園藝植物生物技術(shù)整合版

第一章緒論什么是生物技術(shù)（biotechnology）？P1答：生物技術(shù)（biotechnology）是以現(xiàn)代生命科學(xué)為基礎(chǔ)，結(jié)合其他基礎(chǔ)學(xué)科的科學(xué)原理，運用生物（或生物組織、細胞、器官、染色體、基因、核酸片段等）的特性和功能，設(shè)計、構(gòu)建具有預(yù)期性能的新物質(zhì)或新品系，加工生產(chǎn)產(chǎn)品或提供服務(wù)的綜合性技術(shù)。生物技術(shù)涉及傳統(tǒng)生物技術(shù)與現(xiàn)代生物技術(shù)。傳統(tǒng)生物技術(shù)是指通過微生物的初級發(fā)酵來生產(chǎn)產(chǎn)品，如醬油、醋、酒、面包、奶酪、酸奶等食品的制作技術(shù)?，F(xiàn)代生物技術(shù)是指以現(xiàn)代生物學(xué)理論為基礎(chǔ)，以基因工程為核心的一系列技術(shù)的總稱。生物技術(shù)已廣泛應(yīng)用于農(nóng)林牧漁、醫(yī)藥食品、輕工業(yè)、化學(xué)工業(yè)和能源等領(lǐng)域，與人民生活息息相關(guān)。2.什么是園藝植物生物技術(shù)（biotechnologyinhorticulturalplants）？P1答：園藝植物生物技術(shù)（biotechnologyinhorticulturalplants）以園藝植物為材料，運用生物技術(shù)，發(fā)明或改良種質(zhì)或生物制品的一門技術(shù),它是園藝學(xué)和生物技術(shù)的交叉技術(shù)學(xué)科，是在植物組織培養(yǎng)、植物細胞工程、植物染色體工程、植物基因工程、植物分子標記和生物信息學(xué)等現(xiàn)代生物技術(shù)手段基礎(chǔ)上產(chǎn)生和發(fā)展起來的。這些先進的現(xiàn)代生物技術(shù)在園藝科學(xué)上的應(yīng)用構(gòu)成了園藝植物生物技術(shù)的重要內(nèi)容。園藝植物生物技術(shù)的重要內(nèi)容有哪些？P1——5答：①園藝植物組織培養(yǎng)（也稱園藝植物離體培養(yǎng)）指無菌和人工控制的環(huán)境條件下，運用人工哺育基，對園藝植物的胚胎（成熟和未成熟的胚、胚乳、胚珠、子房等）、器官、（根、莖、葉、花、果實、種子等）、組織（分生組織、形成層、韌皮部、表皮、表層、薄壁組織、髓部等）、細胞（體細胞、生殖細胞等）、原生質(zhì)體等進行離體培養(yǎng)，使其再生發(fā)育成完整植株的過程。植物細胞全能性是植物組織培養(yǎng)的理論基礎(chǔ)。②園藝植物細胞工程指應(yīng)用細胞生物學(xué)和分子生物學(xué)的原理和方法，通過某種工程手段，以植物細胞為基本單位，在離體條件下進行培養(yǎng)、增殖，或人為地使細胞某些生物學(xué)特性按人們的意愿發(fā)生改變，從而達成改良品種和發(fā)明新品種，加速植物繁殖或獲得某種有用物質(zhì)的過程。③園藝植物染色體工程培養(yǎng)獲得單倍體，通過染色體加倍，迅速獲得純系；誘導(dǎo)多倍體，通過選育直接獲得多倍體品種；通過染色體互換、附加或易位，獲得染色體代換系、附加系或易位系。④園藝植物基因工程是以分子遺傳學(xué)為理論基礎(chǔ)，以分子生物學(xué)和微生物學(xué)的現(xiàn)代方法為手段，將不同來源的基因（或DNA分子），按預(yù)先設(shè)計的藍圖，在體外構(gòu)建雜交DNA分子，然后導(dǎo)入園藝植物細胞，以改良園藝植物原有的遺傳特性，獲得新種質(zhì)或新品種。⑤園藝植物分子標記廣義分子標記是指可遺傳的并可檢測的DNA序列或蛋白質(zhì)。狹義的分子標記是指能反映園藝植物個體或種群間基因組中某種差異特性的DNA片段。

4.你認為園藝植物生物技術(shù)發(fā)展趨勢有哪些？P11——13答：①產(chǎn)業(yè)化步伐加快，②由轉(zhuǎn)移抗性性狀向優(yōu)質(zhì)、高產(chǎn)等多種優(yōu)良性狀發(fā)展，③常規(guī)育種與生物技術(shù)緊密結(jié)合的實用化進程加速（分子標記技術(shù)、胚挽救技術(shù)和細胞融合技術(shù)、單倍體培養(yǎng)技術(shù)、體細胞無性系變異與篩選技術(shù)），④基因表達與功能研究更加進一步植物組織培養(yǎng)部分（第2—6章）一．重要名詞概念植物細胞全能性：植物體的每一個細胞都具有一套完整的基因組，并具有發(fā)育成完整植株的潛能。脫分化：離體培養(yǎng)下，已經(jīng)分化的細胞，組織或器官莖細胞分裂或不分裂，失去原有的結(jié)構(gòu)和功能而恢復(fù)分生狀態(tài)，形成無組織結(jié)構(gòu)的細胞團或愈傷組織。再分化:脫分化的細胞或細胞團在適宜條件下可重新分化，形成另一種或幾種細胞，組織，器官，甚至完整的植株。器官發(fā)生途徑:培養(yǎng)條件下的組織或細胞團分化形成不定根，不定芽等器官的過程。5體細胞胚胎發(fā)生途徑:外植體中體細胞誘發(fā)并形成胚胎的過程。外植體:用于培養(yǎng)的園藝植物的細胞，組織，器官，胚胎，原生質(zhì)體通常稱為外植體。褐化現(xiàn)象:植物體內(nèi)酚類物質(zhì)在外植體被切割后氧化形成醌類物質(zhì)，使培養(yǎng)基變褐。看護培養(yǎng):在培養(yǎng)皿中先加入一定體積的固體培養(yǎng)基，在其上放一塊幾毫米大小的愈傷組織，再在其上放一張無菌濾紙，最后把外植體放在濾紙上。培養(yǎng)基通過愈傷組織和濾紙為外植體供應(yīng)營養(yǎng)。分批培養(yǎng):把細胞分散到一定容積的培養(yǎng)基中培養(yǎng)，當培養(yǎng)物增值到一定量時，轉(zhuǎn)接繼代，建立起單細胞培養(yǎng)物。連續(xù)培養(yǎng):在培養(yǎng)過程中不斷注入新鮮培養(yǎng)基，同時排放相同體積的舊培養(yǎng)基，保持反映器內(nèi)培養(yǎng)液的體積不變，是營養(yǎng)物質(zhì)連續(xù)得到補充，細胞的生長和增值得以連續(xù)進行。體細胞雜交:將不同的植株的原生質(zhì)體，在一定條件下融合成雜種細胞。雄核發(fā)育：適宜的離體培養(yǎng)條件下，花粉的發(fā)育可偏離活體時的正常發(fā)育而轉(zhuǎn)向孢子體發(fā)育，經(jīng)胚狀體途徑或器官發(fā)生途徑形成完整植株。雌核發(fā)育：胚胎的發(fā)育僅在母體遺傳的控制下進行的一種發(fā)育方式。非整倍體：核染色體數(shù)不是染色體基數(shù)的整數(shù)倍，而是發(fā)生個別染色體數(shù)目增減的生物體。代換系：生物體的染色體被異源種屬染色體所代換的品系叫代換系。異位系：某染色體的一個區(qū)段移接到非同源的另一染色體上，染色體互相發(fā)生片段互換的植株叫互相異位系，染色體片段只從一方移接到另一方染色體上的植株叫簡樸異位系。附加系：非同種或異種染色體導(dǎo)入受體中，這種染色體在受體中增長的技術(shù)叫染色體附加，具有附加染色體的品系叫附加系。限制生長保存：改變培養(yǎng)物生長的外界環(huán)境條件，限制離體保存材料的生長速度，使細胞生長降至最小限度，但不死亡，從而達成延長繼代培養(yǎng)時間的目的。超低溫保存：指在—80度至—195度甚至更低溫度下保存生物材料。體細胞無性系變異:植物外植體在組織培養(yǎng)過程中，由于受到非生物因子的誘導(dǎo)發(fā)生變異，進而導(dǎo)致再生植株發(fā)生遺傳變異的現(xiàn)象稱為植物體細胞無性系變異。二．各章需掌握的重要內(nèi)容1.植物組織培養(yǎng)的類型有哪些？植株再生途徑重要有哪些？（P15~17）答：植物組織培養(yǎng)的類型：㈠按照外植體的不同可分為：①胚胎培養(yǎng)，②器官培養(yǎng)，③組織培養(yǎng)，④細胞培養(yǎng)，⑤原生質(zhì)體培養(yǎng)。㈡按照培養(yǎng)及性質(zhì)不同可分為：①固體培養(yǎng)，②液體培養(yǎng)，③半液半固體培養(yǎng)。㈢按照培養(yǎng)方法不同可分為：①靜置培養(yǎng)，②振蕩培養(yǎng)，③看護培養(yǎng)，④飼喂培養(yǎng)，⑤微室培養(yǎng)。植株再生途徑：器官發(fā)生途徑、體細胞胚胎發(fā)生途徑、原球莖發(fā)生途徑。完整的植物組織培養(yǎng)實驗室涉及哪些部分？每一部分具有哪些功能？需要配備哪些儀器設(shè)備？自己能獨立設(shè)計一個組織培養(yǎng)實驗室。(此題答案為老師課件上的，相關(guān)內(nèi)容在課本p19)

