無(wú)菌生產(chǎn)車(chē)間的環(huán)境監(jiān)控

無(wú)菌生產(chǎn)車(chē)間的環(huán)境監(jiān)控微生物室SterileProductionTechnicalForum無(wú)菌生產(chǎn)車(chē)間的環(huán)境監(jiān)控背景知識(shí)環(huán)境監(jiān)控的目的、要求以及關(guān)鍵因素環(huán)境監(jiān)控實(shí)際情況討論SterileProductionTechnicalForum背景知識(shí)-法規(guī)文件ISO14644潔凈室及相關(guān)控制環(huán)境美國(guó)聯(lián)邦標(biāo)準(zhǔn)209EFDAcGMP—無(wú)菌藥品的生產(chǎn)，2004版USP1116潔凈室及其它環(huán)境控制區(qū)的微生物學(xué)評(píng)價(jià)歐盟GMP附錄一“無(wú)菌藥品的生產(chǎn)〞(2003)8-G41-2-M環(huán)境監(jiān)測(cè)指南中國(guó)藥品生產(chǎn)質(zhì)量管理標(biāo)準(zhǔn)SterileProductionTechnicalForum背景知識(shí)-術(shù)語(yǔ)空氣懸浮粒子計(jì)數(shù)〔也稱(chēng)總懸浮粒子計(jì)數(shù)〕：檢測(cè)粒徑大于等于0.5μm的粒子數(shù)?？諝饣钚粤Ｗ佑?jì)數(shù)〔也稱(chēng)空氣浮游菌計(jì)數(shù)〕：以總懸浮粒子數(shù)為依據(jù)的級(jí)區(qū)劃分標(biāo)準(zhǔn)中所給定的相應(yīng)空氣浮游菌限度。潔凈室〔cleanroom〕：指空氣懸浮粒子水平符合特定衛(wèi)生級(jí)別要求的房間。潔凈區(qū)〔cleanzone〕：指空氣懸浮粒子及環(huán)境微生物均符合特定衛(wèi)生級(jí)別要求的區(qū)域。SterileProductionTechnicalForum背景知識(shí)-術(shù)語(yǔ)產(chǎn)品接觸區(qū)：在環(huán)境控制區(qū)內(nèi)與產(chǎn)品、容器或密封件直接接觸的區(qū)域或外表，這些會(huì)導(dǎo)致產(chǎn)品和容器-密封件系統(tǒng)被微生物污染。環(huán)境監(jiān)控方案：通過(guò)SOP執(zhí)行的書(shū)面性方案，對(duì)用于監(jiān)測(cè)空氣懸浮粒子及環(huán)境微生物〔如空氣、設(shè)施設(shè)備外表及人員衣服〕的方法和規(guī)那么有詳細(xì)規(guī)定。監(jiān)控方案不僅包括取樣點(diǎn)、取樣頻率，還包括超出警戒或糾偏標(biāo)準(zhǔn)時(shí)所要進(jìn)行的調(diào)查和糾偏措施。還應(yīng)說(shuō)明監(jiān)測(cè)數(shù)據(jù)的趨勢(shì)分析方法。SterileProductionTechnicalForum背景知識(shí)-術(shù)語(yǔ)糾偏標(biāo)準(zhǔn)：在SOP中規(guī)定的環(huán)境控制區(qū)的微生物和懸浮粒子限度，如果超出此限度，必須進(jìn)行偏差調(diào)查并進(jìn)而采取相應(yīng)糾偏措施。警戒標(biāo)準(zhǔn)：在SOP中規(guī)定的環(huán)境控制區(qū)的微生物和懸浮粒子限度，如果超出此限度，那么需要進(jìn)行偏差調(diào)查，確認(rèn)生產(chǎn)工藝仍處于受控狀態(tài)。趨勢(shì)分析：對(duì)與時(shí)間、班次、設(shè)施等相關(guān)的環(huán)境取樣結(jié)果進(jìn)行匯總分析。這些資料可用于評(píng)估一個(gè)生產(chǎn)工藝是否處于受控狀態(tài)，并確定環(huán)境控制區(qū)是否需要進(jìn)行再驗(yàn)證或維修和消毒。SterileProductionTechnicalForum背景知識(shí)-潔凈區(qū)的劃分SterileProductionTechnicalForum背景知識(shí)-環(huán)境微生物的生態(tài)

空氣微生物即使空氣中的水分和營(yíng)養(yǎng)很少，但在未凈化的空氣中發(fā)現(xiàn)了大量的微生物。細(xì)菌：產(chǎn)芽孢類(lèi)－芽孢桿菌屬、生孢梭菌屬 不產(chǎn)芽孢－葡萄球菌屬、鏈球菌屬和棒桿菌屬霉菌：青霉、曲霉、毛霉等酵母菌：紅酵母菌屬空氣中的微生物數(shù)量與環(huán)境內(nèi)的活動(dòng)和分布的顆粒數(shù)以及濕度有關(guān)。微生物往往是由顆粒、皮膚、衣服、液滴以及講話、咳嗽和噴嚏造成的唾液帶入空氣中的?？諝馕⑸锏奶幚碛腥齻€(gè)方法：過(guò)濾、化學(xué)消毒和紫外消毒SterileProductionTechnicalForum背景知識(shí)-環(huán)境微生物的生態(tài)

