傳染病的檢測(cè)技術(shù)進(jìn)展及質(zhì)量控制

關(guān)于傳染病的檢測(cè)技術(shù)進(jìn)展及質(zhì)量控制伴隨醫(yī)療衛(wèi)生事業(yè)的發(fā)展，人們對(duì)傳染病的防治也越來(lái)越重視。在醫(yī)院中大量傳染病標(biāo)本的檢測(cè)工作也變得十分重要。第2頁(yè),共83頁(yè)，2024年2月25日，星期天

傳統(tǒng)的檢測(cè)方法多種多樣，對(duì)于很多疾病的診斷有相當(dāng)大的輔助作用，傳染病病原體的準(zhǔn)確檢測(cè)是傳染病有效防控的前提，也是合理用藥的基礎(chǔ)。然而，傳統(tǒng)的病原體分離、培養(yǎng)等診斷方法不能完全滿足臨床治療和疾病控制的需要。新發(fā)展的傳染病診斷技術(shù)可有效彌補(bǔ)傳統(tǒng)方法的不足。第3頁(yè),共83頁(yè)，2024年2月25日，星期天傳統(tǒng)檢測(cè)方法第4頁(yè),共83頁(yè)，2024年2月25日，星期天新生檢測(cè)技術(shù)高通量酶聯(lián)免疫吸附PCR蛋白質(zhì)芯片技術(shù)生物傳感技術(shù)第5頁(yè),共83頁(yè)，2024年2月25日，星期天乙型病毒性肝炎的病原學(xué)檢查及其意義

第6頁(yè),共83頁(yè)，2024年2月25日，星期天電鏡下，HBV感染者血清中存在三種形式的顆粒：

1.小球形顆粒：直徑15-25nm，數(shù)量最多

2.管形顆粒：直徑22nm，長(zhǎng)50-230nm

3.大球形顆粒：直徑42nm，量少，完整顆粒，有傳染性僅由HBsAg構(gòu)成的空心顆粒，無(wú)核酸、無(wú)傳染性生物學(xué)特征第7頁(yè),共83頁(yè)，2024年2月25日，星期天大球形顆粒是完整的乙型肝炎病毒（HBV）顆粒，又稱Dane顆粒，分為包膜和核心兩部分包膜：含HBsAg、糖蛋白與細(xì)胞脂質(zhì)核心：含環(huán)狀雙股DNA、DNAP、HBcAg和HBeAg，是病毒復(fù)制的主體HBsAgHBeAgDNADNA-PHBcAgDane顆粒生物學(xué)特征第8頁(yè),共83頁(yè)，2024年2月25日，星期天HBV基因組又稱HBVDNA環(huán)狀部分雙股DNA全長(zhǎng)2182bp

長(zhǎng)的負(fù)鏈（L）分S、C、P、X區(qū)重疊，高利用率短的正鏈（S）長(zhǎng)度可變（50-80%）生物學(xué)特征第9頁(yè),共83頁(yè)，2024年2月25日，星期天HBV基因組結(jié)構(gòu)

編碼

pre-S1pre-S1蛋白

pre-S2pre-S2蛋白SHBsAgpre-C

HBeAgCHBcAgPDNAPXHBxAg生物學(xué)特征第10頁(yè),共83頁(yè)，2024年2月25日，星期天生物學(xué)特征第11頁(yè),共83頁(yè)，2024年2月25日，星期天生物學(xué)特征第12頁(yè),共83頁(yè)，2024年2月25日，星期天生物學(xué)特征第13頁(yè),共83頁(yè)，2024年2月25日，星期天開(kāi)放讀碼框架（ORF）及編碼蛋白S區(qū)前S1區(qū)：前S1蛋白（pre-S1）陽(yáng)性提示HBV存在和復(fù)制，慢性化前S2區(qū)：前S2蛋白（pre-S2）陽(yáng)性提示HBV復(fù)制

S區(qū)：HBsAg：感染標(biāo)志屬?zèng)Q定簇“a”亞型決定簇“d/y”和“w/r”C區(qū)

前C基因：HBeAg：陽(yáng)性提示患者高感染低應(yīng)答率

C基因：HBcAg：免疫原性強(qiáng)生物學(xué)特征第14頁(yè),共83頁(yè)，2024年2月25日，星期天開(kāi)放讀碼框架（ORF）及編碼蛋白P區(qū)最長(zhǎng)，編碼多種功能蛋白，參與HBV復(fù)制

DNA多聚酶：復(fù)制的主要酶體，有逆轉(zhuǎn)錄功能

RNA酶HX區(qū)