答：一、完整的植物組織培養(yǎng)室通常涉及洗滌室、化學(xué)實驗室、緩沖室、接種室、培養(yǎng)室、細胞學(xué)實驗室等部分?？梢愿鶕?jù)實際需要和條件進行設(shè)計。二、組培室各部分功能和所需儀器設(shè)備：（1）化學(xué)實驗室：用于培養(yǎng)器皿的清洗、培養(yǎng)基的配制、分裝和滅菌、試管苗的出瓶及整理等工作。冰箱、天平、高壓滅菌鍋、pH計、干燥箱、實驗臺、水槽、涼干架、藥品柜、離心機、水浴鍋、微波爐、電爐、磁力攪拌器、蠕動泵、移液器、各種玻璃器皿（燒杯、量筒、容量瓶、試劑瓶、三角瓶等）及培養(yǎng)基分裝用品等。（2）接種室：植物材料的滅菌、接種以及培養(yǎng)物的繼代轉(zhuǎn)接等。超凈工作臺、紫外燈、小推車、擱架、磁盤、接種工具（各種鑷子、解剖刀、手術(shù)剪、普通剪刀接種針、酒精燈、手持噴霧器、細菌過濾器等）等。（3）培養(yǎng)室：重要用于植物材料的培養(yǎng)。培養(yǎng)架及燈管、搖床（振蕩器）、空調(diào)、自動定期器、加濕及除濕器、光照培養(yǎng)箱、溫濕度計燈等。（4）細胞學(xué)實驗室：重要用于培養(yǎng)材料的顯微觀測及照相等。體視顯微鏡、普通顯微鏡、倒置顯微鏡、熒光顯微鏡、配套顯微照相裝置、普通相機或數(shù)碼相機、切片機及配套制片及染色用品等?；瘜W(xué)實驗室化學(xué)實驗室緩沖室接種室培養(yǎng)室洗滌室細胞學(xué)實驗室滅菌室培養(yǎng)基的組成成分涉及哪些？常用的植物激素和生長調(diào)節(jié)劑有哪些？需掌握化學(xué)名稱和縮寫符號。（p21）

答：一、通常植物組織培養(yǎng)所用培養(yǎng)基涉及以下六大類成分，即礦質(zhì)營養(yǎng)、有機成分、植物生長調(diào)節(jié)劑、碳源、瓊脂以及其他附加物等。二、常用的植物激素及生長調(diào)節(jié)物涉及五大類植物激素：1、生長素類：IAA、IBA、NAA、2，4-D2、細胞分裂類：6-BA、KT（Kin）、ZT、2ip3、赤霉素類：GA3、GA4、GA74、脫落酸：ABA5、乙烯：ETH莖尖培養(yǎng)的概念，以種苗繁殖為目的的莖尖培養(yǎng)涉及哪些階段？各階段對培養(yǎng)基條件有何規(guī)定？（此題答案為老師課件上的）

答：莖尖培養(yǎng)又稱分生組織培養(yǎng)，把莖尖的分生組織或涉及有此分生組織的莖尖分離進行無菌培養(yǎng)的方法。（百度百科釋義）莖尖培養(yǎng)的階段：1、起始培養(yǎng)階段2、增殖培養(yǎng)階段3、生根培養(yǎng)階段4、馴化移栽階段各階段對培養(yǎng)基的規(guī)定：①起始培養(yǎng)階段：A、培養(yǎng)基類型:MS、B5、WhiteB、碳源的影響:蔗糖、葡萄糖等C、植物生長調(diào)節(jié)物質(zhì)：細胞分裂素、生長素類、赤霉素類、其他有機化合物。②增殖培養(yǎng)階段：A、細胞分裂素濃度直接影響增殖的效果，通常使用濃度低于起始培養(yǎng)階段；B、添加少量的生長素，如NAA或IAA有助于維持無菌苗適宜的激素平衡，促進增殖。③生根培養(yǎng)階段：培養(yǎng)基成分對不定根形成的影響。A、礦質(zhì)營養(yǎng)：76%的植物可以在MS,1/2MS,1/3MS培養(yǎng)基上正常生根。低鹽有助于生根（White,Knop），提高Ca濃度有促進作用。B、碳源的影響：多數(shù)植物在20~30gL-1蔗糖有助于生根。無蔗糖生根減少，濃度影響根重。C、植物激素及生長調(diào)節(jié)物質(zhì)：生長素類：通常為生根必需。細胞分裂素：通常有克制作用，使用濃度較低。ABA和GA：ABA/GA3高比值促進生根。④馴化移栽階段：洗去培養(yǎng)基，生根苗培養(yǎng)基中由于帶有蔗糖而易滋生細菌和真菌。選擇適宜的馴化基質(zhì)：透氣保水性要好。蛭石、泥炭、珍珠巖等。莖尖分生組織培養(yǎng)脫毒的原理是什么？影響脫毒效果的重要因素有哪些？病毒檢測方法涉及哪些？其他脫毒方法尚有哪些？

答：一、脫毒原理：（p38）病毒在植物體內(nèi)的分布不均勻，越靠近頂端區(qū)域，帶毒越少，頂端分生組織（0.2-0.5mm）不帶病毒或含病毒量極低。因此，分離分生組織細胞進行培養(yǎng)，可以獲得無病毒種苗。影響脫毒效果的重要因素:脫毒效果與莖尖大小的關(guān)系：脫毒效果和莖尖分生組織大小直接相關(guān)，莖尖分生組織越小，脫毒率越高，但生長速度慢。如草莓莖尖切取0.2-0.3mm時，脫毒率達成100%，而切取1.0mm時，脫毒率為50%。因此，脫毒培養(yǎng)時，需要兼顧脫毒率、成活率及莖尖發(fā)育成完整植株的能力。既要脫除病毒，也要使莖尖分生組織迅速生長發(fā)育。一般莖尖分生組織大小以0.2-0.5mm為適宜。三、病毒檢測方法：（p41）①形態(tài)檢測法②指示植物法③血清鑒定法④分子生物學(xué)檢測法，涉及核酸雜交技術(shù)、聚合酶鏈反映、雙鏈核糖核酸分析。⑤電子顯微鏡檢測。四、其他脫毒方法：（p40）①花器官培養(yǎng)脫毒，②珠心胚培養(yǎng)脫毒，③化學(xué)脫毒，④超低溫解決脫毒，⑤合并熱解決、莖尖培養(yǎng)或微嫁接脫毒。種苗離體快繁中污染發(fā)生的因素重要有哪些？如何控制污染的發(fā)生？（此題答案為老師課件上的）

答：一、污染發(fā)生的因素：（1）培養(yǎng)基和接種用品滅菌不徹底；（2）外植體滅菌不徹底；（3）操作時人為帶入；（4）接種室環(huán)境不潔凈；（5）超凈工作區(qū)域不潔凈。二、控制污染的措施：（1）滅菌時充足排凈鍋內(nèi)冷空氣；（2）接種器具充足灼燒；（3）污染外植體及時挑出，滅菌后倒掉。外植體材料少可二次解決；（4）接種時用75%乙醇擦拭雙手和培養(yǎng)容器，操作區(qū)不放置過多的培養(yǎng)容器；(5)接種室定期熏蒸或消毒液解決；并采用紫外燈進行空氣殺菌；（6）超凈工作臺定期清洗過濾網(wǎng)。原生質(zhì)體分離中材料預(yù)解決方法有哪些？原生質(zhì)體分離常用的酶類有哪些：原生質(zhì)體如何分離和如何純化？原生質(zhì)體培養(yǎng)方法有哪些？