水系統(tǒng)微生物水中微生物的狀況對(duì)制藥企業(yè)尤其是無(wú)菌產(chǎn)品生產(chǎn)企業(yè)來(lái)說(shuō)是至關(guān)重要的。未經(jīng)處理的水：假單胞菌屬、產(chǎn)堿桿菌屬、產(chǎn)黃菌屬、沙雷氏菌屬主要特征：對(duì)營(yíng)養(yǎng)要求比較低，適合較低溫度成長(zhǎng)的革蘭染色陰性桿菌SterileProductionTechnicalForum背景知識(shí)-環(huán)境微生物的生態(tài)

皮膚微生物細(xì)菌－葡萄球菌屬〔金黃色葡萄球菌〕、不動(dòng)桿菌屬、產(chǎn)堿桿菌屬真菌－瓶形酵母、表皮蘚菌屬、小孢子菌屬等鼻腔微生物含有大量的金黃色葡萄球菌和腐生性的鏈球菌防止人員身上的微生物污染產(chǎn)品必須要對(duì)人員進(jìn)行有效的衛(wèi)生和工藝培訓(xùn)以及定期的身體檢查。SterileProductionTechnicalForum環(huán)境監(jiān)控的目的、要求以及關(guān)鍵因素Monitoring:observationsmadebymeasurementinaccordancewithadefinedmethodandplantoprovideevidenceoftheperformanceofandinstallation. (ISO14644-2)環(huán)境監(jiān)控目的：對(duì)清潔、消毒措施的效果進(jìn)行評(píng)估對(duì)操作人員本身的行為標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行評(píng)價(jià)提供足夠的環(huán)境信息以證明環(huán)境是否處于受控狀態(tài)及時(shí)確定污染的可能途徑，以便在產(chǎn)品污染發(fā)生前采取措施來(lái)防止SterileProductionTechnicalForum環(huán)境監(jiān)控根本要求必須有一份符合法規(guī)要求的書(shū)面監(jiān)控方案來(lái)對(duì)潔凈室的環(huán)境進(jìn)行監(jiān)控，該方案的設(shè)計(jì)應(yīng)考慮到該區(qū)域的工藝，并基于對(duì)該區(qū)域的風(fēng)險(xiǎn)評(píng)估。環(huán)境監(jiān)控方案必須由有資質(zhì)的人員執(zhí)行并進(jìn)行結(jié)果分析。使用的監(jiān)控設(shè)備和儀表必須有嚴(yán)格的校驗(yàn)程序管理。必須定期地提供報(bào)告，來(lái)描述環(huán)境監(jiān)控的結(jié)果和糾偏的措施。SterileProductionTechnicalForum環(huán)境監(jiān)控〔方案〕的關(guān)鍵因素取樣點(diǎn)和取樣頻率 取樣類(lèi)型警戒標(biāo)準(zhǔn)、糾偏標(biāo)準(zhǔn)的設(shè)立 數(shù)據(jù)及趨勢(shì)分析 細(xì)菌鑒定 SterileProductionTechnicalForum取樣點(diǎn)和取樣頻率確實(shí)定取樣點(diǎn)和取樣頻率那些與產(chǎn)品相鄰近的區(qū)域，以及可能與產(chǎn)品直接接觸的空氣及設(shè)備外表或是容器和密封件系統(tǒng)的外表，均應(yīng)考慮取樣。對(duì)于這些關(guān)鍵區(qū)域的取樣，應(yīng)盡量在工藝結(jié)束后進(jìn)行，以防止直接接觸無(wú)菌外表，帶來(lái)外源性的污染。在SOP中詳細(xì)闡述所有環(huán)境監(jiān)控取樣點(diǎn)位置，以便可以對(duì)固定的監(jiān)控點(diǎn)進(jìn)行重復(fù)取樣，使數(shù)據(jù)結(jié)果更具可比性和科學(xué)性。SterileProductionTechnicalForumUSP29<1116>表2.指導(dǎo)性取樣頻率〔依潔區(qū)的重要性而定〕潔凈區(qū)取樣頻率100級(jí)或更高級(jí)別每班一次100級(jí)區(qū)毗連的支持性區(qū)域(如：10,000級(jí))每班一次其它支持性區(qū)域(100,000級(jí))每周二次可能與產(chǎn)品/容器相接觸的區(qū)域每周二次無(wú)菌生產(chǎn)區(qū)的其它支持性區(qū)域（該區(qū)域不與產(chǎn)品相接觸，通常為100,000級(jí)或更低）每周一次SterileProductionTechnicalForum取樣類(lèi)型懸浮粒子微生物空氣浮游菌取樣外表微生物取樣培養(yǎng)基及培養(yǎng)條件的選擇培養(yǎng)時(shí)間和溫度SterileProductionTechnicalForum空氣懸浮粒子原理：光脈沖信號(hào)經(jīng)光電二極管轉(zhuǎn)變成電脈沖信號(hào)，電脈沖次數(shù)反映粒子數(shù)，幅值反響粒徑。常見(jiàn)品牌為PMS,MetOne等?？