HBxAg：具反式激活作用，在HCC發(fā)生中起重要作用生物學(xué)特征第15頁(yè),共83頁(yè)，2024年2月25日，星期天乙肝五項(xiàng)檢查是用來(lái)判斷是否感染乙肝，粗略估計(jì)病毒復(fù)制水平的初步檢查，雖然項(xiàng)目少，檢查簡(jiǎn)單，但是意義非常重要。乙肝五項(xiàng)檢查分別是：1.表面抗原(HBsAg)2.表面抗體(抗HBs)3.е抗原(HBeAg)4.е抗體(抗HBe)5.核心抗體(抗HBc）乙肝五項(xiàng)又叫乙肝兩對(duì)半。病原學(xué)檢查第16頁(yè),共83頁(yè)，2024年2月25日，星期天乙型肝炎病毒血清學(xué)檢測(cè)臨床意義第17頁(yè),共83頁(yè)，2024年2月25日，星期天乙肝五項(xiàng)的檢測(cè)包括定性檢測(cè)和定量檢測(cè)；

定量檢測(cè)方法包括：化學(xué)發(fā)光免疫分析法（CLIA）、電化學(xué)發(fā)光免疫分析法、時(shí)間分辨熒光分析法（TRFIA）、放射免疫分析法（RIA）、微粒子酶免分析（MEIA）等定性檢測(cè)包括酶聯(lián)免疫分析法（ELISA）、乳膠分析法、金標(biāo)快速法等。病原學(xué)檢查第18頁(yè),共83頁(yè)，2024年2月25日，星期天1.乙肝五項(xiàng)定量檢查可以動(dòng)態(tài)觀察療效和對(duì)乙肝病情進(jìn)行監(jiān)測(cè)。乙肝五項(xiàng)定量檢查分析HBSAg和HBsAb濃度的變化，可以預(yù)見(jiàn)急性乙肝是不是處在恢復(fù)期。乙肝五項(xiàng)定量檢查分析HBeAg和HBeAb濃度的變化，可以反映病情變化和治療作用。HBcAb濃度的高低能夠反映病毒感染的狀況，高濃度的HBcAb提示乙肝急性感染;低濃度通常為恢復(fù)期或既往感染，有利于對(duì)慢性肝炎活動(dòng)性和非活動(dòng)性的判斷，可以用于慢性乙肝的分類。病原學(xué)檢查第19頁(yè),共83頁(yè)，2024年2月25日，星期天2.乙肝五項(xiàng)定量檢查分析能夠?qū)贵w是不是真正具有中和HBV的免疫力作出正確評(píng)價(jià)，對(duì)乙肝的預(yù)防起到監(jiān)督作用。HBsAb的含量在10mIU/ml以上的患者在用酶聯(lián)免疫吸附劑（ELISA）檢測(cè)查就可呈HBsAb陽(yáng)性結(jié)果，但并不提示機(jī)體都一定具有免疫力，而HBsAb的含量在10mIU/ml-100mIU/ml之間的樣本，定性雖為陽(yáng)性，但此時(shí)機(jī)體對(duì)乙肝病毒的免疫能力較弱，甚至不能預(yù)防HBV感染，仍然有感染HBV的危險(xiǎn)。作為定量檢查，依據(jù)HBsAb的含量能夠判斷機(jī)體對(duì)HBV的免疫狀態(tài)及乙肝疫苗的免疫效果。病原學(xué)檢查第20頁(yè),共83頁(yè)，2024年2月25日，星期天放射免疫技術(shù)優(yōu)點(diǎn)：1.是一項(xiàng)較為成熟的診斷技術(shù)，其夾心法、競(jìng)爭(zhēng)法的標(biāo)記原理為以后的檢測(cè)技術(shù)的發(fā)展奠定了基礎(chǔ)。2.其精度可達(dá)10-12mol/L。缺點(diǎn)：1.使用的放射性物質(zhì)（125I）對(duì)環(huán)境造成了污染2.對(duì)操作者的身體健康造成了危害；3.試劑有效期短，試劑盒的批間、批內(nèi)變異較大，標(biāo)準(zhǔn)曲線有效期短，必須每次定標(biāo)，造成浪費(fèi)；4.該法操作繁瑣，出報(bào)告時(shí)間長(zhǎng)。病原學(xué)檢查第21頁(yè),共83頁(yè)，2024年2月25日，星期天優(yōu)點(diǎn)：1.在于該法避免對(duì)環(huán)境和人體的危害；2.操作簡(jiǎn)便并且有效期較長(zhǎng)。缺點(diǎn)：1.由于該法酶的純度和反應(yīng)過(guò)程容易受環(huán)境因素影像，導(dǎo)致其穩(wěn)定性不好；2.該法靈敏度、重復(fù)性不及放射免疫技術(shù)，精度為10-9mol/L，易造成漏檢和假陽(yáng)性。酶聯(lián)免疫分析法（ELISA）病原學(xué)檢查第22頁(yè),共83頁(yè)，2024年2月25日，星期天化學(xué)發(fā)光法優(yōu)點(diǎn)：1.單個(gè)樣本檢測(cè)速度快，適合做急診；2.靈敏度較高，精度可達(dá)10-15mol/L3.自動(dòng)化程度高。缺點(diǎn)：1.該法發(fā)光過(guò)程短，樣品不能重復(fù)檢測(cè)2.本底較高，在超微量分析及早期診斷方面能力不足3.試劑價(jià)格較高病原學(xué)檢查第23頁(yè),共83頁(yè)，2024年2月25日，星期天時(shí)間分辨熒光免疫法技術(shù)特異性高，線性范圍更寬；可以反復(fù)檢測(cè)，并且其重復(fù)性、穩(wěn)定性好，試劑保質(zhì)期至少1a，標(biāo)準(zhǔn)曲線保留時(shí)間長(zhǎng)，同一批次試劑只需做一條標(biāo)準(zhǔn)曲線即可，其精度可達(dá)10-18mol/L，其定量結(jié)果更是肝移植、乙肝疫苗接種療效觀察等臨床必須的檢查。病原學(xué)檢查第24頁(yè),共83頁(yè)，2024年2月25日，星期天臨床上采用定量測(cè)定乙肝五項(xiàng)指標(biāo)更能準(zhǔn)確的反應(yīng)乙型肝炎臨床變化，以及乙肝患者的治療，預(yù)后情況?，F(xiàn)在臨床醫(yī)生對(duì)乙肝五項(xiàng)定量測(cè)定已經(jīng)有了普遍的認(rèn)識(shí)，也越來(lái)越被患者接受。病原學(xué)檢查第25頁(yè),共83頁(yè)，2024年2月25日，星期天HBVDNA是病毒復(fù)制和傳染性的直接標(biāo)志。目前常用聚合酶鏈反應(yīng)（PCR）。聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)（PCR）是一種用于放大擴(kuò)增特定的DNA片段的分子生物學(xué)技術(shù)，它可看作是生物體外的特殊DNA復(fù)制，PCR的最大特點(diǎn)，是能將微量的DNA大幅增加。病原學(xué)檢查第26頁(yè),共83頁(yè)，2024年2月25日，星期天HBV-DNA定量檢查就是檢驗(yàn)乙肝病毒在血液中的含量。通過(guò)乙肝病毒含量的檢測(cè)，可以了解患者體內(nèi)的病毒含量，病情發(fā)展?fàn)顩r，對(duì)患者的治療有很好的指導(dǎo)作用。