答：一、預(yù)解決方法：（p88）①低溫解決。以葉片等外植體為試材時，將其置于4℃下，黑暗中解決1~2天，起源升值的產(chǎn)量高，均勻一致，分裂頻率高。②等滲溶液解決。把材料放在等滲溶液中（如13％甘露醇）數(shù)小時，再放到酶液中分離原生質(zhì)體，能提高其產(chǎn)量和活性，特別是多酚化合物含量高的植物，如蘋果、梨等，采用這種方法解決效果好。常用的酶類有：A.纖維素酶B.果膠酶C.崩潰酶D.半纖維素酶分離：（p90）原生質(zhì)體分離有機械法及酶消化法，前者產(chǎn)量極低而不多用、后者又分—步法及二步法。一步法是將材料在2l一28℃用纖維素酶及果膠酶混合液一次性解決2—24h。二步法是將材料先用果膠酶降解胞間膠層得到單細胞，再用纖維素酶脫壁而釋放原生質(zhì)體。純化：①離心法②漂浮法③界面法④滴洗法1.培養(yǎng)方法：（p91）（1）固體培養(yǎng)：平板培養(yǎng)法（2）液體培養(yǎng)：A.淺層培養(yǎng)法B.懸滴培養(yǎng)法C.雙層培養(yǎng)法D.看護培養(yǎng)法8.原生質(zhì)體融合方法有哪些？雜種細胞如何篩選？（p93）答：原生質(zhì)體融合的方法涉及化學(xué)誘導(dǎo)融合方法和物理誘導(dǎo)融合方法。A.化學(xué)誘導(dǎo)融合涉及：（1）鹽類融合法（2）高PH—高鈣離子法（3）PEG法B.誘導(dǎo)原生質(zhì)體融合的物理因素有顯微操作、離心震蕩、激光照射以及電融合等。其中電融合應(yīng)用最為普遍。9.離體小孢子發(fā)育（雄核發(fā)育）途徑有哪些？花粉分離方法有哪些？影響花藥和花粉培養(yǎng)的重要因素有哪些？培養(yǎng)適宜時期是哪個時期？預(yù)解決的方法有哪些？(98)答:(1)根據(jù)小孢子最初幾次分裂方式的不同，可將花藥和花粉培養(yǎng)中雄核發(fā)育的途徑歸納為：小孢子發(fā)育途徑（途徑I）、營養(yǎng)細胞發(fā)育途徑（途徑II）、生殖細胞發(fā)育途徑（途徑III）、生殖細胞和營養(yǎng)細胞共同發(fā)育途徑（途徑IV）。（2）花粉分離的方法：1.花藥漂浮培養(yǎng)自然釋放法2.機械分離法（3）影響花藥和花粉培養(yǎng)的重要因素：1.供體植株基因型2.小孢子發(fā)育時期3.供體植株的生理狀態(tài)4.預(yù)解決5.培養(yǎng)基成分6.培養(yǎng)條件7.接種密度和方向（4）培養(yǎng)適宜時期：對大多數(shù)園藝植物而言，小孢子發(fā)育到單核期左右是適宜培養(yǎng)的小孢子發(fā)育時期。（5）預(yù)解決方法：重要方法有低溫、熱激、化學(xué)藥劑、高滲透壓和離心等。以低溫解決最為常用和有效。10.植物染色體加倍的方法有哪些？化學(xué)方法誘導(dǎo)加倍常用試劑有哪些？影響加倍的因素涉及哪些？多倍體鑒定方法有哪些？（p104—109）答：（1）加倍方法：1.浸種法2.浸芽法3.滴苗法4.涂抹法5.套罩法6.毛細管法（2）常用試劑：秋水仙素、氨磺靈、氟樂靈、APM（3）影響因素：1.外植體2.加倍劑類型3.加倍劑的濃度和解決時間4.加倍劑的加入時間5.助劑（4）鑒定方法：1.形態(tài)學(xué)鑒定2.細胞學(xué)鑒定3.生理生化鑒定4.分子生物學(xué)鑒定11.限制生長保存的方法有哪些？超低溫保存的基本程序是什么？（p58）答：（1）限制生長保存的方法：改變培養(yǎng)環(huán)境（如減少培養(yǎng)溫度、減少培養(yǎng)瓶內(nèi)氧氣含量、減少光照等）、提高培養(yǎng)基滲透壓、加入生長克制劑、饑餓法、失水干燥保存等。（不擬定）（2）超低溫保存基本程序：涉及材料準備、預(yù)解決、冷凍解決、冷凍儲存、解凍和再培養(yǎng)。12.體細胞無性系變異的來源有哪些？無性系變異的發(fā)生與哪些因素有關(guān)？（p68）答：（1）重要有兩種來源：1.外植體細胞中預(yù)先存在而在再生植株中表現(xiàn)出來的變異2.植物組織培養(yǎng)過程中誘導(dǎo)產(chǎn)生的變異（2）因素：1.培養(yǎng)基成分和培養(yǎng)條件2.植株再生途徑3.培養(yǎng)時間和繼代頻率4.母本植株的遺傳狀態(tài)基因工程部分（第7—11章）園藝植物基因工程的基礎(chǔ)知識與技術(shù)遺傳工程（geneticengineering)的基本概念是什么？P114答：基因工程（geneticengineering)是將外源基因通過體外重組后倒入受體細胞內(nèi)，是這個基因能在受體細胞內(nèi)復(fù)制，轉(zhuǎn)錄，翻譯，表達的系列操作技術(shù)的總稱。遺傳信息的物質(zhì)載體是什么？重要類型？P114答：載體：核酸重要類型：核酸分為兩類：一類為脫氧核糖核酸（DNA），另一類為核糖核酸（RNA）DNA一級結(jié)構(gòu)與功能有何特點？DNA二級結(jié)構(gòu)有何特點？P114—P115答：DNA的一級結(jié)構(gòu)是指DNA分子中脫氧核苷酸（dAMP,dCMP,dGMP,dTMP）按照一定的排列順序，通過磷酸二酯鍵連接形成的多核苷酸。由于核苷酸之間的差異僅僅是堿基的不同，故又稱為堿基順序。核苷酸的連接方式是一個核苷酸的5’位磷酸與下一位核苷酸的3’-OH形成3’，5’-磷酸二酯鍵，構(gòu)成不分支的線性大分子，其中磷酸基和戊糖基構(gòu)成DNA鏈的骨架，可變部分是堿基排列順序，因此習慣上以堿基名稱的簡寫形勢作為核苷酸順序的代表符號。DNA的二級結(jié)構(gòu)即雙螺旋結(jié)構(gòu)。DNA分子由兩條反向平行的多聚核苷酸鏈圍繞同一中心軸盤曲而成，兩條鏈均為右手螺旋，鏈呈反平行走向，一條走向是5’—3’，另一條是3’—5’。DNA鏈的骨架由脫氧核糖基和磷酸基構(gòu)成，位于雙螺旋的外側(cè)，堿基配對位于雙螺旋的內(nèi)側(cè)。兩條多聚核苷酸鏈以堿基之間形成氫鍵配對而相連，即A與T配對兒，形成兩個氫鍵，G與C配對，形成三個氫鍵。堿基互相配對又叫堿基互補。堿基對平面與螺旋軸幾乎垂直，相鄰堿基對沿軸轉(zhuǎn)36?，上升0.34nm。每個螺旋結(jié)構(gòu)含10bp，螺旋的距為3.4nm。DNA兩股鏈之間的螺旋形成凹槽，一條淺的，叫小溝，一條深的，叫大溝。大溝是蛋白質(zhì)辨認DNA堿基序列發(fā)生作用的基礎(chǔ)，是蛋白質(zhì)和DNA可結(jié)合而發(fā)生作用。真核生物信使RNA（mRNA)的結(jié)構(gòu)與功能？P116答：結(jié)構(gòu)：mRNA的5’端被加上一個甲基化的鳥苷酸殘基帽子，在mRNA3’端多了一段長100~200個腺苷酸[poly（A）]的尾巴結(jié)構(gòu)。mRNA從5’端到3’端的結(jié)構(gòu)依次是5’帽子結(jié)構(gòu)，5’非編碼區(qū)，決定多肽氨基酸序列的編碼區(qū)，3’端非編碼區(qū)和多聚腺苷酸尾巴。功能：3’端[poly（A）]結(jié)構(gòu)也許與增長轉(zhuǎn)錄活性以及mRNA趨于相對穩(wěn)定有關(guān)。mRNA的5’端帽子結(jié)構(gòu)重要有以下3方面的功能：=1\*GB3①封閉mRNA的5’端，使其沒有游離的5’磷酸，這種結(jié)構(gòu)有抗5’-外切核酸酶降解的作用，使mRNA更穩(wěn)定。=2\*GB3②作為mRNA與核糖體結(jié)合的信號，無帽子結(jié)構(gòu)的mRNA不能與核糖體的40S亞基結(jié)合。=3\*GB3③也許與蛋白質(zhì)合成的對的起始作用有關(guān)。什么叫tRNA與rRNA？P116—P117答：tRNA：tRNA是細胞內(nèi)分子質(zhì)量最小的一類核酸，由70—120核苷酸組成，各種tRNA無論在一級結(jié)構(gòu)上，還是在二級，三級結(jié)構(gòu)上均有一些共同點。