諝飧∮尉鲃?dòng)采樣器用來(lái)測(cè)定空氣浮游菌，它們主要分為離心式，撞擊式和膜過(guò)濾式三種形式。SterileProductionTechnicalForum空氣沉降菌價(jià)廉、輕便空氣干擾較小時(shí)間較長(zhǎng)，至少為半小時(shí)，但不應(yīng)超過(guò)4小時(shí)接觸碟和棉拭子接觸碟適用于對(duì)平整的規(guī)那么性外表進(jìn)行取樣監(jiān)測(cè)，取樣面積為25cm2,屬于定量測(cè)試法拭子通常用于對(duì)不規(guī)那么外表(尤其是設(shè)備外表)進(jìn)行取樣，取樣面積為24～30cm2SterileProductionTechnicalForum警戒標(biāo)準(zhǔn)、糾偏標(biāo)準(zhǔn)的設(shè)立糾偏限度：符合中國(guó)GMP和歐洲GMP的要求，并且按照較嚴(yán)的標(biāo)準(zhǔn)執(zhí)行。另外，連續(xù)三次超過(guò)以下警戒限度視為超過(guò)一次糾偏限度。警戒限度：警戒標(biāo)準(zhǔn)是根據(jù)驗(yàn)證和歷史的運(yùn)行監(jiān)測(cè)結(jié)果制定的。SterileProductionTechnicalForum警戒限度潔凈級(jí)別空氣浮游菌（CFU/m3）表面微生物一般/地面（CFU/plate,25cm2）B22/5Ca105/10Cb205/10SterileProductionTechnicalForum人員監(jiān)測(cè)潔區(qū)內(nèi)的主要污染源來(lái)自于其中的人員，所以，控制人員帶來(lái)的污染是環(huán)境控制方案的最重要內(nèi)容之一。通過(guò)培訓(xùn)使所有在潔凈室及環(huán)境控制區(qū)工作的人員掌握相關(guān)的微生物學(xué)知識(shí)。培訓(xùn)應(yīng)包括無(wú)菌工藝的根本原理以及生產(chǎn)和操作程序與產(chǎn)品污染的相關(guān)性。工作于環(huán)境控制區(qū)的所有人員，均應(yīng)嚴(yán)格監(jiān)測(cè)。被監(jiān)測(cè)人員不限于生產(chǎn)操作人員，同時(shí)也包括環(huán)境監(jiān)測(cè)人員。對(duì)人員的監(jiān)測(cè)一般應(yīng)在生產(chǎn)開(kāi)始前或生產(chǎn)結(jié)束后進(jìn)行。SterileProductionTechnicalForum細(xì)菌鑒定GCM8－G41－2－MAprogrammeshallexisttodeterminethefrequencyofidentifyingenvironmentalisolates.必須制訂細(xì)菌鑒定程序來(lái)對(duì)環(huán)境檢出菌進(jìn)行頻率分析。對(duì)關(guān)鍵區(qū)及其鄰近區(qū)域內(nèi)所發(fā)現(xiàn)的污染菌進(jìn)行鑒別應(yīng)優(yōu)先于其他非關(guān)鍵區(qū)域的別離菌的鑒別。SterileProductionTechnicalForum培養(yǎng)基灌裝采用培養(yǎng)基代替藥品進(jìn)行無(wú)菌灌裝對(duì)無(wú)菌工藝進(jìn)行驗(yàn)證。此模擬工藝稱(chēng)之為“培養(yǎng)基灌封〞。將裝有培養(yǎng)基的密閉容器進(jìn)行培養(yǎng)以檢查微生物的生長(zhǎng)，然后對(duì)結(jié)果進(jìn)行評(píng)價(jià)，借以確定實(shí)際生產(chǎn)中產(chǎn)品污染的概率。培養(yǎng)基模擬灌封試驗(yàn)中由環(huán)境監(jiān)控獲得的數(shù)據(jù)，對(duì)評(píng)估生產(chǎn)線也是十分有益的。接受標(biāo)準(zhǔn)：批量警戒限度糾偏限度報(bào)廢限度5000111>5000122SterileProductionTechnicalForum環(huán)境監(jiān)控實(shí)際情況無(wú)菌車(chē)間的級(jí)區(qū)劃分和監(jiān)測(cè)頻率環(huán)境監(jiān)控程序趨勢(shì)分析及MRS2環(huán)境監(jiān)控軟件標(biāo)準(zhǔn)化的取樣步驟及時(shí)的偏差報(bào)告流程豐富的趨勢(shì)分析SterileProductionTechnicalForumThanks!SterileProductionTechnicalForum背景知識(shí)-法規(guī)文件ISO14644-1空氣潔凈度等級(jí)ISO14644-2潔凈室測(cè)試和監(jiān)測(cè)標(biāo)準(zhǔn)ISO14644-3儀器和測(cè)試方法ISO14644-4設(shè)計(jì)、施工和啟動(dòng)ISO14644-5潔凈室的運(yùn)行ISO14644-6術(shù)語(yǔ)和