病原學(xué)檢查第27頁(yè),共83頁(yè)，2024年2月25日，星期天

HBV-DNA定量檢查的正常值是1000cps/ml。當(dāng)HBV-DNA定量檢查值小于1000cps/ml時(shí)，表明體內(nèi)HBV-DNA為陰性，傳染力弱。當(dāng)HBV-DNA定量檢查值大于1000cps/ml時(shí)，表明體內(nèi)HBV-DNA為陽(yáng)性，病毒仍然較多，傳染力強(qiáng)。病毒的數(shù)量與某些藥物的療效相關(guān)。例如，干擾素治療對(duì)肝炎病毒高拷貝者不敏感，低拷貝者敏感；而有些藥物則具有顯著降低病毒高拷貝的作用。病原學(xué)檢查第28頁(yè),共83頁(yè)，2024年2月25日，星期天乙型肝炎病毒前Ｓ1抗原乙型肝炎病毒前Ｓ1抗原（PreS1-Ag）是存在于均有傳染性的完整Dane顆粒和管型顆粒上最外端的外膜蛋白，前S1蛋白（抗原）在病毒侵入肝細(xì)胞過(guò)程中起重要作用。國(guó)內(nèi)報(bào)道部分HBeAg陰性患者仍有病毒復(fù)制，而前S1抗原可作為HBeAg陰性慢性乙型肝炎患者肝細(xì)胞損害的一項(xiàng)指標(biāo)。作為HBV感染、復(fù)制和乙肝患者診斷、治療和預(yù)后的一個(gè)重要標(biāo)志，在多數(shù)醫(yī)院廣泛開(kāi)展，但其臨床價(jià)值仍沒(méi)有被充分認(rèn)識(shí)。病原學(xué)檢查第29頁(yè),共83頁(yè)，2024年2月25日，星期天國(guó)內(nèi)外對(duì)前Ｓ蛋白/抗前Ｓ蛋白臨床意義的基本共識(shí)一·前Ｓ蛋白１．前Ｓ1病毒蛋白出現(xiàn)在急性HBV感染的最早期，是病毒清除的最早跡象。２．前Ｓ1病毒蛋白持續(xù)存在者將發(fā)展至慢性肝炎。３．前Ｓ1病毒蛋白與HBV-DNA,HBeAg高度相關(guān)。與肝內(nèi)

