分光光度技術(shù)的基本原理及應(yīng)用

分光光度技術(shù)的根本原理及應(yīng)用定物質(zhì)性質(zhì)及含量的技術(shù)，其理論依據(jù)是〔分光光度法〕主要是指利用物質(zhì)特有的LambertBeer光區(qū)和紅外光區(qū)。比色法用的單色光是來自濾光片，譜帶寬度從40-120nm,精度不高，分光3-5nm,在紫外區(qū)可到1nm以下，來自棱鏡或光柵，具有較高的精度。根本原理一、光的根本學(xué)問光是由光量子組成的，具有二重性，即不連續(xù)的微粒和連續(xù)的波動性。波長和頻率是光的波動性和特征，可用下式表示：式中λV為頻率，即每秒鐘振動次數(shù)。C為光速等于299770千米/成表1-1所示的波譜圖。分光光度法所使用的光譜范圍在200nm-10μ〔1μ=1,000nm〕間。其中200nm-400nm400nm-760nm760nm-10,000nm二、朗伯-比爾〔Lambert-Beer〕定律朗伯-比爾定律是比色分析的根本原理，這個定律是有色溶液對單色光的吸取程度與溶液及液層厚度間的定量關(guān)系。此定律是由朗伯定律和比爾定律歸納而得。不變，則溶液的厚度愈大〔即光在溶液中所經(jīng)過的途徑愈長，光的強(qiáng)度減低也愈顯著。假設(shè)同時考慮吸取層的厚度和溶液濃度對光吸取的影響合并起來，吸光度與溶液的濃度和液層的厚度的乘積成正比，這就是朗伯-比爾定律。分光光度計根本構(gòu)造簡介能從含有各種波長的混合光中將每一單色光分別出來并測量其強(qiáng)度的儀器稱為分光光度計?！踩ǘ螛悠烦?，檢測器系統(tǒng)。一、光源〔鎢比燈、鹵鎢燈等，氣體放電燈〔氫燈、氘燈及氙燈等，金屬弧燈〔各種汞燈〕等多種。鎢燈和鹵鎢燈放射320-2023nm360-1000nm,穩(wěn)定性好，用作可150-400nm的紫外結(jié)，可用作紫外光區(qū)分光光度計的光源。紅外線光源則由納恩斯特〔Nernst〕棒產(chǎn)生，此棒由ZrO2:Y2O3=17:3〔Zr為鋯，Y〕Y2O3,GeO2〔Ge〕ThO2〔Th〕之混合物制成。汞燈放射的不是連續(xù)光譜，能量絕大局部集中在253.6nm波長外，一般作波長校正用。鎢燈在消滅燈管發(fā)黑時是石英的，且有固定的放射方向，安裝時必需認(rèn)真校正接觸燈管時應(yīng)戴手套以防留下污跡。二、分光系統(tǒng)〔單色器〕璃制成的棱鏡色散力強(qiáng)，但只能在可見光區(qū)工作，石棱鏡工作波長范圍為185-4000nm,在紫外區(qū)有較好的分辯力而且也適用于可見光區(qū)和近紅外區(qū)。棱鏡的特點是波長越短，色散程0.2nm,而在長波段只能到達(dá)5nm行線，刻線處不透光，于是通過光的干預(yù)和衍射現(xiàn)象，較長的光波偏折的角度大波偏折的角度小，因而形成光譜。三、狹縫接影響分辯力。狹縫可在0-2mm寬度內(nèi)調(diào)整，由于棱鏡色散力隨波長不同而變化，較先進(jìn)的分光光度計的狹縫寬度可隨波長一起調(diào)整。四、比色環(huán)洗液〔1分鐘，外表只能用松軟的絨布或拭鏡頭紙擦凈。五、檢測器系統(tǒng)生的電流叫做光電流。受光器有兩種，一是光電池，二是光電管。光電池的組成種類繁多，使用時不宜長期照耀，隨用隨關(guān)，以防止光電池因疲乏而產(chǎn)生誤差?！捕酁閴A土金屬的氧化物做成，大。分光光度計中常用電子倍增光電管，在光照耀下所產(chǎn)生的電流比其他光電管要大得多，這就提高了測定的靈敏度。壓表、記錄器、示波器及與計算機(jī)聯(lián)用等，數(shù)字輸出則通過模擬/數(shù)字轉(zhuǎn)換裝置如數(shù)字式電壓表等。分光光度技術(shù)的應(yīng)用一、測定溶液中物質(zhì)的含量〔濃度的溶液〔濃度待測定的溶液該是一條直線，然后測定出未知液的吸光度，即可從標(biāo)準(zhǔn)曲線上查到其相對應(yīng)的濃度。含量測定時所用波長通常要選擇被測物質(zhì)的最大吸取波長，這樣做有兩個好處：⑴靈敏度大，物質(zhì)在含量上的稍許變化將引起較大的吸光度差異；⑵可以避開其它物質(zhì)的干