牛體內(nèi)反復(fù)機(jī)械傳代的程度。這種蟲苗在澳大利亞被使用了20多年，為該國(guó)的養(yǎng)牛業(yè)建立了很大的功績(jī)。進(jìn)入2070大量的蟲體ES抗原，與saponin等佐劑混合制備的抗原苗開頭取代弱毒苗。其中牛巴貝的主要蟲苗。2080國(guó)外又開頭爭(zhēng)論巴貝斯蟲的基因工程苗。其中進(jìn)展較為快速的還屬對(duì)牛巴貝斯蟲(包括雙芽巴貝斯蟲)的爭(zhēng)論。牛巴貝斯蟲的宿主保護(hù)性抗原(Bv60、Bv225)、雙芽巴貝斯蟲抗原(P50、P58P70)、羊巴貝斯蟲抗原(Bv60.14(Bv60/P58)的氨基酸組成及基因序列均已分析清楚。其中牛巴貝斯蟲的Bv60和雙芽巴貝斯蟲的P58經(jīng)建立。由兩種重組抗原所制備的型蟲苗正在澳大利亞進(jìn)展臨床試驗(yàn)。血吸蟲蟲苗的基困工程苗和抗Id2080GreeneBenacerraf(1980)證明抗原皮內(nèi)注射途徑能有效地刺激細(xì)胞免疫的根底上導(dǎo)特異性免疫力的爭(zhēng)論大量地開展起來。James(1984)應(yīng)用凍融的曼氏血吸蟲抗原加BCG，皮內(nèi)注射免疫小鼠，結(jié)果可使小鼠的染蟲率下降35%～70%。P