HBV-DNA,HBcAg檢出高度相關(guān)。４．在抗HBe(+)

的HBV感染者中，檢出前Ｓ1蛋白可表明病毒的復(fù)制。病原學(xué)檢查第30頁(yè),共83頁(yè)，2024年2月25日，星期天５．病毒附著于肝細(xì)胞膜上，最重要的介導(dǎo)部位是前Ｓ1蛋白的氨基酸(AA)21-47片段。變異的病毒只要這一區(qū)段完好就有傳染性。僅僅是對(duì)(AA)21-47肽的

前Ｓ1抗體才能中和病毒。６．前S1蛋白顆粒表面具有高度的免疫原性，常作為乙肝疫苗的主要成分。⒎前S1抗原主要存在于血清中完整HBV表面。病原學(xué)檢查第31頁(yè),共83頁(yè)，2024年2月25日，星期天PreS1抗原試劑盒的臨床應(yīng)用1.對(duì)擬查“二對(duì)半”的患者，同時(shí)加查PreS1，可起到確診與補(bǔ)充的作用，如感染與復(fù)制、急性與慢性、預(yù)后與療效等；2.非肝炎住院病人常規(guī)檢測(cè)，PreS1比“二對(duì)半”更有意義；3.獻(xiàn)血員篩查，檢測(cè)前S1可減少乙肝病毒感染者漏檢；4.創(chuàng)傷性檢查病員應(yīng)檢測(cè)PreS1，如內(nèi)窺鏡檢查、牙科手術(shù)等。病原學(xué)檢查第32頁(yè),共83頁(yè)，2024年2月25日，星期天乙型肝炎病毒血清學(xué)檢測(cè)的臨床意義第33頁(yè),共83頁(yè)，2024年2月25日，星期天乙肝大蛋白HBV表面抗原通過(guò)啟動(dòng)子表達(dá)后，會(huì)產(chǎn)生大蛋白（HBV-LP）、中蛋白（HBV-MP）以及小蛋白（HBV-SP）三類產(chǎn)物;HBV-LP氨基酸序列中包括Pre-S1、Pre-S2和S部分；產(chǎn)物中蛋白和產(chǎn)物小蛋白形式主要為小球型病毒顆粒，其余兩種病毒顆粒（管形顆粒、Dane顆粒）則是由三類產(chǎn)物共同組成，且Dane顆粒的組成取決于HBV-LP。因此HBV-LP被認(rèn)為是一種能反映HBV復(fù)制和Dane顆粒存在的標(biāo)記物。病原學(xué)檢查第34頁(yè),共83頁(yè)，2024年2月25日，星期天病原學(xué)檢查第35頁(yè),共83頁(yè)，2024年2月25日，星期天HBV-LP有直接的肝細(xì)胞毒性，致使肝細(xì)胞凋亡而快速死亡。HBV-LP對(duì)HBV復(fù)制過(guò)程有反式激活作用，并與病毒顆粒從細(xì)胞內(nèi)釋放調(diào)節(jié)有關(guān)。所以，檢測(cè)HBV-LP用于臨床判斷體內(nèi)HBV復(fù)制和治療預(yù)后有一定意義。病原學(xué)檢查第36頁(yè),共83頁(yè)，2024年2月25日，星期天病毒性肝炎—丙肝

丙型肝炎（HC）是一種對(duì)人類危害重大的疾病，HCV感染的慢性化發(fā)生率明顯高于乙型肝炎，較乙型肝炎易早期出現(xiàn)肝硬化、HCC，因此，HCV的檢測(cè)對(duì)丙型肝炎病毒感染的早期診斷和指導(dǎo)臨床治療有重大的意義。到目前為止,丙型肝炎檢測(cè)技術(shù)主要有抗-HCV檢測(cè)、HCV-RNA核酸擴(kuò)增檢測(cè)、HCV基因分型、HCV核心抗原的檢測(cè)以及同時(shí)檢測(cè)抗-HCV和HCV核心抗原等。第37頁(yè),共83頁(yè)，2024年2月25日，星期天第38頁(yè),共83頁(yè)，2024年2月25日，星期天抗-HCV的檢測(cè)