tRNA中具有10%~20%的稀有堿基。tRNA約占細胞總RNA的15%。tRNA的作用是3’端攜帶相應(yīng)的氨基酸將其轉(zhuǎn)運到核糖體上以供蛋白質(zhì)合成。rRNA是細胞內(nèi)含量最多的RNA，約占RNA總量的80%以上。rRNA分子是蛋白質(zhì)合成工廠的核糖體的組分。核糖體由rRNA分子和蛋白質(zhì)組成，并在大部分細胞中大量存在。典型的真核生物核糖體包含40S和60S兩個亞基。大亞基包含3種rRNA（28S,5.8S和5S)與49條多肽。小亞基只包含一個18S的rRNA和33條多肽。各種生物核蛋白體小亞基中的rRNA具有相似的二級結(jié)構(gòu)。什么是遺傳中心法則？（可以圖示）P118答：DNA通過復(fù)制把遺傳信息由親代傳遞給子代，在后代生長發(fā)育過程中，DNA通過轉(zhuǎn)錄將遺傳信息轉(zhuǎn)入RNA中，RNA又通過翻譯將遺傳信息表達為特異的蛋白質(zhì)，以執(zhí)行各種生命功能，這就是著名的的“中心法則”。在某些情況下，RNA也可作為遺傳信息的攜帶者，進行自我復(fù)制，尚有許多包含由RNA分子構(gòu)成的基因組反轉(zhuǎn)錄病毒，通過反轉(zhuǎn)錄的方式將遺傳信息傳遞給DNA，單鏈RNA分子被轉(zhuǎn)換為雙鏈DNA拷貝，隨后插入宿主細胞基因組。圖略什么叫限制性核酸內(nèi)切酶？根據(jù)辨認位點嚴格專一性可分為哪三類？P119答：限制性內(nèi)切核酸酶是一類可以辨認雙鏈DNA分子中某一特定核苷酸序列，并能對核酸內(nèi)部的磷酸二酯鍵進行切割的一種內(nèi)切核酸酶。類型：=1\*ROMANI型酶，=2\*ROMANII型酶，=3\*ROMANIII型酶=1\*ROMANI型酶能辨認專一的核苷酸序列，并在辨認點附近切割雙鏈，但切割序列沒有專一性。=2\*ROMANII型酶辨認位點（回文序列）嚴格專一，并在辨認位點內(nèi)將雙鏈切斷。（最具實用價值）=3\*ROMANIII型酶辨認位點嚴格專一（不是回文序列），但切點不專一，往往不在辨認位點內(nèi)部。9.什么叫DNA連接酶？（百度）答：是一種封閉DNA鏈上缺口酶，借助ATP或NAD水解提供的能量催化DNA鏈的5'-PO4與另一DNA鏈的3'-OH生成磷酸二酯鍵。11.什么是反轉(zhuǎn)錄酶？常用有哪些？重要用途？（P121）答：反轉(zhuǎn)錄酶（reversetranscriptase）是以RNA為模板指導(dǎo)脫氧核苷酸合成互補DNA的酶。常用兩類：①AMV：二鏈多肽。具5’—3’DNA活性。具很強的RNA酶活性（用途：降解與DNA雜交的RNA）；②M—MuLV：單肽。RNaseH活性弱。（用途：合成較長cDNA）。12.植物基因工程常用載體的作用？抱負載體應(yīng)具有條件？根據(jù)功能可分為哪幾類？（P123）答：作用：把外源DNA帶進宿主細胞，并使之在細胞內(nèi)建立穩(wěn)定的遺傳狀態(tài)，在細胞內(nèi)繁殖、傳代或進行表達。條件：①能自主復(fù)制，即外源DNA插入后也如此。②載體應(yīng)具有可供選擇的遺傳標記，可以借助于這些標記容易地把轉(zhuǎn)化的細胞與未轉(zhuǎn)化的分開，把重組分子與非重組分子所轉(zhuǎn)化的細胞相區(qū)別，便于進行重組體篩選和堅定。③載體分子的合適位置上必須有供外源DNA插入的位點，即克隆位點。④載體自身應(yīng)盡量小，不含或盡量少含多余DNA部分，這樣可以容納較大外源DNA。⑤載體的特性應(yīng)是充足掌握的，涉及基因和酶切位點的準確位置，以及它的核苷酸序列。功能分類：①克隆載體：重要是對目的基因克隆，建立DNA文庫和cDNA文庫，其上有復(fù)制子即可②表達載體：能使目的基因在宿主細胞表達充足③穿梭載體：可在原核細胞中復(fù)制，也可在真核細胞中擴增表達。13.質(zhì)粒載體的基本特性？常用質(zhì)粒載體種類？（P123~124）答：質(zhì)粒（plasmid）存在于多種細菌中，是能自主復(fù)制的雙鏈環(huán)狀DNA分子，是染色體外獨立的遺傳因子。除具有DNA復(fù)制原點外，還產(chǎn)生抗生素、低抗抗菌素、降解有機化合物，產(chǎn)生大腸菌素，內(nèi)毒素，或限制性和修飾性的酶等基因。常用種類：pBR322和pUC系列質(zhì)粒。14.下列符號含義：AmpR,Tetr,Cmr,Kanr（P124）答：①抗氨芐青霉素標記②抗四環(huán)素標記③抗氯霉素標記④抗卡那霉素標記16.什么是YeastArtificialchromosome、BacterialArtificialchromosome?答：①是酵母人工染色體（YeastArtificialchromosome，YAC）。是目前能容納最大外源DNA片段的載體。（P126）②細菌人工染色體（BacterialArtificialchromosome，BAC）指一種以F質(zhì)粒（F-plasmid）為基礎(chǔ)建構(gòu)而成的細菌染色體克隆載體，長用來克隆150kb左右大小的DNA片段，最多可保存300kb個堿基對。（百度）17.什么是PCR？PCR反映原理、重要體系與重要環(huán)節(jié)？答：聚合酶鏈式反映（polymerasechainreaction,PCR）。是運用酶促反映體外合成特異DNA片段的新方法。反映原理：由高溫變性、低溫退火和適溫延伸三部。反映體系：PCR反映緩沖液；模板DNA；底物dNTP濃度；引物；DNA聚合酶及其濃度重要環(huán)節(jié)：在高溫（95℃）下，待擴增的靶DNA雙鏈受熱變性成為兩條單鏈DNA模版；再在低溫（37~55℃）下，兩條人工合成的寡核苷酸引物與互補的單鏈DNA模版退火結(jié)合形成部分雙鏈；最后將溫度升到72℃左右保溫，以引物3’端為合成起點，以4種脫氧核苷酸（dNTP）為原料，沿模版以5’→3’方向延伸，合成心得互補鏈。這樣，每一雙蓮的DNA模板，通過一次解鏈、退火、延伸3個環(huán)節(jié)的熱循環(huán)后就成了兩條DNA分子。如此反復(fù)，PCR產(chǎn)物以2n的指數(shù)形式迅速擴增，通過25~30個循環(huán)后，理論上可使模板DNA擴增106~107倍以上。什么是RT-PCR與實時定量PCR（realtimePCR）p133RT-PCR：以mRNA為模板，反映體系中，加入反轉(zhuǎn)錄酶，RNA通過反轉(zhuǎn)錄酶反轉(zhuǎn)錄為cDNA，再以cDNA為模板進行的PCR反映稱為RT-PCR。RT-PCR具有很高的敏感性，可以用來分析不同組織或是相同組織不同發(fā)育階段中mRNA表達狀況的相關(guān)性。實時定量PCR：是一種在反映體系中加入熒光集團，運用Taq酶的5’-3’外切核酸酶活性和熒光能量傳遞技術(shù)，巧妙地把核酸擴增，雜交，光譜分析和實時檢測技術(shù)結(jié)合在一起，借助于熒光信號的積累來實時監(jiān)測整個PCR進程，最后通過標準曲線對未知核酸模板進行定量分析的方法。可分為絕對定量和相對定量兩種。19.Southern印跡雜交、Northern雜交、Western雜交重要檢測對象是什么？P135Northern雜交用于分析RNA；Southern雜交用于分析DNA；Western雜交用于分析蛋白質(zhì)。園藝植物基因的分離與克隆1.什么是GMOs？GMOs:Geneticallymodifiedorganisms（即轉(zhuǎn)基因作物）轉(zhuǎn)基因作物：通過基因工程技術(shù)導(dǎo)入某種基因的植物、動物、微生物。所謂轉(zhuǎn)基因生物,即為了達成特定的目的而將DNA進行人為改造的生物。通常的做法是提取某生物具有特殊功能(如抗病蟲害、增長營養(yǎng)成分)的基因片斷,通過基因技術(shù)加入到目的生物當中。（百度）

