一種治療心肌炎的低分子硫酸軟骨素的制備方法

一種治療心肌炎的低分子硫酸軟骨素的制備方法一種治療心肌炎的低分子硫酸軟骨素的制備方法本發(fā)明公開了一種治療心肌炎的低分子硫酸軟骨素的制備方法，步驟包括：將原料經(jīng)過食砜節(jié)桿菌發(fā)酵液發(fā)酵，原料中硫酸軟骨素經(jīng)過酶解得到低分子硫酸軟骨素；所制備的低分子硫酸軟骨素素中硫酸軟骨素二糖含量在97%以上，其分子量在450-480之間，硫酸軟骨素A含量在70-95%之間，硫酸軟骨素C含量在5-25%之間。本發(fā)明制備方法操作方便、周期短，生產(chǎn)成本低，低分子硫酸軟骨素治療好，純度高，可用于大規(guī)模工業(yè)化生產(chǎn)，經(jīng)過大鼠試驗，對心肌細胞損傷修復效果顯著?！緦＠f明】—種治療心肌炎的低分子硫酸軟骨素的制備方法【技術(shù)領(lǐng)域】[0001]本發(fā)明涉及一種硫酸軟骨素的制備方法，尤其涉及一種治療心肌炎的低分子硫酸軟骨素的制備方法?！颈尘凹夹g(shù)】[0002]硫酸軟骨素(ChondroitinSulfate,CS)是存在于人和動物結(jié)締組織中的酸性黏多糖，主要分布于軟骨、骨、肌腱、肌膜和血管壁中，由D-葡糖醛酸和N-乙酰-D-氨基半乳糖以1，3苷鍵連接形成二糖，二糖之間以β_1，4苷鍵連接而成。CS的相對分子質(zhì)量(Mr)一般在20X103以上，當Mr降低小于IOX103時，常被稱為低分子量硫酸軟骨素(LMWCS)。[0003]CS作為蛋白聚糖的組成部分，存在于細胞內(nèi)顆粒、細胞膜、基底膜和細胞外基質(zhì)中，通過糖鏈中特定的結(jié)構(gòu)域與細胞因子、粘附因子或她們的受體特異性結(jié)合，發(fā)揮著重要的生理學功能，也與眾多病理過程息息相關(guān)。CS作為臨床藥物使用也近半個世紀之久，在歐、美、日等發(fā)達國家，因其具有抗關(guān)節(jié)炎、降血脂、抗凝血、抗動脈粥樣硬化、心臟病、抗病毒和抗腫瘤、減少鉬類藥物腎毒性等多種生物活性而得到廣泛應用。但由于CS分子量較大，親水集團多，脂溶性差，故體內(nèi)吸收不完全，生物利用度低的不足也一直困擾著CS類藥品的大規(guī)模應用。而LMWCS相對普通CS而言，因Mr降低而更有利于被機體吸收和利用，在藥用、保健品和化妝品等方面有巨大的應用潛力。[0004]LMWCS一般通過CS產(chǎn)品的降解來制備，主要有酸水解法和酶法。酸降解反應產(chǎn)物中雜質(zhì)較多且不易除去，處理須耗費大量時間，反應過程中硫酸軟骨素分子上的硫酸基團也會不同程度的脫落，且造成環(huán)境污染。相比較之下，酶解法反應條件溫和，污染小且工藝簡單易控，亦不會造成CS分子上硫酸基團的破壞，更適合于LMWCS的工業(yè)化生產(chǎn)。[0005]但是酶解法對使用的酶有很高的要求，需要特異的軟骨素酶，但目前國內(nèi)尚未開發(fā)出有自主知識產(chǎn)權(quán)的軟骨素酶產(chǎn)生菌，只能以高昂的價格從國外進口，從而大大增加了生產(chǎn)成本。【發(fā)明內(nèi)容】[0006]本發(fā)明的目的在于克服現(xiàn)有技術(shù)的不足，提供一種治療心肌炎的低分子硫酸軟骨素的制備方法。[0007]為實現(xiàn)上述目的，本發(fā)明所采用的技術(shù)方案是:一種治療心肌炎的低分子硫酸軟骨素的制備方法，步驟包括:將原料經(jīng)過食砜節(jié)桿菌發(fā)酵液發(fā)酵，原料中硫酸軟骨素經(jīng)過酶解得到低分子硫酸軟骨素；所制備的低分子硫酸軟骨素素中硫酸軟骨素二糖含量在97%以上，其分子量在450-480之間，硫酸軟骨素A含量在70-95%之間，硫酸軟骨素C含量在5-25%之間。[0008]進一步的，所述原料指雞軟骨、豬軟骨或牛軟骨的一種或幾種混合。[0009]進一步的，所述硫酸軟骨素二糖分子結(jié)構(gòu)如下:【權(quán)利要求】1.一種治療心肌炎的低分子硫酸軟骨素的制備方法，其特征在于，步驟包括:將原料經(jīng)過食砜節(jié)桿菌發(fā)酵液發(fā)酵，原料中硫酸軟骨素經(jīng)過酶解得到低分子硫酸軟骨素；所制備的低分子硫酸軟骨素素中硫酸軟骨素二糖含量在97%以上，其分子量在450-480之間，硫酸軟骨素A含量在70-95%之間，硫酸軟骨素C含量在5-25%之間。2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的治療心肌炎的低分子硫酸軟骨素的制備方法，其特征在于:所述原料指雞軟骨、豬軟骨或牛軟骨的一種或幾種混合。3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的治療心肌炎的低分子硫酸軟骨素的制備方法，其特征在于:所述硫酸軟骨素二糖分子結(jié)構(gòu)如下:4.根據(jù)權(quán)利要求1或3所述的治療心肌炎的低分子硫酸軟骨素的制備方法，其特征在于:所述硫酸軟骨素二糖含量在98.5%以上，分子量在455-460之間。5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的治療心肌炎的低分子硫酸軟骨素的制備方法，其特征在于:所述硫酸軟骨素A含量在70-80%之間，硫酸軟骨素C含量在10-15%之間。6.根據(jù)權(quán)利要求1所述的治療心肌炎的低分子硫酸軟骨素的制備方法，其特征在于:所述食砜節(jié)桿菌發(fā)酵液培養(yǎng)基組分為w/v:硫酸軟骨素0.7-0.9%,KH2PO40.01-0.03%、酵母浸粉0.5-0.7%、MgSO4.7H20含量0.7-0.9%、pH值5_7;發(fā)酵條件為:按1.5%v/v接種量將種子菌液接入發(fā)酵罐中于20-35°C，100_300r/min振蕩通氣培養(yǎng)48_96h。7.根據(jù)權(quán)利要求1所述的治療心肌炎的低分子硫酸軟骨素的制備方法，其特征在于:所述發(fā)酵液酶解硫酸軟骨素的條件為每升發(fā)酵液酶解硫酸軟骨素0.1-0.6kg，酶解時間5-8h,酶解溫度30-45°C，酶