抗-HCV的檢測(cè)（化學(xué)發(fā)光免疫分析法CIA，或者酶免疫法EIA）是最早出現(xiàn)的HCV檢測(cè)技術(shù),可用于HCV感染者的篩查?？焖僭\斷測(cè)試(RDTs)可以被用來(lái)初步篩查抗–HCV，對(duì)于抗體陽(yáng)性者，應(yīng)進(jìn)一步進(jìn)行HCVRNA檢測(cè)。

然而，對(duì)于免疫功能不正常的HCV感染者,則不能檢出抗-HCV。另外,由于“窗口期”的存在,仍有一定的漏檢率。對(duì)于抗-HCV的檢測(cè),目前仍有改進(jìn)的潛力。HCV抗原的檢測(cè)

在缺乏HCVRNA檢測(cè)條件時(shí)，可考慮進(jìn)行HCV核心抗原的檢測(cè)，用于慢性HCV感染者的實(shí)驗(yàn)室診斷。第39頁(yè),共83頁(yè)，2024年2月25日，星期天HCV-RNA核酸擴(kuò)增檢測(cè)技術(shù)(NAT)

HCV-RNA是HCV感染、傳染性和病毒復(fù)制的標(biāo)志HCV-RNA水平直接代表患者病毒血癥水平HCV-RNA檢測(cè)可將窗口期由6-8周縮短至12天HCV-RNA檢測(cè)是丙肝早期篩查、診斷和治療管理最關(guān)鍵的指標(biāo)準(zhǔn)確的HCV-RNA檢測(cè)是應(yīng)答指導(dǎo)治療策略的保障，可以幫助醫(yī)生確定停藥終點(diǎn)，進(jìn)而提高治愈率第40頁(yè),共83頁(yè)，2024年2月25日，星期天

HCV基因分型HCV基因分型的方法有分子生物學(xué)和血清學(xué)兩大類，前者包括DNA測(cè)序法、特異型引物擴(kuò)增法、基因芯片、探針雜交等，后者是合成HCV特異性多肽來(lái)檢測(cè)其特異性的抗體從而區(qū)分基因型，HCV基因分型應(yīng)當(dāng)在抗病毒治療前進(jìn)行。HCV基因型與肝病嚴(yán)重程度有著密切關(guān)系，并且對(duì)抗病毒治療產(chǎn)生很大影響。因此，HCV基因分型檢測(cè)可為HCV感染者的診斷和治療提供重要的科學(xué)依據(jù)。HCV1b和2a在中國(guó)各地較為常見(jiàn)。第41頁(yè),共83頁(yè)，2024年2月25日，星期天肝纖維化非侵襲性診斷目前常用的無(wú)創(chuàng)診斷方法包括血清學(xué)和影像學(xué)兩大類。血清學(xué)方法通常是指包括多種臨床指標(biāo)的模型。其中APRI和FIB-4簡(jiǎn)單易行，但敏感性和特異性不強(qiáng)。

影像學(xué)主要是瞬時(shí)彈性成像（TE），TE是近年開(kāi)始廣泛使用的一種新的影像學(xué)無(wú)創(chuàng)診斷方法，對(duì)HCV肝纖維化分期的診斷較為可靠，對(duì)肝硬化的診斷更準(zhǔn)確。

血清學(xué)和TE等影像學(xué)無(wú)創(chuàng)指標(biāo)聯(lián)合應(yīng)用，可顯著提高纖維化的診斷準(zhǔn)確率。當(dāng)兩者結(jié)果不一致時(shí)，建議進(jìn)行肝活檢明確真確。第42頁(yè),共83頁(yè)，2024年2月25日，星期天艾滋病

人類免疫缺陷病毒（HIV），即艾滋?。ˋIDS）病毒，是造成人類免疫系統(tǒng)缺陷的一種病毒。人類免疫缺陷病毒是一種感染人類免疫系統(tǒng)細(xì)胞的慢病毒（Lentivirus），屬逆轉(zhuǎn)錄病毒的一種。HIV通過(guò)破壞人體的CD4﹢T淋巴細(xì)胞，進(jìn)而阻斷細(xì)胞免疫和體液免疫過(guò)程，導(dǎo)致免疫系統(tǒng)癱瘓，從而致使各種疾病在人體內(nèi)蔓延，最終導(dǎo)致艾滋病。第43頁(yè),共83頁(yè)，2024年2月25日，星期天病毒復(fù)制過(guò)程第44頁(yè),共83頁(yè)，2024年2月25日，星期天HIV感染過(guò)程中HIV抗原和相關(guān)抗體及CD4+細(xì)胞的變化第45頁(yè),共83頁(yè)，2024年2月25日，星期天實(shí)驗(yàn)室免疫學(xué)檢查