2.第一代與第二代轉(zhuǎn)基因作物有何特點？第一代轉(zhuǎn)基因作物是抗病、抗蟲、抗除草劑轉(zhuǎn)基因作物。第二代轉(zhuǎn)基因作物重要目的是提高作物產(chǎn)品的品質(zhì)，增長營養(yǎng)保健。更豐富的微量元素，維生素和蛋白質(zhì)，低脂肪，低膽固醇，抗癌，藥用。（ppt上內(nèi)容）

3.園藝植物基因工程技術(shù)重要環(huán)節(jié)？（ppt上）目的基因分離與克隆--目的基因修飾（啟動子，終止子）--植物表達載體構(gòu)建--遺傳轉(zhuǎn)化（Ti介導(dǎo)的質(zhì)粒轉(zhuǎn)化，PEG介導(dǎo)的原生質(zhì)體轉(zhuǎn)化，植物DNA病毒介導(dǎo)的轉(zhuǎn)化，電激，基因槍，花粉管通道法）--轉(zhuǎn)化植物細胞的篩選--植株再生--轉(zhuǎn)基因植株鑒定（PCR，southern或western雜交，表型檢測）--發(fā)放或進一步哺育新優(yōu)品種

4.什么是基因gene？P118五基因是實體，它的物質(zhì)基礎(chǔ)是DNA或RNA，基因是具有一定遺傳效應(yīng)的DNA分子中特定的核苷酸序列，它是遺傳信息傳遞和性狀分化，發(fā)育的依據(jù)，基因是可分的。根據(jù)基因的產(chǎn)物可將基因分為結(jié)構(gòu)基因，調(diào)節(jié)基因，無翻譯產(chǎn)物基因。簡言之，基因是一個具有特定遺傳信息的核苷酸序列，它是遺傳物質(zhì)的最小功能單位?；虻?個基本特性？（ppt）①都有固定的一級結(jié)構(gòu)，即核苷酸序列②每一個基因在染色體均占有特定的位置（座位）③均有特定轉(zhuǎn)錄模式（編碼mRNA或④大多數(shù)基因均有特定的功能基因文庫的定義及類型？（課本p138)基因文庫（genelibrary)是一組DNA或cDNA序列克隆的集合體。園藝植物基因組文庫是指來自園藝植物基因組所有DNA片段組成的基因文庫。一般規(guī)定所構(gòu)建的植物基因組文庫必須符合以下幾個基本條件：①文庫可以覆蓋整個基因組②插入的DNA片段比較大③文庫易于保存且比較穩(wěn)定基因文庫涉及基因組文庫（genomiclibrary)和cDNA文庫（cDNAlibrary)?；蚪MDNA文庫構(gòu)建重要流程？（課本p138）①載體的制備②大片段基因組DNA的制備③大片段DNA與克隆載體的連接④載體的遺傳轉(zhuǎn)化⑤克隆的挑取、驗證⑥文庫的擴增、分裝于保存cDNA文庫構(gòu)建流程？（ppt)具有目的基因的組織或細胞純化mRNA樣品的制備cDNA第一鏈的合成雙鏈cDNA的合成cDNA的甲基化銜接頭與cDNA相連接制備cDNA文庫什么是基因序列同源克隆(p152)與圖位克隆Map-basdecloning?不同物種間基因和基因順序具有保守性。基因序列同源保守性：不同種植物，行駛類似功能的基因，其一級結(jié)構(gòu)也許相同或極其相似。據(jù)此，從一種生物中分離獲得的基因可被用作探針，來分離另一生物與之相應(yīng)的同源基因。（ppt)圖位克隆(Map-basdecloning)又稱定位克?。╬ositionalcloning)，是根據(jù)目的基因在染色體上位置進行基因克隆的一種方法。圖位克隆的原理是一方面找到一個與目的基因相連的DNA分子標記，然后通過染色體步移技術(shù)克隆分離出目的基因。（書本p144)園藝植物遺傳轉(zhuǎn)化載體的構(gòu)建有效的植物遺傳轉(zhuǎn)化載體必須具有的功能？（ppt)①能作為媒介將外源基因?qū)胫参锛毎?，并且整合到宿主細胞的基因組DNA上。②能提供被宿主細胞的復(fù)制和轉(zhuǎn)錄系統(tǒng)所辨認的DNA序列，即啟動子和復(fù)制子起始位點，以保證外源基因能在植物細胞中進行復(fù)制和表達。Agrobacteriumtumefaciens與Agrobacteriumrhizogenes是什么？植物體遺傳轉(zhuǎn)化中常用的質(zhì)粒載體？（ppt)Agrobacteriumtumefaciens：根癌農(nóng)桿菌Agrobacteriumrhizogenes：發(fā)根農(nóng)桿菌Ti質(zhì)粒載體，Ri質(zhì)粒載體Ti質(zhì)粒的重要結(jié)構(gòu)？P159答：根據(jù)功能不同可以將Ti質(zhì)粒劃分為4個區(qū)段：1、與基因轉(zhuǎn)移相關(guān)的T-DNA區(qū)；2、激活T-DNA的轉(zhuǎn)移，使農(nóng)桿菌對植物表現(xiàn)出侵染性的毒性區(qū)，即Vir區(qū)；3、調(diào)控Ti質(zhì)粒在農(nóng)桿菌間發(fā)生結(jié)合轉(zhuǎn)移的Con區(qū)；4、調(diào)控Ti質(zhì)粒自我復(fù)制的Ori區(qū)4、什么是”卸甲載體”（disarmedvector）？P159卸甲載體是無毒的Ti質(zhì)粒載體，又稱onc-載體，是將Ti質(zhì)粒的T-DNA區(qū)中的有致瘤作用的onc-基因切除，即“卸甲”，以此作為遺傳轉(zhuǎn)化載體時，不會影響植物的生長。5、什么叫共整合載體（co-integratedvector）?P161指中間載體與改造后的受體Ti質(zhì)粒之間，通過同源重組所產(chǎn)生的一種復(fù)合型載體。由于該載體的T-DNA區(qū)與Ti質(zhì)粒的Vir區(qū)連鎖，因此又稱為順式載體。6、什么叫雙元載體（binaryvector）系統(tǒng)？其特點是什么？P164是指由兩個分別具有T-DNA區(qū)和Vir區(qū)的相容性突變Ti質(zhì)粒構(gòu)成的雙質(zhì)粒系統(tǒng)。特點：1、可以在大腸桿菌和根癌瘤桿菌中復(fù)制，并且和Ti質(zhì)粒是相容的；2、具有Ti質(zhì)粒的左右兩側(cè)或右側(cè)的邊沿區(qū)序列，使DNA可以轉(zhuǎn)移到植物細胞；3、邊沿區(qū)序列內(nèi)包含植物選擇標記嵌合基因，用于轉(zhuǎn)基因陽性株的初步篩選；4、帶有抗生素基因，一般是Kanr基因，可以作為細菌轉(zhuǎn)化子的選擇記號。7、載體構(gòu)建中常用的選擇標記基因（selectablemarkergene）概念與基本特點？列舉1-2種常用的選擇標記基因。概念：選擇標記基因是指其編碼產(chǎn)物可以使轉(zhuǎn)化的細胞、組織具有對抗生素或除草劑及其他一些脅迫物質(zhì)的抗性，或者使轉(zhuǎn)化的細胞、組織具有代謝的優(yōu)越性，從而在具有這些選擇試劑的培養(yǎng)基中可以繼續(xù)存活，進而將轉(zhuǎn)化的細胞、組織從大量的細胞或組織中篩選出來的一類基因。特點：1、編碼一種不存在于正常植物細胞中的酶；2、基因較小，可構(gòu)成嵌合基因；3、能在轉(zhuǎn)化細胞中得到充足表達；4、檢測容易，并能定量分析；5、選擇劑最佳可以克制植物細胞的正常生長，但并不殺死細胞，由于死細胞往往對鄰近細胞有很強的克制作用；6、標記基因的表達產(chǎn)物應(yīng)為轉(zhuǎn)化細胞提供抵抗選擇劑克制的作用，選擇培養(yǎng)基中使用的抗代謝物（即選擇劑）對轉(zhuǎn)化細胞再生植株的生長發(fā)育不應(yīng)有明顯的影響；7、最佳有一種簡便方法可以檢測選擇標記基因在轉(zhuǎn)化細胞或植株中的表達。舉例：Kanr(卡那霉素抗性基因)、Tetr(四環(huán)素抗性基因)、Ampr(氨芐青霉素抗性基因)8、載體構(gòu)建中常用的報告基因（reportergene）概念與基本特點？列舉1-2種常用的報告基因。是指其編碼產(chǎn)物可以被快速地測定，通過它的表達來標定目的基因是否導(dǎo)入到受體細胞、組織、器官中的一類特殊用途的基因。特點：1、其產(chǎn)物在原植物中不存在，并對宿主植物細胞無毒性；2、表達產(chǎn)物應(yīng)有適度的穩(wěn)定性以利于檢測；3、檢測手段高度敏感，檢測方法簡樸、靈敏并可以定量；4、檢測過程應(yīng)不具有破壞性。舉例：β-葡萄糖苷酸酶（GUS基因）、綠色熒光蛋白（GFP）基因9、什么叫正義表達載體與反義表達載體？正義表達載體：是遺傳轉(zhuǎn)化載體中最常構(gòu)建的一種載體類型，是目的基因以全長或功能單元正向的方式連接于植物啟動子下游，轉(zhuǎn)化植物后，在啟動子的驅(qū)動下，實現(xiàn)外源基因的表達。反義表達載體：將目的基因按照3’-5’的方向反向連接到啟動子后，通過在植物中進行的轉(zhuǎn)錄過程，獲得一個與原基因mRNA完全互補的序列，進而與內(nèi)源基因形成雙鏈mRNA結(jié)構(gòu)，從而阻止內(nèi)源基因的翻譯過程，達成克制基因表達的目的。第十章園藝植物遺傳轉(zhuǎn)化什么叫植物遺傳轉(zhuǎn)化(plantgenetictransformation)？

植物遺傳轉(zhuǎn)化是應(yīng)用分子重組技術(shù)、細胞組織培養(yǎng)技術(shù)或種質(zhì)系統(tǒng)轉(zhuǎn)化技術(shù)，有目的地將外源基因或DNA片段插入到受體植物基因組中，并使其在后代植株中得得以表達的過程。什么是植物遺傳轉(zhuǎn)化受體系統(tǒng)(receptorsystem)？常用的遺傳轉(zhuǎn)化受體系統(tǒng)有哪些？植物遺傳轉(zhuǎn)化受體系統(tǒng)：是指用于轉(zhuǎn)化的外植體通過組織培養(yǎng)途徑或其他非組織培養(yǎng)途徑，能高效、穩(wěn)定地再生無性系，并能接受外源DNA整合，對轉(zhuǎn)化選擇抗生素敏感的再生系統(tǒng)。常用的遺傳轉(zhuǎn)化受體系統(tǒng)：組織受體系統(tǒng)、原生質(zhì)體受體系統(tǒng)、生殖細胞受體系統(tǒng)什么叫園藝植物遺傳轉(zhuǎn)化中外源DNA直接轉(zhuǎn)化法？并列舉外源DNA直接轉(zhuǎn)化法：通過物理或化學(xué)方法直接將外源目的基因?qū)胫参锘蚪M中物理方法：電穿孔轉(zhuǎn)化法、基因槍轉(zhuǎn)化法、激光微束穿孔轉(zhuǎn)化法、體內(nèi)注射法、超聲波法等化學(xué)方法：PEG、脂質(zhì)體介導(dǎo)轉(zhuǎn)化法什么是基因槍轟擊法（微彈轟擊技術(shù)micro-projectilebombardment)、葉盤轉(zhuǎn)化法Leaf-discmethod？優(yōu)缺陷？基因槍轟擊法：是運用火藥爆炸、高壓氣體和高壓放電作為驅(qū)動力，將包裹有生物活性DNA的金屬小顆粒加速，高速轟擊植物組織或細胞，是外源基因?qū)崿F(xiàn)穿壁并導(dǎo)入受體細胞中，然后通過細胞和組織培養(yǎng)技術(shù)，再生出新的植株類型的技術(shù)。優(yōu)點：（1）無宿主限制，特別適宜那些由原生質(zhì)體再生植株較為困難和對農(nóng)桿菌感染不敏感的單子葉植物，提高單子葉植物的轉(zhuǎn)化效率。（2）操作簡樸，可控限度高，可以根據(jù)實驗需要調(diào)控微彈的速度和射入濃度，命中特定層次的細胞，提高遺傳轉(zhuǎn)化效率（3）靶受體類型廣泛，不受基因型限制，能轉(zhuǎn)化所有具有分生潛力的植物的任何組織或細胞（4）可將外源基因?qū)刖€粒體、葉綠體等植物細胞的細胞器，反復(fù)性好，獲得外源基因能穩(wěn)定表達的轉(zhuǎn)基因株系，這是目前質(zhì)體轉(zhuǎn)化研究中最常用和最有效的DNA導(dǎo)入方法。缺陷：基因槍轟擊法因轟擊的隨機性導(dǎo)致轉(zhuǎn)化的效率極低；成本高；出現(xiàn)非轉(zhuǎn)化體和嵌合體的比率大；基因插入往往是多拷貝隨機整合到受體基因組中，也許發(fā)生多種方式的重排，也也許會由于與植物自身序列同源而互相作用，導(dǎo)致轉(zhuǎn)錄或轉(zhuǎn)錄后水平的基因沉默，因而遺傳穩(wěn)定性差；轟擊過程中也許導(dǎo)致外源基因的斷裂，使插入的基因成為無活性的片段。（非官方）葉盤轉(zhuǎn)化法：多種農(nóng)桿菌Ti質(zhì)粒介導(dǎo)的植物基因轉(zhuǎn)化方法之一優(yōu)點：運用天然的載體系統(tǒng)，成功率高，效果好；轉(zhuǎn)移的外源基因常為單拷貝整合，很少發(fā)生甲基化和轉(zhuǎn)基因沉默，遺傳穩(wěn)定，并且符合孟德爾遺傳定律；費用低，方法簡樸，易于操作；與基因槍法結(jié)合使用，效果更佳；合用寄主范圍廣，幾乎所有的雙子葉植物都可采用此法。缺陷：大多數(shù)單子葉植物，特別是禾本科作物對農(nóng)桿菌不敏感，限制了它的應(yīng)用范圍；農(nóng)桿菌侵染后的外植體再生階段脫菌比較困難，需要長期使用抗生素，給實驗帶來麻煩。（此法屬于載體介導(dǎo)遺傳轉(zhuǎn)化法，優(yōu)缺陷來自載體介導(dǎo)遺傳轉(zhuǎn)化法）5、什么是園藝植物遺傳轉(zhuǎn)化中載體介導(dǎo)遺傳轉(zhuǎn)化法（vector-mediatedtransformation）？基本環(huán)節(jié)？優(yōu)缺陷？載體介導(dǎo)遺傳轉(zhuǎn)化法：通過將目的基因連接在植物表達載體上，隨著載體DNA的轉(zhuǎn)移而將外源目的基因整合到植物基因中的方法?；经h(huán)節(jié)：（1）含重組Ti質(zhì)粒的工程菌培養(yǎng)及轉(zhuǎn)化（2）選擇合適的外植體（3）工程菌與外植體共培養(yǎng)（4）外植體脫菌及篩選培養(yǎng)（5）轉(zhuǎn)化植株再生及鑒定優(yōu)點：運用天然的載體系統(tǒng)，成功率高，效果好；轉(zhuǎn)移的外源基因常為單拷貝整合，很少發(fā)生甲基化和轉(zhuǎn)基因沉默，遺傳穩(wěn)定，并且符合孟德爾遺傳定律；費用低，方法簡樸，易于操作；與基因槍法結(jié)合使用，效果更佳；合用寄主范圍廣，幾乎所有的雙子葉植物都可采用此法。缺陷：大多數(shù)單子葉植物，特別是禾本科作物對農(nóng)桿菌不敏感，限制了它的應(yīng)用范圍；農(nóng)桿菌侵染后的外植體再生階段脫菌比較困難，需要長期使用抗生素，給實驗帶來麻煩。什么是園藝植物遺傳轉(zhuǎn)化中種質(zhì)轉(zhuǎn)化法?有何特點？列舉常用的轉(zhuǎn)化方法？（p188）以植物自身種質(zhì)細胞為媒介，將外源DNA導(dǎo)入完整植物細胞，實現(xiàn)遺傳轉(zhuǎn)化的技術(shù)稱為種質(zhì)轉(zhuǎn)化系統(tǒng)（germlinetransformation），該技術(shù)也稱為生物媒體轉(zhuǎn)化系統(tǒng)或整株活化（inplantatransformation）。該技術(shù)具有如下特點：1.目的DNA可以是裸露的DNA，也可以是總DNA或重組質(zhì)粒DNA，還可以是某些DNA片段2.轉(zhuǎn)化過程依靠植物自身的種質(zhì)系統(tǒng)或細胞結(jié)構(gòu)來實現(xiàn)，不需要細胞分離、組織培養(yǎng)和再生植株等復(fù)雜技術(shù)3.方法簡樸易行，并與常規(guī)育種緊密結(jié)合。它已發(fā)展稱為一種頗有潛力的轉(zhuǎn)化系統(tǒng)。具體方法涉及植物原位真空滲入法、花粉管通道法和浸泡轉(zhuǎn)化法等。