1.主要是中度以上細(xì)胞免疫缺陷包括：CD4+T淋巴細(xì)胞耗竭：T淋巴細(xì)胞功能下降，外周血淋巴細(xì)胞顯著減少，CD4<200/μl，CD4/CD8<1.0，（正常人為1.25～2.1），遲發(fā)型變態(tài)反應(yīng)皮試陰性，有絲分裂原刺激反應(yīng)低下。2.B淋巴細(xì)胞功能失調(diào)：多克隆性高球蛋白血癥，循環(huán)免疫復(fù)合物形成和自身抗體形成。3.NK細(xì)胞活性下降第46頁(yè),共83頁(yè)，2024年2月25日，星期天

檢測(cè)HIV感染者體液中病毒抗原和抗體的方法，操作方便，易于普及應(yīng)用，其中抗體檢測(cè)尤普通。但HIvP24抗原和病毒基因的測(cè)定，在HIV感染檢測(cè)中的地位和重要性也日益受到重視?？贵w檢測(cè)血清中HIV抗體是判斷HIV感染的間接指標(biāo)。根據(jù)其主要的適用范圍，可將現(xiàn)有HIV抗體檢測(cè)方法分為篩檢試驗(yàn)和確證試驗(yàn)。HIV-1抗體的檢測(cè)，ELISA測(cè)定法結(jié)果連續(xù)兩次為陽(yáng)性者，再行WB法進(jìn)行確診（確證試驗(yàn)）。第47頁(yè),共83頁(yè)，2024年2月25日，星期天第48頁(yè),共83頁(yè)，2024年2月25日，星期天HIVP24抗原HIV-1P24抗原檢測(cè)可用于HIV-1抗體不確定或窗口期的輔助診斷；HIV-1抗體陽(yáng)性母親所生嬰兒早期的輔助鑒別診斷。病毒基因

通過(guò)檢測(cè)HIV基因型和表型的變異了解藥物變異情況。目前主要采用基因型檢測(cè)。在抗病毒治療前進(jìn)行基因檢測(cè)，有助于選擇合適的抗病毒藥物。第49頁(yè),共83頁(yè)，2024年2月25日，星期天第50頁(yè),共83頁(yè)，2024年2月25日，星期天第51頁(yè),共83頁(yè)，2024年2月25日，星期天第52頁(yè),共83頁(yè)，2024年2月25日，星期天第53頁(yè),共83頁(yè)，2024年2月25日，星期天第54頁(yè),共83頁(yè)，2024年2月25日，星期天第55頁(yè),共83頁(yè)，2024年2月25日，星期天蛋白質(zhì)芯片

蛋白芯片在人的傳染病檢測(cè)方面主要研究對(duì)象是較為嚴(yán)重的傳染病病原，能同時(shí)檢測(cè)HIV、HBV、HCV聯(lián)合感染患者血中HIV、HBV、HCV核酸和相應(yīng)的抗體，有較好的應(yīng)用前景。第56頁(yè),共83頁(yè)，2024年2月25日，星期天流行性出血熱

出血熱即流行性出血熱又稱腎綜合征出血熱，是由流行性出血熱病毒（漢坦病毒）引起的，以鼠類為主要傳染源的自然疫源性疾病。以發(fā)熱、出血、充血、低血壓休克及腎臟損害為主要臨床表現(xiàn)。，其病理變化為全身小血管和毛細(xì)血管損傷。流行性出血熱的病毒具有多嗜性的特點(diǎn)，可以導(dǎo)致患者體內(nèi)多個(gè)臟器官的損傷，臨床表現(xiàn)較為復(fù)雜，時(shí)常出現(xiàn)并發(fā)癥和不典型病例。第57頁(yè),共83頁(yè)，2024年2月25日，星期天出血熱潛伏期一般為2～3周。典型臨床經(jīng)過(guò)分為五期：發(fā)熱期、低血壓休克期、少尿期、多尿期及恢復(fù)期。1.發(fā)熱期

主要表現(xiàn)為感染性病毒血癥和全身毛細(xì)血管損害引起的癥狀。起病急,有發(fā)熱（38℃～40℃）、三痛（頭痛、腰痛、眼眶痛）以及惡心、嘔吐、胸悶、腹痛、腹瀉、全身關(guān)節(jié)痛等癥狀，皮膚黏膜三紅（臉、頸和上胸部發(fā)紅），眼結(jié)膜充血，重者似酒醉貌?？谇火つ?、胸背、腋下出現(xiàn)大小不等的出血點(diǎn)或淤斑，或呈條索狀、抓痕樣的出血點(diǎn)。2.低血壓休克期

多在發(fā)熱4～6日，體溫開(kāi)始下降時(shí)或退熱后不久，主要為失血漿性低血容量休克的表現(xiàn)。患者出現(xiàn)低血壓，重者發(fā)生休克。第58頁(yè),共83頁(yè)，2024年2月25日，星期天3.少尿期

24小時(shí)尿量少于400ml，少尿期與低血壓期常無(wú)明顯界限。4.多尿期

腎臟組織損害逐漸修復(fù)，但由于腎小管回吸收功能尚未完全恢復(fù)，以致尿量顯著增多。第8～12日多見(jiàn)，持續(xù)7～14天，尿量每天4000～6000ml左右，極易造成脫水及電解質(zhì)紊亂。5.恢復(fù)期隨著腎功能的逐漸恢復(fù)，尿量減至3000ml以下時(shí)，即進(jìn)入恢復(fù)期。尿量、癥狀逐漸恢復(fù)正常，復(fù)原需數(shù)月。第59頁(yè),共83頁(yè)，2024年2月25日，星期天診斷:出血熱病死率與臨床類型、治療遲早及措施是否正確相關(guān)。早期的診斷和治療措施的改進(jìn)可有效降低病死率。通常診斷依據(jù)主要依靠臨床特征癥狀和體征，結(jié)合實(shí)驗(yàn)室檢查，參考流行病學(xué)資料進(jìn)行診斷。

第60頁(yè),共83頁(yè)，2024年2月25日，星期天第61頁(yè),共83頁(yè)，2024年2月25日，星期天1.常規(guī)檢查

（1）血常規(guī)早期白細(xì)胞總數(shù)正?；蚱停?～4日后即明顯增高，多在（15～30）×109/L，異型淋巴細(xì)胞在1～2病日即可出現(xiàn)，且逐日增多，一般為10～20%，部分達(dá)30%以上；血小板明顯減少，低血壓及少尿期最低，并有異型、巨核血小板出現(xiàn)，多尿后期始恢復(fù)。紅細(xì)胞和血紅蛋白在發(fā)熱期開(kāi)始上升，低血壓期逐漸增高，休克期患者明顯上升，至少尿期下降，其動(dòng)態(tài)變化可作為判斷血液濃縮與血液稀釋的重要指標(biāo)。（2）尿常規(guī)顯著的尿蛋白是本病的重要特點(diǎn)，也是腎損害的最早表現(xiàn)。尿中還可有紅細(xì)胞、管型或膜狀物（是凝血塊、蛋白質(zhì)與壞死脫落上皮細(xì)胞的混合凝聚物）。第62頁(yè),共83頁(yè)，2024年2月25日，星期天2.血液生化檢查（1）尿素氮及肌酐低血壓休克期輕、中度增高。少尿期至多尿期達(dá)高峰，以后逐漸下降，升高程度及幅度與病情成正比。（2）電解質(zhì)血鉀在發(fā)熱期可有降低，休克期仍低，少尿期上升為高血鉀，多尿期又降低。但少尿期亦有呈低血鉀者。血鈉及氯在全病程均降低，以休克及少尿期最顯著。血鈣在全病程中亦多降低。（3）二氧化碳結(jié)合力發(fā)熱后期即下降，低血壓休克期明顯，少尿期亦有下降，多尿期逐漸恢復(fù)至正常。第63頁(yè),共83頁(yè)，2024年2月25日，星期天3.凝血功能檢查凝血因子大量消耗，血小板下降，凝血酶原和部分凝血活酶時(shí)間延長(zhǎng)，纖維蛋白原降低。繼發(fā)性纖溶亢進(jìn)表現(xiàn)為凝血酶凝固時(shí)間延長(zhǎng)，纖維蛋白降解物增加及優(yōu)球蛋白溶解時(shí)間縮短。血漿魚(yú)精蛋白副凝試驗(yàn)（3P試驗(yàn)）陽(yáng)性。第64頁(yè),共83頁(yè)，2024年2月25日，星期天4.特異性抗原、抗體和病原學(xué)檢查早期用免疫熒光試驗(yàn)、酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)（ELISA、膠體金法在血清、尿沉渣細(xì)胞可查特異性抗原。檢測(cè)血清特異性抗體IgM1：20以上和IgG抗體1：40為陽(yáng)性，恢復(fù)期血清特異性IgG抗體比急性期有4倍以上增高者也可診斷。RT-PCR法檢測(cè)血清中病毒RNA，可用于早期的診斷和非典型患者的診斷。第65頁(yè),共83頁(yè)，2024年2月25日，星期天布魯菌病