7.園藝植物遺傳轉(zhuǎn)化植株常用鑒定方法有哪些？（p190）（一）運用選擇標記基因和報告基因鑒定抗生素抗性基因鑒定2.除草劑抗性基因鑒定3.顯色或發(fā)光基因鑒定（二）運用重組DNA分子特性鑒定重組DNA分子酶切圖譜鑒定2.PCR技術(shù)鑒定3.Southern雜交技術(shù)鑒定（三）運用外源基因的轉(zhuǎn)錄或表達鑒定1.Northern雜交與點雜交技術(shù)鑒定2.Western雜交技術(shù)鑒定3.蛋白質(zhì)免疫測定技術(shù)鑒定

8.什么是轉(zhuǎn)基因植物中外源基因沉默？（p193）園藝植物遺傳轉(zhuǎn)化的目的是獲得能高效表達、穩(wěn)定遺傳的轉(zhuǎn)基因株系，但大量的實驗表白，導(dǎo)入并整合進受體基因組中的外源基因在轉(zhuǎn)化體的當代或其后代中出現(xiàn)表達受到克制，甚至并不完全表達的現(xiàn)象，稱為轉(zhuǎn)基因沉默（transgenesilencing）。轉(zhuǎn)基因沉默分為轉(zhuǎn)錄水平上的基因沉默（TGS）和轉(zhuǎn)錄后水平上的基因沉默（PTGS）

第十一章轉(zhuǎn)基因技術(shù)在園藝植物育種的應(yīng)用

1.園藝植物基因工程重要應(yīng)用領(lǐng)域有哪些？（p202）轉(zhuǎn)基因技術(shù)在園藝植物育種上的應(yīng)用重要表現(xiàn)為，一是可提高作物產(chǎn)量和改善作物的抗蟲、抗病、抗除草劑等抗逆能力；二是改善園藝產(chǎn)品的營養(yǎng)價值和食用風味，如營養(yǎng)成分含量、風味品質(zhì)、延遲貨架壽命和保存時間，以及用食品工程菌生產(chǎn)食品添加劑和功能因子等。（或?qū)懸?、哺育抗病品種二、哺育抗蟲品種三、哺育抗逆品種四、哺育抗除草劑品種五、哺育耐儲運品種六、發(fā)明雄性不育材料七、改良產(chǎn)品營養(yǎng)品質(zhì)八、改變花卉作物的花型和花色九、提高光合速率和固氮能力十、改良其他性狀

第12～15章

1.什么是遺傳標記，抱負的遺傳標記需具有哪些特點？（p233）遺傳標記是指園藝植物基因型特殊的、易于辨認的表現(xiàn)形式，涉及外部形態(tài)、染色體結(jié)構(gòu)與數(shù)目、生物大分子結(jié)構(gòu)與序列等方面的變異，而所有的遺傳標記則構(gòu)成了園藝植物的遺傳多態(tài)性。抱負的遺傳標記具有的特點：1.多態(tài)性高，標記數(shù)目多，提供的信息量大2.共顯性遺傳，能區(qū)分純合基因型與雜合基因型3.表現(xiàn)中性，不影響目的性狀表達，與不良性狀無必然連鎖4.表現(xiàn)穩(wěn)定，不受植株內(nèi)外環(huán)境的影響5.經(jīng)濟方便，易于觀測記載2.什么是分子標記？分子標記具有什么特點？廣義的分子標記（molecularmarker）是指具有遺傳多態(tài)性的生物大分子，涉及DNA標記和生化標記；狹義的分子標記專指直接反映DNA核苷酸序列多態(tài)性的DNA標記。多態(tài)性高，標記數(shù)目多，提供信息量大。2.共顯性遺傳，能區(qū)分純合基因型與雜交基因型。3.表現(xiàn)中性，不影響目的性狀表達，與不良性狀無必然連鎖。4.表現(xiàn)穩(wěn)定，不受植物內(nèi)外環(huán)境的影響。5.經(jīng)濟方便，易于觀測記載。

3.分子標記產(chǎn)生多態(tài)性的分子基礎(chǔ)是什么？園藝植物分子標記多態(tài)性的分子基礎(chǔ)重要有三種：DNA序列酶切位點（或PCR引物結(jié)合位點）處的堿基發(fā)生突變，導(dǎo)致酶切位點（或PCR引物結(jié)合位點）消失、酶切引物（或擴增產(chǎn)物）減少。2.DNA序列酶切位點（或PCR引物結(jié)合位點）之間缺失（或插入）了一段核苷酸序列，或者是酶切位點（或PCR引物結(jié)合位點）之間的串聯(lián)反復(fù)單元數(shù)數(shù)目發(fā)生了改變，導(dǎo)致酶切產(chǎn)物（或PCR引物結(jié)合位點）片段長度發(fā)生改變。3.單核苷酸突變，即DNA序列發(fā)生了單堿基轉(zhuǎn)換（如一種嘧啶置換了另一種嘧啶或一種嘌呤置換了另一種嘌呤）或顛換（嘌呤與嘧啶互換）

4.什么是RFLP？RFLP標記有何特點？RFLP技術(shù)的基本環(huán)節(jié)是如何的？RFLP：運用限制性內(nèi)切核酸酶切割不同生物個體的DNA，根據(jù)具有與雜交探針的同源序列的酶切片段的長度來檢測DNA序列差異的技術(shù)。RFLP標記有何特點優(yōu)點：1.結(jié)果可靠，這是由限制性內(nèi)切核酸酶辨認序列的專一性決定的。2.結(jié)果穩(wěn)定。3.RFLP標記的等位基因間是共顯性的。4.非等位基因間不存在基因互作，標記互不干擾。5.變異在數(shù)量上幾乎不受限制。缺陷：1.需要高純度DNA。2.所需設(shè)備多，檢測環(huán)節(jié)多，技術(shù)較復(fù)雜，周期長，成本高。3.通常用到同位素，對人體有一定傷害。4.具有種屬特異性，且只適應(yīng)單拷貝和低拷貝基因。5.多態(tài)信息含量低。RFLP技術(shù)的基本環(huán)節(jié)：321.提取高純度的核酸植物基因組DNA。2.運用限制性內(nèi)切核酸酶切割DNA，獲得長度不同的DNA片段。3.運用瓊脂糖凝膠電泳分離這些片段，使不同長度的片段處在凝膠的不同位置，形成連續(xù)的電泳譜帶。4.將凝膠放入堿性緩沖液，使DNA分子由雙鏈變性為單鏈。5.運用毛細管作用將單鏈DNA分子由凝膠轉(zhuǎn)移并固定到固相支持物上，稱為轉(zhuǎn)膜。6.用P或者生物素標記準備好的同源探針，并將其變性為單鏈。7.將標記好的探針與硝酸纖維膜或尼龍膜上的DNA片段進行雜交，然后洗去為雜交的單鏈探針。8.運用放射自顯影或免疫技術(shù)檢測雜交信號，顯示雜交帶，假如雜交帶的位置有差異，那么這種差異就是RFLP。

4.什么是RAPD？RAPD標記有何特點？32RAPD（隨機擴增多態(tài)性DNA）：基于PCR基礎(chǔ)之上的一種可對整個未知序列的基因組進行多態(tài)性分析的分子技術(shù)。操作環(huán)節(jié)與常規(guī)PCR基本相似，只是引物不同。(百度)RAPD標記有何特點：優(yōu)點：1.所需模板DNA量少，對DNA質(zhì)量規(guī)定不高。2.分析程序簡樸，不涉及放射性同位素。3.不需了解目的的基因的DNA序列，不需要設(shè)計專門的引物。4.引物在不同物種間具有通用性。5.引物合成商品化，成本低。6.可用引物數(shù)量多，覆蓋整個基因組，多態(tài)性檢出率高。缺陷：1.退火溫度低，PCR反映受環(huán)境條件影響較大，檢測結(jié)果穩(wěn)定性低、反復(fù)性差。2.大部分RAPD標記表現(xiàn)顯性，不能區(qū)分雜合與純合基因型，不能提供完整的遺傳信息。3.存在共遷移過程問題，同一條帶中也許具有長度相同而序列不同的片段。

6.什么是AFLP？AFLP標記有何特點？AFLP擴增片段長度多態(tài)性選擇性擴增園藝植物基因組DNA的雙酶切片段，檢測的多態(tài)性是酶切位點的變化或酶切片段間DNA序列的插入與缺失，其實質(zhì)是RFLP和PCR兩項技術(shù)的結(jié)合，既有RFLP的可靠性，也有PCR的靈敏性。特點（缺陷）：對基因組ＤＮＡ和限制酶的質(zhì)量規(guī)定高，酶切不完全也許會出現(xiàn)假陽性；操作環(huán)節(jié)較多，對實驗技能規(guī)定較高，成本也較高；大多數(shù)為顯性標記，并且很能鑒別等位基因；該技術(shù)已申請專利，只能用于非賺錢性的科學(xué)研究。7.什么是SSR？SSR標記有何特點？ＳＳＲ稱為微衛(wèi)星或簡樸序列反復(fù)ＳＳＲ兩側(cè)是高度保守的單拷貝序列，可根據(jù)ＳＳＲ兩側(cè)序列設(shè)計一引物，運用ＰＣＲ技術(shù)對ＳＳＲ自身進行特異性擴增，經(jīng)聚丙烯酰胺凝膠電泳分離后，擴增片段長短的變化可以顯示該物種不同基因型ＤＮＡ在每個ＳＳＲ位點上的多態(tài)性，這種多態(tài)性便是ＳＳＲ標記。特點：優(yōu)點：多態(tài)性高；共顯性遺傳，能區(qū)分純合和雜合基因型；操作簡樸，快捷；技術(shù)反復(fù)性好，結(jié)果穩(wěn)定可靠；所需ＤＮＡ量少，且對其質(zhì)量不高。缺陷：需要根據(jù)標記兩端的ＤＮＡ序列信息設(shè)計特異引物，比較耗時費力，要檢測多個基因不現(xiàn)實；具有物種特異性，不同的物種均需要開發(fā)其相應(yīng)的ＳＳＲ標記。8.什么是SNP？SNP標記有何特點？ＳＮＰ單核苷酸多態(tài)性是指園藝植物基因組由于單個核苷酸變異而引起的ＤＮＡ序列多態(tài)性，涉及單堿基的轉(zhuǎn)換，顛換以及單堿基的插入或缺失。（理論上，ＳＮＰ在一個核苷酸位置可以有四種堿基形式，即具有四個等位基因，但事實上ＳＮＰ多表現(xiàn)為雙等位基因，稱為雙等位基因標記。）特點：優(yōu)點：雙等位基因標記，便于自動化分析；分布廣泛，數(shù)量豐富，遺傳穩(wěn)定；共顯性遺傳；某些ＳＮＰ位于基因編碼區(qū)，直接影響蛋白質(zhì)結(jié)構(gòu)與功能，也許直接控制重要性狀的變異；檢測技術(shù)已實現(xiàn)了半自動化或全自動化。9.分子標記在園藝植物上都用哪些應(yīng)用？分子遺傳圖譜構(gòu)建和基因定位；分子標記輔助選擇育種；遺傳多樣性和親緣關(guān)系分析；核心種質(zhì)構(gòu)建；園藝植物品種鑒定與純度分析。什么是核心種質(zhì)？核心種質(zhì)具有的特性有哪些？（書P243）核心種質(zhì)：能最大限度地代表種質(zhì)資源遺傳多樣性的最小數(shù)量種質(zhì)資源，從而提高種質(zhì)的保存、評價與運用效率，而核心種質(zhì)以外的種質(zhì)資源則作為保存種質(zhì)（reservecollection）保存。特性：異質(zhì)性、代表性、實用性和動態(tài)性等。異質(zhì)性：核心種質(zhì)彼此間的相似性要盡也許小，應(yīng)最大限度地避免遺傳反復(fù)。代表性：核心種質(zhì)應(yīng)代表本物種及其近緣種盡也許多的生態(tài)和遺傳多樣性，而不是所有種質(zhì)資源的簡樸壓縮。實用性：核心種質(zhì)的規(guī)模急劇減小，應(yīng)極大地提高對其保存、評價與運用的效率，使符合需要的資源能更容易地被篩選出來。動態(tài)性：隨著研究的進一步、對資源結(jié)識的加深以及應(yīng)用需求的變化，核心種質(zhì)與保存種質(zhì)之間應(yīng)保持材料上的動態(tài)交流與調(diào)整，使整個種質(zhì)資源的管理和運用更方便。12、什么是暫時性分離群體？什么是永久性分離分離群體？（概念為112班14號自己組織語言定義，詳情見書P239）暫時性分離群體：以單株為分離單位，自交后遺傳組成發(fā)生變化無法永久保存和使用的（用于構(gòu)建園藝植物分子遺傳圖譜的）分離群體。重要有F1、F2、BC等分離群體。永久性分離群體：以株系為分離單位，以不同株系間具基因型差異但株系內(nèi)部基因型相同且純合故自交不分離為理論基礎(chǔ)，自交或近交后可永久保存和使用的（用于構(gòu)建園藝植物分子遺傳圖譜的）分離群體。13、什么重組自交系？（書P240）什么是近等位基因系？（書P241）（1）重組自交系：F2單粒傳代法（singleseeddescent，SSD）經(jīng)多代自交而建立的一種作圖群體。（2）近等基因系（NIL）：只有個別基因或性狀差異的一系列品系。（式一系列回交過程的產(chǎn)物）14、什么是DH群體？（書P240）通過F1植株花藥離體培養(yǎng)誘導(dǎo)產(chǎn)生單倍體植株后將其染色體加倍產(chǎn)生的一類純合的永久性群體。15、什么是分子標記輔助選擇（MAS）？（書P241）MAS在園藝植物育種中的應(yīng)用和優(yōu)越性有哪些？（十二章李英老師ppt）MAS（molecularassistantselection)：可以借助分子標記對目的性狀的基因型進行選擇。應(yīng)用及優(yōu)越性：可以在植物發(fā)育的任何階段進行選擇,對目的性狀的選擇不受基因表達和環(huán)境的影響,可在早代進行準確的選擇,加速育種進程,提高育種效率共顯性標記可區(qū)分純合體和雜合體,不需下代再鑒定,并且在分離世代能快速準確地鑒定植株的基因型可有效地對抗病性、抗逆性和根部性狀等表型鑒定困難的性狀進行基因型鑒定可聚合多個有利基因提高育種效率克服不良性狀連鎖,有助于導(dǎo)入遠緣優(yōu)良基因16、什么是集團分離分析法（BSA）？（第十二章李英老師ppt）BSA（分離體分組混合分析法或混合分組分析法，又稱集團分離分析法，Bulked