為人畜共患病，以畜傳染人為主，人傳人的實(shí)例少見(jiàn)。1.傳播途徑

主要為接觸性傳播，包括飲食、接觸患病動(dòng)物皮毛

2.癥狀

急性的病人會(huì)發(fā)高熱、關(guān)節(jié)炎、出汗、另有一些病人會(huì)出現(xiàn)肌肉痛等癥狀

3.危害

可侵犯中樞神經(jīng)系統(tǒng)，以及引起腦膜炎等并發(fā)癥，侵蝕骨骼，引起骨骼損傷，甚至讓患者喪失勞動(dòng)能力。第66頁(yè),共83頁(yè)，2024年2月25日，星期天成年人發(fā)病男性多于女性，且多集中在３０～４９歲。另外，分布于中國(guó)北部的病患以農(nóng)牧民居多，而在中國(guó)南方則主要集中于餐飲服務(wù)者，工人及退休人員，城市地區(qū)發(fā)病率有所上升。面臨如此嚴(yán)峻的形勢(shì)，加強(qiáng)臨床實(shí)驗(yàn)室的檢測(cè)力度并形成統(tǒng)一的篩選及確診檢驗(yàn)?zāi)Ｊ绞鞘种匾摹５?7頁(yè),共83頁(yè)，2024年2月25日，星期天細(xì)菌學(xué)培養(yǎng)技術(shù)

細(xì)菌學(xué)培養(yǎng)技術(shù)是臨床實(shí)驗(yàn)室最常用的分離方法，是布魯菌病疫情判定，臨床診斷中最直接的證據(jù)。目前血液中布魯氏菌的分離率呈上升趨勢(shì)。臨床醫(yī)生如遇診斷不明的腦膜炎患者，應(yīng)考慮腦脊液的細(xì)菌培養(yǎng)，以排除布魯菌性腦膜炎。目前細(xì)菌學(xué)培養(yǎng)是分離布魯氏菌的“金標(biāo)準(zhǔn)”，但由于其培養(yǎng)周期長(zhǎng)，分離鑒定困難，因此易造成漏診誤診。第68頁(yè),共83頁(yè)，2024年2月25日，星期天免疫學(xué)檢測(cè)技術(shù)1.特異性血清凝集性試驗(yàn)?zāi)壳皣?guó)內(nèi)外用于檢測(cè)診斷布魯菌病的特異性血清凝集性試驗(yàn)方法主要有平板凝集試驗(yàn)（PAT）、虎紅平板凝集試驗(yàn)（RBPT）試管凝集試驗(yàn)（SAT）。PAT和RBPT在臨床上主要用于早期大面積快速篩查。2.酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)（ELISA）酶的催化效率很高，可使測(cè)定達(dá)到很高的靈敏度，同時(shí)優(yōu)化檢測(cè)靶點(diǎn)，大大提高了檢測(cè)的特異。3.其他血清學(xué)檢測(cè)方法補(bǔ)體結(jié)合實(shí)驗(yàn)（CFT）和抗人球蛋白試驗(yàn)（Coomb′s）此外，熒光偏振技術(shù)（FPA）被認(rèn)為是檢測(cè)牛布魯菌病抗體最穩(wěn)定的血清學(xué)方法，F(xiàn)PA技術(shù)可以進(jìn)行人類感染布魯菌病的快速檢測(cè)，且可以對(duì)治療過(guò)程及預(yù)后復(fù)發(fā)進(jìn)行實(shí)時(shí)監(jiān)控。第69頁(yè),共83頁(yè)，2024年2月25日，星期天分子生物學(xué)技術(shù)（PCR技術(shù))

實(shí)時(shí)熒光定量PCR（Real‐timePCR）Real‐timePCR技術(shù)實(shí)現(xiàn)了PCR技術(shù)中定性到定量的飛躍，具有更強(qiáng)的特異度，更高的自動(dòng)化程度，并且有效地解決了PCR的污染問(wèn)題，Real‐timePCR技術(shù)具有較好的穩(wěn)定性，特異度和靈敏度，檢測(cè)時(shí)間小于２h，重現(xiàn)性好，易于標(biāo)準(zhǔn)化，且能對(duì)臨床治療的效果進(jìn)行監(jiān)測(cè)和評(píng)估，可作為人類布魯菌病快速診斷的實(shí)用方法。第70頁(yè),共83頁(yè)，2024年2月25日，星期天真菌—新型隱球菌病

第71頁(yè),共83頁(yè)，2024年2月25日，星期天第72頁(yè),共83頁(yè)，2024年2月25日，星期天第73頁(yè),共83頁(yè)，2024年2月25日，星期天