Segregation

Analysis）：基于將分離群體中的個體依據(jù)研究的目的性狀（如抗病和染?。┨岢蓛山M，在每組群體中把各個個體的DNA等量混合，形成兩個DNA混合池為原理的近等基因池法。它克服了許多植物不易獲得近等基因系的缺陷。17、什么是生物信息學(xué)？它的研究內(nèi)容和任務(wù)是什么？P246（1）生物信息學(xué)是由生物學(xué)、計算機科學(xué)、數(shù)學(xué)、物理學(xué)、化學(xué)等學(xué)科互相結(jié)合而產(chǎn)生的一門新型學(xué)科，也是一門研究生物學(xué)系統(tǒng)和生物學(xué)過程中信息流的綜合系統(tǒng)科學(xué)，通過其獨特的橋梁作用和整合作用，人們可以從各生物學(xué)科眾多分散的觀測資料中獲得對生物學(xué)系統(tǒng)和生物學(xué)過程運營的理解，最終達成應(yīng)用于實踐的目的。（2）重要研究內(nèi)容：1、生物信息的收集、存儲和管理。2、基因組序列信息的提取和分析，開發(fā)快速功能強大的信息檢索工具及搜索后信息的自動化解決技術(shù)。3、功能基因組相關(guān)信息分析，強調(diào)用發(fā)展和整合的實驗方法分析基因組序列信息來闡述基因的功能。4、生物大分子結(jié)構(gòu)模擬。5、生物信息分析的技術(shù)和方法研究，發(fā)展有效的能支持大尺度作圖與測序需要的軟件，數(shù)據(jù)庫以及數(shù)據(jù)分析工具，創(chuàng)建合用與基因組信息分析的新技術(shù)、新方法等。重要研究任務(wù)是以計算機科學(xué)、工程和應(yīng)用數(shù)學(xué)為基礎(chǔ)，進行相關(guān)生物信息的獲取、加工、儲存、分派、分析和解釋等，即依賴實驗和衍生數(shù)據(jù)的大量存儲，將各種各樣的生物信息如基因序列、染色體定位、基因產(chǎn)物的結(jié)構(gòu)和功能及各生物種間的進化關(guān)系等進行搜集、分類和分析，并實現(xiàn)生命科學(xué)界的信息資源共享。18、國際上三大DNA綜合性數(shù)據(jù)庫是哪幾個？P247由美國國家生物技術(shù)信息中心（NationCenterforBiotechnologyInformation,NCBI）維護的GenBank數(shù)據(jù)庫。由歐洲生物信息學(xué)研究所（EuropeanBioinformaticsInstitute,EBI）維護的EMBL數(shù)據(jù)庫。由日本國立遺傳學(xué)研究所（JapanNationalinstituteofgeneticscenterforinformationbiology）維護的DDBJ數(shù)據(jù)庫。19、Blastn、Blastp、Blastx、tBlastn、tblastp的具體含義是什么？（網(wǎng)上含義。P252表13-2）（1）BLASTN是核酸序列到核酸庫中的一種查詢。庫中存在的每條已知序列都將同所查序列作一對一地核酸序列比對。（2）BLASTP是蛋白序列到蛋白庫中的一種查詢。庫中存在的每條已知序列將逐個地同每條所查序列作一對一的序列比對。（3）BLASTX是核酸序列到蛋白庫中的一種查詢。先將核酸序列翻譯成蛋白序列（一條核酸序列會被翻譯成也許的六條蛋白），再對每一條作一對一的蛋白序列比對。（4）TBLASTN是蛋白序列到核酸庫中的一種查詢。與BLASTX相反，它是將庫中的核酸序列翻譯成蛋白序列，再同所查序列作蛋白與蛋白的比對。（5）TBLASTP是蛋白序列對蛋白庫中的一種查詢。運用取代矩陣尋找較遠關(guān)系，可以進行SEG過濾。（書上木有，百度沒有具體解釋）20、Blast程序評價序列相似性中的兩個數(shù)據(jù)：Score（分值）和E值（e-value）具有什么意義？（網(wǎng)上）（1）SCORE:使用打分矩陣對匹配的片段進行打分，這是對各種氨基酸殘基（或堿基）打分求和的結(jié)果，一般來說，匹配片段越長、相似性越高則SCORE值越大。（2）e-value：在相同長度的情況下，兩個氨基酸殘基（或堿基）隨機排列的序列進行打分，得到上述SCORE值的概率的大小。E值越小表達隨機情況下得到該SCORE值的也許性越低。21、什么是EST？P253何謂電子克??？P254（1）EST(expressedsequencetag)是基因表達的短cDNA序列，他們攜帶完整基因的某些片段信息，將他們拼接起來就也許得到完整的基因。（2）運用計算機來協(xié)助克隆基因，稱為“電子”基因克?。╥nsillcocloning）,是運用生物信息學(xué)手段進行基因克隆的新方法，即采用生物信息學(xué)的方法通過EST或基因組的序列組裝和拼接，運用RT-PCR的方法快速地獲得部分乃至全長cDNA的序列。22、已知某一基因的DNA序列，如何預(yù)測其蛋白質(zhì)結(jié)構(gòu)？這題找不到，網(wǎng)上答案比較口語化。。大約意思就是把核酸序列成蛋白質(zhì)，然后用專門的軟件預(yù)測下蛋白質(zhì)的結(jié)構(gòu)。23、什么是蛋白質(zhì)組學(xué)？蛋白質(zhì)組學(xué)與基因組學(xué)的聯(lián)系和區(qū)別有哪些？（蛋白質(zhì)組學(xué)ppt.區(qū)別和聯(lián)系來自百度百科）蛋白質(zhì)組學(xué)(proteomics)是指應(yīng)用各種技術(shù)手段來研究蛋白質(zhì)組的一門新興科學(xué)，其目的是從整體的角度分析細胞內(nèi)動態(tài)變化的蛋白質(zhì)組成成份、表達水平與修飾狀態(tài)，了解蛋白質(zhì)之間的互相作用與聯(lián)系，揭示蛋白質(zhì)功能與細胞生命活動規(guī)律。區(qū)別：聯(lián)系：蛋白質(zhì)組學(xué)的重要研究手段有哪些？（蛋白質(zhì)組學(xué)ppt.）支撐技術(shù)重要有雙向凝膠電泳、以質(zhì)譜為代表的蛋白質(zhì)鑒定技術(shù)及生物信息學(xué)分析。25、雙向凝膠電泳的基本原理是什么？（蛋白質(zhì)組學(xué)ppt.）第歷來在高壓電場下對蛋白質(zhì)進行等電聚焦電泳(IEF),再在第歷來垂直方向上進行第二向SDS-聚丙烯酰胺凝膠電泳(SDS)。26、雙向電泳蛋白質(zhì)染色方法有哪些？各有什么特點？（蛋白質(zhì)雙向電泳及質(zhì)譜技術(shù)ppt.）膠體考馬斯亮藍染色-靈敏度為30~100ng，線性范圍是20倍-可實現(xiàn)PAGE的無背景染色-會對蛋白質(zhì)進行修飾而影響質(zhì)譜分析的結(jié)果胺基黑染色-轉(zhuǎn)印至聚偏二氟乙烯（PVDF）上的蛋白質(zhì)的染色-轉(zhuǎn)印至硝酸纖維素膜上的蛋白質(zhì)的染色銀染-可減少膠內(nèi)蛋白質(zhì)產(chǎn)量-對某些種類的蛋白質(zhì)染色效果差-對其后的蛋白質(zhì)測序和質(zhì)譜分析導(dǎo)致影響負染-重要涉及金屬鹽染料、鋅－咪唑染料等的使用-能專門提高PAGE膠上蛋白質(zhì)的回收率-速度快（5~15min）且能保持蛋白質(zhì)的生物活性-不能用于膜上染色-合用于蛋白質(zhì)顯色、完整蛋白質(zhì)的膠上被動提取以及質(zhì)譜分析膠體擴散染料-重要涉及印度墨水染料、膠體金屬染料等-高靈敏度檢出電轉(zhuǎn)印至硝酸纖維素和PVDF膜上的蛋白質(zhì)-靈敏度與PAGE膠內(nèi)的銀染類似-不用于膠內(nèi)染色有機熒光團染料-涉及共價結(jié)合和非共價結(jié)合的熒光團染料兩類，后者最為常用，其典型代表是已經(jīng)商品化的SYPRORed、Orange、Ruby等熒光染料-可對SDS膠內(nèi)蛋白質(zhì)進行一步染色，約30~60min完畢-靈敏度為2~10ng其線性范圍為3個數(shù)量級-在Tris/甘氨酸轉(zhuǎn)印緩沖液中染色后，蛋白質(zhì)可被轉(zhuǎn)印至膜上并進行免疫染色或Edman測序來鑒定蛋白質(zhì)金屬螯合染料-與現(xiàn)代蛋白質(zhì)組學(xué)研究相兼容的-專門與常用微量化學(xué)表征過程兼容-不包含戊二醛、甲醛或Tween-20等，很容易和集成化蛋白質(zhì)組學(xué)平臺（涉及自動化凝膠染色儀、圖像分析工作站、機器人剪切儀器、蛋白質(zhì)酶解工作站和質(zhì)譜儀等）相結(jié)合27、質(zhì)譜分析儀重要有那幾個部分組成？（蛋白質(zhì)組學(xué)ppt）一臺質(zhì)譜儀一般有：進樣裝置、離子化源、質(zhì)量分析器、離子檢測器和數(shù)據(jù)分析系統(tǒng)組成28、什么是肽指紋圖譜（PMF）？（蛋白質(zhì)組學(xué)ppt）肽質(zhì)量指紋圖譜法（peptidemassfingerprinting，PMF）：對蛋白酶解后的多肽混合物進行質(zhì)譜分析，與多肽蛋白數(shù)據(jù)庫中蛋白質(zhì)的理論肽斷進行比較，判斷出所測蛋白是已知還是未知。由于不同的蛋白質(zhì)具有不同的氨基酸序列，不同蛋白質(zhì)所得肽斷具有指紋特性。29、舉例蛋白質(zhì)組在園藝植物上的實際應(yīng)用。？我找不到。。。ppt（蛋白質(zhì)組學(xué)那一章）上有蛋白質(zhì)組學(xué)在疾病研究中的應(yīng)用：疾病的蛋白組學(xué)研究重要是通過比較和分析正常與異常組織細胞、同一疾病不同發(fā)展時期細胞內(nèi)整體蛋白質(zhì)的表達差異，對差異表達的蛋白質(zhì)進行鑒定、定量研究，尋找與疾病相關(guān)的新標志物，為人類疾病研究提供新的手段和依據(jù)。30、什么是生物安全？（書P265）生物安全是指由于人類不妥活動干擾、侵害、損害、威脅生物種群的正常生存發(fā)展而引起的問題，涉及生物、生態(tài)系統(tǒng)、人體健康和公私財產(chǎn)受到污染、破壞、損害等問題。31、什么是轉(zhuǎn)基因生物（GMO）和轉(zhuǎn)基因食品（GMF）？（書P272）轉(zhuǎn)基因食品，從狹義上來講，是運用分子生物學(xué)技術(shù)，將某些生物（涉及動物、植物及微生物）的一種或幾種外源基因轉(zhuǎn)移到園藝植物中，從而改變園藝植物的遺傳物質(zhì)使其有效的表達相應(yīng)的產(chǎn)物（多肽或蛋白質(zhì)），以轉(zhuǎn)基因園藝植物為原料加工成的食品就是園藝植物轉(zhuǎn)基因食物。（網(wǎng)上的：所謂轉(zhuǎn)基因生物就是指為了達成特定的目的而將DNA進行人為改造的生物。書上有轉(zhuǎn)基因植物的概念：266頁。轉(zhuǎn)基因植物是指應(yīng)用dna重組技術(shù)將外源基因整合到受體植物基因組中，獲得的基因組結(jié)構(gòu)發(fā)生改變的植物及其后代。）32、轉(zhuǎn)基因植物的生態(tài)方面潛在的風險有哪些？（書P269）1、轉(zhuǎn)基因自身存在的潛在風險；2、轉(zhuǎn)基因植物通過基因漂流對其他物種帶來影響，從而給生態(tài)系統(tǒng)帶來危害。（1）轉(zhuǎn)基因植物成為雜草（定義：錯誤時間、錯誤地點內(nèi)生長的植物）的也許性：轉(zhuǎn)基因植物也許通過兩種方法轉(zhuǎn)變?yōu)殡s草：一